專(zhuān)利名稱(chēng)：β-葡萄糖基-Yariv試劑的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥、化工技術(shù)領(lǐng)域，具體地說(shuō)是一種P-葡萄糖基-Yariv試劑的制
備方法。
背景技術(shù)：
P-葡萄糖基-Yariv試齊U(P-D-glucosyl-Yariv reagent, P GlcY)，艮卩1， 3， 5-三 (4-P-D-葡吡喃糖氧基-氧化苯基偶氮基)-2， 4， 6_三羥基苯，是一種人工合成的苯基偶
氮染色劑，它對(duì)我們探究植物體中AGPs的分布和生理作用有著十分重要的意義，該試劑 可與阿拉伯半乳糖蛋白(AGPs)的糖基發(fā)生反應(yīng)形成紅色沉淀。 目前，有關(guān)4-13 -D-葡吡喃糖氧基-氧化苯基偶氮基的合成技術(shù)國(guó)內(nèi)尚未見(jiàn)研 究報(bào)道。國(guó)外，最早是J.Yariv等人在1962年發(fā)表的文章(Yariv， J. ; Rapport， M.M.; Graf ， L.The interaction of glycosides and saccharides with antibody to the corresponding phenyl azo glycoside.Biochem丄1962， 85， 383-388.)中提出了 P-D-葡萄糖苷Yariv試劑的合 成方法。
之后I.Ganjian等人的文章(Ganjian， I. ; Basile， D.V.Reductive syntheses of p-aminophenyl--D-glucoside and its conversion to-glucosyl Yariv reagent.Anal.Biochem.1997， 246， 152-155.)對(duì)其合成進(jìn)行了改進(jìn)，即從對(duì)硝基苯基葡萄糖苷作為起始原料進(jìn)行合成。 以上這些合成方法存在著工藝復(fù)雜、操作繁瑣、產(chǎn)率較低，產(chǎn)率一般在20 40%左右， 嚴(yán)重制約了 13 -D-葡萄糖基-Yariv試劑的廣泛應(yīng)用和發(fā)展。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足而提供的一種13 -葡萄糖基-Yariv試劑的制 備方法，工藝簡(jiǎn)單、操作方便，收率高，合成所用原料價(jià)廉易得，有機(jī)溶劑和催化劑用 量少，生產(chǎn)成本低，是一種很有應(yīng)用前景的糖苷合成新方法。 實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的的具體技術(shù)方案是 一種P-葡萄糖基-Yariv試劑的制備方法， 特點(diǎn)是以對(duì)硝基苯基葡萄糖苷為原料合成對(duì)氨基苯基葡萄糖苷，然后經(jīng)還原、重氮、偶 聯(lián)反應(yīng)制得具有如下結(jié)構(gòu)式的P-葡萄糖基-Yariv試劑，制備步驟包括
a、對(duì)氨基苯基葡萄糖苷的制備 將硝基苯基葡萄糖苷與甲醇或乙醇按l : 50 200的質(zhì)量體積比在反應(yīng)器內(nèi)攪 拌混合后，在金屬催化劑下加氫反應(yīng)0.5 10小時(shí)，加氫壓力為O.l l.OMPa，反應(yīng)溫 度25 10(TC，反應(yīng)結(jié)束后過(guò)濾，取濾液經(jīng)減壓濃縮得對(duì)氨基苯基葡萄糖苷，減壓濃縮 的壓力為3 4KPa，溫度為30 40°C ;
b、重氮鹽的制備 將上述制備的對(duì)氨基苯基葡萄糖苷溶于水中，分別加入HC1溶液和亞硝酸鹽溶 液混合后，在0 5t:的溫度下重氮反應(yīng)0.5 3小時(shí)得重氮鹽溶液，對(duì)氨基苯基葡萄糖 苷與HC1、水、亞硝酸鹽的摩爾比為l : 1.2 1.5 : 1.2 1.5 : 250 400;
c、偶聯(lián)反應(yīng) 將上述制備的重氮鹽溶液滴加間苯三酚溶液攪拌混合后，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié) pH至8.0 9.0，在0 5"的溫度下偶聯(lián)反應(yīng)1 5小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束后用甲醇或乙醇混 合，放置12 48小時(shí)，過(guò)濾沉淀物，經(jīng)干燥后得e-葡萄糖基-Yariv試劑，重氮鹽溶液 與間苯三酚的配比以重氮鹽的硝基苯基葡萄糖苷含量與間苯三酚的摩爾比為1 : 0.25 0.6，甲醇或乙醇為分析純與重氮鹽溶液的體積比為0.5 2 : 1。所述金屬催化劑為鈀催化劑(Pd/C)、鉑催化劑(Pt/C)或雷呢鎳催化劑(Raney Ni)，催化劑的金屬含量為5 25%重量比，金屬催化劑的用量以金屬Pd、 Pt或Ni與硝 基苯基葡萄糖苷的摩爾比為0.01 10 : 1。
所述HC1溶液的濃度為0.3 l.OM。
所述亞硝酸鹽為亞硝酸鈉或亞硝酸鉀。
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本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有工藝簡(jiǎn)單、操作方便，收率高，合成所用原料價(jià)廉 易得，有機(jī)溶劑和催化劑用量少，生產(chǎn)成本低的優(yōu)點(diǎn)，是一種很有應(yīng)用前景的糖苷合成 新方法。


圖1為本發(fā)明試劑的力-核磁譜圖
圖2為本發(fā)明試劑的紅外譜圖
圖3為本發(fā)明試劑的質(zhì)譜圖
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明以對(duì)硝基苯基葡萄糖苷為原料合成對(duì)氨基苯基葡萄糖苷，然后經(jīng)還原、
重氮、偶聯(lián)反應(yīng)制得P-葡萄糖基-Yariv試劑，其合成過(guò)程的結(jié)構(gòu)式如下
R= 以下將通過(guò)具體的實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的闡述
實(shí)施例1 a、對(duì)氨基苯基葡萄糖苷的制備 取0.33mmol的對(duì)硝基苯基葡萄糖苷0.10g加入10ml無(wú)水甲醇，混合攪拌約5分 鐘，然后加入鎳含量為10% (重量比)的雷呢鎳0.30g作為金屬催化劑，將上述混合物和 雷呢鎳催化劑一起放入反應(yīng)器，在持續(xù)攪拌中通入壓力為0.3MPa的氫氣，在8(TC溫度下還原反應(yīng)3小時(shí)，待轉(zhuǎn)化完全后冷卻至室溫，經(jīng)硅藻土過(guò)濾，合并濾液后經(jīng)減壓濃縮得對(duì)氨基苯基葡萄糖苷，減壓濃縮的壓力為3.5KPa，溫度為3(TC，
b、重氮鹽的制備 將上述減壓濃縮得到的對(duì)氨基苯基葡萄糖苷溶解在2ml純水中，然后分別滴加0.5M的鹽酸lml和亞硝酸鈉溶液，亞硝酸鈉溶液由0.38mmo1亞硝酸鈉0.026g溶于lml純水配制而成，在2t:溫度下重氮反應(yīng)3小時(shí)得重氮鹽溶液。
c、偶聯(lián)反應(yīng) 在上述制備的重氮鹽溶液中滴加0.12mmo1的間苯三酚溶液5.0ml攪拌混合后，用5X的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至9.0，在2t:的溫度下偶聯(lián)反應(yīng)1.5小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束后用等體積的分析純乙醇稀釋?zhuān)⒃?t:的溫度下放置12小時(shí)，過(guò)濾沉淀物，經(jīng)干燥后得含量為83%的|3 -葡萄糖基-Yariv試劑0.09g。
實(shí)施例2 a、對(duì)氨基苯基葡萄糖苷的制備 取3.3mmo1的對(duì)硝基苯基葡萄糖苷l(shuí).Og加入90ml無(wú)水甲醇，混合攪拌約5分鐘，然后加入鈀含量為10% (重量比)的鈀催化劑(UOg，將上述混合物和鈀催化劑一起放入反應(yīng)器，在持續(xù)攪拌中通入壓力為0.5MPa的氫氣，在7(TC溫度下還原反應(yīng)4小時(shí)，待轉(zhuǎn)化完全后冷卻至室溫，經(jīng)硅藻土過(guò)濾，合并濾液后經(jīng)減壓濃縮得對(duì)氨基苯基葡萄糖苷，減壓濃縮的壓力為3.8KPa，溫度為35"。
b、重氮鹽的制備 將上述減壓濃縮得到的對(duì)氨基苯基葡萄糖苷溶解在2ml純水中，然后分別加滴0.5M的鹽酸10ml和亞硝酸鈉溶液，亞硝酸鈉溶液由0.38mmo1亞硝酸鈉0.26g溶于8ml純水配制而成，在3t:溫度下重氮反應(yīng)2.5小時(shí)得重氮鹽溶液。
c、偶聯(lián)反應(yīng) 在上述制備的重氮鹽溶液滴加l.lmmol的間苯三酚溶液48ml攪拌混合后，用5X的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至8.5，在3t:的溫度下偶聯(lián)反應(yīng)2.5小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束后用等體積的分析純甲醇稀釋?zhuān)⒃?t:的溫度下放置20小時(shí)，過(guò)濾沉淀物，經(jīng)干燥后得含量為84%的|3 -葡萄糖基-Yariv試劑0.91g。 參閱附圖1 附圖3，對(duì)上述實(shí)施例所得產(chǎn)物P-葡萄糖基-Yariv試劑進(jìn)行力-NMR、 IR、質(zhì)譜及HPLC分析，測(cè)試數(shù)據(jù)如下 丄H-NMR: (500MHz， DMSO-d6， TMS內(nèi)標(biāo))S (ppm)3.19(m， 1H)， 3.45(m，1H)， 3.71(m， 1H)， 4.34(t， J = 11.5Hz， 1H)， 4.60(t， J = 11.5Hz， 1H)， 4.92(d， J =7.5Hz， 1H)5.03(d， J = 5.0Hz， 1H)， 5.09(d， J = 5.0Hz， 1H)， 5.27(d， J = 5.0Hz， 1H)，7.15(d， J = 9.0Hz， 2H)， 7.65(d， J = 3.0Hz， 2H);IR(KBr， pel let, cm1): 3395.6(s)， 2920.0(w)， 1608.9(m)， 1511.l(m)，1484.4(s)， 1435.6(m)， l概9(s)， 1324.4(w)， 1231.l(s)， 1195.6(m)， 1075.6(s)， 835.6(w)
MS(ESI， negative mode) : m/z 971.3(M-H+， 100); HPLC(Diamonsil C18 5 ii 250*4.6mm ; DLKMA Technologies ;流動(dòng)相甲醇水=1 : 1(V/V)，流速0.5ml/min)保留時(shí)間10.45min，純度99.1% 上述實(shí)施例所得產(chǎn)物13 -葡萄糖基-Yariv試劑經(jīng)檢測(cè)、分析后可以確認(rèn)為純的目
7標(biāo)產(chǎn)物。
權(quán)利要求
一種β-葡萄糖基-Yariv試劑的制備方法，其特征在于以對(duì)硝基苯基葡萄糖苷為原料合成對(duì)氨基苯基葡萄糖苷，然后經(jīng)還原、重氮、偶聯(lián)反應(yīng)制得具有如下結(jié)構(gòu)式的β-葡萄糖基-Yariv試劑，制備步驟包括a、制備對(duì)氨基苯基葡萄糖苷的制備將硝基苯基葡萄糖苷與甲醇或乙醇按1∶50～200的質(zhì)量體積比在反應(yīng)器內(nèi)攪拌混合后，在金屬催化劑下加氫反應(yīng)0.5～10小時(shí)，加氫壓力為0.1～1.0MPa，反應(yīng)溫度25～100℃，反應(yīng)結(jié)束后過(guò)濾，取濾液經(jīng)減壓濃縮得對(duì)氨基苯基葡萄糖苷，減壓濃縮的壓力為3～4KPa，溫度為30～40℃；b、重氮鹽的制備將上述制備的對(duì)氨基苯基葡萄糖苷溶于水中，分別加入HCl溶液和亞硝酸鹽溶液混合后，在0～5℃的溫度下重氮反應(yīng)0.5～3小時(shí)得重氮鹽溶液，對(duì)氨基苯基葡萄糖苷與HCl、亞硝酸鹽、水的摩爾比為1∶1.2～1.5∶1.2～1.5∶250～400；c、偶聯(lián)反應(yīng)將上述制備的重氮鹽溶液滴加間苯三酚溶液攪拌混合后，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至8.0～9.0，在0～5℃的溫度下偶聯(lián)反應(yīng)1～5小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束后用甲醇或乙醇混合，放置12～48小時(shí)，過(guò)濾沉淀物，經(jīng)干燥后得β-葡萄糖基-Yariv試劑，重氮鹽溶液與間苯三酚的配比以重氮鹽的硝基苯基葡萄糖苷含量與間苯三酚的摩爾比為1∶0.25～0.6，甲醇或乙醇為分析純與重氮鹽溶液的體積比為0.5～2∶1。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述13 -葡萄糖基-Yariv試劑的制備方法，其特征在于所述金屬催 化劑為鈀催化劑(Pd/C)、鉑催化劑(Pt/C)或雷呢鎳催化劑(Raney Ni)，催化劑的金屬含量為5 25%重量比，金屬催化劑的用量以金屬Pd、 Pt或Ni與硝基苯基葡萄糖苷的摩爾比為o.oi io : i。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述13 -葡萄糖基-Yariv試劑的制備方法，其特征在于所述HCl溶 液的濃度為0.3 l.OM。
4. 權(quán)利要求1所述13 -葡萄糖基-Yariv試劑的制備方法，其特征在于所述亞硝酸鹽為 亞硝酸鈉或亞硝酸鉀。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種β-葡萄糖基-Yariv試劑的制備方法，特點(diǎn)是以對(duì)硝基苯基葡萄糖苷為原料合成對(duì)氨基苯基葡萄糖苷，然后經(jīng)還原、重氮、偶聯(lián)反應(yīng)而得。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有工藝簡(jiǎn)單、操作方便，收率高的優(yōu)點(diǎn)，合成所用原料價(jià)廉易得，有機(jī)溶劑和催化劑用量少，生產(chǎn)成本低，是一種很有應(yīng)用前景的糖苷合成新方法。
文檔編號(hào)C09B33/00GK101691450SQ20091005529
公開(kāi)日2010年4月7日 申請(qǐng)日期2009年7月24日 優(yōu)先權(quán)日2009年7月24日
發(fā)明者張劍波, 李萌, 田祥光, 許意達(dá), 陳琛 申請(qǐng)人:華東師范大學(xué)