一種測定配方奶粉中低聚半乳糖含量的檢測方法
【專利說明】一種測定配方奶粉中低聚半乳糖含量的檢測方法
[0001] 本方法涉及氣相色譜-質(zhì)譜測定配方奶粉中低聚半乳糖含量的檢測方法，屬于乳 制品檢測領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 低聚半乳糖，英文名稱Galactooligosaccharide，簡稱G0S，是一種具有天然屬性 的功能性低聚糖，其分子結(jié)構(gòu)一般是在半乳糖（Gal)或葡萄糖（Glc)分子上連接1-7個(gè)半 乳糖基，即Gal-(Gal)n-Glc/Gal(n為0-6)，分子量約300-2000。低聚半乳糖的化學(xué)結(jié)構(gòu)式 見下：
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種測定配方奶粉中低聚半乳糖含量的檢測方法，其特征在于該方法包括以下步 驟： (1) 提?。悍Q取均勻樣品LOg(精確至0.0 lg)于50mL刻度塑料離心管中，加入40mL 磷酸鹽緩沖液（〇. 2M磷酸鹽緩沖液：22. Og磷酸二氫鉀+6. Og磷酸氫二鉀+1. OL二級(jí)水） 溶解，渦旋混勻，在80°C ±2°C水浴中持續(xù)振搖提取30min，冷卻至室溫后用磷酸鹽緩沖溶 液定容至IOOmL,移取5. OmL試樣的提取溶液于50mL容量瓶中，用磷酸鹽緩沖溶液定容至 50mL，備用。 (2) 酶解：移取提取液1.0 mL于IOmL刻度塑料離心管中，加入0. 5mL β -半乳糖苷酶溶 液（來源于米曲霉，50U/mL)，混勻，在60°C ±2°C水浴中持續(xù)振搖60min，冷卻至室溫后用 20%乙腈定容至IOmL,搖勻，10000r/min離心10min,上層水相用濾紙過濾，用0. 22 μ m水相 濾膜過濾，待衍生，測定并計(jì)算酶解后半乳糖的濃度（C1)。 ⑶酶解前：同時(shí)移取提取液1.0 mL于IOmL刻度塑料離心管中，加入0. 5mL磷酸鹽緩沖 溶液，混勻，在60°C ±2°C水浴中持續(xù)振搖60min，冷卻至室溫后用20%乙腈定容至10mL，搖 勻，10000r/min離心10min,上層水相用濾紙過濾,然后用0. 22μηι水相濾膜過濾,待衍生， 測定并計(jì)算提取原液中游離乳糖的濃度（C2)和游離半乳糖的濃度（C 3)。 (4) 衍生：分別移?、坪廷堑淖罱K樣液ImL,氮?dú)獯蹈苫虻蜏兀?0~60°C )真空干 燥后，分別加入400yL N，N-二甲基甲酰胺（DMF)和200yL衍生試劑（N，0-雙（三甲基硅 烷基）三氟乙酰胺和三甲基氯硅烷的混合液（比例為99 : l，v/v)，保證密封并震蕩混勻， 75°C ±2°C衍生30min，冷卻后，用丙酮定容至lmL，過0. 22μπι有機(jī)膜。 (5) 測定：定容后的溶液進(jìn)入氣相色譜-質(zhì)譜儀，選擇離子掃描檢測（SIM)，外標(biāo)法定 量； (6) 采用氣相色譜-質(zhì)譜儀，配電子轟擊源（EI);作為優(yōu)選，氣相色譜-質(zhì)譜條件：色 譜柱：DB-5MS毛細(xì)管柱（30mX0. 25mmX0. 25μπι)或相當(dāng)柱；進(jìn)樣口 ：280°C ;傳輸線溫度： 280°C;氦氣流速為l.OmL/min;進(jìn)樣方式：分流，分流比20 : 1;進(jìn)樣量IyL;柱溫：150°C; 升溫程序：從150°C以4°C /min升溫至230°C，以20°C /min升溫至280°C (保持15min);載 氣：氦氣；流速：1.0 mL/min (恒流）；電離方式：EI ;電離能量：70eV ;測定方式：SIM ;溶劑延 遲：5min ;離子源溫度：230°C ;并根據(jù)保留時(shí)間定性，半乳糖和乳糖的衍生物的定性離子皆 為m/z 191和m/z 217,以m/z 204為定量離子。 (7) 計(jì)算公式： 樣品中低聚半乳糖含量X按公式（a)計(jì)算，數(shù)值以mg/100g表示。 式中：
X--樣品中低聚半乳糖含量，單位為毫克每百克（mg/100g); 1.35--折算系數(shù)因子； 注：1. 35為低聚半乳糖原料的經(jīng)驗(yàn)k值，不同的產(chǎn)品可能會(huì)有不同，可通過實(shí)際添加的 低聚半乳糖原料實(shí)測的k值作為計(jì)算值。 Gt-酶解分解液中最終的半乳糖含量，單位為毫克每百克（mg/100g); Lb--提取液原液中的乳糖含量，單位為毫克每百克（mg/lOOg); 1.9--乳糖換算成半乳糖的經(jīng)驗(yàn)換算系數(shù)； Gb--提取原液中的半乳糖含量，單位為毫克每百克（mg/100g)。 公式（a)中Gt、Lb、Gb按照公式（b)-(e)計(jì)算：
上述公式中： Gt-酶解分解液中最終的半乳糖含量，單位為毫克每百克（mg/100g); C1-酶解分解液中最終的半乳糖濃度，單位為微克每毫升（μ g/mL); Lb 提取原液中的乳糖含量，單位為暈克每百克（mg/100g); C2--提取原液中的乳糖的濃度，單位為微克每毫升（μ g/mL); Gb 提取原液中的半乳糖含量，單位為暈克每百克（mg/100g); C3--提取原液中的半乳糖濃度，單位為微克每毫升（μ g/mL); m--樣品稱樣量，單位為克（g); V--樣品處理過程稀釋體積，單位為毫升（mL); 10--單位轉(zhuǎn)換系數(shù)。
2.如權(quán)利要求1所述的一種測定配方奶粉中低聚半乳糖含量的檢測方法，其特征在 于，所述半乳糖和乳糖用氣相色譜-質(zhì)譜儀進(jìn)行測定。
【專利摘要】本方法涉及低聚半乳糖含量的檢測方法，尤其涉及氣相色譜-質(zhì)譜測定配方奶粉中低聚半乳糖含量的檢測方法。用熱的磷酸鹽緩沖液從待測樣品中提取低聚半乳糖和乳糖，用β-半乳糖苷酶將提取液中的低聚半乳糖水解，離心，取上清液過微孔濾膜，氮?dú)獯蹈苫虻蜏卣婵崭稍锖螅珺STFA衍生，用丙酮定容。采用氣相-質(zhì)譜聯(lián)用法分別測定提取原液中游離的半乳糖和乳糖，和酶解分解液中低聚半乳糖和乳糖釋放出的半乳糖總量，用酶解分解液后的半乳糖含量減去提取原液的半乳糖含量和乳糖酶解產(chǎn)生的半乳糖含量，計(jì)算出樣品中低聚半乳糖的含量。采用本發(fā)明的方法檢測奶粉中低聚半乳糖的含量，具有檢測限低、靈敏度高的優(yōu)點(diǎn)。
【IPC分類】G01N30-88
【公開號(hào)】CN104655771
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201410415976
【發(fā)明人】宋薇
【申請(qǐng)人】譜尼測試科技股份有限公司
【公開日】2015年5月27日
【申請(qǐng)日】2014年8月22日