專利名稱：一種防治脂代謝紊亂的復(fù)方中藥提取物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及復(fù)方中藥領(lǐng)域，具體涉及一種防治脂代謝紊亂的復(fù)方中藥提取物及其 制備方法。
背景技術(shù)：
中國專利200410051250. 4公開了一種治療高脂血癥的藥物，命名為“復(fù)方貞術(shù)調(diào) 脂方”(FTZ)，由女貞子、白術(shù)、杜仲、三七、大薊、丹參、黃連、佛手八味中藥組成。是經(jīng)臨床 十多年應(yīng)用經(jīng)驗方，用于治療高脂血癥取得理想療效，實驗研究也表明，該方對實驗性的大 鼠飲食性高脂血癥具有很好的降脂作用，該處方專利已經(jīng)獲得授權(quán)。雖然該復(fù)方有良好調(diào)節(jié)血脂的作用，但是由于是中藥復(fù)方，有八味中藥組成， 其化學(xué)成分復(fù)雜，有效成分并不清楚，實際應(yīng)用中其產(chǎn)品質(zhì)量不易獲得有效控制，最終將影 響產(chǎn)品臨床療效的穩(wěn)定，且用于制備藥物制劑時無效組分太多，服用量大，劑型不能多樣 化，不利于大規(guī)模生產(chǎn)上市，廣泛應(yīng)用受到限制。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于根據(jù)現(xiàn)有的“復(fù)方貞術(shù)調(diào)脂方”藥物中存在的化學(xué)成分復(fù)雜、有 效成分不清楚、實際應(yīng)用中其產(chǎn)品質(zhì)量不易獲得有效控制、無效組分太多等缺陷，提供一種 防治脂代謝紊亂的復(fù)方中藥提取物。本發(fā)明的另一目的是提供上述復(fù)方中藥提取物的制備方法。本發(fā)明的目的通過以下技術(shù)方案予以實現(xiàn)
一種防治脂代謝紊亂的復(fù)方中藥提取物，有效成分為臘醇、谷留醇、正二十六 烷酸、白術(shù)內(nèi)酯III、齊墩果酸、小檗堿、藥根堿、黃連堿、丹參素、丹酚酸B、環(huán)二十四烷、 9，12-十八碳二烯酸、5，7- 二甲氧基香豆素、特女貞苷、人參皂苷和Rgl、三七皂苷R1、 杜仲醇。它們的重量比例是1 5:1 6:1 4:1 4: 1 8: 1 8:1 5: 1 5: 1 6:1 5:1 4:1 3:1 5:1 4:1 8:1 8:1 3:1 4。上述復(fù)方中藥提取物的制備方法，該復(fù)方中藥是由丹參、女貞子、黃連、大薊、杜 仲、白術(shù)、三七和佛手八味中藥組成，制備方法步驟如下
將原料藥物經(jīng)過C"醇(甲醇、乙醇或丙醇)提和/或水提后，合并總提取物，再以不同 極性的有機(jī)溶劑萃取總提取物得到不同極性的有效部位，將各有效部位混合，得到防治脂 代謝紊亂的復(fù)方中藥提取物。具體制備步驟如下
(ι)將原料藥三七和女貞子進(jìn)行CV3醇提，得到Ci_3醇提物，將大薊、白術(shù)、丹參、杜仲、 佛手和黃連進(jìn)行水提、濃縮，得到水提物，合并(V3醇提物和水提物得到總提取物；
(2)以石油醚萃取步驟(1)得到的總提取物，得到有效提取部位A；
(3)然后以乙酸乙酯萃取步驟(2)石油醚萃取后剩下的提取物，得到有效提取部位B;
(4)然后再以正丁醇萃取步驟(3)乙酸乙酯萃取后剩下的提取物，得到有效提取部位C，合并各有效部位，得到防治脂代謝紊亂的復(fù)方中藥提取物。所述Cp3醇為甲醇、乙醇或丙醇。作為一種優(yōu)選方案，所述CV3醇提優(yōu)選用30 95體積％的乙醇提取1 5次，優(yōu) 選2 3次，每次提取的乙醇體積為藥材質(zhì)量的1 15倍，優(yōu)選5 10倍，每次提取時間 為5 min 10 h，優(yōu)選5 min 5 h，更優(yōu)選1 3 h ；所述水提優(yōu)選以水煎煮1 5次， 優(yōu)選2 3次，每次用水的體積為藥材質(zhì)量的1 15倍，優(yōu)選4 12倍，每次煎煮時間為 5 min 10 h，優(yōu)選1 3 h ；所述濃縮后的濃縮液體積優(yōu)選藥材質(zhì)量的0. 2 5倍，優(yōu)選 1 2倍。 上述制備方法中，有效提取部位A的制備方法如下加入0. 5 15倍，優(yōu)選5 15 倍于被萃取物體積的石油醚，萃取1 5次，優(yōu)選3 4次，合并萃取液，經(jīng)低溫干燥得到有 效提取部位A ；
有效提取部位B的制備方法如下(3)然后以乙酸乙酯萃取步驟(2)石油醚萃取后剩 下的提取物，加入0. 5 15倍，優(yōu)選5 15倍于被萃取物體積的乙酸乙酯，萃取1 5次， 優(yōu)選3 4次，合并萃取液，經(jīng)低溫干燥得到有效提取部位B ；
有效提取部位C的制備方法如下(4)然后再以正丁醇萃取步驟(3)乙酸乙酯萃取后 剩下的提取物，加入0. 5 15倍，優(yōu)選5 15倍于被萃取物體積的正丁醇，萃取1 5次， 優(yōu)選3 4次，合并萃取液，經(jīng)低溫干燥得到有效提取部位C。本發(fā)明制備得到的防治脂代謝紊亂的復(fù)方中藥提取物，有效提取部位A、B和C的 重量比為0 1:0 2:0 3。本發(fā)明中，還可以將各個有效提取部位或其組合物按照藥劑學(xué)上可以接受的載體 和一般制劑方法，加工成為口服制劑或注射制劑等形式。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下有益效果
通過本發(fā)明制備方法，可以去除中藥中大量無效的化學(xué)成分，得到不同的有效提取部 位，既保留了中藥特色，又使傳統(tǒng)中藥中的有效成分含量大大提高，減少了無效成分對產(chǎn)品 加工和制劑質(zhì)量的影響，使該復(fù)方中藥有效成分明確，制備工藝穩(wěn)定，產(chǎn)品質(zhì)量可控，有利 于工業(yè)化生產(chǎn)和提高并穩(wěn)定療效。實驗研究表明，本發(fā)明方法得到的復(fù)方中藥提取物對實 驗性的大鼠高血脂血癥具有很好的調(diào)血脂作用。


圖1 實施例2中復(fù)方中藥提取物(FTZCE)經(jīng)UHPLC-MS分析得到的指紋圖譜；
圖2 實施例2中復(fù)方中藥提取物(FTZCE)促進(jìn)L-02肝細(xì)胞膽固醇7 α羥化酶基因 mRNA表達(dá)的試驗結(jié)果圖，其中1為marker，2為空白對照，3為FTZ組，4為FTZCE低劑量組， 5為FTZCE中劑量組，6為FTZCE高劑量組；
圖3 實施例2中復(fù)方中藥提取物(FTZCE)物對HMG-CoA還原酶活性的抑制作用試驗 結(jié)果圖，其中c為正常L-02肝細(xì)胞HMG-CoA還原酶活性，F(xiàn)l. 0、F5. 0、F25. 0為1 μ g/ml、5 μ g/ml、25 μ g/ml濃度FTZCE處理后肝細(xì)胞HMG-CoA還原酶活性，SlO為辛伐他汀10 μ g/ ml處理后肝細(xì)胞HMG-CoA還原酶活性；
圖4 實施例2復(fù)方中藥提取物(FTZCE)促進(jìn)L-02肝細(xì)胞LDL-R基因mRNA表達(dá)的試 驗結(jié)果，c為正常L-02肝細(xì)胞LDL-R基因基礎(chǔ)表達(dá)，F(xiàn)l. 0、F5. 0、F25. 0為1、5、25 μ g/ml濃度FTZCE處理后肝細(xì)胞LDL-R基因表達(dá)；
圖5 實施例2復(fù)方中藥提取物(FTZCE)促進(jìn)L-02肝細(xì)胞HNF4 α a基因mRNA表達(dá)的 影響圖，c為正常L-02肝細(xì)胞HNF4a基因的基礎(chǔ)表達(dá)，F(xiàn)l. 0、F5. 0、F25. 0為1、5、25 g/ml 濃度FTZCE處理后肝細(xì)胞HNF4 α基因表達(dá)；
圖6 :實施例2中復(fù)方中藥提取物(FTZCE)對L-02肝細(xì)胞FXR α基因表達(dá)的影響圖，c 為正常1^-02肝細(xì)胞？父1^基因的基礎(chǔ)表達(dá)，F(xiàn)l. 0、F5. 0、F25. 0為1、5、25 g/ml濃度FTZCE 處理后肝細(xì)胞FXR α基因表達(dá)。
具體實施例方式以下結(jié)合實施例來進(jìn)一步解釋本發(fā)明，但實施例并不對本發(fā)明做任何形式的限定。實施例1中藥復(fù)方的總提取物的制備
將女貞子、白術(shù)、杜仲、三七、大薊、丹參、黃連、佛手(重量比為1:1:1:2:1:2:1:1)中的 三七、女貞子兩藥粉碎成粗粉，以藥材量的10倍、8倍和6倍的60體積％乙醇分別回流提取 三次，每次2 h，合并提取液，回收乙醇并使醇提部分濃度為1 ml相當(dāng)于1 g生藥；方中其 余藥材都以八倍、六倍和四倍量的水，分別煎煮提取三次，每次2 h，合并三次水提液，真空 減壓濃縮至1 g藥材/ml提取液，水提體部分和前面醇提部分合并得到中藥復(fù)方總提取物 (FTZ)0實施例2復(fù)方總提取物的提取部位的制備
以復(fù)方總提取物15倍體積的石油醚萃取一次，分離石油醚層；再以10倍體積提取兩 次，分離得到石油醚層，合并三次的石油醚萃取液，回收石油醚，再于0. 08 MPa, 60°C真空干 燥，得到提取部位A ；
萃取后的提取物再分別加15、10、8倍量的乙酸乙酯萃取，得到的乙酸乙酯萃取部位， 回收溶劑，于0.07 MPa，60°C下真空干燥，得到復(fù)方提取物部位B ；
萃取后的提取物再分別以總提物15、10、8倍量的正丁醇分別萃取，得到萃取液合并， 回收正丁醇，將萃取物于0. 07 MPa，75°C下真空干燥，得到復(fù)方提取部位C。根據(jù)中藥復(fù)方總投料量和得到各提取部位的量，分別計算各提取物的得率。有效提取部位A的得率在0. 10% 0. 30% ； 有效提取部位B的得率在0. 40% 1. 00% ； 有效提取部位C的得率在2. 00% 4. 00% ；
按有效提取部位A、B和C和重量比為1: 2:5混合得復(fù)方中藥提取物(FTZCE)^S UHPLC-MS分析得到的指紋圖譜如圖1所示，該提取物經(jīng)測定含有臘醇、谷留醇、正 二十六烷酸、白術(shù)內(nèi)酯III、齊墩果酸、小檗堿、藥根堿、黃連堿、丹參素、丹酚酸B、環(huán)二十四 烷、9，12-十八碳二烯酸、5，7-二甲氧基香豆素、特女貞苷、人參皂苷Rbl和Rgl、三七皂苷 R1、杜仲醇等有效成分。實施例3復(fù)方中藥提取物膠囊的制備方法 提取物按照以下重量份組合
有效提取部位A 1份 有效提取部位B 2份檢測項目
齊墩果酸 特女貞苷 丹騎酸 正二十六烷酸 人參皂苷Rbl 5J-二甲氧基香豆素
實施例4復(fù)方中藥提取物對飲食性高脂血癥大鼠血脂代謝的影響
1.實驗材料
1.1藥品與試劑
復(fù)方中藥提取物(FTZCE)同實施例2
中藥復(fù)方總提取物(FTZ)為復(fù)方貞術(shù)調(diào)脂方提取物，同實施例1 總膽固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白膽固醇測定試劑盒。1. 2 動物
清潔級SD大鼠、體質(zhì)量(180-225 g)，由南方醫(yī)科大學(xué)省實驗動物中心提供。純種新西 蘭雌兔、體質(zhì)量(1.80-2.20 kg)，由廣東省實驗動物中心提供。2.實驗方法
2.1對飲食性高血脂模型大鼠的血脂的影響
觀察不同劑量的FTZCE對高脂血癥整體動物大鼠血清TC、TG、LDL-C，HDL-C的影響。按文獻(xiàn)(郭姣，貝偉劍等復(fù)方貞術(shù)調(diào)脂方對飲食性高脂血癥大鼠肝脂酶的作用 中藥材2009;31(4) :582-585)報道方法復(fù)制并確認(rèn)高血脂大鼠動物模型成功。將動物隨機(jī)分組將96只大鼠編號稱重后隨機(jī)分為8組，每組12只，設(shè)定①正 常對照組，②高脂模型組，③FTZ組，④洛伐他丁組，⑤非諾貝特組，⑥⑦⑧依次為FTZCE高、 中、低劑量各實驗組。除正常對照組自由攝取普通飼料外，其余組分別在此基礎(chǔ)上每天上午 按10 ml / kg量灌胃給予高脂乳劑，4 h后給予相應(yīng)的藥物，其中正常組、模型組給予等量 生理鹽水，連續(xù)給藥4周，禁食12 h(不禁水)，第2天清晨末次給藥1 h后先從眼眶靜脈叢 取血，離心、分離血清，分別測定TC、TG、HDL-C, LDL-C02. 2對高脂血癥新西蘭雌兔整體動物模型的血脂代謝的影響
純種新西蘭雌兔去勢術(shù)+0. 5%膽固醇飼料+靜注牛血清白蛋白造模。實驗動物純種新 西蘭長毛兔49只，雌性，體重1.8-2. 2 kg，月齡3 4月，由廣東省實驗動物中心提供。給 家兔灌服高脂飼料(高脂飼料的配置比例為膽固醇0. 5%，豬油3%，基礎(chǔ)飼料96. 5%)0實
臘醇 小檗堿 黃連堿 白術(shù)內(nèi)酉旨I 人參皂苷R 杜仲醇
CN 102078418 A說明書4/9 頁
有效提取部位C 5份。將上述比例的各提取物，提取部位A與等量的淀粉混合均勻，再與提取部位B混 合，最后與提取部位C混合，三者混合均勻后干法制粒，減壓干燥后，整粒，填充2號膠囊，拋 光，質(zhì)檢包裝。用HPLC方法測定制得的膠囊，其含各有效成分含量結(jié)果見表1 表1 FTZCE膠囊HPLC含量測定結(jié)果
Ili-1
(.). 量粒 含
測項目
11
量粒
6驗兔經(jīng)過1周適應(yīng)性喂養(yǎng)后隨機(jī)分成七個組①假手術(shù)對照組，②去勢高脂模型組和給藥 各組，③復(fù)方貞術(shù)調(diào)脂方FTZ組，④洛伐他丁組，⑤非諾貝特組，⑥FTZCE大劑量組，⑦FTZCE 小劑量組。每組7只。假手術(shù)組行假性手術(shù)(在卵巢周圍切取一小塊脂肪組織)，不切除卵 巢，術(shù)后予普通市售飼料(120 150g/d)；其余6組模型組和各給藥組家兔實施經(jīng)腹切除 雙側(cè)卵巢摘除術(shù)，上述動物術(shù)后予喂飼高脂飼料(120 150g/d)，并給牛血清白蛋白Q50 mg/kg)靜脈注射(1次/4周)。復(fù)方貞術(shù)調(diào)脂方FTZ組(相當(dāng)于臨床成人日劑量的5倍) 和FTZCE組等給藥若干組每天灌胃給藥；對照、模型組予同體積的生理鹽水和灌胃。實驗第 12周測體重，血脂測定于12周經(jīng)耳動脈采血2 mL，每次采血前禁食16 h。全血標(biāo)本室溫靜 置3 h，2200 r/min離心15 min，上層血清分裝后_20°C保存?zhèn)溆谩Ｑ蹇偰懝檀?、甘油?酯、HDL-C和LDL-C的檢測采用全自動生物化學(xué)分析儀，步驟參照試劑盒說明書進(jìn)行。血漿 OX-LDL測定采用ELISA法，按試劑盒說明書操作。2. 3統(tǒng)計學(xué)方法
數(shù)據(jù)用X士S表示，用SSP10. 0軟件進(jìn)行方差分析和均數(shù)間多重比較。3 結(jié)果
3.1對飲食高血脂模型大鼠的血脂的影響
研究結(jié)果表明，F(xiàn)TZCE可明顯降低飲食高血脂模型小鼠血清中總膽固醇(TC)、甘油三 酯(TG)及低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)，明顯升高高密度脂蛋白(HDL-C)，有調(diào)節(jié)血酯的作 用，見表2
表2 FTZCE對飲食高血脂模型大鼠的血脂的影響
權(quán)利要求
1.一種防治脂代謝紊亂的復(fù)方中藥提取物，有效成分為臘醇、β-谷留醇、正二十六 烷酸、白術(shù)內(nèi)酯III、齊墩果酸、小檗堿、藥根堿、黃連堿、丹參素、丹酚酸B、環(huán)二十四烷、 9，12-十八碳二烯酸、5，7- 二甲氧基香豆素、特女貞苷、人參皂苷和Rgl、三七皂苷R1、 杜仲醇。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的復(fù)方中藥提取物，其特征在于有效成分臘醇、谷留醇、正 二十六烷酸、白術(shù)內(nèi)酯III、齊墩果酸、小檗堿、藥根堿、黃連堿、丹參素、丹酚酸B、環(huán)二十四 烷、9，12-十八碳二烯酸、5，7- 二甲氧基香豆素、特女貞苷、人參皂苷和Rgl、三七皂 苷R1、杜仲醇的重量比例1 5:1 6:1 4:1 4: 1 8: 1 8:1 5: 1 5: 1 6:1 5:1 4:1 3:1 5:1 4:1 8:1 8:1 3:1 4。
3.權(quán)利要求1所述復(fù)方中藥提取物的制備方法，包括如下步驟(1)將原料藥物丹參、女貞子、黃連、大薊、杜仲、白術(shù)、三七和佛手進(jìn)行Ci_3醇提和/或 水提，合并總提取物；(2)用不同極性的有機(jī)溶劑萃取總提取物，得到不同極性的有效部位，將各有效部位混 合，得到防治脂代謝紊亂的復(fù)方中藥提取物。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，包括以下步驟(1)將原料藥三七和女貞子進(jìn)行CV3醇提，得到Cu醇提物，將大薊、白術(shù)、丹參、杜仲、 佛手和黃連進(jìn)行水提、濃縮，得到水提物，合并CV3醇提物和水提物得到總提取物；(2)以石油醚萃取步驟(1)得到的總提取物，得到有效提取部位A；(3)以乙酸乙酯萃取步驟(2)石油醚萃取后剩下的提取物，得到有效提取部位B；(4)再以正丁醇萃取步驟(3)乙酸乙酯萃取后剩下的提取物，得到有效提取部位C，合 并各有效部位，得到防治脂代謝紊亂的復(fù)方中藥提取物。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于所述CV3醇提是指用30 95體積％ 的Ci_3醇提取1 5次，每次提取的Ci_3醇體積為藥材質(zhì)量的1 15倍，每次提取時間為5 min 5 h0
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于所述水提是指以水煎煮1 5次，每次 用水的體積為藥材質(zhì)量的1 15倍，每次煎煮時間為5 min 5 h ；所述濃縮后的濃縮液 體積為藥材質(zhì)量的0. 2 5倍。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于所述有效提取部位A的制備方法是加 入0. 5 15倍于被萃取物體積的石油醚，萃取1 5次，合并萃取液，經(jīng)低溫干燥得到有效 提取部位A。
8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于有效提取部位B的制備方法是加入 0. 5 15倍于被萃取物體積的乙酸乙酯，萃取1 5次，合并萃取液，經(jīng)低溫干燥得到有效 提取部位B。
9.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于有效提取部位C的制備方法是加入 0. 5 15倍于被萃取物體積的正丁醇，萃取1 5次，合并萃取液，經(jīng)低溫干燥得到有效提 取部位C。
10.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于有效部位A、B和C的重量比為0 1:0 2:0 3。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種防治脂代謝紊亂的復(fù)方中藥提取物，該復(fù)方中藥是由丹參、女貞子、黃連、大薊、杜仲、白術(shù)、三七和佛手八味中藥組成，所述制備方法包括如下步驟將原料藥物經(jīng)過C1-3醇提和/或水提后，合并總提取物，再以不同極性的有機(jī)溶劑萃取總提取物得到不同極性的有效部位，將各有效部位混合，得到用于預(yù)防或治療脂代謝紊亂的復(fù)方中藥。通過本發(fā)明制備方法，可以去除中藥中大量無效的化學(xué)成分，減少了無效成分對產(chǎn)品加工和制劑質(zhì)量的影響，使該復(fù)方中藥有效成分明確，制備工藝穩(wěn)定，產(chǎn)品質(zhì)量可控，有利于工業(yè)化生產(chǎn)和提高并穩(wěn)定療效。
文檔編號A61K31/20GK102078418SQ20111000800
公開日2011年6月1日 申請日期2011年1月14日 優(yōu)先權(quán)日2011年1月14日
發(fā)明者何偉, 郭姣 申請人:廣東藥學(xué)院