專利名稱：從千層塔中提取分離石杉?jí)A甲和石杉?jí)A乙的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種生物堿的提取方法，特別是一種從千層塔中提取分離石杉?jí)A甲和石杉?jí)A乙的方法。
背景技術(shù)：
千層塔為石杉科石杉屬蕨類植物，又名蛇足石杉、救命王。主布東北、長(zhǎng)江流域和閩、粵、桂、滇、黔等省區(qū)。民間常將全草入藥，有毒，用于退熱、止血、消腫散毒、跌打損傷等。 千層塔中含有的生物堿，特別是石杉?jí)A甲(HupA)和石杉?jí)A乙(HupB)是具有低毒、高效、可逆和高選擇性等優(yōu)點(diǎn)的乙酰膽堿酯酶抑制劑，對(duì)于治療重癥肌無(wú)力、中老年癡呆及提高記憶力具有良好的療效，并對(duì)抑制有機(jī)磷酸中毒有一定的作用。由于其獨(dú)特的藥用價(jià)值，千層塔及其提取物正日益受到國(guó)內(nèi)外市場(chǎng)的廣泛重視。目前的千層塔提取物主要集中在石杉?jí)A甲，而石杉?jí)A乙在提取過(guò)程中被作為廢渣棄去，嚴(yán)重浪費(fèi)了有效資源。如專利號(hào)200710018515. 4“一種從千層塔中提取分離石杉?jí)A甲的方法”，專利申請(qǐng)?zhí)?00910014866. 7 “一種從千層塔中提取分離高純度石杉?jí)A甲的新方法”等只是獲得了石杉?jí)A甲，而丟棄了石杉?jí)A乙。專利號(hào)200610128322. X，公布了“從植物藥材千層塔中提取石杉?jí)A乙的工藝”只是獲得了石杉?jí)A乙，而丟棄了石杉?jí)A甲。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種可以同時(shí)提取并分離石杉?jí)A甲和石杉?jí)A乙的方法，以提高有限資源的利用率。為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案包括石杉總堿的提取、提純、石杉?jí)A甲和石杉?jí)A乙的分離、濃縮結(jié)晶和重結(jié)晶，具體步驟如下。⑴粉碎凈選千層塔藥材，粉碎，粒度為10-20目，過(guò)篩。⑵綜合提取連續(xù)兩次提取，第一次提取是將千層塔粉粒用0. 8%的鹽酸溶液按照固液比為1 :20-25的標(biāo)準(zhǔn)浸泡60min，再用600W功率的超聲波提取15min，然后再浸泡 60min，接著將提取液離心，取上清液；第二次提取是將濾渣用0. 8%的鹽酸溶液按照固液比為1 :18-22的標(biāo)準(zhǔn)浸泡45min，再用600W功率的超聲波提取lOmin，然后再浸泡45min，接著將提取液離心，取上清液，最后將兩次上清液合并。⑶脫色在合并液中加入活性炭，攪拌脫色4h，濾去活性炭，留取濾液，活性炭的加入量為提取上清液體積的5%。。⑷洗脫將所得濾液上陽(yáng)離子交換樹(shù)脂進(jìn)行吸附，吸附30min后，用等體積蒸餾水洗滌樹(shù)脂，再用等體積1%鹽酸洗脫，減壓濃縮洗脫液至原材料重量的10-12倍體積。 ω反相色譜分離將洗脫濃縮液上反相C18色譜柱，用2倍20%乙醇溶液溶解10h， 再用等量35%-45%乙醇溶液進(jìn)行洗脫，減壓濃縮洗脫液至原材料重量的10-12倍體積。
(6)分離將洗脫濃縮液上反相硅膠色譜柱，用2倍20%_30%的甲醇溶液溶解，再用等量30%_40%的甲醇溶液進(jìn)行洗脫，同時(shí)紫外在線檢測(cè)，收集石杉?jí)A甲所在洗脫峰的洗脫液；再用等量60%-70%甲醇溶液進(jìn)行洗脫，同時(shí)紫外在線檢測(cè)，收集石杉?jí)A乙在洗脫峰的洗脫液。(7)濃縮結(jié)晶將得到的石杉?jí)A甲洗脫液和石杉?jí)A乙洗脫液分別減壓濃縮，直至有結(jié)晶析出，過(guò)濾得石杉?jí)A甲粗結(jié)晶和石杉?jí)A乙粗結(jié)晶。⑶重結(jié)晶分別將石杉?jí)A甲粗結(jié)晶和石杉?jí)A乙粗結(jié)晶放入100-150倍體積的 85%-90%乙醇溶液中，加熱充分溶解然后濃縮至結(jié)晶原體積的10-12倍，然后放置析晶，析出白色針狀結(jié)晶，過(guò)濾得石杉?jí)A甲結(jié)晶和石杉?jí)A乙結(jié)晶。⑶干燥分別將石杉?jí)A甲結(jié)晶和石杉?jí)A乙結(jié)晶放入真空干燥器中干燥，得到石杉?jí)A甲產(chǎn)品和石杉?jí)A乙產(chǎn)品。本發(fā)明的有益效果是，用酸液浸泡，超聲波提取，可充分析出千層塔中的石杉總堿，然后利用活性炭和陽(yáng)離子交換樹(shù)脂清除雜質(zhì)，再利用反相色譜柱可以分離石杉?jí)A甲和石杉?jí)A乙，然后分別通過(guò)萃取、結(jié)晶和重結(jié)晶可以提高石杉?jí)A甲和石杉?jí)A乙的純度，這樣有效的利用了自然資源，提高了經(jīng)濟(jì)效益。


圖1為本發(fā)明從千層塔中提取分離石杉?jí)A甲和石杉?jí)A乙的方法流程示意圖。圖2為本發(fā)明實(shí)施例1石杉?jí)A甲的高效液相色譜圖。圖3為本發(fā)明實(shí)施例1石杉?jí)A乙的高效液相色譜圖。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明。實(shí)施例1。凈選千層塔藥材IOOkg (原料含量石杉?jí)A甲0. 17%。，石杉?jí)A乙0. 036%。)，粉碎，粒度為10-20目，過(guò)篩；然后將千層塔粉粒用0. 8%的鹽酸溶液2200L浸泡60min，再用600W 功率的超聲波提取15min，然后再浸泡60min，接著將提取液離心，取上清液；接著將濾渣用 0. 8%的鹽酸溶液2000L浸泡45min，再用600W功率的超聲波提取lOmin，然后再浸泡45min，
接著將提取液離心，取上清液，最后將兩次上清液合并。在合并液中加入活性炭3kg，攪拌脫色4h，濾去活性炭，留取濾液；將所得濾液上陽(yáng)離子交換樹(shù)脂進(jìn)行吸附，吸附30min后，用4200L蒸餾水洗滌樹(shù)脂，再用1%鹽酸4200L洗脫，減壓濃縮洗脫液至IOOOL ；接著將洗脫濃縮液上反相C18色譜柱，用20%乙醇溶液2000L 溶解10h，再用40%乙醇溶液2000L進(jìn)行洗脫，減壓濃縮洗脫液至1000L ；將洗脫濃縮液上反相硅膠色譜柱，用25%的甲醇溶液2000L溶解，再用35%的甲醇溶液2000L進(jìn)行洗脫，同時(shí)紫外在線檢測(cè)，收集石杉?jí)A甲所在洗脫峰的洗脫液；再用65%甲醇溶液2000L進(jìn)行洗脫，同時(shí)紫外在線檢測(cè)，收集石杉?jí)A乙在洗脫峰的洗脫液。將得到的石杉?jí)A甲洗脫液和石杉?jí)A乙洗脫液分別減壓濃縮，直至有結(jié)晶析出，過(guò)濾得石杉?jí)A甲粗結(jié)晶23. 9g和石杉?jí)A乙粗結(jié)晶5. 3g ；然后分別將石杉?jí)A甲粗結(jié)晶和石杉?jí)A乙粗結(jié)晶放入2500g和600g的85%乙醇溶液中，加熱充分溶解然后濃縮至MOg和55g，然后放置析晶，析出白色針狀結(jié)晶，過(guò)濾得石杉?jí)A甲結(jié)晶和石杉?jí)A乙結(jié)晶；最后分別將石杉?jí)A甲結(jié)晶和石杉?jí)A乙結(jié)晶放入真空干燥器中干燥，得到石杉?jí)A甲產(chǎn)品15. 9g和石杉?jí)A乙產(chǎn)品 3. 7g。經(jīng)檢測(cè)，AgilentlOO高效液相色譜儀，色譜柱為Hypersil 0DS(150mmX4. 6mm，5 μ )，流動(dòng)相為乙腈磷酸鹽緩沖液=14:86 ；檢測(cè)波長(zhǎng)為310nm ；流速為 lml/min ；進(jìn)樣量20 μ L。測(cè)得石杉?jí)A甲純度為98. 13%HPLC，回收率為88. 15%，見(jiàn)圖2 ；石杉?jí)A乙純度為98. 53%HPLC,回收率為93. 31%，見(jiàn)圖3。實(shí)施例2。凈選千層塔藥材IOOkg (原料含量石杉?jí)A甲0. 17%。，石杉?jí)A乙0. 036%。)，粉碎，粒度為10-20目，過(guò)篩；然后將千層塔粉粒用0. 8%的鹽酸溶液2500L浸泡60min，再用600W 功率的超聲波提取15min，然后再浸泡60min，接著將提取液離心，取上清液；接著將濾渣用 0. 8%的鹽酸溶液2200L浸泡45min，再用600W功率的超聲波提取lOmin，然后再浸泡45min，
接著將提取液離心，取上清液，最后將兩次上清液合并。在合并液中加入活性炭3kg，攪拌脫色4h，濾去活性炭，留取濾液；將所得濾液上陽(yáng)離子交換樹(shù)脂進(jìn)行吸附，吸附30min后，用4700L蒸餾水洗滌樹(shù)脂，再用1%鹽酸4700L洗脫，減壓濃縮洗脫液至IOOOL ；接著將洗脫濃縮液上反相C18色譜柱，用20%乙醇溶液2000L 溶解10h，再用40%乙醇溶液2000L進(jìn)行洗脫，減壓濃縮洗脫液至1000L ；將洗脫濃縮液上反相硅膠色譜柱，用25%的甲醇溶液2000L溶解，再用40%的甲醇溶液2000L進(jìn)行洗脫，同時(shí)紫外在線檢測(cè)，收集石杉?jí)A甲所在洗脫峰的洗脫液；再用70%甲醇溶液2000L進(jìn)行洗脫，同時(shí)紫外在線檢測(cè)，收集石杉?jí)A乙在洗脫峰的洗脫液。將得到的石杉?jí)A甲洗脫液和石杉?jí)A乙洗脫液分別減壓濃縮，直至有結(jié)晶析出，過(guò)濾得石杉?jí)A甲粗結(jié)晶22. 7g和石杉?jí)A乙粗結(jié)晶4. 95g ；然后分別將石杉?jí)A甲粗結(jié)晶和石杉?jí)A乙粗結(jié)晶放入2500g和600g的85%乙醇溶液中，加熱充分溶解然后濃縮至230g和50g， 然后放置析晶，析出白色針狀結(jié)晶，過(guò)濾得石杉?jí)A甲結(jié)晶和石杉?jí)A乙結(jié)晶；最后分別將石杉?jí)A甲結(jié)晶和石杉?jí)A乙結(jié)晶放入真空干燥器中干燥，得到石杉?jí)A甲產(chǎn)品15. 3g和石杉?jí)A乙產(chǎn)品 3. 45g。實(shí)施例3。凈選千層塔藥材IOOkg (原料含量石杉?jí)A甲0. 17%。，石杉?jí)A乙0. 036%。)，粉碎，粒度為10-20目，過(guò)篩；然后將千層塔粉粒用0. 8%的鹽酸溶液2000L浸泡60min，再用600W 功率的超聲波提取15min，然后再浸泡60min，接著將提取液離心，取上清液；接著將濾渣用 0. 8%的鹽酸溶液1800L浸泡45min，再用600W功率的超聲波提取lOmin，然后再浸泡45min，
接著將提取液離心，取上清液，最后將兩次上清液合并。在合并液中加入活性炭3kg，攪拌脫色4h，濾去活性炭，留取濾液；將所得濾液上陽(yáng)離子交換樹(shù)脂進(jìn)行吸附，吸附30min后，用3800L蒸餾水洗滌樹(shù)脂，再用1%鹽酸3800L洗脫，減壓濃縮洗脫液至1000L ；接著將洗脫濃縮液上反相C18色譜柱，用20%乙醇溶液2000L 溶解10h，再用45%乙醇溶液2000L進(jìn)行洗脫，減壓濃縮洗脫液至1000L ；將洗脫濃縮液上反相硅膠色譜柱，用25%的甲醇溶液2000L溶解，再用30%的甲醇溶液2000L進(jìn)行洗脫，同時(shí)紫外在線檢測(cè)，收集石杉?jí)A甲所在洗脫峰的洗脫液；再用60%甲醇溶液2000L進(jìn)行洗脫，同時(shí)紫外在線檢測(cè)，收集石杉?jí)A乙在洗脫峰的洗脫液。將得到的石杉?jí)A甲洗脫液和石杉?jí)A乙洗脫液分別減壓濃縮，直至有結(jié)晶析出，過(guò)濾得石杉?jí)A甲粗結(jié)晶22. 5g和石杉?jí)A乙粗結(jié)晶4. Sg ；然后分別將石杉?jí)A甲粗結(jié)晶和石杉?jí)A乙粗結(jié)晶放入2300g和500g的90%乙醇溶液中，加熱充分溶解然后濃縮至225g和50g，然后放置析晶，析出白色針狀結(jié)晶，過(guò)濾得石杉?jí)A甲結(jié)晶和石杉?jí)A乙結(jié)晶；最后分別將石杉?jí)A甲結(jié)晶和石杉?jí)A乙結(jié)晶放入真空干燥器中干燥，得到石杉?jí)A甲產(chǎn)品15. Ig和石杉?jí)A乙產(chǎn)品 3. 4go
權(quán)利要求
1.從千層塔中提取分離石杉?jí)A甲和石杉?jí)A乙的方法，由粉碎、綜合提取、脫色、洗脫、反相洗脫、分離、濃縮結(jié)晶、重結(jié)晶和干燥等工序完成，其特征在于具體步驟如下⑴粉碎凈選千層塔藥材，粉碎，粒度為10-20目，過(guò)篩；⑵綜合提取連續(xù)兩次提取，第一次提取是將千層塔粉粒用0. 8%的鹽酸溶液按照固液比為1 :20-25的標(biāo)準(zhǔn)浸泡60min，再用600W功率的超聲波提取15min，然后再浸泡60min， 接著將提取液離心，取上清液；第二次提取是將濾渣用0. 8%的鹽酸溶液按照固液比為1 18-22的標(biāo)準(zhǔn)浸泡45min，再用600W功率的超聲波提取lOmin，然后再浸泡45min，接著將提取液離心，取上清液，最后將兩次上清液合并；⑶脫色在合并液中加入活性炭，攪拌脫色4h，濾去活性炭，留取濾液，活性炭的加入量為提取上清液體積的5%。；⑷洗脫將所得濾液上陽(yáng)離子交換樹(shù)脂進(jìn)行吸附，吸附30min后，用等體積蒸餾水洗滌樹(shù)脂，再用等體積1%鹽酸洗脫，減壓濃縮洗脫液至原材料重量的10-12倍體積；( 反相色譜分離將洗脫濃縮液上反相C18色譜柱，用2倍20%乙醇溶液溶解10h，再用等量35%-45%乙醇溶液進(jìn)行洗脫，減壓濃縮洗脫液至原材料重量的10-12倍體積；(6)分離將洗脫濃縮液上反相硅膠色譜柱，用2倍20%-30%的甲醇溶液溶解，再用等量 30%-40%的甲醇溶液進(jìn)行洗脫，同時(shí)紫外在線檢測(cè)，收集石杉?jí)A甲所在洗脫峰的洗脫液；再用等量60%-70%甲醇溶液進(jìn)行洗脫，同時(shí)紫外在線檢測(cè)，收集石杉?jí)A乙在洗脫峰的洗脫液； ⑵濃縮結(jié)晶將得到的石杉?jí)A甲洗脫液和石杉?jí)A乙洗脫液分別減壓濃縮，直至有結(jié)晶析出，過(guò)濾得石杉?jí)A甲粗結(jié)晶和石杉?jí)A乙粗結(jié)晶；⑶重結(jié)晶分別將石杉?jí)A甲粗結(jié)晶和石杉?jí)A乙粗結(jié)晶放入100-150倍體積的85%-90% 乙醇溶液中，加熱充分溶解然后濃縮至結(jié)晶原體積的10-12倍，然后放置析晶，析出白色針狀結(jié)晶，過(guò)濾得石杉?jí)A甲結(jié)晶和石杉?jí)A乙結(jié)晶；⑶干燥分別將石杉?jí)A甲結(jié)晶和石杉?jí)A乙結(jié)晶放入真空干燥器中干燥，得到石杉?jí)A甲產(chǎn)品和石杉?jí)A乙產(chǎn)品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于步驟⑵所述的綜合提取方法為首先將千層塔粉粒用22倍體積0. 8%的鹽酸溶液浸泡60min，再用600W功率的超聲波提取 15min，然后再浸泡60min，接著將提取液離心，取上清液；然后再將濾渣用20倍體積0. 8% 的鹽酸溶液浸泡45min，再用600W功率的超聲波提取lOmin，然后再浸泡60min，接著將提取液離心，取上清液，最后將兩次上清液合并。
全文摘要
從千層塔中提取分離石杉?jí)A甲和石杉?jí)A乙的方法，包括石杉總堿的提取、提純、石杉?jí)A甲和石杉?jí)A乙的分離、結(jié)晶，其有益效果是，用酸液浸泡，超聲波反復(fù)提取，可充分析出千層塔中的石杉總堿，然后利用活性炭和陽(yáng)離子交換樹(shù)脂清除雜質(zhì)，再利用反相色譜柱分離石杉?jí)A甲和石杉?jí)A乙，然后分別通過(guò)濃縮結(jié)晶和重結(jié)晶可以提高石杉?jí)A甲和石杉?jí)A乙的純度，本發(fā)明有效的利用了自然資源，提高了回收率和提取物含量，提高了經(jīng)濟(jì)效益。
文檔編號(hào)C07D221/22GK102432535SQ20111044926
公開(kāi)日2012年5月2日 申請(qǐng)日期2011年12月29日 優(yōu)先權(quán)日2011年12月29日
發(fā)明者何全慧, 向廷軍, 楊再江, 祝利, 趙勇彪 申請(qǐng)人:重慶市秀山紅星中藥材開(kāi)發(fā)有限公司