一種濃縮葡萄糖檢測試劑凍干微球及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種濃縮葡萄糖檢測試劑凍干微球及其制備方法，凍干微球包含三乙醇胺緩沖液、ATP、NADP、己糖激酶、6-磷酸葡萄糖脫氫酶、防腐劑、海藻糖、聚乙二醇8000、聚乙二醇20000、TrionX-100等。其制備過程主要有以下步驟：（1）配制溶液，過濾、脫氣；（2）利用精確定量的分液系統(tǒng)制備微滴，并將微滴滴入液氮中制備冷凍小球；（3）將冷凍小球轉(zhuǎn)移至凍干機(jī)中凍干得到檢測試劑凍干微球。本發(fā)明提供的葡萄糖檢測試劑是一種球形顆粒狀凍干試劑，可預(yù)封裝與檢測芯片中，同已有的液體檢測試劑相比具有可實(shí)現(xiàn)室溫穩(wěn)定保存、運(yùn)輸?shù)葍?yōu)點(diǎn)，同凍干粉試劑相比具有定量準(zhǔn)確、便于封裝處理等優(yōu)點(diǎn)。
【專利說明】一種濃縮葡萄糖檢測試劑凍干微球及其制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及凍干微球及其制備領(lǐng)域，具體是一種濃縮葡萄糖檢測試劑凍干微球及其制備方法。

【背景技術(shù)】
[0002]血液中的糖主要是葡萄糖，它是糖在體內(nèi)的運(yùn)輸形式。正常人在空腹血糖濃度為
3.61?6.llmmol/L?？崭寡菨舛瘸^7.0mmoI/L稱為高血糖。血糖濃度低于3.61mmol/L稱為低血糖。血糖量維持在一定水平恒定，對于保證人體各組織器官特別是腦組織的正常機(jī)能活動極為重要。血糖高低同人體機(jī)能密切相關(guān)，因此，檢測血糖含量對臨床診斷治療具有重要意義。
[0003]隨著社會的不斷進(jìn)步，醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)從大醫(yī)院向社區(qū)、現(xiàn)場等即時(shí)診斷領(lǐng)域發(fā)展。即時(shí)血糖檢測發(fā)展迅速，即時(shí)血糖檢測可用于緊急情況下血糖檢測，例如在急診室、急救車等眾多條件有限、但仍然需要迅速得出檢測結(jié)果的場景應(yīng)用。微流控芯片技術(shù)的進(jìn)步極大促進(jìn)了即時(shí)診斷儀器的發(fā)展。微流控芯片技術(shù)把樣品的制備、分離、反應(yīng)和檢測等集成于一塊芯片上，由微通道形成網(wǎng)絡(luò)，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)整個(gè)系統(tǒng)流體的精確控制。將微流控芯片技術(shù)引入到POCT設(shè)備，可使以往實(shí)驗(yàn)室繁復(fù)的操作在芯片上自動完成，而且儀器構(gòu)造相對簡單，體積小，重量輕，操作簡單，適合床旁檢測、戰(zhàn)場或小型門診的需要。
[0004]目前，在歐美市場上，即時(shí)血糖檢測儀器已經(jīng)逐漸成為體外診斷試劑與儀器領(lǐng)域的重要研究項(xiàng)目，并有不少產(chǎn)品投入市場。但這些儀器和相應(yīng)的試劑耗材價(jià)格高昂，出于成本考慮，這些儀器尚未能在中國推廣應(yīng)用。十二五國家戰(zhàn)略性產(chǎn)業(yè)發(fā)展規(guī)劃中，明確提出要建立操作簡單、裝置便攜、測量準(zhǔn)確的即時(shí)檢測儀器。現(xiàn)有的葡萄糖液體檢測試劑不易封裝和貯存，凍干粉試劑不易定量，均不適用于即時(shí)檢測儀器，亟需一種可用于基于微流控技術(shù)的即時(shí)檢測儀器的葡萄糖檢測試劑。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的是提供一種濃縮葡萄糖檢測試劑凍干微球及其制備方法，以解決現(xiàn)有技術(shù)液體和凍干粉葡萄糖檢測試劑存在的問題。
[0006]為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案為:
[0007]一種濃縮葡萄糖檢測試劑凍干微球，其特征在于:其反應(yīng)試劑和緩沖液組分及各組分重量配比為:
[0008]

【權(quán)利要求】
1.一種濃縮葡萄糖檢測試劑凍干微球，其特征在于:其反應(yīng)試劑和緩沖液組分及各組分重量配比為: 三乙醇胺緩沖液100 mM -300mM, ATP4mM-8mM, NADP4mM-8mM, 己糖激酶5KU/L-30KU/L， 6-磷酸葡萄糖脫氫酶 2KU/L-10KU/L， 防腐劑lg/L-10g/L， 該試劑凍干微球的其他組分如凍干保護(hù)劑和凍干塑型劑等組成為: 聚乙二醇 800010g/L-40g/L, 聚乙二醇 2000020g/L-60g/L, 海藻糖5g/L-30g/L, Tr1n X-100lg/L_5g/L。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種濃縮葡萄糖檢測試劑凍干微球，其特征在于:所述反應(yīng)試劑為緩沖液，可選用三乙醇胺緩沖液，或者Tris緩沖液，或檸檬酸-檸檬酸三鈉緩沖液。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種濃縮葡萄糖檢測試劑凍干微球，其特征在于:所述凍干保護(hù)劑為糖類、聚合物、表面活性劑中的一種或幾種，其中: 糖類優(yōu)選海藻糖，或者鹿糖，糖類含量約為5g/L-30g/L ； 聚合物優(yōu)選聚乙二醇，或者聚乙烯吡咯烷酮，或者牛血清白蛋白，或者葡聚糖，聚合物含量約為 30g/L-100g/L ； 表面活性劑優(yōu)選吐溫80，或者吐溫20，或者聚氧乙烯月桂醚，或者Tr1n X-100，表面活性劑含量約為l-10g/L。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種濃縮葡萄糖檢測試劑凍干微球，其特征在于:所述凍干塑型劑優(yōu)選甘露醇，或者聚乙二醇，或者牛血清白蛋白，或者聚乙烯吡咯烷酮，聚乙二醇同時(shí)具有凍干塑型劑和保護(hù)劑作用。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種濃縮葡萄糖檢測試劑凍干微球，其特征在于:所述試劑中反應(yīng)試劑和緩沖液組分為常規(guī)試劑反應(yīng)試劑和緩沖液濃度的2-4倍。
6.一種濃縮葡萄糖檢測試劑凍干微球制備方法，其特征在于:包括以下步驟: (1)、配制葡萄糖檢測試劑； (2)、添加凍干保護(hù)劑和塑型劑，充分溶解后過濾除去不溶性物質(zhì)，真空脫氣去除氣泡； (3)、利用可精確定量的分液系統(tǒng)制備微滴，將液滴滴入液氮中，經(jīng)液氮冷卻后形成冷凍試劑微球； (4)、將冷凍試劑微球轉(zhuǎn)入凍干機(jī)中冷凍干燥后制備得到檢測試劑凍干微球。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種濃縮葡萄糖檢測試劑凍干微球制備方法，其特征在于:所述步驟(3)中的液滴體積大小利用分液系統(tǒng)精確控制,液滴大小在2-10ul，大小誤差在2%內(nèi)。
【文檔編號】G01N33/66GK104198717SQ201410437964
【公開日】2014年12月10日 申請日期:2014年8月30日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月30日
【發(fā)明者】張濤, 黎海文, 劉聰, 周武平, 蔣克明, 郭振 申請人:中國科學(xué)院蘇州生物醫(yī)學(xué)工程技術(shù)研究所