miRNA-378在脂肪肝治療中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于代謝性疾病治療領(lǐng)域。具體地，涉及一種治療脂肪肝的miRNA及其作 用機(jī)制。
【背景技術(shù)】
[0002] 肝臟是人體重要的代謝性器官，其可以感知來自激素、神經(jīng)沖動(dòng)以及營(yíng)養(yǎng)代謝因 子等多種信號(hào)并行使特定的功能。肝臟在調(diào)節(jié)機(jī)體糖脂平衡中有著十分重要的作用。而脂 肪肝是由于機(jī)體脂代謝紊亂而導(dǎo)致肝細(xì)胞內(nèi)甘油三酯（TG)蓄積過多而產(chǎn)生的病變。近年 來，隨著人們生活飲食結(jié)構(gòu)的變化，脂肪肝的發(fā)病率逐年增加。長(zhǎng)期的肝臟脂質(zhì)沉積可能出 現(xiàn)肝功能異常，嚴(yán)重者可導(dǎo)致肝纖維化、肝硬化，甚至引起肝功能衰竭。
[0003] 目前，脂肪肝的治療主要依靠降低血脂或生活方式的改變，如飲食控制、加強(qiáng)運(yùn) 動(dòng)。但由于降血脂的同時(shí)還要同時(shí)達(dá)到抑制肝內(nèi)脂肪的沉積，但某些降脂藥甚至?xí)又馗?功能障礙，而生活方式改變的主觀性太強(qiáng)，患者依從性不夠好。因此目前為止，還沒有一種 能夠同時(shí)降低血脂的同時(shí)快速減少肝內(nèi)脂肪堆積，從而治療脂肪肝的有效方法。
[0004] 因此，本領(lǐng)域迫切需要開發(fā)一種能夠調(diào)整肝內(nèi)脂肪代謝、抑制肝內(nèi)脂肪沉積，從而 治療脂肪肝的方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明提供了一種能夠通過降低胰島素代謝通路中特殊基因表達(dá)并降低肝內(nèi)脂 肪含量的miRNA-378,該miRNA能夠有效地改善肝內(nèi)脂肪蓄積，從而治療脂肪肝。
[0006] 本發(fā)明第一方面，提供了一種活性成分的用途，所述的活性成分選自下組：
[0007] (a) · miRNA-378 家族的微小 RNA，所述 miRNA-378 家族的微小 RNA 包括：miRNA-378 或經(jīng)修飾的miRNA-378衍生物；或核心序列為5' CUGGA⑶3'、長(zhǎng)度為18-26nt、功能與 miRNA-378相同或基本相同的微小RNA或經(jīng)修飾的miRNA衍生物；
[0008] (b).前體miRNA，所述的前體miRNA能在宿主內(nèi)加工成（a)中所述的miRNA-378 ;
[0009] (c).多核苷酸，所述的多核苷酸能被宿主轉(zhuǎn)錄形成（b)中所述的前體miRNA,并加 工形成（a)中所述的微小RNA ;
[0010] (d).表達(dá)載體，所述表達(dá)載體含有（a)中所述的miRNA-378、或（b)中所述的前體 miRNA、或（c)中所述的多核苷酸；
[0011] (e). (a)中所述的微小RNA的激動(dòng)劑；
[0012] 其中，所述的活性成分用于：
[0013] (i)制備抑制pi 10 α基因或其蛋白表達(dá)和/或活性的藥物組合物；和/或 [0014] α υ制備治療脂肪肝；和/或抑制肝內(nèi)甘油三酯蓄積的藥物組合物。
[0015] 在另一優(yōu)選例中，所述的藥物組合物包括所述的活性成分和藥學(xué)上可接受的載 體。
[0016] 在另一優(yōu)選例中，所述的miRNA-378還用于制備治療ρ110 α相關(guān)腫瘤。
[0017] 在另一優(yōu)選例中，所述的藥物組合物還含有額外的ρ??οα抑制劑。
[0018] 在另一優(yōu)選例中，（a)中所述的核心序列指微小RNA第2-8位的核苷酸序列； 和/或所述的"功能與miRNA-378相同或基本相同"是指保留了 miRNA-378的彡40%，且 < 500%的抑制ρ? 10 α基因或其蛋白表達(dá)和/或活性的功能。
[0019] 在另一優(yōu)選例中，所述的miRNA-378的序列如SEQ ID Ν0. :1所示 (ACUGGACUUGGAGUCAGAAGGC)
[0020] 在另一優(yōu)選例中，所述的miRNA-378來源于哺乳動(dòng)物，優(yōu)選地，來源于人、大鼠、或 小鼠。
[0021 ] 在另一優(yōu)選例中，所述的藥物組合物還包括任選的降脂藥。
[0022] 在另一優(yōu)選例中，所述的降脂藥包括（但不限于）：HMG - CoA還原酶抑制劑（他汀 類藥物）、煙酸及其衍生物、普羅布考以及貝特類等。
[0023] 在另一優(yōu)選例中，所述的經(jīng)修飾的miRNA衍生物，其修飾選自下組的一種或多種 修飾形式：核苷酸的糖基修飾、核苷酸之間連接方式的修飾、膽固醇修飾、鎖核苷酸修飾、肽 段修飾、脂類修飾、鹵素修飾、烴基修飾、和核酸修飾。
[0024] 在另一優(yōu)選例中，所述的核苷酸的糖基修飾包括2-0-甲基的糖基修飾、2-0-甲氧 乙酯的糖基修飾、2-0-烷基的糖基修飾、2-氟代的糖基修飾、糖環(huán)修飾、鎖核苷酸修飾；和/ 或
[0025] 所述的核苷酸之間連接方式的修飾包括硫代磷酸修飾、磷酸烷基化修飾；和/或
[0026] 所述的核酸修飾包括"TT"修飾。
[0027] 在另一優(yōu)選例中，（a)中所述經(jīng)修飾的miRNA衍生物是具有式I所示結(jié)構(gòu)的化合 物單體或其多聚體：
[0028] (X) η- (Y) m
[0029] 式 I，
[0030] 在式I中，
[0031] 各X為（a)中所述的微小RNA ;
[0032] 各Y獨(dú)立地為促進(jìn)微小RNA施藥穩(wěn)定性的修飾物；
[0033] Y連接于X的左側(cè)、右側(cè)或中間；
[0034] η為1-100的（較佳地1-20)正整數(shù)（較佳地η為1、2、3、4或5);
[0035] m為1-1000的（較佳地1-200)正整數(shù)；
[0036] 各""表示接頭、化學(xué)鍵、或共價(jià)鍵。
[0037] 在另一優(yōu)選例中，所述的接頭是長(zhǎng)度為1-10個(gè)堿基的核酸序列。
[0038] 在另一優(yōu)選例中，所述的Y包括（但不限于）膽固醇、類固醇、留醇、醇、有機(jī)酸、月旨 肪酸、酯、單糖、多糖、氨基酸、多肽、單核苷酸、多核苷酸。
[0039] 在另一優(yōu)選例中，（b)所述的前體miRNA的核苷酸序列如SEQ ID N0. : 2所示（前 體序列）。
[0040] 5 ' -AGGGCUCCUGACUCCAGGUCCU⑶GUGUUACCUAGAAAUAGCACUGGACUUGGA⑶CAGAAG
[0041] 在另一優(yōu)選例中，（c)中所述的多核苷酸具有式II所示的結(jié)構(gòu)：
[0042] Seq 正向-X-Seq 反向
[0043] 式 II，
[0044] 式 II 中，
[0045] Seq正向?yàn)槟茉谒拗髦斜患庸こ伤龅奈⑿NA核苷酸序列；
[0046] Seq反向?yàn)榕cSeq正向基本上互補(bǔ)或完全互補(bǔ)的核苷酸序列；
[0047] X為位于Seq正向和Seq反向之間的間隔序列，并且所述間隔序列與Seq正向和 Seq反向不互補(bǔ)；
[0048] 并且式II所示的結(jié)構(gòu)在轉(zhuǎn)入宿主細(xì)胞后，形成式III所示的二級(jí)結(jié)構(gòu)：
[0049]
[0050] 式 III，
[0051] 式III中，Seq正向、Seq反向和X的定義如上述，
[0052] | |表示在Seq正向和Seq反向之間形成的堿基互補(bǔ)配對(duì)關(guān)系。
[0053] 在另一優(yōu)選例中，（d)中所述的表達(dá)載體包括：病毒載體和非病毒載體。
[0054] 在另一優(yōu)選例中，（e)中所述miRNA-378的激動(dòng)劑選自下組：促進(jìn)miRNA-378表達(dá) 的物質(zhì)、提高miRNA-378活性的物質(zhì)。
[0055] 在另一優(yōu)選例中，所述的藥學(xué)上可接受的載體選自下組：水、鹽水、脂質(zhì)體、脂質(zhì)、 蛋白、蛋白-抗體綴合物、肽類物質(zhì)、纖維素、納米凝膠、或其組合。
[0056] 本發(fā)明第二方面，提供了一種藥物組合物，所述的藥物組合物含有活性成分，和藥 學(xué)上可接受的載體，其中，所述的活性成分選自：
[0057] (a) · miRNA-378 家族的微小 RNA，所述 miRNA-378 家族的微小 RNA 包括：miRNA-378 或經(jīng)修飾的miRNA-378衍生物；或核心序列為5' CUGGA⑶3'、長(zhǎng)度為18-26nt、功能與 miRNA-378相同或基本相同的微小RNA或經(jīng)修飾的miRNA衍生物；
[0058] (b).前體miRNA，所述的前體miRNA能在宿主內(nèi)加工成（a)中所述的miRNA-378 ;
[0059] (c).多核苷酸，所述的多核苷酸能被宿主轉(zhuǎn)錄形成（b)中所述的前體miRNA,并加 工形成（a)中所述的微小RNA ;
[0060] (d).表達(dá)載體，所述表達(dá)載體含有（a)中所述的miRNA-378、或（b)中所述的前體 miRNA、或（c)中所述的多核苷酸。
[0061] 本發(fā)明第三方面，提供了一種篩選促進(jìn)miRNA-378候選化合物的方法，包括步驟：
[0062] (a)將加入候選化合物的細(xì)胞培養(yǎng)體系作為實(shí)驗(yàn)組；將不加入候選化合物的細(xì)胞 培養(yǎng)體系作為對(duì)照組；
[0063] (b)測(cè)試實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組中plio α蛋白的表達(dá)量和/或活性；
[0064] 其中，當(dāng)測(cè)試組中pllO α蛋白的表達(dá)量和/或活性顯著高于對(duì)照組，則表明該候 選化合物為促進(jìn)miRNA-378的物質(zhì)。
[0065] 在另一優(yōu)選例中，所述的細(xì)胞為肝細(xì)胞。
[0066] 在另一優(yōu)選例中，步驟（b)中還包括：
[0067] 進(jìn)一步測(cè)試所獲得化合物對(duì)實(shí)驗(yàn)組或?qū)φ战M中肝細(xì)胞內(nèi)甘油三酯蓄積的抑制作 用；
[0068] 其中，當(dāng)實(shí)驗(yàn)組中的肝細(xì)胞內(nèi)甘油三酯蓄積顯著低于對(duì)照組，則表明所述候選化 合物為治療脂肪肝的物質(zhì)。
[0069] 本發(fā)明第四方面，提供了一種體外非治療性的抑制ρ??ο α表達(dá)量和/或活性；和 /或抑制肝細(xì)胞內(nèi)甘油三酯蓄積的方法，包括步驟：
[0070] 向細(xì)胞培養(yǎng)體系中加入本發(fā)明第二方面所述的藥物組合物或miRNA-378,從而抑 制pllO α表達(dá)量和/或活性；和/或抑制肝細(xì)胞內(nèi)甘油三酯蓄積。
[0071] 本發(fā)明第五方面，提供了一種抑制pllO α表達(dá)量和/或活性、和/或抑制肝細(xì)胞 內(nèi)甘油三酯蓄積、和/或治療脂肪肝的方法，包括步驟：
[0072] 向需要的對(duì)象施用本發(fā)明第二方面所述的藥物組合物，從而抑制ρΙΙΟα表達(dá)量 和/或活性、和/或抑制肝細(xì)胞內(nèi)甘油三酯蓄積、和/或治療脂肪肝。
[0073] 在另一優(yōu)選例中，所述需要的對(duì)象為哺乳動(dòng)物，較佳地，為人、小鼠、或大鼠。
[0074] 本發(fā)明第六方面，提供了一種ρΙΙΟα基因或其蛋白的抑制劑，所述的抑制劑包括 本發(fā)明第二方面所述的藥物組合物。
[0075] 本發(fā)明第七方面，提供了一種ρΙΙΟα基因抑制劑的用途，用于制備治療脂肪肝的 藥物組合物。
[0076] 在另一優(yōu)選例中，所述的ρ110 α基因抑制劑為miRNA-378或其衍生序列。
[0077] 應(yīng)理解，在本發(fā)明范圍內(nèi)中，本發(fā)明的上述各技術(shù)特征和在下文（如實(shí)施例）中具 體描述的各技術(shù)特征之間都可以互相組合，從而構(gòu)成新的或優(yōu)選的技術(shù)方案。限于篇幅，在 此不再一一累述。
【附圖說