種子液5mL接入裝有發(fā)酵培養(yǎng)基的錐形瓶中，于25°C靜置培養(yǎng)30天。 [0024] ?提取分離： 將步驟S2所得的發(fā)酵物離心獲得菌體，菌體用體積比為1 :1的甲醇浸泡提取三次，提 取液在低于50°C下濃縮至1L，濃縮液用體積比為1 :1的乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯萃取液在 低于50°C下減壓濃縮得浸膏12. 6g。該浸膏經(jīng)硅膠柱層析進行分離，分別用0%，10%，20%， 30%，40%，50%，60%，70%，100%的乙酸乙酯-石油醚梯度淋洗，其中40%乙酸乙酯-石油醚洗 脫部分，經(jīng)葡聚糖凝膠Sephadex LH-20層析，用體積比為1:1的甲醇-氯仿為洗脫劑進行 洗脫，經(jīng)多次重結(jié)晶得到式（I )所示聚酮類化合物（5. 8mg)。
[0025] 實施例2 對實施例1中的化合物進行結(jié)構(gòu)分析測試，得到以下理化性質(zhì)數(shù)據(jù)： 白色粉末，熔點121.1-121.6°(：(溫度計未校正)41-]^(111/2):372 []\〇+;·^-]^ (m/z) :372. 1209 [M] +(理論值 372. 1204)。
[0026] 1H NMR (500 MHz, CDCl3) J 11. 27 (s，1H)，6. 58 (dd，/= 15.8，6. 7 Hz, 1H), 6.28 (dd, J= 15.8, 1.4 Hz, 1H), 6.16 (s, 1H), 6.08 (d, / = 1.8 Hz, 1H), 6.03 (d, /= 1.8 Hz, 1H), 5.11 (dd, J= 10.5, 6.1 Hz, 1H), 3.07 (dd, J= 16.6, 5. 5 Hz, 1H), 2.70 (dd, J= 16.6, 10. 5 Hz, 1H), 2.39 (s, 3H), 1.83 (d, /=6.7 Hz, 3H), 1.56 (s, 3H). 13C 匪R (125 MHz, CDCl3) ^ 181.9, 170.3, 164.9, 161.6, 161.0, 144.2, 144.1, 138.7, 134.2, 119.0, 112.2, 107.8, 104.8, 101.2, 87.3, 69.6, 24.4, 18.9, 16.4 根據(jù)以上數(shù)據(jù)，得知聚酮類化合物的結(jié)構(gòu)式如式（I )所示： 式（I )。
[0027] 實施例3 對實施例1中的化合物進行α-葡萄糖苷酶抑制實驗： 采用對硝基苯酚-α-葡萄糖苷（pNPG)為底物，在0.01Μ磷酸緩沖液（ρΗ7.0)中進行。 pNPG被α -葡萄糖苷酶酶解為對硝基苯酚，用紫外-可見分光光度計在400nm波長處測量 其吸光度的變化而計算酶的活性。樣品和陽性對照（阿卡波糖）均配成DMSO溶液（均為 10 #m〇l/mL)，酶和底物用0.0 lM磷酸緩沖液配成適宜濃度溶液，ImL初始反應(yīng)體系內(nèi)含 0.1 unit酶，60 底物，20 DMS0。取適量酶液，加入空白DMSO溶液或樣品的DMSO溶液， 混勻，37°C下，恒溫20分鐘，加入底物，混勻，立即在400nm波長處檢測Imin內(nèi)體系的吸光 度的變化值。用如下公式來計算酶活性：抑制率（%) = [(B - S )/ B] X 100%，其中B 為加空白DMSO時的吸光度變化值，S為樣品的吸光度變化值。測定5個濃度的樣品，繪制 劑量一抑制率曲線，得出其IC5tl值。每個樣品重復(fù)測定三次，結(jié)果用平均值土標準偏差表 不O
[0028] 結(jié)果測得該化合物對α-葡萄糖苷酶具有抑制作用，其IC5tl為9.05 ± 0.60 #Μ。 此外，3組抑制濃度下的抑制雙倒數(shù)曲線顯示，反應(yīng)速度Vmax隨抑制劑濃度增大而變小，而 在不同抑制劑濃度下，α-葡萄糖苷酶的米氏常數(shù)（Km)保持不變，雙倒數(shù)曲線交于橫坐標 上，是典型的非競爭性抑制動力學(xué)曲線(見圖1)。
【主權(quán)項】
1. 一種海洋真菌來源的聚酮類化合物，其特征在于，其結(jié)構(gòu)式如式（I)所示：式（I)。2. 權(quán)利要求1所述聚酮類化合物的制備方法，其特征在于，聚酮化合物是從海洋真菌 曲霉As/76?/沿7A/Ssp. 16-5B的發(fā)酵液中分離獲得的；海洋真菌曲霉As/76?/沿7A/Ssp. 16-5B于2015年4月6日保藏在中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏地址為中國武漢市武漢大 學(xué)，保藏編號為CCTCCNO:M2015204。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，聚酮化合物的制備方法包括如下步 驟：51. 將海洋真菌曲霉sp. 16-5B接入種子培養(yǎng)基，搖床培養(yǎng)，得到種子培 養(yǎng)液；52. 將種子培養(yǎng)液接入發(fā)酵培養(yǎng)基中，靜置培養(yǎng)；53. 將發(fā)酵產(chǎn)物過濾得到菌體，菌體用甲醇浸泡，減壓濃縮，得到浸膏，再經(jīng)層析分離， 得到聚酮類化合物。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述種子培養(yǎng)基的組分為：葡萄糖 35~40g，蛋白胨4~5g，酵母膏4~5g，海鹽4~5g，水2L。5. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述發(fā)酵培養(yǎng)基的組分為：硝酸鈉 3g，磷酸氫二鉀lg，硫酸鎂0. 5g，氯化鉀lg，硫酸亞鐵0.Olg，蔗糖20g，瓊脂20g，蒸餾水 lOOOmL。6. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，步驟S1所述搖床培養(yǎng)條件為： 26~28 °C下，搖床轉(zhuǎn)速150~200rpm，培養(yǎng)時間為60~72h。7. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，步驟S2所述靜置培養(yǎng)的時間為 28~30天，靜置培養(yǎng)的溫度為25~28°C。8. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，步驟S3所述菌體用體積為1 :1的 甲醇浸泡提取三次，提取液在低于50°C下濃縮至1L，濃縮液用體積比為1 :1的乙酸乙酯萃 取，乙酸乙酯萃取液在低于50°C下減壓濃縮得浸膏；該浸膏經(jīng)硅膠柱層析進行分離，分別 用0%，10%，20%，30%，40%，50%，60%，70%，100%的乙酸乙酯-石油醚梯度淋洗，其中40%乙酸 乙酯-石油醚洗脫部分經(jīng)葡聚糖S印hadexLH-20凝膠柱，用純甲醇為洗脫劑進行洗脫，經(jīng) 多次重結(jié)晶得到聚酮類化合物。9. 權(quán)利要求1所述聚酮類化合物在制備a_葡萄糖苷酶抑制劑中的應(yīng)用。10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述聚酮類化合物的應(yīng)用，其特征在于，所述a-葡萄糖苷酶抑制 劑用于防治II型糖尿病。
【專利摘要】本發(fā)明屬于藥物化合物領(lǐng)域，具體公開了一種海洋真菌來源的聚酮類化合物及其制備方法和應(yīng)用。所述聚酮類化合物的結(jié)構(gòu)式如式（Ⅰ）所示。該化合物能顯著抑制α-葡萄糖苷酶的活性，其IC50值為9.05 ±0.60μM。酶動力學(xué)研究表明該化合物是典型的非競爭性抑制劑。因此，該化合物可用于制備α-葡萄糖苷酶抑制劑藥物，用于防治II型糖尿病。CCTCC NO：M201520420150406
【IPC分類】C12R1/66, A61P3/10, C07D307/79, C12P17/04
【公開號】CN104987316
【申請?zhí)枴緾N201510204186
【發(fā)明人】佘志剛, 劉亞月, 肖澤恩, 丁博
【申請人】中山大學(xué)
【公開日】2015年10月21日
【申請日】2015年4月27日