嬰幼兒配方乳粉中低聚半乳糖的提純方法
【專利說明】
[0001]技術(shù)領(lǐng)域:
本發(fā)明涉及一種嬰幼兒配方乳粉中低聚半乳糖的提純方法。
[0002]【背景技術(shù)】:
低聚半乳糖是我國衛(wèi)生部允許使用的食品添加劑，也允許在嬰幼兒配方乳粉中添加。我國允許添加的低聚半乳糖是指以牛乳中的乳糖為原料，經(jīng)β -半乳糖苷酶的催化水解半乳糖苷鍵，生成半乳糖和葡萄糖，并通過轉(zhuǎn)半乳糖苷的作用，將水解下來的半乳糖苷轉(zhuǎn)移到乳糖分子，生成低聚半乳糖。低聚半乳糖是由2個~8個單糖通過β-糖苷鍵連接形成直鏈寡糖，不能被人體上消化道消化吸收，可以直接進(jìn)入大腸。低聚半乳糖分子式如下:
CH20H-C5H5 (OH) 30- (C6H1105) n-0_C5H5 (OH) 30-CH20H，其中(C6H1105) n，其中字母 η是半乳糖聚合數(shù)，η為1-7。
[0003]國內(nèi)外科學(xué)家的大量研究表明，低聚半乳糖具有低能量、促進(jìn)腸道雙歧桿菌的增殖、改善礦物質(zhì)元素的吸收、防止骨質(zhì)減少、改善脂質(zhì)代謝、預(yù)防和治療便秘、低致齲齒性、生成營養(yǎng)物質(zhì)、改善營養(yǎng)狀況、提高免疫力、增強(qiáng)抗腫瘤和抗衰老等多種生理功能。近年來，嬰幼兒配方乳粉生產(chǎn)企業(yè)添加低聚半乳糖的產(chǎn)品越來越多，但嬰幼兒配方乳粉中低聚半乳糖的定量分析技術(shù)還不成熟。目前，由于配方乳粉成分比較復(fù)雜，既含有蛋白質(zhì)、脂肪、糖水化合物等常量成分，又含有多種礦物元素和多種維生素，尤其含有較多的乳糖，因此準(zhǔn)確檢測其中的低聚半乳糖難度較大，準(zhǔn)確測定嬰幼兒配方乳粉中低聚半乳糖的含量仍然是國內(nèi)外的技術(shù)難題，其中的關(guān)鍵是原來沒有能夠較好地去除配方乳粉中各種干擾物的好方法。
[0004]
【發(fā)明內(nèi)容】
:
本發(fā)明的目的是提供一種嬰幼兒配方乳粉中低聚半乳糖的提純方法。
[0005]上述的目的通過以下的技術(shù)方案實現(xiàn):
一種嬰幼兒配方乳粉中低聚半乳糖的提純方法，該方法步驟如下:
用79±1%的乙醇水溶液提取嬰幼兒配方乳粉中的低聚半乳糖，通過萃取、膜透析等除去蛋白質(zhì)、脂肪等干擾物質(zhì)，然后再通過液相色譜法純化，分離除去蔗糖、乳糖等難以去除的干擾物，濃縮定容，得到?jīng)]有蔗糖、乳糖、蛋白質(zhì)、脂肪等干擾物質(zhì)的低聚半乳糖提純?nèi)芤海?br>步驟一:提取低聚半乳糖:
將添加了低聚半乳糖的嬰幼兒配方乳粉樣品5.0Og?10.0Og放入10mL燒杯中，用21mL溫水(約45°C )使樣品充分溶解，形成樣品溶液，樣品溶液轉(zhuǎn)入10mL容量瓶中，然后每次用約1mL無水乙醇沖洗燒杯，連續(xù)沖洗3次，沖洗液依次轉(zhuǎn)入10mL容量瓶中，與樣品溶液合并，待樣品溶液溫度降至室溫后，用室溫的無水乙醇定容至lOOmL，充分混勻，超聲波震蕩提取lOmin，室溫放置過夜，取150mL三角燒瓶與玻璃三角漏斗，放好定性濾紙，把樣品溶液過濾，得到樣品提取初步濾液，移取樣品初步濾液20mL，轉(zhuǎn)入MD34 (7000)透析袋，透析袋置于已有20mL水的玻璃容器中，水的頁面高于透析袋的頁面，透析15小時后取出，此時大部分小分子蛋白類干擾物質(zhì)已經(jīng)留在透析袋內(nèi)，取透析袋外的溶液用0.45微米有機(jī)微孔濾膜過濾，得到樣品提取濾液； 步驟二:純化低聚半乳糖:
分別把乳糖、蔗糖、半乳糖、葡萄糖及低聚半乳2糖至低聚半乳8糖標(biāo)準(zhǔn)溶液或其混合溶液進(jìn)樣20微升上機(jī)分析測定，確定好各個標(biāo)準(zhǔn)組分的保留時間，必須做到低聚半乳2糖至低聚半乳8糖標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的保留時間區(qū)域內(nèi)沒有乳糖、蔗糖、半乳糖等干擾物質(zhì)，記錄低聚半乳2糖至低聚半乳8糖的保留時間區(qū)間，在各種糖類標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的幾次進(jìn)樣的保留時間穩(wěn)定之后，依次分別把得到的樣品提取濾液進(jìn)樣1.0mL上機(jī)分析，從低聚半乳2糖的保留時間開始收集，至低聚半乳8糖的保留時間再延遲2min收集結(jié)束，為增加樣品收集液中低聚半乳糖的含量，可以連續(xù)收集同一批號樣品10次的色譜分離溶液，合并同一批號的色譜分離溶液至同一濃縮燒瓶中，這樣得到的收集溶液已經(jīng)把蔗糖、乳糖、半乳糖等大多難分離的干擾物質(zhì)去除了，得到的是純化了的低聚半乳糖純化溶液；
將得到的含低聚半乳糖純化溶液的濃縮燒瓶在蒸發(fā)濃縮儀上加熱真空濃縮或加氮吹濃縮，溫度為80 ± 2°C。濃縮至近干時(不要完全蒸干)，取下濃縮燒瓶，用水分次淋洗并定容至10mL，從而得到嬰幼兒配方乳粉的低聚半乳糖提純?nèi)芤骸?br>[0006]所述的嬰幼兒配方乳粉中低聚半乳糖的提純方法，所述的79±1%的乙醇水溶液的配制是移取色譜純無水乙醇790mL，加純凈水210mL，混勻；所述的乳糖、蔗糖、半乳糖、葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制是分別稱取乳糖、蔗糖、半乳糖、葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品0.1015g，用純凈水溶解并定容至10mL;所述的低聚半乳2糖、低聚半乳3糖、低聚半乳4糖、低聚半乳5糖、低聚半乳6糖、低聚半乳7糖、低聚半乳8糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制是分別稱取低聚半乳2糖、低聚半乳3糖、低聚半乳4糖、低聚半乳5糖、低聚半乳6糖、低聚半乳7糖、低聚半乳8糖標(biāo)準(zhǔn)品
0.1020g，用純凈水溶解并定容至lOOmL。
[0007]所述的嬰幼兒配方乳粉中低聚半乳糖的提純方法，所述的乳糖標(biāo)準(zhǔn)品、蔗糖標(biāo)準(zhǔn)品、半乳糖標(biāo)準(zhǔn)品、葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品的含量大于等于98.5%，所述的低聚半乳2糖至低聚半乳8糖標(biāo)準(zhǔn)品的含量大于等于98.0%。
[0008]所述的嬰幼兒配方乳粉中低聚半乳糖的提純方法，用低聚半乳糖參照品代替低聚半乳2糖至低聚半乳8糖標(biāo)準(zhǔn)品，所述的低聚半乳糖參照品的含量大于等于57.0%，低聚半乳糖參照品溶液的配制是稱取乳糖參照品0.1754g，用純凈水溶解并定容至lOOmL。
[0009]本發(fā)明的有益效果:
本發(fā)明通過用79±1%的乙醇水溶液提取嬰幼兒配方乳粉中的低聚半乳糖，通過萃取、膜透析等除去蛋白質(zhì)、脂肪等干擾物質(zhì)；然后再通過液相色譜法純化，分離出去蔗糖、乳糖等難以去除的干擾物，濃縮定容，得到?jīng)]有蔗糖、乳糖、蛋白質(zhì)、脂肪等干擾物質(zhì)的低聚半乳糖提純?nèi)芤?，提純?nèi)芤阂呀?jīng)去除了大多數(shù)干擾雜質(zhì)，尤其是去除了乳糖等糖類的干擾，有利于進(jìn)一步的準(zhǔn)確分析與檢測，可以用于嬰幼兒配方乳粉中低聚半乳糖的定性定量分析，也可以用于其它科學(xué)研究。如果用于嬰幼兒配方乳粉中低聚半乳糖的定量分析，由于稱樣量m(g)，初始定容lOOmL，液相色譜法分離純化時每次進(jìn)樣量1.0mL,連續(xù)進(jìn)樣并收集10次，合并收集溶液，濃縮后又用水定容至10.0mL,即色譜分離純化過程沒有改變樣品溶液中低聚半乳糖的濃度，嬰幼兒配方乳粉中低聚半乳糖含量X計算式如下:X=CX100X100/1000mk;其中K是樣品初始濾液透析時的稀釋倍數(shù)，C是低聚半乳糖提純?nèi)芤褐械途郯肴樘堑臐舛菴(mg/mL)，C的值可以通過色譜法得到，X是嬰幼兒配方乳粉中低聚半乳糖含量(g/100g)。
[0010]【具體實施方式】: 實施例1:
一種嬰幼兒配方乳粉中低聚半乳糖的提純方法，該方法步驟如下:
用79±1%的乙醇水溶液提取嬰幼兒配方乳粉中的低聚半乳糖，通過萃取、膜透析等除去蛋白質(zhì)、脂肪等干擾物質(zhì)，然后再通過液相色譜法純化，分離除去蔗糖、乳糖等難以去除的干擾物，濃縮定容，得到?jīng)]有蔗糖、乳糖、蛋白質(zhì)、脂肪等干擾物質(zhì)的低聚半乳糖提純?nèi)芤海?br>步驟一:提取低聚半乳糖:
將添加了低聚半乳糖的嬰幼兒配方乳粉樣品5.0Og?10.0Og放入10mL燒杯中，用21mL溫水(約45°C )使樣品充分溶解，形成樣品溶液，樣品溶液轉(zhuǎn)入10mL容量瓶中，然后每次用約1mL無水乙醇沖洗燒杯，連續(xù)沖洗3次，沖洗液依次轉(zhuǎn)入10mL容量瓶中，與樣品溶液合并，待樣品溶液溫度降至室溫后，用室溫的無水乙醇定容至lOOmL，充分混勻，超聲波震蕩提取lOmin，室溫放置過夜，取150mL三角燒瓶與玻璃三角漏斗，放好定性濾紙，把樣品溶液過濾，得到樣品提取初步濾液，移取樣品初步濾液20mL，轉(zhuǎn)入MD34 (7000)透析袋，