PS注射的影響。
[0105] 組織采集
[0106] 在行為測試后3h于12-lp.m.處死動物。立即取出全腦并迅速冷凍在干冰 (Sigma-Aldrich，UK)上的冷異戊烷中，之后儲存在-80°C直至進一步的分子分析。將軀干 血米集到鉀EDTA (乙二胺四乙酸）管中并在5000rpm下旋轉(zhuǎn)15min。分離血衆(zhòng)并于_80°C 儲存用于進一步的皮質(zhì)酮分析。在整個研究中從各籠采集糞粒于PBS(磷酸鹽緩沖鹽水） 中的70%甘油中并于-20°C儲存用于進一步的細(xì)菌計數(shù)。
[0107] 數(shù)據(jù)分析
[0108] 使用SPSS軟件（19版）分析數(shù)據(jù)。使用柯爾莫哥洛夫一斯米洛夫檢驗 (Kolmogorov-Smirnov test)來測試數(shù)據(jù)常態(tài)。以雙因素方差分析（2-way AN0VA) 評價運動活動，所有其它數(shù)據(jù)以單因素方差分析（或針對非參數(shù)數(shù)據(jù)的秩和檢驗 (Kruskal-Wallis))、接著以圖基事后檢驗（Tukey post-hoc test)來評價。所有數(shù)據(jù)表示 為平均值土標(biāo)準(zhǔn)平均誤差（standard error of the mean，SEM)，并將統(tǒng)計顯著性的閾值 設(shè)定為P〈〇. 05。
[0109] 結(jié)果
[0110] BG0S對即刻LPS-誘導(dǎo)的疾病行為的作用：運動活動和埋珠試驗
[0111] 水-飼養(yǎng)動物與鹽水相比在LPS注射后表現(xiàn)出較低的運動活動（圖6A，時間效 應(yīng)，F(xiàn)(5, 260) = 142. 12, P〈0? 0001 ;LPS 注射效應(yīng)（F(l，52) = 3. 61，p = 0? 063 ;相互作用 時間XLPS注射F(5, 260) = 5. 12, p〈0. 001)。事后檢驗揭示了在30和40min時間點時 水-LPS動物行動的距離明顯短于其鹽水對應(yīng)組（二者均為p〈0. 05)。BGOS摧毀了 LPS對 自動運動的作用（圖6B)，因為仍存在時間效應(yīng)（F (5, 260) = 113. 01，p〈0. 0001)，但沒有 LPS注射效應(yīng)（F(l，52) = 1. 12, p = 0. 3)，也沒有相互作用時間XLPS注射（F(5, 260)= 0. 12, p = 0. 99)。與水-鹽水組相比，BGOS并未使鹽水動物的運動活動產(chǎn)生任何差別。
[0112] 在埋珠試驗中（圖7)，LPS對小鼠行為具有顯著作用（H(df = 3)= 13. 79, p〈0. 01)，其不會被BGOS反轉(zhuǎn)，因為水（p〈0. 05)和BGOS (p〈0. 05)二者-處理的接受 了 LPS的動物比它們的鹽水對應(yīng)組埋藏的彈珠少。與水-鹽水組相比，BG0S并未使鹽水動 物的埋珠數(shù)產(chǎn)生任何差別。
[0113] BG0S對延遲的LPS-誘導(dǎo)的焦慮行為的作用：明暗箱
[0114] LPS增加了水-飼養(yǎng)動物的焦慮行為（圖8)。如對光延遲（圖8A，H(df = 3)= 12. 17, p〈0. 01)和光下時間（圖 8B，F(xiàn)(3, 106) = 4. 71，p〈0. 01)的評價，該作用被 BGOS 摧 毀。的確，事后分析揭示了水-LPS動物比其鹽水對應(yīng)組（p〈0.01)以及鹽水-和BG0S-LPS 動物（二者均為P〈〇. 05)表現(xiàn)出顯著2倍高的對光延遲。水-LPS動物也比所有其它組表 現(xiàn)出顯著短的在亮部的時間（P〈〇. 05水-LPS vs.所有組）。然而，在暗部和亮部之間的轉(zhuǎn) 換數(shù)沒有統(tǒng)計學(xué)差異（圖3C，F(xiàn) (3, 110) = 1.7, p = 0. 17)。與水-鹽水動物相比，單獨的 BG0S對接受了鹽水的對照小鼠的任何參數(shù)都不產(chǎn)生任何差別。
[0115] LPS后24h BG0S對免疫參數(shù)的作用：額葉皮質(zhì)和血漿中的細(xì)胞因子水平
[0116] 額葉皮質(zhì)中，LPS誘導(dǎo)水-動物、而非BG0S動物（圖9)的TNF-a、IL-I 和 IL-6變化，但不誘導(dǎo)IL-10的變化。事后分析顯示，水LPS動物表現(xiàn)出比所有其它組高的 TNF-a (p〈〇. 05)，較高的IL-1 0 (p〈0.0 lvs?水-鹽水，和vs. BG0S-鹽水，p〈0. 05vs. BG0S LPS)，以及較高的IL-6 (p〈0. 05vs.水-鹽水）。因此，用BGOS飼養(yǎng)的、接受了鹽水或LPS注 射的動物的細(xì)胞因子水平均與對照的水-鹽水對應(yīng)組類似。
[0117] 血漿中，LPS誘導(dǎo)了水-動物、而非BG0S動物（圖10)的TNF- a的顯著變化，然 而，各組間的IL-6和IL-10、以及IL-1P沒有總體的統(tǒng)計學(xué)差異，盡管對于后者而言，與鹽 水相比，LPS誘導(dǎo)了水動物中非顯著性2倍增加。
[0118] 討論
[0119] 目前的研究試驗了益生元（BG0S)攝取對小鼠的LPS-誘導(dǎo)的疾病行為、焦慮和細(xì) 胞因子表達的影響，并且基于BGOS(Bimuno)經(jīng)免疫系統(tǒng)影響腦功能的推測。我們的兩個關(guān) 鍵發(fā)現(xiàn)是：1)與對照相比，BG0S飼養(yǎng)小鼠在LPS單次注射后未顯示自動活動（LMA)不足和 焦慮；和2)LPS-誘導(dǎo)的血漿中促炎介質(zhì)的表達（粒細(xì)胞集落刺激因子（G-CSF);趨化因子 (C-C基序）配體2(CCL2) ;IFNY誘導(dǎo)的單核因子、趨化因子（C-X-C基序）配體9(MIG))和 腦（TNFa)被BG0S攝取所抑制。總之，我們的數(shù)據(jù)支持現(xiàn)有觀點，即BGOS(Bimuno)在維持 腦健康中起到重要作用，并且對免疫應(yīng)激的應(yīng)答的改善可鞏固該作用。
[0120] 實施例6
[0121] BG0S對健康大鼠認(rèn)知表現(xiàn)的作用
[0122] 材料&方法
[0123] 給予普通斯普拉道來大鼠水或1. 3 % w/v BG0S的混合物的益生元溶液3周，接 著在注意定勢車專移任務(wù)（weeksandthentestedontheattentionalset-shifting task,ASST)(參見Bissonette，G. B.等人；BehaviouralBrainResearch;(2013) ：250： 91-101)上使用標(biāo)準(zhǔn)方案進行試驗。
[0124] 結(jié)果
[0125] 圖11示出給予BG0S 3周的大鼠顯示出在作為靈活學(xué)習(xí)的量度的ASST額 外維（extra-dimensional, ED)元素（component)方面改善的表現(xiàn)。如維內(nèi)相 (intradimensional phase) -樣輕松地執(zhí)行ED元素（ID/ED-變換）暗示了增加的認(rèn)知靈 活性（老年人受損的參數(shù)）。圖11中，與對照ID相比，#p〈0. 05,與對照ED相比，*p〈0. 05。
[0126] 結(jié)論
[0127] 給予BG0S的大鼠在依賴于通常在精神疾病和衰老中受損的醫(yī)學(xué)前額皮質(zhì)的任務(wù) 中顯示出改善的認(rèn)知表現(xiàn)。
【主權(quán)項】
1. 一種低聚半乳糖組合物，其包含二糖Gal ( P 1-3) -Glc ;Gal ( P 1-3) -Gal ; Gal (0 I-6)-Gal ；Gal(al-6)-Gal ；二糖 Gal(0 l_6)_Gal(0 l_4)_Glc ; Gal (0 1-3)-Gal ( P 1-4)-Glc ;四糖 Gal (0 1-6)-Gal ( P 1-6)-Gal ( P 1-4)-Glc 和五糖 Gal (M-6)-Gal ( M-6)-Gal ( M-6)-Gal ( M-4)-Glc，用于預(yù)防或治療神經(jīng)精神疾病或衰老 中的認(rèn)知功能障礙和/或情緒紊亂的用途。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述認(rèn)知功能障礙為由衰老、癡呆或精神分裂 癥引起的認(rèn)知減退或損傷。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述神經(jīng)精神疾病為抑郁癥或焦慮癥。4. 根據(jù)權(quán)利要求1至3任一項所述的組合物，其為粉劑、片劑、膠囊劑、液體制劑如糖漿 劑或軟錠劑的形式。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的組合物，其中當(dāng)其為粉劑形式時，在I. 65g至20g的粉劑組合 物中包含1. 35至9. 6g的低聚半乳糖，優(yōu)選在2. 5g至IOg的粉劑中包含I. 96g至4. 9g的 低聚半乳糖，最優(yōu)選在3. Og至5. 5g的粉劑中包含2. 7g至2. 75g的低聚半乳糖。6. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的組合物，其中當(dāng)其為糖漿劑形式時，在2. Ig至25. 29g的糖漿 劑組合物中包含I. 35g至9. 6g的低聚半乳糖，優(yōu)選在3. Og至12. 9g的糖漿劑中包含I. 96g 至4. 9g的低聚半乳糖，最優(yōu)選在4. Ig至7. 25g的糖衆(zhòng)劑中包含2. 7g至2. 75g的低聚半乳 糖。7. -種預(yù)防或治療發(fā)生在神經(jīng)精神疾病中或衰老中的認(rèn)知功能障礙和/或情緒 紊亂的方法，其包含向個體施用有效量的低聚半乳糖組合物，所述低聚半乳糖組合物 包含二糖 Gal(P l-3)_Glc ;Gal(P l-3)_Gal ;Gal(P l-6)_Gal ;Gal(al-6)_Gal ;三糖 Gal ( P 1-6) -Gal ( P 1-4) -Glc ;Gal ( P 1-3) -Gal ( P 1-4) -Glc ;四糖 Gal ( P 1-6) -Gal ( P 1-6 )-Gal ( P 1-4)-Glc 和五糖 Gal (0 1-6)-Gal ( P 1-6)-Gal ( P 1-6)-Gal ( P 1-4)-Glc。8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中所述個體為人。9. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中所述組合物口服施用。10. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中每日以單劑量施用所述有效量的低聚半乳糖組 合物。11. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中每日以間隔4至12小時、優(yōu)選間隔6至10小時、 最優(yōu)選間隔8小時的兩次分開劑量施用所述有效量的低聚半乳糖組合物。12. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中所述組合物為粉劑、片劑、膠囊劑、液體劑如糖漿 劑或軟錠劑的形式。13. 根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其中所述組合物為粉劑形式，且在I. 65g至20g的 粉劑組合物中包含1. 35至9. 6g的低聚半乳糖，優(yōu)選在2. 5g至IOg的粉劑中包含I. 96g至 4. 9g的低聚半乳糖，最優(yōu)選在3. Og至5. 5g的粉劑中包含2. 7g至2. 75g的低聚半乳糖。14. 根據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其中所述組合物為糖漿劑形式，且在2. Ig至25. 29g 的糖漿劑組合物中包含I. 35g至9. 6g的低聚半乳糖，優(yōu)選在3. Og至12. 9g的糖漿劑中包 含I. 96g至4. 9g的低聚半乳糖，最優(yōu)選在4. Ig至7. 25g的糖衆(zhòng)劑中包含2. 7g至2. 75g的 低聚半乳糖。
【專利摘要】一種包含二糖、三糖、四糖和五糖的混合物的低聚半乳糖組合物用于預(yù)防或治療神經(jīng)精神疾病或衰老中的認(rèn)知功能障礙和/或情緒紊亂的用途。
【IPC分類】A61P25/28, A61K31/7016, A61P25/24, A61K31/702
【公開號】CN105073120
【申請?zhí)枴緾N201480018975
【發(fā)明人】G·塔澤吉斯
【申請人】科拉薩多公司
【公開日】2015年11月18日
【申請日】2014年3月17日
【公告號】CA2908230A1, WO2014155056A1