專利名稱：酶電極法檢測(cè)葡萄糖含量的試劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及體外診斷試劑技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種酶電極法檢測(cè)葡萄糖含量的試劑。
背景技術(shù)：
測(cè)定葡萄糖是一項(xiàng)對(duì)臨床有著重要意義的檢測(cè)項(xiàng)目，這是由于葡萄糖含量是重要的人體生理指標(biāo)，在臨床上應(yīng)用廣泛，需求量很大。體內(nèi)的葡萄糖主要來(lái)自于食物，它是糖在體內(nèi)的運(yùn)輸形式，通過(guò)糖元生成與糖元分解、糖元異生與糖元酵解、脂肪形成與解脂作用間的相互調(diào)節(jié)與平衡，血糖的相對(duì)恒定對(duì)維持機(jī)體的正常生理功能有重要的意義。目前，葡萄糖含量偏高或偏低的臨床表現(xiàn)為1、葡萄糖升高高血糖癥最常見(jiàn)的是糖尿??；胰腺炎、胰腺癌等彌漫性胰腺疾病患，空腹血糖可增高；抽搐及某些疾病終期，糖元分解加速可出現(xiàn)輕度高血糖；窒息可引起酸中毒及糖元分解增多，結(jié)果出現(xiàn)高血糖；感染性疾病、毒血癥以及顱內(nèi)疾患，由于機(jī)體內(nèi)對(duì)病例損傷的反應(yīng),可能出現(xiàn)明顯的高血糖癥；麻醉往往可出現(xiàn)高·血糖，血糖升高的程度與麻醉種類和時(shí)間長(zhǎng)短有關(guān)，并出現(xiàn)尿糖。2、葡萄糖降低最多見(jiàn)于接受超劑量胰島素治療的糖尿病患者；甲狀腺功能低下和腎上腺皮質(zhì)功能低下患者，血糖可降至正常值范圍以下；由于肝糖元分解過(guò)程中某些酶的缺陷而引起的肝糖元累積病，糖元不能轉(zhuǎn)化為葡萄糖，也可能出現(xiàn)低血糖；慢性腹瀉吸收不良及脂肪瀉，由于葡萄糖吸收障礙可使血糖降低；劇烈運(yùn)動(dòng)可產(chǎn)生低血糖，肝臟病由于肝糖元儲(chǔ)備不足，有時(shí)可出現(xiàn)低血糖。臨床實(shí)驗(yàn)室傳統(tǒng)測(cè)定血葡萄糖的方法為酶比色法，大致可分為兩種。第I種為葡萄糖氧化酶法(GOD )，葡萄糖在GOD催化下，生成葡萄糖酸和過(guò)氧化氫(H2O2)，H2O2與4-氨基安替吡啉和對(duì)溴苯酚生成紅色化合物，在一定范圍內(nèi)，紅色深淺與葡萄糖量成正比，從而可求得血清中葡萄糖含量。第2種采用己糖激酶法(HK)，葡萄糖與ATP在HK催化下生成葡萄糖-6-磷酸(G-6-P)和ADP，葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(G6PD)催化G-6-P與NAD+形成6-磷酸葡萄糖酸(6-PG)及NADH，NADH生成與樣本中葡萄糖濃度成正比。隨著大型全自動(dòng)生化分析儀的推廣使用以及生化分析儀的更新?lián)Q代，廣泛應(yīng)用于臨床檢驗(yàn)科的血葡萄糖的測(cè)定方法從傳統(tǒng)的酶比色法為主導(dǎo)逐漸過(guò)渡到酶比色法與酶電極法兩種方法并重的局面。葡萄糖酶比色法是根據(jù)葡萄糖在GOD或HK催化下的酶促反應(yīng)，產(chǎn)生具有特征吸收峰的物質(zhì)，在特定的波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度改變的速率，來(lái)計(jì)算溶液中葡萄糖的濃度，但傳統(tǒng)的酶比色法易受樣本中內(nèi)源性物質(zhì)，如維生素C、尿酸、尿素、膽紅素、肌酐的干擾，溶血樣本也會(huì)對(duì)其檢測(cè)產(chǎn)生影響。葡萄糖酶電極法是根據(jù)電化學(xué)原理，利用電勢(shì)與溶液中給定離子活動(dòng)度的對(duì)數(shù)的線性關(guān)系，直接測(cè)定溶液中離子的濃度。在電極膜上連接上生物酶后，就能將電極法的快速與酶促反應(yīng)的專一性結(jié)合起來(lái)，使測(cè)定結(jié)果可靠、快速，并可避免樣本中的內(nèi)源性物質(zhì)可能對(duì)比色產(chǎn)生影響，保證檢測(cè)結(jié)果的可靠性，進(jìn)而為臨床診斷提供真實(shí)的數(shù)據(jù)。
在檢測(cè)速度上，酶電極法平均30秒可出結(jié)果，而傳統(tǒng)的酶比色法卻要費(fèi)時(shí)I分鐘以上，因此，酶電極法更適用于急診，及時(shí)為臨床醫(yī)生提供檢測(cè)結(jié)果，爭(zhēng)取寶貴的治療時(shí)間。另外，酶電極法的其他性能指標(biāo)，如線性范圍、準(zhǔn)確度等，與傳統(tǒng)的酶比色法相比也符合方法學(xué)要求，且具有良好的相關(guān)性，適合現(xiàn)代快速臨床檢驗(yàn)需求。而如何提供一種適用于酶電極法的、與傳統(tǒng)的酶比色法相比具有良好的相關(guān)性，較寬的檢測(cè)線性范圍，檢測(cè)速度更加快速，且 不受內(nèi)源性物質(zhì)的干擾，結(jié)果更加可靠的酶電極法檢測(cè)葡萄糖含量的試劑成為亟待解決的問(wèn)題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的上述不足，提供一種與傳統(tǒng)的酶比色法相比具有良好的相關(guān)性，較寬的檢測(cè)線性范圍，檢測(cè)速度更加快速，更重要的是不受內(nèi)源性物質(zhì)的干擾，結(jié)果更加可靠的酶電極法檢測(cè)葡萄糖含量的試劑。為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明的具體技術(shù)方案為一種酶電極法檢測(cè)葡萄糖含量的試劑，該試劑包含緩沖液、葡萄糖氧化酶(G0D)、無(wú)水乙醇、碘鹽、鑰酸銨、穩(wěn)定劑和防腐劑。上述的酶電極法檢測(cè)葡萄糖含量的試劑，該試劑具體由以下濃度范圍的各組分組成緩沖液(pH6.0) :50-500mmol/L葡萄糖氧化酶(GOD):10-500KU/L無(wú)水乙醇0. 1-10% (v V體積百分含量)碘鹽l_100mmol/L鑰酸銨l-100mmol/L穩(wěn)定劑:0.l-10g/L防腐劑0.l-10g/L。上述組份中，緩沖液為檸檬酸-檸檬酸三鈉緩沖液、甘氨酸緩沖液、Tris緩沖液或醋酸-醋酸鈉緩沖液；上述組份中，碘鹽為碘化鉀或碘化鈉；穩(wěn)定劑為丙三醇或辛醇；防腐劑為甲醛、疊氮鈉或PC系列防腐劑(如proclin300)。本發(fā)明酶電極法的主要原理為，一薄層GOD覆蓋在氧電極表面，通過(guò)氧電極檢測(cè)溶液中溶解氧的消耗量可以間接測(cè)定葡萄糖的含量。具體的反應(yīng)原理為02在GOD催化下氧化葡萄糖，生成H2O2和葡萄糖酸，消耗反應(yīng)液中的含氧量，用氧電極來(lái)測(cè)定反應(yīng)液中的O2消耗速率，其下降速率與樣本中的葡萄糖成正比。由于本法直接測(cè)定O2消耗量，為了避免H2O2在過(guò)氧化氫酶存在時(shí)被催化生成O2而產(chǎn)生干擾，試劑中加入乙醇來(lái)消除干擾，同時(shí)為徹底消除H2O2，試劑中加入了碘鹽和鑰酸鹽。主要反應(yīng)方程式為
葡萄糖 + + H1O ---^^>葡萄糖酸 + H1O1
HiOi +乙醇腺德, > 乙醛+ Hl0
權(quán)利要求
1.ー種酶電極法檢測(cè)葡萄糖含量的試劑，其特征在于所述的試劑包含緩沖液、葡萄糖氧化酶、無(wú)水こ醇、碘鹽、鑰酸銨、穩(wěn)定劑和防腐剤。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的酶電極法檢測(cè)葡萄糖含量的試劑，其特征在于所述試劑具體由以下濃度范圍的各組分組成 緩沖液(PH6. 0) 50-500mmol/L 葡萄糖氧化酶10-500KU/L 無(wú)水こ醇0. 1-10%碘鹽l-100mmol/L 鑰酸銨l-100mmol/L 穩(wěn)定劑:0. l-10g/L 防腐齊IJ :0. l-10g/L。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的酶電極法檢測(cè)葡萄糖含量的試劑，其特征在于所述的緩沖液為檸檬酸-檸檬酸三鈉緩沖液、甘氨酸緩沖液、Tris緩沖液或醋酸-醋酸鈉緩沖液。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的酶電極法檢測(cè)葡萄糖含量的試劑，其特征在于所述的碘鹽為碘化鉀或碘化鈉。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的酶電極法檢測(cè)葡萄糖含量的試劑，其特征在于所述的穩(wěn)定劑為丙三醇或辛醇。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的酶電極法檢測(cè)葡萄糖含量的試劑，其特征在于所述的防腐劑為甲醛、疊氮鈉或PC防腐剤。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種酶電極法檢測(cè)葡萄糖的試劑，所述的試劑包含緩沖液、葡萄糖氧化酶、無(wú)水乙醇、碘鹽、鉬酸銨、穩(wěn)定劑和防腐劑。本發(fā)明提供的葡萄糖檢測(cè)試劑利用酶電極檢測(cè)，適用于配備有葡萄糖酶電極的全自動(dòng)生化分析儀，與傳統(tǒng)的葡萄糖酶比色法相比具有良好的相關(guān)性，且其具有抗干擾性能好，檢測(cè)快速，線性范圍寬等優(yōu)點(diǎn)，尤其能夠滿足臨床急診生化的需求。
文檔編號(hào)G01N27/26GK102735726SQ20121018752
公開(kāi)日2012年10月17日 申請(qǐng)日期2012年6月5日 優(yōu)先權(quán)日2012年6月5日
發(fā)明者張桂春, 鄒炳德, 鄒繼華 申請(qǐng)人:寧波美康生物科技股份有限公司