專利名稱：預(yù)防和治療糖尿病以及脂代謝紊亂的多肽的制作方法
預(yù)防和治療糖尿病以及脂代謝紊亂的多肽技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及預(yù)防和治療糖尿病和脂代謝紊亂疾病的藥物。 技術(shù)背景
糖尿病(diabetes)是由遺傳因素、免疫功能紊亂、微生物感染及其毒素、自由基 毒素、精神因素等等各種致病因子作用于機(jī)體導(dǎo)致胰島功能減退、胰島素抵抗(Insulin Resistance, IR)等而引發(fā)的糖、蛋白質(zhì)、脂肪、水和電解質(zhì)等一系列代謝紊亂綜合征。糖尿 病已經(jīng)成為人類繼癌癥、心腦血管疾病之后的第三大“健康殺手”。隨著經(jīng)濟(jì)發(fā)展，肥胖增多 以及人類結(jié)構(gòu)的老年化，糖尿病的發(fā)病率持續(xù)增長。
1980年，世界衛(wèi)生組織(world health organization, WHO)將糖尿病分為胰島 素依賴性糖尿病(insulin-dependent diabetes mellitus, IDDM，又稱I型)，非胰島素依 賴性糖尿病(noninsulin-d印endent diabetes mellitus，NIDDM，又稱 II 型)及其他類型 糖尿病。I型患者常起病于幼年，又稱為少年發(fā)病型，是由內(nèi)源性胰島素分泌不足引起，多需 要胰島素治療。II型患者多起病于40歲以后，有時(shí)稱陳年發(fā)病型，患者的高血糖癥主要是 由于胰島素信號通路障礙，胰島素刺激細(xì)胞攝取葡萄糖的能力下降。由于糖尿病病因復(fù)雜， 發(fā)病機(jī)制還不完全清楚，給治療帶來了極大的困難。
目前治療糖尿病以注射給予胰島素為主，而由于胰島素是一種水溶性多肽，易于 被胃腸道內(nèi)的酶降解，因此不適宜于口服給藥；而且糖尿病患者實(shí)施胰島素治療需要終生 每日皮下注射胰島素，長期頻繁注射不但給患者帶來痛苦，還可能產(chǎn)生皮下脂肪萎縮等多 種不良反應(yīng)。另外長期給予胰島素治療有引發(fā)低血糖癥的危險(xiǎn)。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的任務(wù)是提供一種預(yù)防和治療糖尿病以及脂代謝紊亂的多肽及其制備方法。
實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的技術(shù)方案是
本發(fā)明提供的這種預(yù)防和治療糖尿病以及脂代謝紊亂的多肽具有以下序列1至4 中任一項(xiàng)所示的氨基酸序列
序列1 :ASCNGVCSPFEMPPCGSSACRCIPVGLWGYCRHPSG
序列2 JSCNGVCSPFDIPPCGTPLCRCIPAGLFVGKCRHPYG
序列3 :VSCNGVCSPFDIPPCGTPLCRCIPYGLFVGNCRHPYG
序列 4 :VSCNGVCSPFEMPPCGSSACRCIPYGLVVGNCRHPSG
本發(fā)明提供的多肽可用于預(yù)防和治療糖尿病以及脂代謝紊亂疾病。以本發(fā)明多肽 為活性成分和藥學(xué)上可接受的載體，可制備用于預(yù)防和治療糖尿病以及脂代謝紊亂疾病的 藥物。
本發(fā)明多肽提取工藝
豌豆(大豆)或榨油后的豆粕，經(jīng)0. 5M醋酸浸泡過夜，打漿，漿液冷凍離心，離心上清液用海藻酸吸附，然后用0. 2M鹽酸洗脫，重復(fù)吸附和洗脫操作3遍，洗脫液進(jìn)行鹽析， 鹽析后的產(chǎn)品經(jīng)過G-25柱脫鹽，脫鹽后的液體經(jīng)過G-50柱過濾，濾液冷凍干燥濃縮，用 HPLC進(jìn)行分離，取不同的分離峰組分進(jìn)行藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)，最終選擇有降糖作用的峰組分進(jìn)行 蛋白測序。提取工藝流程圖見

圖1。
產(chǎn)率1kg大豆一打漿一離心一海藻酸吸附一鹽析(10g，l% )—脫鹽(6g， 0. 6% ) — G-50 柱過濾(3g，0. 3% ) — HPLC(500mg，0. 05% )
多肽的鑒定
1.收集HPLC中各分離峰的分離液(見圖2)分別進(jìn)行藥效學(xué)試驗(yàn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)峰3， 峰4，峰5，峰7中的物質(zhì)有降糖效果，然后分別將這四種物質(zhì)進(jìn)行蛋白測序，測序結(jié)果為
多肽1 (峰；3) ASCNGVCSPFEMPPCGSSACRCIPVGLVVGYCRHPSG (37)
多肽2 (峰 4) ISCNGVCSPFDIPPCGTPLCRCIPAGLFVGKCRHPYG (37)
多肽3 (峰幻 VSCNGVCSPFDIPPCGTPLCRCIPYGLFVGNCRHPYG (37)
多肽 4 (峰 7) VSCNGVCSPFEMPPCGSSACRCIPYGLVVGNCRHPSG (37)
其中，A-丙氨酸、C-半胱氨酸、D-天冬氨酸、E-谷氨酸、F-苯丙氨酸、G-甘氨酸、 H-組氨酸、I-異亮氨酸、K-賴氨酸、L-亮氨酸、M-甲硫氨酸、N-天冬酰胺、P-脯氨酸、R-精 氨酸、S-絲氨酸、T-蘇氨酸、V-纈氨酸、Y-酪氨酸
2.物理性狀
該四種化合物外觀均為白色粉末，極易溶解于水等極性溶劑，對熱穩(wěn)定，耐蛋白酶 水解。
3.命名
本發(fā)明專利申請將該四種多肽一起命名為legaglycins，中文名胰怡素。
藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)資料
1.實(shí)驗(yàn)用藥及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
實(shí)驗(yàn)用藥取本發(fā)明提供的四種多肽，均用生理鹽水分別配制成濃度為ang/ml的 口服液，供實(shí)驗(yàn)灌胃使用。
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物本實(shí)驗(yàn)中的動(dòng)物均為BABC小鼠，每組10只，隨機(jī)分組。
2.實(shí)驗(yàn)方法及結(jié)果
1)治療II型糖尿病效果實(shí)驗(yàn)
建立II型糖尿病小鼠動(dòng)物模型100mg/kg —次性大劑量注射鏈脲佐菌素(STZ)， 并以高糖高脂飼料喂養(yǎng)，建立II型糖尿病小鼠動(dòng)物模型。
將糖尿病小鼠隨機(jī)分為多肽灌胃組、二甲雙胍(陽性對照)組、模型對照組和空白 對照組，每組10只。隔日灌胃給藥，持續(xù)4周，給藥量為20ug/g，每周測定小鼠的血糖。結(jié) 果見表1。
表1 小鼠血糖變化情況
權(quán)利要求
1.用于預(yù)防和/或治療糖尿病和/或脂代謝紊亂的多肽，其特征在于，具有以下序列1 至4中任一項(xiàng)所示的氨基酸序列序列 1 :ASCNGVCSPFEMPPCGSSACRCIPVGLWGYCRHPSG 序列 2 JSCNGVCSPFDIPPCGTPLCRCIPAGLFVGKCRHPYG 序列 3 :VSCNGVCSPFDIPPCGTPLCRCIPYGLFVGNCRHPYG 序列 4 :VSCNGVCSPFEMPPCGSSACRCIPYGLVVGNCRHPSG
2.權(quán)利要求1所述的多肽在制備用于預(yù)防和/或治療糖尿病和/或脂代謝紊亂的藥物 中的應(yīng)用。
3.一種用于預(yù)防和/或治療糖尿病和/或脂代謝紊亂的藥劑，其特征在于含有有效量 的權(quán)利要求1所述的多肽和藥學(xué)上可接受的載體。
全文摘要
本發(fā)明提供了一類預(yù)防和治療糖尿病以及脂代謝紊亂的多肽，該類多肽對II型糖尿病有顯著的療效，其降糖作用是在高血糖基礎(chǔ)上發(fā)生，是依賴葡萄糖而降低高血糖濃度，不會(huì)導(dǎo)致低血糖，安全性好，而且對胰腺β細(xì)胞有一定的保護(hù)作用。該類多肽還具有明顯降低血中甘油三酯作用，可作為治療和預(yù)防糖尿病以及脂代謝紊亂疾病的疾病的藥物。因其耐酶解，適宜開發(fā)為口服制劑。
文檔編號A61K38/16GK102030820SQ20101018311
公開日2011年4月27日 申請日期2010年5月26日 優(yōu)先權(quán)日2010年5月26日
發(fā)明者萬定一, 杜仲夏, 蓋文麗, 賈紹輝, 陸婕, 陳正望, 陳磊, 頓新鵬, 顏冬菁 申請人:華中科技大學(xué)