專利名稱：海狗油作為制備治療脂代謝紊亂(高血脂)藥的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及的是將海狗油作為制備治療脂代謝紊亂(高血脂)藥的應(yīng)用，具體地講，本發(fā)明涉及的是將海狗油作為制備治哺乳動(dòng)物以及人的治療脂代謝紊亂(高血脂)藥的應(yīng)用。
通常認(rèn)為，愛(ài)斯基摩人和日本沿海漁民患此類疾病的患者數(shù)量比一般人群要明顯的低，研究人員相信這種現(xiàn)象和與他們食用富含不飽和脂肪酸的海狗肉、油有關(guān)。
但是，至今并未有具體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)或者臨床結(jié)果加以證明。
在本發(fā)明中所述的海狗通常是指生活紐芬蘭、北大西洋地區(qū)、北極的一種哺乳動(dòng)物，它們體內(nèi)脂肪中不飽和脂肪酸含量高達(dá)25％，而且其分子結(jié)構(gòu)與人體內(nèi)的脂肪酸分子結(jié)構(gòu)相似。
本發(fā)明所述的海狗油(又稱海豹油)是指由上述海狗的皮下脂肪提煉而成的純天然產(chǎn)品。
研究結(jié)果表明，海狗油中含有大量的人體必需的體內(nèi)不能自行合成的ω-3系長(zhǎng)碳鏈多烯不飽和脂肪酸以及少量的角鯊烯(SPUALENE)。
本發(fā)明的藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)采用的海狗油為海狗體內(nèi)提取而成的微黃色油狀液體，由加拿大的大西洋衛(wèi)生食品有限公司以軟膠囊(0.5g/粒)方式提供，批號(hào)為11656，所述的海狗油在實(shí)驗(yàn)室采用室溫保存。
為了進(jìn)一步明確上述海狗油的成份和含量，以下對(duì)本發(fā)明所使用的海狗油的成份進(jìn)行分析和確認(rèn)。
現(xiàn)有技術(shù)已經(jīng)表明，從海狗油中提取的ω-3系多烯不飽和脂肪酸的化學(xué)主成份為EPA、DHA和DPA，其中EPA是指二十碳五烯酸；DPA是指二十二碳五烯酸；DHA是指二十二碳六烯酸；本發(fā)明的研究人員對(duì)上述獲得的海狗油進(jìn)行紫外吸收光譜、紅外吸收光譜、氣相色譜、氣-質(zhì)聯(lián)用色譜等項(xiàng)目的測(cè)定，對(duì)所述樣品的化學(xué)結(jié)構(gòu)進(jìn)行了確認(rèn)，具體如下本發(fā)明采用的海狗油樣品的檢測(cè)結(jié)果是
(1)紫外吸收光譜用氯仿(分析純)把樣品配成5.9mg/ml溶液后進(jìn)行全波長(zhǎng)紫外掃描，所使用的儀器的型號(hào)是U-3210spectrophotometer(Japan制造)；參見(jiàn)附

圖1，其結(jié)果表明樣品在249.8nm處有最大吸收，可以證明樣品中含有大量的不飽和鍵；(2)紅外吸收光譜參見(jiàn)附圖2，其結(jié)果表明，在3010cm-1和1745cm-1處的強(qiáng)吸收分別是不飽和＝C-H和＞C＝O伸縮振動(dòng)的特征吸收；1655cm-1處的弱吸收符合順式雙鍵(R1-C＝C-R2)的伸縮振動(dòng)特征吸收(1665-1635cm-1，反式為1675-1665cm-1)，H/\H722cm-1處的吸收峰符合順式雙鍵＝C-H彎曲振動(dòng)的特征吸收(730-665cm-1，反式為980-960cm-1)。
綜合紅外和紫外光譜分析，可以認(rèn)為樣品中主要為順式非共軛脂肪酸。
(3)氣相色譜在本項(xiàng)檢測(cè)中，采用的標(biāo)準(zhǔn)品由SIGMA公司提供，分別為Cis-5，8，11，14，17-EICOSAPENTAENOIC ACID METHYL ESTER，二十碳五烯酸甲酯；Cis-4，7，10，13，16，19-DOCOSAHEXAENOIC ACID ETHYL ESTER，二十二碳六烯酸乙酯；Cis-7，10，13，16，19-DOCOSAPENTAENOIC ACID METHYL ESTER，二十二碳五烯酸甲酯；樣品為上述獲得的海狗油，用GC法分析脂肪酸需要將其乙酯化以利氣化，具體是取所述的樣品80μl，加0.5ml/l的NaOH-乙醇液1ml，充N2，加塞，于50攝氏度水浴中振搖至小油滴完全消失，加三氟化硼乙醇液1.5ml?；旌暇鶆?，于50度水浴中放5min，取出冷卻，加正庚烷1ml、飽和NaCl為2ml混合均勻，分層。取上層液于另一試管中，加少量無(wú)水NA2SO4，充N2，于4度放置待GC分析。
所使用的儀器為HP6890；氣相色譜條件玻璃充填柱2m×3mm，10％DEGS酸洗，101白色擔(dān)體，載氣N2，流速25ml/min，檢測(cè)器FID，柱溫180度，氣化室210度，檢測(cè)器270度，進(jìn)樣量1ul。
將標(biāo)準(zhǔn)品用正己烷定容，配置成2.5mg/ml溶液，精密量取1ul進(jìn)行氣相含量測(cè)定，同樣的方法對(duì)樣品進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果是樣品和對(duì)照品的保留時(shí)間一致。
可參見(jiàn)附圖3-7。
(4)氣-質(zhì)聯(lián)用法采用的儀器為美國(guó)Trace 2000GC/Trace MS型氣-質(zhì)聯(lián)用儀，所有試劑均為分析純。
實(shí)驗(yàn)條件為氣相色譜條件PEG-20M玻璃毛細(xì)管柱(2m×0.32mm)；柱溫40度保持1min，以10度/min升溫至200度，保持5min，再以30度/min升溫至210度，保持2min；載氣N2，柱前壓3.0kpa，分流比1∶30，進(jìn)樣口溫度250度；離子源溫度250度，電離電壓70Ev，質(zhì)量掃描范圍350AmU.S-1；進(jìn)樣量1ml。
經(jīng)質(zhì)譜圖分析，確定樣品和標(biāo)準(zhǔn)品的分子量相符。
至此，對(duì)本發(fā)明采用的海狗油的分子量、成份、含量和結(jié)構(gòu)已經(jīng)得到確認(rèn)。
實(shí)驗(yàn)例一本實(shí)驗(yàn)例是采用高脂飼料致大鼠脂代謝紊亂模型檢驗(yàn)本發(fā)明所述的海狗油對(duì)大鼠脂代謝紊亂的效果，對(duì)海狗油在2.2ml/KG劑量下連續(xù)灌胃二周的藥效學(xué)作用進(jìn)行了觀察，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，該藥可使大鼠血清總膽固醇(TC)及甘油三酯(TG)水平明顯降低，HDL水平明顯升高，LDL+VLDL水平明顯下降，使肝組織中膽固醇水平明顯下降，說(shuō)明該藥有明顯的降血脂及減肝脂作用。
試驗(yàn)材料(1)海狗油，為海狗體內(nèi)提取而成的微黃色油狀液體，山大西洋食品公司生產(chǎn)，本實(shí)驗(yàn)室室溫保存，試驗(yàn)時(shí)按150g體重灌胃1.2ml(高劑量使用原液)或1ml(中、低劑量使用稀釋藥液)。
(2)陽(yáng)性對(duì)照藥，為脂必妥(0.35g/征片)，1.05g.Kg灌胃，1ml/只.批號(hào)20001024，成都地奧九泓制藥廠。
(3)高脂飼料4％膽固醇+10％豬油+0.2％丙基硫氧嘧啶+86％混合飼料；其中膽固醇(普通型)由北京奧星生物技術(shù)有限責(zé)任有限公司生產(chǎn)銷售；丙基硫氧嘧啶由第二軍醫(yī)大學(xué)朝暉制藥廠提供(批號(hào)是990504)；橄欖油由北京芳草醫(yī)藥化工研制公司提供(批號(hào)是980428)(4)試驗(yàn)動(dòng)物，為清潔級(jí)wister大鼠，體重140-160g，動(dòng)物合格證號(hào)京動(dòng)許字(2000)第012號(hào)，中國(guó)藥品生物制品檢定所實(shí)驗(yàn)中心提供。實(shí)驗(yàn)前觀察兩天，選健康、活潑的動(dòng)物用于試驗(yàn)。
方法取健康大鼠，按體重隨機(jī)分組，每組8只i.空白對(duì)照組口服新鮮水1ml/只；ii.劑對(duì)照組口服橄欖油1ml/只；iii.模型對(duì)照組口服橄欖油1ml/只；iv.陽(yáng)藥對(duì)照組脂必妥1.05g/Kg，口服1ml/只；v.海狗油高劑量組8.6ml/Kg，口服1.2ml/只；vi.海狗油中劑量組4.3ml/Kg，口服1ml/只(用稀釋藥液)；vii.海狗油高劑量組2.2ml/Kg，口服1ml/只(用稀釋藥液)；(2)-(7)組給予高脂飼料，每日罐胃一次，連續(xù)二周，末次給藥一小時(shí)后，眼眶采血，測(cè)血脂水平(TC、TL、HDL及LDL+VLDL)，取肝測(cè)肝組織中總膽固醇(TC)。
結(jié)果海狗油4.3ml/Kg-8.6ml/Kg口服，可明顯降低大鼠血清膽固醇(TC)水平，甘油三酯(TG)水平，LDL+VLDL水平，升高HDL水平，并且還可明顯降低肝組織中的膽固醇水平，具體可見(jiàn)見(jiàn)表1。
表1


X±S與模型組比*p＜0.05**p＜0.01實(shí)驗(yàn)例二本實(shí)驗(yàn)例是采用高脂飼料致家兔脂代謝紊亂模型檢驗(yàn)本發(fā)明所述的海狗油對(duì)家兔脂代謝紊亂的效果，在海狗油為1.1ml/kg-4.5ml/kg的劑量下，連續(xù)灌胃二周的藥效學(xué)作用進(jìn)行了觀察，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，該藥可使家兔血清總膽固醇(TC)及甘油三酯(TG)水平明顯降低，HDL水平明顯升高，LDL+VLDL水平明顯下降，使肝組織中膽固醇水平明顯下降，說(shuō)明該藥有明顯的降血脂及減輕肝脂作用。
在本實(shí)驗(yàn)例中所使用的試驗(yàn)材料如下(1)海狗油，為海狗體內(nèi)提取而成的微黃色油腔滑調(diào)狀液體，山大西洋食品公司生產(chǎn)，本實(shí)驗(yàn)室室溫保存，試驗(yàn)時(shí)按2Kg體重灌胃9ml(高劑量使用原液)或6ml(中、低劑量使用稀釋藥液)。
(2)陽(yáng)性對(duì)照藥，為脂必妥(0.35g/片)，0.53g/Kg灌胃，6ml/只。批號(hào)20001024，成都地奧九泓制藥廠。
(3)高脂飼料4％膽固醇+10％豬油+0.2％丙基硫氧嘧淀+86％混合飼料，其中，膽固醇(普通型)由北京奧星生物技術(shù)有限責(zé)任有限公司提供；丙基硫氧嘧啶由第二軍醫(yī)大學(xué)朝暉制藥廠提供(批號(hào)是990504)；橄欖油由北京芳草醫(yī)藥化工研制公司提供(批號(hào)是980428)；(4)試驗(yàn)動(dòng)物為清潔級(jí)家兔，體重2-2.5Kg，動(dòng)物合格證號(hào)京動(dòng)許字(2000)第012號(hào)，中國(guó)藥品生物制品檢定所實(shí)驗(yàn)中心提供。實(shí)驗(yàn)前觀察兩天，選健康、活潑的動(dòng)物用于試驗(yàn)。
方法取健康家兔，按體重隨機(jī)分組，每組5只(1)空白對(duì)照組口服新鮮水6ml/只(2)溶劑對(duì)照組口服橄欖油6ml/只(3)模型對(duì)照組口服橄欖油6ml/只(4)陽(yáng)藥對(duì)照組脂必妥0.53/Kg口服6ml/只(5)海狗油高劑量組4.5ml/Kgml(6)海狗油中劑量組2.2ml/Kg口服6ml/只(用稀釋藥液)(7)海狗油中劑量組1.1ml/Kg口服6ml/只(用稀釋藥液)(2)-(7)組給予高脂飼料，每日灌胃一次，連續(xù)二周，未次給藥1小時(shí)后，心臟采血，測(cè)血脂水平(TC、T1、HDL及LDL+VLDL)，取肝測(cè)肝組織中總膽固醇(TC)。
結(jié)果海狗油2.2ml/Kg-4.5ml/Kg口服，可明顯降低家兔血清膽固醇水平，甘油三酯(TG)水平，升高HDL水平，并且還可明顯降低肝組織中的膽固醇水平。見(jiàn)表2

X±S與模型組比*p＜0.05**p＜0.01以上實(shí)驗(yàn)表明，海狗油具有良好的治療脂代謝紊亂(高血脂)的作用。
權(quán)利要求
1.一種主要成份為二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳五烯酸(DPA)以及二十二碳六烯酸(DHA)的海狗油作為制備治療脂代謝紊亂(高血脂)藥的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述的應(yīng)用優(yōu)選2.2-8.6ml/kg的口服劑量。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的應(yīng)用，其特征在于所述的應(yīng)用更優(yōu)選4.3-8.6ml/kg的口服劑量。
全文摘要
本發(fā)明涉及的是將海狗油作為制備治療脂代謝紊亂(高血脂)藥的應(yīng)用，研究人員發(fā)現(xiàn)，將本發(fā)明所述的海狗油在2.2－8.6ml/kg口服劑量下，連續(xù)灌胃給藥，對(duì)高脂飼料導(dǎo)致的大鼠、家兔的脂代謝紊亂(高血脂)，可明顯降低其血清膽固醇、甘油三酯(TG)水平，升高HDL水平，從而證實(shí)將所述的海狗油作為藥的情形下，在較大劑量時(shí)有明顯的治療脂代謝紊亂(高血脂)的作用。
文檔編號(hào)A61K35/12GK1410075SQ01135519
公開(kāi)日2003年4月16日 申請(qǐng)日期2001年9月30日 優(yōu)先權(quán)日2001年9月30日
發(fā)明者徐康森, 李湛軍, 樂(lè)嘉靜, 忻余, 林蘭, 何謂鑒 申請(qǐng)人:中國(guó)藥品生物制品檢定所