用于預(yù)防或治療代謝綜合癥的方法
【專利摘要】本發(fā)明旨在提供一種用于預(yù)防或治療代謝綜合癥的方法，其可以通過抑制巨噬細(xì)胞浸潤進(jìn)入脂肪組織中在上游停止代謝綜合癥中類似多米諾效應(yīng)的疾病鏈。本發(fā)明提供了一種用于預(yù)防或治療代謝綜合癥的方法，該方法包括將AIM抑制劑施用到對象的步驟。
【專利說明】用于預(yù)防或治療代謝綜合癥的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種預(yù)防或治療代謝綜合征的方法，該方法包括將AIM抑制劑施用到對象。
【背景技術(shù)】
[0002]通常，已知諸如糖尿病、高血脂癥、高血壓和肥胖癥的與生活方式相關(guān)的疾病經(jīng)常聚集于一個人。盡管這些疾病有分別成為動脈硬化癥的風(fēng)險，但是當(dāng)聚集時，風(fēng)險變得非常高。因此，已經(jīng)提出了多個名稱以表示這些疾病聚集的病理。
[0003]目前，用標(biāo)準(zhǔn)名稱-代謝綜合癥來表示包括糖尿病、高血脂癥、高血壓、肥胖癥和胰島素抗性作為基本構(gòu)成要素的疾病概念，其中，這些疾病經(jīng)常聚集于一個人并使導(dǎo)致動脈硬化疾病的風(fēng)險變高。 [0004]通常，在代謝綜合癥中，內(nèi)臟脂肪型肥胖癥，即腹腔內(nèi)過量聚集中性脂肪的肥胖癥，是核心病理。由肥胖癥引起的胰島素抗性相繼引發(fā)高血壓、糖尿病、高血脂癥等，它們的聚集和聯(lián)系引發(fā)動脈硬化疾病。這種現(xiàn)象被比作多米諾效應(yīng)，近些年提出了“代謝多米諾”的概念。
[0005]也就是說，就像一旦開始傾倒就難以恢復(fù)的多米諾效應(yīng)一樣，一系列病理朝一個方向行進(jìn)，并且長期地以持續(xù)的方式慢性地引發(fā)各種疾病。
[0006]代謝綜合征的治療不以癥狀的減緩為目的，而是以預(yù)防各種疾病尤其是后來可能引發(fā)的動脈硬化疾病的起始為目的。
[0007]如上所述，在代謝多米諾的概念下，由于一旦開始，行進(jìn)就難以恢復(fù)到原來的狀態(tài)，所以期望在上游抑制行進(jìn)。
[0008]迄今進(jìn)行的研究已經(jīng)闡明，在代謝綜合征中，當(dāng)過量的中性脂肪聚集在腹腔內(nèi)的脂肪細(xì)胞中時，由于發(fā)生來自脂肪細(xì)胞的脂肪細(xì)胞因子的分泌量異常、血液游離脂肪酸的增加以及脂肪組織的慢性炎癥，所以諸如胰島素抗性、糖尿病、高血脂癥、高血壓等與生活方式相關(guān)的疾病以及繼發(fā)的疾病像鏈?zhǔn)椒磻?yīng)一樣被引發(fā)。
[0009]因此，在代謝綜合癥的預(yù)防或治療中，優(yōu)選考慮以諸如脂肪細(xì)胞因子的分泌、血液游離脂肪酸和脂肪組織的慢性炎癥的上游事件為目標(biāo)。
[0010]在它們之中，已經(jīng)闡明脂肪組織的慢性炎癥的發(fā)生是由于伴隨肥胖癥浸潤進(jìn)入脂肪組織的巨噬細(xì)胞增加(參見，例如，非專利文獻(xiàn)I和2)。
[0011]巨噬細(xì)胞的活化狀態(tài)包括兩種:M1和M2。Ml也被稱作經(jīng)典活化巨噬細(xì)胞，并表現(xiàn)出使諸如TNF-a、IL-6和IL-12等的炎性細(xì)胞因子和誘導(dǎo)性一氧化氮合成酶(iNOS)的產(chǎn)生增加。M2也被稱作替代活化巨噬細(xì)胞，并表現(xiàn)出使炎性細(xì)胞因子的產(chǎn)生下降并使諸如IL-10等的抗炎性細(xì)胞因子和抑制iNOS活性的精氨酸酶的產(chǎn)生增加。
[0012]已知在非肥胖癥的情況下，浸潤進(jìn)入脂肪組織的巨噬細(xì)胞主要是M2，而隨著肥胖癥的行進(jìn)主要是Ml (參見，例如，非專利文獻(xiàn)3)。
[0013]也已經(jīng)報道，在巨噬細(xì)胞特異性PPARy-缺陷小鼠中，不存在M2并且高脂肪飲食誘發(fā)的肥胖癥和胰島素抗性增強(qiáng)(非專利文獻(xiàn)4);巨噬細(xì)胞PPAR Y的失活導(dǎo)致在正常飲食的不肥胖小鼠的骨骼肌和肝臟中葡萄糖耐受性和胰島素抗性的下降(非專利文獻(xiàn)5);巨噬細(xì)胞特異性Cap (Cbl相關(guān)蛋白質(zhì))缺陷小鼠表現(xiàn)出脂肪組織中巨噬細(xì)胞浸潤的下降以及由高脂肪飲食負(fù)荷(high-fat diet loading)導(dǎo)致的胰島素抗性的表達(dá)減弱(非專利文獻(xiàn)6);等等。因此，暗示了浸潤進(jìn)入脂肪組織的巨噬細(xì)胞Ml在胰島素抗性的表達(dá)中發(fā)揮著重要的作用。
[0014]脂肪組織的慢性炎癥在代謝綜合癥的發(fā)生中的深度參與與許多代謝綜合癥患者是高敏CRP陽性的報道一致，這表明輕度炎癥的存在以及具有抗炎作用的水楊酸和噻唑烷藥劑的施用改善了胰島素抗性。
[0015]此外，同野生型小鼠相比，在CCR2 (C-C趨化因子受體2)敲除小鼠中，對與肥胖癥相關(guān)的脂肪細(xì)胞因子的產(chǎn)生的異?？刂?abnormal control)得到改善,其中，CCR2敲除小鼠表現(xiàn)出巨噬細(xì)胞進(jìn)入脂肪組織的浸潤的下降(非專利文獻(xiàn)7)。因此，認(rèn)為浸潤進(jìn)入脂肪組織的巨卩遼細(xì)胞也參與脂肪細(xì)胞因子的產(chǎn)生的瓦解控制(collapsed control)。
[0016]綜上所述，認(rèn)為在代謝綜合癥的預(yù)防或治療中，通過以浸潤進(jìn)入脂肪組織的炎性巨噬細(xì)胞為目標(biāo)，能夠在諸如脂肪組織中的慢性炎癥和脂肪細(xì)胞因子產(chǎn)生的瓦解控制的代謝多米諾的最上游的位點停止代謝多米諾的行進(jìn)。
[0017]然而，還未闡明伴隨肥胖癥的巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)進(jìn)入脂肪組織的機(jī)制。
[0018]例如，報道已經(jīng)證明了巨噬細(xì)胞誘導(dǎo)效率在單核細(xì)胞趨化因子MCP-1敲除小鼠和CCR2敲除小鼠中降低，但是 該效率依據(jù)報道而變化。另外，也有報道表明巨噬細(xì)胞的浸潤在MCP-1敲除小鼠中得到促進(jìn)。
[0019]因此，存在討論MCP-1和CCR2與巨噬細(xì)胞的誘導(dǎo)之間的因果關(guān)系的空間，至少它們不被認(rèn)為是明確的(必要的)和基本的因素。
[0020]自然，還沒有發(fā)現(xiàn)通過抑制巨噬細(xì)胞浸潤進(jìn)入脂肪組織的基本原因來在代謝多米諾的最上游中止代謝多米諾行進(jìn)的方法。
[0021]同時，本發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)來自組織巨噬細(xì)胞的巨噬細(xì)胞凋亡抑制因子(AM)(參見非專利文獻(xiàn)9)。AIM是可溶性蛋白質(zhì)，是清道夫受體富含半胱氨酸(SRCR)超家族的成員。AIM首先作為保護(hù)巨噬細(xì)胞免受各種凋亡誘導(dǎo)劑影響的凋亡抑制因子被發(fā)現(xiàn)(參見非專利文獻(xiàn)9)。
[0022]因為AIM的結(jié)構(gòu)具有3個SRCR結(jié)構(gòu)域，與⑶5的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域相似，所以AM也稱作CD5L (CD5-相似)。
[0023][文獻(xiàn)列表]
[0024]非專利文獻(xiàn)
[0025]非專利文獻(xiàn)I:ffeisberg, S.P.等人，J.Clin.1nvest.，2003，112:1796-1808
[0026]非專利文獻(xiàn)2:Xu, H.等人，J.Clin.1nvest.，2006，116:115-124
[0027]非專利文獻(xiàn)3:Lumeng, C.N.等人，J.Clin.1nvest.，2007，117:175-184
[0028]非專利文獻(xiàn)4:0degaard, J.L.等人，Nature, 2007，447:1116-1121
[0029]非專利文獻(xiàn)5:Hevener, A.L.等人，J.Clin.1nvest.，2007，117:1658-1669
[0030]非專利文獻(xiàn)6:Lesniewski, L.A.等人,Nature Med., 2007, 13:455-462
[0031]非專利文獻(xiàn)7:ffeisberg, S.P.等人，J.Clin.1nvest.，2006，116:115-124[0032]非專利文獻(xiàn)8:Kanda, H.等人，J.Clin.1nvest.，2006，116:1494-1505
[0033]非專利文獻(xiàn)9:Miyazaki, T.等人，J.Exp.Med.189，413-422 (1999)
[0034]非專利文獻(xiàn)10:Arai, S.等人，Cell Metab.1, 201-213 (2005)

【發(fā)明內(nèi)容】

[0035]技術(shù)問題
[0036]本發(fā)明旨在提供一種用于預(yù)防或治療代謝綜合癥的方法，其可以通過抑制巨噬細(xì)胞浸潤進(jìn)入脂肪組織中在上游停止代謝綜合癥中類似多米諾效應(yīng)的疾病鏈。
[0037]技術(shù)方案
[0038]在本
【發(fā)明者】對AM進(jìn)一步研究過程中，我們發(fā)現(xiàn)在動脈粥樣硬化病變中，巨噬細(xì)胞內(nèi)吞脂質(zhì)并產(chǎn)生AM，由于產(chǎn)生的AM支持病變部位巨噬細(xì)胞的凋亡抑制，所以產(chǎn)生的AIM也參與動脈硬化癥的發(fā)展。另外，我們已經(jīng)制備了 AIM缺陷小鼠，并證實了 AIM缺陷顯著地減輕了動脈硬化癥(Arai, S.等人，Cell Metab.1, 201-213 (2005))。
[0039]同時，本
【發(fā)明者】已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，如在下述參考示例中所示，AM也在浸潤進(jìn)入肥胖脂肪組織的巨噬細(xì)胞中表達(dá)。另外，我們發(fā)現(xiàn):在存在AIM的情況下，前脂肪細(xì)胞分化成為成熟脂肪細(xì)胞受到抑制；在存在AIM的情況下，在成熟脂肪細(xì)胞中引起脂滴的分解(脂解作用)；在存在AIM的情況下，脂肪細(xì)胞的尺寸趨于變?。灰虼?，AIM本身作為抗肥胖癥藥物是有用的。
[0040]另外，我們還發(fā)現(xiàn):脂肪組織中產(chǎn)生的AIM結(jié)合到細(xì)胞表面上的⑶36并通過內(nèi)吞作用進(jìn)入到脂肪細(xì)胞中；產(chǎn)生的AIM結(jié)合到細(xì)胞中的脂肪酸合酶(FAS)并抑制其活性，即，AIM的直接目標(biāo)分子是FAS，并且AM通過抑制FAS活性抑制前脂肪細(xì)胞分化成為成熟脂肪細(xì)胞并抑制脂滴的分解。
[0041]然而，本
【發(fā)明者】現(xiàn)在已經(jīng)發(fā)現(xiàn)看起來與上述發(fā)現(xiàn)明顯相反的現(xiàn)象；即，AIM直接參與代謝綜合癥的發(fā)生。
[0042]具體地講，我們已經(jīng)通過體內(nèi)研究證實:伴隨肥胖癥，AIM的血液濃度增加；即使在AM敲除小鼠已經(jīng)變肥胖之后，它們的脂肪組織中也幾乎看不到巨噬細(xì)胞的浸潤；并且通過對AIM敲除小鼠全身施用重組AIM，炎性巨噬細(xì)胞浸潤進(jìn)入脂肪組織中。
[0043]另外，我們已經(jīng)通過體內(nèi)研究證實，炎性巨噬細(xì)胞浸潤進(jìn)入脂肪組織中是由脂滴融解的誘導(dǎo)所導(dǎo)致的巨噬細(xì)胞的遷移引起的，脂滴融解是通過因肥胖癥使AM血液濃度增加而抑制FAS活性引起的。
[0044]另外，我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，即使在通過采取高脂肪飲食使AM敲除小鼠變肥胖時，小鼠的葡萄糖代謝也不會下降，因此，即使小鼠變得肥胖，對AM抑制也可以防止類似多米諾效應(yīng)的代謝綜合癥的一系列疾病的后續(xù)鏈?zhǔn)狡鹗己托羞M(jìn)，這導(dǎo)致了本發(fā)明的完成。
[0045]因此，本發(fā)明涉及:
[0046][I] 一種用于預(yù)防或治療代謝綜合癥或其相關(guān)疾病的方法，該方法包括將AIM抑制劑施用到對象的步驟；
[0047][2]根據(jù)上述[I]所述的方法，其中，上述AM抑制劑降低血液中AM的穩(wěn)定性；
[0048][3]根據(jù)上述[I]所述的方法，其中，上述AM抑制劑抑制AM與⑶36之間的結(jié)合；[0049][4]根據(jù)上述[I]所述的方法，其中，上述AM抑制劑抑制AM進(jìn)入靶細(xì)胞中；
[0050][5]根據(jù)上述[I]所述的方法，其中，上述AIM抑制劑抑制AIM從內(nèi)含體轉(zhuǎn)移到細(xì)胞質(zhì)；
[0051][6]根據(jù)上述[I]所述的方法，其中，上述AIM抑制劑抑制AIM結(jié)合到脂肪酸合酶(FAS)；
[0052][7]根據(jù)上述[I]所述的方法，其中，上述AM抑制劑抑制AM的表達(dá)；
[0053][8]根據(jù)上述[1]_[7]中任意一項所述的方法，其中，上述代謝綜合癥或其相關(guān)疾病是從由代謝綜合癥、肥胖癥、胰島素抗性、糖尿病、高血脂癥、高血壓、動脈硬化疾病、肝臟疾病、肝失疏泄、腦血管疾病、局部缺血性心臟病、心力衰竭、癡呆癥、腦溢血、神經(jīng)癥、腎臟疾病、脂肪細(xì)胞因子分泌異常以及血液游離脂肪酸量異常組成的組中選擇的至少一種；
[0054][9]根據(jù)上述[1]_[8]中任意一項所述的方法，其中，上述對象是人；
[0055][10]根據(jù)上述[1]_[8]中任意一項所述的方法，其中，上述對象是非人類的哺乳動物或鳥類；
[0056][11]根據(jù)上述[10]所述的方法，其中，上述對象是狗或貓；
[0057][12] 一種用于預(yù)防或治療代謝綜合癥或其相關(guān)疾病的藥劑，該藥劑包括從以下組中選擇的至少一種:[0058]抗AM抗體；
[0059]抗CD36 抗體；
[0060]對AM基因具有RNAi效應(yīng)的雙鏈核酸；
[0061]AM基因的反義核酸；
[0062]AM基因的核酶；
[0063]結(jié)合到抗AIM抗體而不抑制FAS活性的蛋白質(zhì)；
[0064]結(jié)合到⑶36而不抑制FAS活性的蛋白質(zhì)；
[0065]結(jié)合到FAS而不抑制FAS活性的蛋白質(zhì)；以及
[0066]可溶CD36;
[0067][13]根據(jù)上述[12]所述的治療藥劑，其中，上述抗體是單克隆抗體、多克隆抗體、重組抗體、人源抗體、人源化抗體、嵌合抗體或者抗體片段；
[0068][14]根據(jù)上述[12]或[13]所述的治療藥劑，其中，上述結(jié)合到FAS而不抑制FAS活性的蛋白質(zhì)結(jié)合到從由DH、ER、TE和CC組成的組中選擇的至少一個結(jié)構(gòu)域；
[0069][15]根據(jù)上述[12]或[13]所述的治療藥劑，其中，上述結(jié)合到抗AM抗體而不抑制FAS活性的蛋白質(zhì)選自于由AIM片段、AIM變異體或其片段以及AM嵌合蛋白質(zhì)或其片段組成的組；
[0070][16]根據(jù)上述[12]或[13]所述的治療藥劑，其中，上述結(jié)合到CD36而不抑制FAS活性的蛋白質(zhì)選自于由AIM片段、AIM變異體以及AM嵌合蛋白質(zhì)組成的組；
[0071][17]根據(jù)上述[12]或[13]所述的治療藥劑，其中，上述結(jié)合到FAS而不抑制FAS活性的蛋白質(zhì)選自于由AM片段、AM類似物、AM變異體以及AM嵌合蛋白質(zhì)組成的組；
[0072][18]根據(jù)上述[15]-[17]中任意一項所述的治療藥劑，其中，上述AM片段選自于包含AIM蛋白質(zhì)的功能域及其保守區(qū)域的片段；
[0073][19]根據(jù)上述[12]_[18]中任意一項所述的治療藥劑，其中，上述代謝綜合癥或其相關(guān)疾病是從由代謝綜合癥、肥胖癥、胰島素抗性、糖尿病、高血脂癥、高血壓、動脈硬化疾病、肝臟疾病、肝失疏泄、腦血管疾病、局部缺血性心臟病、心力衰竭、癡呆癥、腦溢血、神經(jīng)癥、腎臟疾病、脂肪細(xì)胞因子分泌異常以及血液游離脂肪酸量異常組成的組中選擇的至少一種；
[0074][20]根據(jù)上述[12]_[19]中任意一項所述的治療藥劑，其中，上述對象是人；
[0075][21]根據(jù)上述[12]_[19]中任意一項所述的治療藥劑，其中，上述對象是非人類的哺乳動物或鳥類；
[0076][22]根據(jù)上述[21]所述的治療藥劑，其中，上述對象是狗或貓；
[0077][23] 一種用于預(yù)防或治療代謝綜合癥或其相關(guān)疾病的方法，該方法包括施用根據(jù)上述[12]-[22]中任意一項所述的治療藥劑的步驟；
[0078][24] 一種生產(chǎn)AM抑制劑的方法，該方法包括:
[0079]用蛋白酶處理AM以獲得AM片段的步驟，以及
[0080]通過其中固定有結(jié)合到AM的功能域或保守區(qū)域的抗AM抗體的親和柱純化上述AM片段的步驟。
[0081]發(fā)明效果
[0082]根據(jù)本發(fā)明的方法，可以通過抑制AM來抑制巨噬細(xì)胞浸潤進(jìn)入肥胖個體的脂肪組織中以在上游停止代謝綜合癥的致命疾病組的鏈?zhǔn)狡鹗肌?br> 【專利附圖】

【附圖說明】
[0083]圖1示出了肥胖小鼠和正常小鼠的血液AM濃度的測量結(jié)果。
[0084]圖2示出了使用抗巨噬細(xì)胞單克隆抗體(F4/80)等檢測巨噬細(xì)胞浸潤進(jìn)入肥胖AIM+/+小鼠和肥胖AIM+小鼠的內(nèi)臟脂肪組織中的結(jié)果。 [0085]圖3示出了在對AM+小鼠全身施用rAM3周后使用抗巨噬細(xì)胞單克隆抗體(F4/80 )等檢測巨噬細(xì)胞浸潤進(jìn)入內(nèi)臟脂肪組織中的結(jié)果。
[0086]圖4示出了巨噬細(xì)胞遷移能力的測量結(jié)果。
[0087]圖5是示出了用HFD飼喂12周之后的AIM+/+小鼠和AIM+小鼠的解剖學(xué)結(jié)果的照片。
[0088]圖6示出了用HFD飼喂12周之后的AIM+/+小鼠和AIM+小鼠的體重和總脂肪量的結(jié)果。
[0089]圖7示出了在飼喂HFD之前對AIM+/+小鼠和AIM+小鼠執(zhí)行葡萄糖耐受性測試的結(jié)果。
[0090]圖8示出了在飼喂HFD之后對AIM+/+小鼠和AIM+小鼠執(zhí)行葡萄糖耐受性測試的結(jié)果。
[0091]圖9示出了在飼喂HFD之前對AIM+/+小鼠和AIM+小鼠執(zhí)行胰島素耐受性測試的結(jié)果。
[0092]圖10示出了在飼喂HFD之后對AM+/+小鼠和AIM+小鼠執(zhí)行胰島素耐受性測試的結(jié)果。
[0093]圖11示出了在飼喂HFD之后對AIM+/+小鼠和AIM+小鼠執(zhí)行胰島素敏感性測試的結(jié)果。[0094]圖12示出了使用抗巨噬細(xì)胞單克隆抗體、抗小鼠AM多克隆抗體和抗IL-6抗體對從正常小鼠(未飼喂高脂肪飲食的小鼠)和肥胖小鼠的內(nèi)臟脂肪組織制得的切片染色的結(jié)果。
[0095]圖13示出了在3T3-L1細(xì)胞培養(yǎng)期間施用rAM的時間表。
[0096]圖14示出了按照圖13中示出的時間表在第12天用紅油O (oil-red-Ο)對細(xì)胞染色的結(jié)果。
[0097]圖15示出了按照圖13中示出的時間表在第12天通過定量實時PCR測量脂肪細(xì)胞標(biāo)記的表達(dá)結(jié)果。
[0098]圖16A示出了施用rAM并用紅油O染色的成熟脂肪細(xì)胞的結(jié)果。圖16B示出了脂滴的尺寸，圖16C示出了每單位面積的包含脂滴的細(xì)胞的數(shù)目。
[0099]圖17示出了通過對成熟脂肪細(xì)胞施用rAM并測量培養(yǎng)上清液中的丙三醇和游離脂肪酸獲得的測量結(jié)果。
[0100]圖18示出了通過對成熟脂肪細(xì)胞施用rAM并通過定量實時PCR測量脂滴形成相關(guān)基因的表達(dá)獲得的測量結(jié)果。
[0101]圖19示出了在施用HFD20天后AIM+/+小鼠和AIM+小鼠的脂肪組織切片的HE染色的結(jié)果。
[0102]圖20A示出了通過對分化或未分化3T3-L1細(xì)胞施用rAM并針對AM、PPAR Y 2和DAPI對細(xì)胞染色獲得的結(jié)果。圖20B示出了基于圖20A的結(jié)果根據(jù)PPAR Y 2的表達(dá)水平對細(xì)胞分類并計算每100個每種細(xì)胞中包含rAIM的細(xì)胞的數(shù)目而獲得的測量結(jié)果。圖20C示出了通過對3T3-L1細(xì)胞施用rAM并針對AM和內(nèi)含體或者AM和溶酶體對細(xì)胞染色獲得的結(jié)果。
[0103]圖21示出了使用金納米粒子對AM標(biāo)記之后與圖20的樣品相同的樣品的電子顯微鏡觀察的結(jié)果。
[0104]圖22示出了通過使用⑶36中和抗體處理3T3-L1細(xì)胞并檢測rAM對內(nèi)吞作用的影響獲得的結(jié)果。
[0105]圖23示出了通過對⑶36+/+小鼠和⑶36+小鼠靜脈注射rAM并對從脂肪組織制得的切片針對AIM和巨噬細(xì)胞進(jìn)行染色而獲得的結(jié)果。
[0106]圖24示出了通過注射對AIM+小鼠的脂肪組織直接施用用HA-標(biāo)簽標(biāo)記的rAM、使用脂肪組織通過抗HA抗體執(zhí)行免疫共沉淀并通過免疫印記檢測沉淀物中的FAS而獲得的結(jié)果。
[0107]圖25示出了通過使用抗Flag抗體或抗HA抗體的免疫共沉淀來證實用HA標(biāo)簽標(biāo)記的rAM和用FLAG標(biāo)簽標(biāo)記的FAS在HEK293T細(xì)胞中的結(jié)合而獲得的結(jié)果。
[0108]圖26示出了通過用Flag標(biāo)簽標(biāo)記FAS的每個結(jié)構(gòu)域、在穩(wěn)定地表達(dá)AM-HA的HEK293T細(xì)胞中進(jìn)行表達(dá)并通過使用抗Flag抗體或抗HA抗體的免疫共沉淀來證實FAS和AIM的結(jié)合而獲得的結(jié)果。
[0109]圖27示出了在存在或不存在rAM (5 μ g/ml)并存在C75 (25 μ Μ)的情況下處理6天的3T3-L1細(xì)胞的FAS活性的測量結(jié)果。
[0110]圖28示出了 ΑΜ+/+小鼠和AIM+小鼠的脂肪組織中的FAS活性的測量結(jié)果。
[0111]圖29示出了在之前3小時通過局部注射到脂肪中施用rAM或BSA的AM+小鼠的脂肪組織的FAS活性的測量結(jié)果。
[0112]圖30示出了人源AM的氨基酸序列和小鼠AM的氨基酸序列及其之間的共有序列。
[0113]圖31是示出FAS結(jié)構(gòu)的概念圖。
[0114]圖32示出了用HFD喂飼12周的AIM+/+小鼠和AIM+小鼠的內(nèi)臟脂肪量和皮下脂
肪量的變化的測量結(jié)果。
[0115]圖33示出了 AIM+小鼠5周(在5周內(nèi)，每周對小鼠施用HFD以及rAM或BSA兩次)的體重變化的測量結(jié)果。
[0116]圖34示出了 AIM+小鼠5周(在5周內(nèi)，每周對小鼠施用HFD以及rAM或BSA兩次)的內(nèi)臟脂肪量和皮下脂肪量的變化的測量結(jié)果。
[0117]圖35示出了在圖33和圖34中示出的實驗之后的AM+小鼠的內(nèi)臟脂肪中的脂肪細(xì)胞標(biāo)記等的mRNA水平的測量結(jié)果。
[0118]圖36示出了通過免疫印跡對狗、貓和小鼠的血清中的AM蛋白的檢測結(jié)果。
[0119]圖37示出了通過基于FSP27表達(dá)的篩選獲得的低分子量化合物的AIM抑制活性的評價結(jié)果。
[0120]圖38示出了通過基于FSP27表達(dá)的篩選獲得的低分子量化合物的AM抑制活性的評價結(jié)果。
[0121]圖39示出了通過基于FSP27表達(dá)的篩選獲得的抗AIM抗體的AIM中和活性的評價結(jié)果。
[0122]圖40示出了經(jīng)全面醫(yī)學(xué)檢查的大約550個患者的血液AM濃度的測量結(jié)果。
[0123]圖41示出了隨意選擇的BMI為18_25或不小于35的獻(xiàn)血者(包括外國人)的血液AIM濃度的測量結(jié)果。
【具體實施方式】
[0124]本發(fā)明的用于預(yù)防或治療代謝綜合癥及相關(guān)疾病的方法包含將AIM抑制劑施用到對象的步驟。
[0125]在本說明書中，代謝綜合癥是表現(xiàn)為一系列疾病鏈的概念，該一系列疾病鏈通常從內(nèi)臟脂肪型肥胖癥(內(nèi)臟脂肪積累)開始，然后通過脂肪組織的慢性炎癥、來自脂肪細(xì)胞的脂肪細(xì)胞因子的分泌異常和血液游離脂肪酸的異常量等引起胰島素抗性，其后引發(fā)諸如糖尿病、高血脂癥和高血壓等的與生活方式相關(guān)的疾病，最后發(fā)展為各種動脈硬化疾病。疾病鏈的下游可以包括肝臟疾病、肝失疏泄、腦血管疾病、局部缺血性心臟病、心力衰竭、癡呆癥、腦溢血、神經(jīng)癥和腎臟疾病等。
[0126]在本說明書中，代謝綜合癥及相關(guān)疾病包括基于在代謝綜合癥的發(fā)作或行進(jìn)的機(jī)制中以及在代謝綜合癥的發(fā)作或行進(jìn)的過程中產(chǎn)生的各種異常的任何疾病、癥狀和異常。例如，他們包括但不限于代謝綜合癥、肥胖癥、胰島素抗性、糖尿病、高血脂癥、高血壓、動脈硬化疾病、肝臟疾病(包括脂肪肝、肝癌)、肝失疏泄、腦血管疾病、局部缺血性心臟病、心力衰竭、癡呆癥、腦溢血、神經(jīng)癥、腎臟疾病、脂肪細(xì)胞因子分泌異常和血液游離脂肪酸量異
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[0127]在本說明書中，以最廣泛的意義和方式使用代謝綜合癥及相關(guān)疾病的預(yù)防或治療，例如，胰島素抗性的預(yù)防、延遲或改善；代謝綜合癥及相關(guān)疾病的發(fā)作的預(yù)防、延遲或改善；與代謝綜合癥及相關(guān)疾病有關(guān)的一種或多種癥狀的緩解；代謝綜合癥及相關(guān)疾病的診斷標(biāo)準(zhǔn)中的各項值的改善；等等。
[0128]作為代謝綜合癥的診斷標(biāo)準(zhǔn)的項的示例包括作為腹部肥胖的指標(biāo)的腰部直徑、血清甘油三酯值、HDL膽固醇值、血壓、空腹血糖水平、葡萄糖耐量、胰島素抗性和尿白蛋白質(zhì)
含量等。[0129]在本說明書中，AM抑制劑表示通過抑制AM蛋白質(zhì)的功能或表達(dá)來抑制機(jī)體中AIM蛋白質(zhì)活性的物質(zhì)。其示例包括但不限于低分子量化合物、高分子量化合物、肽、蛋白質(zhì)和核酸等。
[0130]在本說明書中，如上所述，“AM”是作為SRCR超家族的成員的可溶性蛋白質(zhì)。作為一個示例，在圖30中示出了人類AIM和小鼠AM的氨基酸序列。
[0131]如下述的示例10中所示，在大部分健康個體(經(jīng)過全面健康檢查而無需醫(yī)療看護(hù)的個體)中，血液AM濃度是5-20 μ g/mL。此外，如示例11中所示,具有35或更高BMI的對象與具有18-25BMI的對象相比，表現(xiàn)出顯著高的血液AM濃度。
[0132]本發(fā)明的AIM抑制劑可以抑制任何種類的AIM。例如，人類、人類之外的哺乳動物(例如，小鼠、大鼠、豚鼠、兔、狗、貓、豬、牛、馬、猴)以及鳥類等中的AIM同源蛋白質(zhì)的抑制劑也相當(dāng)于本發(fā)明的AIM抑制劑。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可以從高水平的序列相似性和功能分析來評價其他哺乳動物或鳥類中的蛋白質(zhì)是否是AIM的同源蛋白質(zhì)。例如，小鼠AIM和人類AM之間的氨基酸序列的同源性高達(dá)大約80%。另外，對于小鼠AM和人類AIM，SRCR結(jié)構(gòu)域中的共有序列(在具有SRCR結(jié)構(gòu)域的諸如CD5、CD6等的其他分子中保守的氨基酸序列)完全相同。
[0133]作為示例，在SEQ ID NO: 1、22、23、24和25中分別示出了人類、黑猩猩、狗、小鼠和
大鼠的AIM的氨基酸序列。
[0134]另外，本發(fā)明的AM抑制劑可以抑制AM的類似物或變異體。AIM的類似物和變異體的示例包括具有其中經(jīng)過缺失、取代或添加一個至幾個氨基酸的AM的氨基酸序列并且保持AIM的功能的蛋白質(zhì)。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可以通過高水平的序列相似性或功能分析來確定某個蛋白質(zhì)是否是AIM的類似物或變異體。
[0135]在本發(fā)明中，AIM的受AM抑制劑抑制的功能是指將巨噬細(xì)胞浸潤進(jìn)入脂肪組織中的功能以及對于巨噬細(xì)胞浸潤進(jìn)入脂肪組織中所需的并且由AIM直接或間接地表現(xiàn)的任何功能。對于巨噬細(xì)胞浸潤進(jìn)入脂肪組織中所需的并且由AM直接或間接地表現(xiàn)的任何功能的示例包括在脂肪細(xì)胞表面上導(dǎo)致結(jié)合到CD36的功能；通過內(nèi)吞作用導(dǎo)致進(jìn)入脂肪細(xì)胞中的功能；在脂肪細(xì)胞中導(dǎo)致結(jié)合到FAS的功能；導(dǎo)致抑制FAS的酶活性的功能；導(dǎo)致促進(jìn)脂滴融解的功能；通過脂滴融解引發(fā)巨噬細(xì)胞遷移的功能；等等。
[0136]通過抑制AIM的這些功能中的任何功能，可以防止巨噬細(xì)胞浸潤進(jìn)入脂肪組織中，巨噬細(xì)胞浸潤進(jìn)入脂肪組織中導(dǎo)致脂肪組織和整個機(jī)體的慢性炎癥。因此，即使是肥胖癥，也不引發(fā)胰島素抗性，并可以在上游停止代謝綜合癥疾病的鏈?zhǔn)桨l(fā)作。
[0137](抑制AM功能的AM抑制劑)
[0138]抑制AIM的功能的AM抑制劑通過直接或間接地作用于AIM來抑制AIM的全部功能或部分功能。抑制AIM功能的機(jī)制的示例包括但不限于降低血液中AIM的穩(wěn)定性、抑制AIM與CD36的結(jié)合、抑制AM進(jìn)入靶細(xì)胞中、抑制AM從內(nèi)含體轉(zhuǎn)移到細(xì)胞質(zhì)中以及抑制AM與FAS的結(jié)合等。
[0139]當(dāng)施用降低血液中AIM的穩(wěn)定性的抑制劑時，AIM在短時間內(nèi)被降解，而未發(fā)揮其功能。
[0140]當(dāng)施用抑制AM與⑶36結(jié)合的AM抑制劑時，可以抑制AIM通過內(nèi)吞作用進(jìn)入靶細(xì)胞中，由此可以抑制AIM的功能。
[0141]作為抑制AIM與CD36結(jié)合的物質(zhì)，可以使用抑制蛋白質(zhì)之間結(jié)合的任何物質(zhì)，例如可以使用抗AIM抗體和抗CD36抗體。如下述的參考示例中所示，施用抗CD36抗體可以抑制AM進(jìn)入靶細(xì)胞中。對于抗AM抗體，將AM對CD36的結(jié)合位點識別為抗原決定基的抗體是優(yōu)選的。對于抗CD36抗體，識別CD36對AIM的結(jié)合位點的抗體是優(yōu)選的。
[0142]本說明書中的“抗體”也包括抗體片段，并可以是單克隆抗體、多克隆抗體、重組抗體、人源抗體、人源化抗體、嵌合抗體、單鏈抗體、Fab片段、F(ab’)2抗體、scFv、雙特異性抗體以及合成抗體等。
[0143]可以根據(jù)本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的方法生產(chǎn)這些抗體。例如，可以通過從用AM免疫的非人類的哺乳動物中分離產(chǎn)生抗體的細(xì)胞，將產(chǎn)生抗體的細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞等融合以產(chǎn)生雜交瘤細(xì)胞,并純化由雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生的抗體來獲得抗AIM的單克隆抗體。另外，可以從用AIM免疫的動物的血清等中獲得多克隆抗體。
[0144]這里使用的用于免疫的AM可以是全長或片段，并且本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可以合適地確定。當(dāng)使用片段時，它 優(yōu)選地包含對CD36的結(jié)合位點。
[0145]另外，當(dāng)能夠獲得有效地抑制AM對CD36的結(jié)合的非人源的單克隆抗體時，也可以通過基因重組的方法生產(chǎn)抗體。例如,從產(chǎn)生抗AM單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞通過標(biāo)準(zhǔn)方法來制備總RNA，使用市售的試劑盒制備編碼抗AIM抗體的mRNA，并使用逆轉(zhuǎn)錄酶合成cDNA，由此可以獲得編碼抗AM抗體的DNA。將包含該DNA的表達(dá)載體轉(zhuǎn)染到合適的宿主細(xì)胞中并在合適的條件下培養(yǎng)宿主細(xì)胞以表達(dá)抗AIM抗體。
[0146]另外，還可以使用上述cDNA作為模版通過PCR方法來獲得編碼抗AM抗體的⑶R區(qū)域的DNA。利用編碼⑶R區(qū)域的DNA，可以根據(jù)常規(guī)方法通過基因重組方法來生產(chǎn)人源抗體和人源化抗體。例如,通過PCR方法來合成編碼來源于非人源抗體的⑶R區(qū)域的DNA和設(shè)計為連接到人源抗體的骨架區(qū)的DNA，再連接到編碼人源抗體的恒定區(qū)的DNA，由此可以獲得編碼人源抗體的DNA。
[0147]根據(jù)已知的方法(利用限制酶的方法等)將這樣的DNA插入到表達(dá)載體(例如，質(zhì)粒、逆轉(zhuǎn)錄病毒、腺病毒、腺相關(guān)病毒(AAV)、諸如花椰菜花葉病毒、煙草花葉病毒等的植物病毒、粘粒、YAC、來源于EBC的附加體)中，將表達(dá)載體轉(zhuǎn)染到合適的宿主細(xì)胞中以產(chǎn)生轉(zhuǎn)化子。表達(dá)載體還可以包含調(diào)節(jié)抗體基因表達(dá)的啟動子、復(fù)制起始點和選擇標(biāo)記基因等?？梢愿鶕?jù)宿主細(xì)胞和載體的種類合適地選擇啟動子和復(fù)制起始點。
[0148]然后，在合適的條件下培養(yǎng)轉(zhuǎn)化子以表達(dá)抗AM抗體的人源抗體。
[0149]例如，可以使用諸如哺乳動物細(xì)胞(CH0細(xì)胞、COS細(xì)胞、骨髓瘤細(xì)胞、HeLa細(xì)胞、Vero細(xì)胞等)、昆蟲細(xì)胞、植物細(xì)胞、真菌細(xì)胞(酵母、曲霉等)的真核細(xì)胞以及諸如大腸桿菌(E.Coli)、枯草芽孢桿菌等的原核細(xì)胞作為宿主細(xì)胞。
[0150]可以通過已知方法(例如，使用蛋白質(zhì)A等的親和柱、其他的色譜柱、過濾、超濾、鹽析、透析等)的合適的組合來分離和純化表達(dá)的抗體。
[0151]當(dāng)本發(fā)明的抗AIM抗體是諸如Fab片段、F(ab’)2抗體和scFv等的低分子量的抗體時，也可以根據(jù)上述的方法，使用編碼低分子量抗體的DNA表達(dá)抗體。另外，也可以通過使用諸如木瓜蛋白酶、胰蛋白酶等的酶的處理來生產(chǎn)抗體。
[0152]也可以使用結(jié)合到抗AM抗體并且不抑制FAS活性的蛋白質(zhì)作為抑制AM和⑶36結(jié)合的AM抑制劑。這樣的蛋白質(zhì)與AM競爭性地結(jié)合到⑶36，并且抑制由于AM結(jié)合到⑶36而對FAS活性的抑制。
[0153]結(jié)合到抗AM抗體并且不抑制FAS活性的蛋白質(zhì)的示例包括AM片段、AM變異體或其片段以及AIM嵌合蛋白質(zhì)或其片段。[0154]然而，AM片段不受具體限制，只要它包含AM的部分肽，例如，可以使用包含AM功能域或保守區(qū)域的5-150個氨基酸的片段。
[0155]可以使用具有AM的經(jīng)過缺失、取代或添加1-10個氨基酸的氨基酸序列并且不抑制FAS活性的蛋白質(zhì)作為AIM變異體。
[0156]AIM嵌合蛋白質(zhì)是指部分人源AIM蛋白質(zhì)和來源于其他動物(例如小鼠)的AIM蛋白質(zhì)的嵌合蛋白質(zhì)。
[0157]結(jié)合到抗AM抗體并且不抑制FAS活性的蛋白質(zhì)還包括AM變異體或AM嵌合蛋白質(zhì)的片段。
[0158]通過常規(guī)方法獲得編碼蛋白質(zhì)的DNA并通過基因重組的方法使DNA表達(dá)蛋白質(zhì)，這樣可以表達(dá)結(jié)合到抗AM抗體并且不抑制FAS活性的蛋白質(zhì)。為了增加對⑶36的親和力和在血液中的穩(wěn)定性，可以視情況改變和修改氨基酸序列。必要時，可以將蛋白質(zhì)表達(dá)為與其他蛋白質(zhì)和肽的融合蛋白質(zhì)。
[0159]另外，也可以通過生產(chǎn)每個全長蛋白質(zhì)并用蛋白酶處理該蛋白質(zhì)來獲得AM片段、AIM變異體的片段和AIM嵌合蛋白質(zhì)的片段。
[0160]另外，也可以使用結(jié)合到⑶36而不抑制FAS活性的蛋白質(zhì)作為抑制AM和⑶36的結(jié)合的AIM抑制劑。這樣的蛋白質(zhì)與AIM競爭性地結(jié)合到⑶36，并且抑制因AIM結(jié)合到⑶36而對FAS活性的抑制。
[0161]結(jié)合到⑶36而不抑制FAS活性的蛋白質(zhì)的示例包括AM片段、AM變異體或其片段以及AIM嵌合蛋白質(zhì)或其片段。
[0162]當(dāng)施用抑制AIM進(jìn)入靶細(xì)胞中的AIM抑制劑時，可以抑制AIM結(jié)合到靶細(xì)胞中的FAS并抑制其酶活性的功能。
[0163]另外，抑制AM從內(nèi)含體轉(zhuǎn)移到細(xì)胞質(zhì)中的AM抑制劑還抑制AM結(jié)合到靶細(xì)胞中的FAS并抑制其酶活性的功能。
[0164]當(dāng)施用抑制AIM和FAS的結(jié)合的AIM抑制劑時，可以直接抑制AIM對FAS的作用，例如，可以使用結(jié)合到FAS并且不抑制FAS活性的蛋白質(zhì)。這樣的蛋白質(zhì)與AM競爭性地結(jié)合到FAS’并且抑制因AM結(jié)合到FAS而對FAS活性的抑制。
[0165]對于這種的蛋白質(zhì)，優(yōu)選結(jié)合到從DH、ER、TE和CC組成的組中選擇的至少一個FAS結(jié)構(gòu)域的蛋白質(zhì)。
[0166]結(jié)合到FAS并且不抑制FAS活性的蛋白質(zhì)的示例包括AM片段、AIM變異體或其片段以及AIM嵌合蛋白質(zhì)或其片段。[0167]可以通過利用AM抑制前脂肪細(xì)胞分化成為成熟脂肪細(xì)胞、引起脂肪細(xì)胞中的脂滴融解以及減小脂肪細(xì)胞的尺寸等事實的篩選方法從候選化合物中容易地選擇上面解釋的抑制AM的功能的AM抑制劑。
[0168]例如，可以通過包括以下步驟的篩選方法容易地選擇AM抑制劑:
[0169](i )在用于分化成為脂肪細(xì)胞的條件下培養(yǎng)前脂肪細(xì)胞，并且僅將AIM或AIM與候選化合物加入培養(yǎng)基；
[0170](ii)評價上述前脂肪細(xì)胞向脂肪細(xì)胞的分化；以及
[0171](iii)選擇與僅加入AM相比，在與AM —起加入時增加分化誘導(dǎo)效率的候選化合物。
[0172]例如，可以使用脂肪細(xì)胞中脂滴的產(chǎn)生以及脂肪細(xì)胞標(biāo)記、前脂肪細(xì)胞標(biāo)記和/或間充質(zhì)干細(xì)胞標(biāo)記的表達(dá)作為指標(biāo)來執(zhí)行步驟(ii )。
[0173]另外，可以通過包括以下步驟的篩選方法容易地選擇AM抑制劑:
[0174](a)培養(yǎng)脂肪細(xì)胞，并且僅將AM或AM與候選化合物加入培養(yǎng)基；
[0175](b)評價上述脂肪細(xì)胞中的脂滴融解；以及[0176](C)選擇與僅加入AM相比，在與AM—起加入時降低脂滴融解效率的候選化合物。
[0177]例如，可以使用脂肪細(xì)胞的培養(yǎng)上清液中的丙三醇或游離脂肪酸的量、脂滴形成相關(guān)基因的表達(dá)等作為指標(biāo)來執(zhí)行步驟(b)。
[0178]另外，可以通過包括以下步驟的篩選方法容易地選擇AM抑制劑:
[0179](I)培養(yǎng)脂肪細(xì)胞，并且僅將AM或AM與候選化合物加入培養(yǎng)基；
[0180](2)評價上述脂肪細(xì)胞的尺寸；以及
[0181](3)選擇與僅加入AM相比，在與AM —起加入時增加脂肪細(xì)胞的尺寸的候選化合物。
[0182]例如，可以通過細(xì)胞的伊紅染色來執(zhí)行步驟(2)。
[0183]另外，AM抑制劑包括以下步驟:
[0184]在候選化合物的存在或不存下在包括AIM的培養(yǎng)基中培養(yǎng)脂肪細(xì)胞或前脂肪細(xì)胞；以及
[0185]評價在上述培養(yǎng)之后被攝入上述細(xì)胞中的AIM0
[0186]例如，可以在細(xì)胞培養(yǎng)步驟之后通過固定細(xì)胞、賦予滲透性、加入被標(biāo)記的以允許檢測的抗AM抗體以及溫育細(xì)胞來檢測攝入細(xì)胞中的AIM。
[0187]當(dāng)在候選化合物的存在下細(xì)胞中的所述攝入減少時，可以評價該候選化合物通過抑制AM進(jìn)入細(xì)胞中抑制了 AIM的功能。
[0188]另外，AM抑制劑包括以下步驟:
[0189]在候選化合物存在或不存在下在包括AIM的培養(yǎng)基中培養(yǎng)脂肪細(xì)胞或前脂肪細(xì)胞；以及
[0190]評價在上述細(xì)胞中AIM和FAS的結(jié)合。
[0191]例如，可以通過制備細(xì)胞裂解液、使用抗AIM抗體進(jìn)行免疫沉淀以及使用抗FAS抗體對免疫沉淀物進(jìn)行免疫印跡來確定AIM和FAS的結(jié)合。
[0192]當(dāng)在候選化合物的存在下AIM與FAS的結(jié)合減少時，可以評價該候選化合物通過抑制AM和FAS的結(jié)合來抑制AM的功能。
[0193]可以使用下面的化合物作為抑制AIM的功能的低分子量化合物。
[0194]
【權(quán)利要求】
1.一種用于預(yù)防或治療代謝綜合癥或其相關(guān)疾病的方法，所述方法包括將AIM抑制劑施用到對象的步驟。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述AIM抑制劑降低血液中AIM的穩(wěn)定性。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述AIM抑制劑抑制AIM與CD36之間的結(jié)合。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述AIM抑制劑抑制AIM進(jìn)入靶細(xì)胞中。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述AIM抑制劑抑制AIM從內(nèi)含體轉(zhuǎn)移到細(xì)胞質(zhì)。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述AIM抑制劑抑制AIM結(jié)合到脂肪酸合酶。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述AIM抑制劑抑制AIM的表達(dá)。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-7中任意一項所述的方法，其中，所述代謝綜合癥或其相關(guān)疾病是從由代謝綜合癥、肥胖癥、胰島素抗性、糖尿病、高血脂癥、高血壓、動脈硬化疾病、肝臟疾病、肝失疏泄、腦血管疾病、局部缺血性心臟病、心力衰竭、癡呆癥、腦溢血、神經(jīng)癥、腎臟疾病、脂肪細(xì)胞因子分泌異常以及血液游離脂肪酸量異常組成的組中選擇的至少一種。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-8中任意一項所述的方法，其中，所述對象是人。
10.根據(jù)權(quán)利要求1-8中任意一項所述的方法，其中，所述對象是非人類的哺乳動物或鳥類。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的方法，其中，所述對象是狗或貓。
12.一種用于預(yù)防或治療代謝綜合癥或其相關(guān)疾病的藥劑，所述藥劑包括從以下組中選擇的至少一種: 抗AIM抗體； 抗CD36抗體； 對AM基因具有RNAi效應(yīng)的雙鏈核酸； AIM基因的反義核酸； AM基因的核酶； 結(jié)合到抗AIM抗體而不抑制脂肪酸合酶活性的蛋白質(zhì)； 結(jié)合到CD36而不抑制脂肪酸合酶活性的蛋白質(zhì)； 結(jié)合到脂肪酸合酶而不抑制脂肪酸合酶活性的蛋白質(zhì)；以及 可溶⑶36。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的治療藥劑，其中，所述抗體是單克隆抗體、多克隆抗體、重組抗體、人源抗體、人源化抗體、嵌合抗體或抗體片段。
14.根據(jù)權(quán)利要求12或13所述的治療藥劑，其中，所述結(jié)合到脂肪酸合酶而不抑制脂肪酸合酶活性的蛋白質(zhì)結(jié)合到從由DH、ER、TE和CC組成的組中選擇的至少一種結(jié)構(gòu)域。
15.根據(jù)權(quán)利要求12或13所述的治療藥劑，其中，所述結(jié)合到抗AIM抗體而不抑制脂肪酸合酶活性的蛋白質(zhì)選自于由AIM片段、AIM變異體或其片段以及AIM嵌合蛋白質(zhì)或其片段組成的組。
16.根據(jù)權(quán)利要求12或13所述的治療藥劑，其中，所述結(jié)合到CD36而不抑制脂肪酸合酶活性的蛋白質(zhì)選自于由AIM片段、AIM變異體以及AIM嵌合蛋白質(zhì)組成的組。
17.根據(jù)權(quán)利要求12或13所述的治療藥劑，其中，所述結(jié)合到脂肪酸合酶而不抑制脂肪酸合酶活性的蛋白質(zhì)選自于由AIM片段、AIM類似物、AIM變異體以及AIM嵌合蛋白質(zhì)組成的組。
18.根據(jù)權(quán)利要求15-17中任意一項所述的治療藥劑，其中，所述AIM片段選自于包含AIM蛋白質(zhì)的功能域及其保守區(qū)域的片段。
19.根據(jù)權(quán)利要求12-18中任意一項所述的治療藥劑，其中，所述代謝綜合癥或其相關(guān)疾病是從由代謝綜合癥、肥胖癥、胰島素抗性、糖尿病、高血脂癥、高血壓、動脈硬化疾病、肝臟疾病、肝失疏泄、腦血管疾病、局部缺血性心臟病、心力衰竭、癡呆癥、腦溢血、神經(jīng)癥、腎臟疾病、脂肪細(xì)胞因子分泌異常以及血液游離脂肪酸量異常組成的組中選擇的至少一種。
20.根據(jù)權(quán)利要求12-19中任意一項所述的治療藥劑，其中，所述對象是人。
21.根據(jù)權(quán)利要求12-19中任意一項所述的治療藥劑，其中，所述對象是非人類的哺乳動物或鳥類。
22.根據(jù)權(quán)利要求21所述的治療藥劑，其中，所述對象是狗或貓。
23.一種用于預(yù)防或治療代謝綜合癥或其相關(guān)疾病的方法，所述方法包括施用根據(jù)權(quán)利要求12-22中任意一項所述的治療藥劑的步驟。
24.一種生產(chǎn)AM抑制劑的方法，所述方法包括: 用蛋白酶處理AM以獲得AM片段的步驟，以及 通過其中固定有結(jié)合到AIM的功能域或保守區(qū)域的抗AM抗體的親和柱純化所述AIM片段的步驟。
【文檔編號】A61P3/06GK103648531SQ201180036214
【公開日】2014年3月19日 申請日期:2011年5月20日 優(yōu)先權(quán)日:2010年5月20日
【發(fā)明者】宮崎徹 申請人:宮崎徹, 大日本住友制藥株式會社