專利名稱：一種從千層塔中提取分離高純度石杉?jí)A甲的新方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種從中草藥千層塔中提取分離高純度石杉?jí)A甲的方法。
背景技術(shù)：
千層塔是蕨類植物石杉科石杉屬蛇足石杉的全草，民間應(yīng)用于散瘀化血、消腫止 疼、除濕、清熱解毒。其所含生物堿石杉?jí)A甲和石杉?jí)A乙具有很強(qiáng)的抑制膽堿脂酶活性，臨 床實(shí)驗(yàn)證實(shí)石杉?jí)A甲對(duì)治療早老性癡呆有顯著療效。從千層塔中提取的石杉?jí)A甲，是中國(guó) 獨(dú)創(chuàng)的一種新藥。屬于可逆性膽堿酯酶抑制劑，是目前治療良性記憶障礙和早老性癡呆癥 最為安全有效的藥物之一。 現(xiàn)已有文獻(xiàn)報(bào)道提取制備石杉?jí)A甲的方法。 沈生榮等〔石杉?jí)A甲提取工藝研究，浙江大學(xué)學(xué)報(bào)(農(nóng)業(yè)與生命科學(xué)版)2002， 28(6) ，591-595〕系統(tǒng)研究了石杉?jí)A甲的提取工藝。系用有機(jī)酸浸提、萃取、反萃取、脫色和 重結(jié)晶等化學(xué)分離技術(shù)從千層塔中提取、純化石杉?jí)A甲。可得到純度大于99%的高純度石 杉?jí)A甲。 楊明等〔HPLC法制備石杉?jí)A甲，解放軍藥學(xué)學(xué)報(bào)2003，19 (5) ，352-354〕建立了用 制備型HPLC制備石杉?jí)A甲的方法。用常規(guī)的方法提取出石杉總生物堿，總生物堿經(jīng)HPLC 直接進(jìn)樣，以氯仿-甲醇-氨水(840 : 24 : 1.2)為流動(dòng)相，可得到純度大于90%的石杉 堿甲。 劉建廷等〔石杉?jí)A甲提取工藝研究，天然產(chǎn)物研究與開發(fā)2006， 18 :298-301〕研究 了以蛇足石杉為原料，采用生物堿分離的傳統(tǒng)方法，通過鹽酸浸提，氯仿萃取來制取純化石 杉?jí)A甲。 陳建華等〔高速逆流色譜技術(shù)制備石杉?jí)A甲單體，中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)雜志2006， 23(4) ，295-297〕運(yùn)用高速逆流色譜技術(shù)，以n-Hexane/n-BuOH/H20 (4 : 1 : 5， V/V/V)為 兩相溶劑體系，在優(yōu)化的工藝參數(shù)條件下，獲得了單體純度為98.6% (HPLC)的石杉?jí)A甲單 體。 近年來也出現(xiàn)了一些有關(guān)制備石杉?jí)A甲的專利文獻(xiàn)。《一種從千層塔中提取分離石杉?jí)A甲的方法》(中國(guó)專利，CN 101134743A)用有 機(jī)溶劑提取，調(diào)酸；陽離子交換樹脂色譜分離，洗脫，濃縮成浸膏；經(jīng)硅膠攪拌，上硅膠柱色 譜，混合洗脫劑洗脫，濃縮，結(jié)晶，可得純度達(dá)98 %的石杉?jí)A甲?！兑环N高純度石杉?jí)A甲的制備方法》(中國(guó)專利，CN1587260A)用正構(gòu)烷烴-脂肪 醇-水作為溶劑體系，用高速逆流色譜法從石杉屬植物千層塔中分離高純度石杉?jí)A甲。
《從中草藥千層塔中提取石杉?jí)A甲的方法》(中國(guó)專利CN1448390A)應(yīng)用以下工藝 步驟制備石杉?jí)A甲原料粉碎一浸漬一濃縮一萃取(反復(fù))一柱層析一結(jié)晶一高效液相色 譜選段一濃縮干燥一成品，純度達(dá)到98%以上。《一種分析與分離制備石杉?jí)A甲和石杉?jí)A乙的方法》(中國(guó)專利，CN1704405A)采用 原料粉碎浸泡一大孔吸附樹脂富集濃縮一反相柱層析一非烷基鍵合相硅膠介質(zhì)柱層析一
3濃縮結(jié)晶的工藝制備分離，最后可獲得純度> 98%的石杉?jí)A甲和石杉?jí)A乙?！稄闹参镏刑崛∈?jí)A甲的工藝》(中國(guó)專利，CN1861580A)采用石筋草為原料和原
料粉碎一酸液浸泡一濃縮一活性炭脫色一調(diào)節(jié)PH值一氯仿萃取一減壓回收一硅膠拌樣揮
發(fā)一乙醇氯仿溶液洗脫一減壓回收一結(jié)晶一干燥的工藝，提取石杉?jí)A甲。 上述各種方法或得到的產(chǎn)品純度較低，或收率較低，或操作比較麻煩，有的生產(chǎn)成
本較高，生產(chǎn)規(guī)模較小，不能滿足市場(chǎng)需求。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種操作簡(jiǎn)便、分離量大，綜合成本 低，生產(chǎn)周期短的快速制備高純度石杉?jí)A甲的方法。本發(fā)明是一種從千層塔中提取純化石 杉?jí)A甲的方法，其技術(shù)方案包括如下步驟 (1)提取液的制備①將粉碎好的千層塔，加3-25倍量的0. 2_2%硫酸，常溫浸泡
1-24小時(shí)；②滲漉提取至流出液中檢測(cè)不出石杉?jí)A甲，收集濾液得到提取液備用； 本發(fā)明的技術(shù)方案中，千層塔的乙醇提取物還包括了超聲波提取法，具體方法如
下 ①將粉碎好的千層塔藥材，加3-25倍量的0. 2_2%硫酸，常溫浸泡0_24小時(shí)，超 聲波超聲處理10-60min，分離出藥液；②向藥渣中加入藥渣量2_10倍的提取溶劑，用超聲 波超聲處理10-50min，分離出藥液；③合并藥液，采用過濾、離心等方法除去提取液中的雜 質(zhì)，得到千層塔提取液。 (2)大孔樹脂預(yù)分離①將提取液用氨水調(diào)pH至8-10，上大孔吸附樹脂柱；②第 一次使用0-15%的乙醇洗脫，洗脫液棄去；③第二次使用15-70%的乙醇洗脫，收集洗脫 液，回收乙醇，得提取物浸膏備用； (3)高速逆流色譜純化以石油醚_正丁醇_磷酸鹽緩沖液為溶劑系統(tǒng)，將上述得
到的浸膏應(yīng)用高速逆流色譜法進(jìn)行純化，即得到高純度的石杉?jí)A甲，純度在98%以上。 本發(fā)明的方法與現(xiàn)有制備石杉?jí)A甲的方法相比，具有如下優(yōu)勢(shì) (1)本發(fā)明以酸提取千層塔藥材中的石杉?jí)A甲，以大孔樹脂預(yù)分離，以乙醇為洗脫
劑，以高速逆流色譜進(jìn)行純化，工藝過程綠色環(huán)保，對(duì)環(huán)境無嚴(yán)重危害。 (2)本發(fā)明操作簡(jiǎn)單，工藝周期短，節(jié)省試劑，洗脫劑可回收重復(fù)利用，降低了生產(chǎn) 成本，效率高，所制備的石杉?jí)A甲純度高。


圖1是經(jīng)大孔樹脂分離后得到的提取物的高效液相色譜圖。 圖2是采用石油醚_正丁醇_磷酸鹽水為高速逆流色譜兩相溶劑系統(tǒng)分離純化石 杉?jí)A甲提取物的高速逆流色譜圖。 圖3是高速逆流色譜分離純化得到的石杉?jí)A甲的高效液相色譜圖。
具體實(shí)施例方式
提取液的制備①將粉碎好的千層塔，加3-25倍量的0. 2-2%硫酸，常溫浸泡0-24 小時(shí)；②滲漉提取至流出液中檢測(cè)不出石杉?jí)A甲，得到提取液備用；
大孔樹脂預(yù)分離①將提取液調(diào)pH至8-10，上大孔吸附樹脂柱；②第一次使用 0-15 %的乙醇洗脫，洗脫液棄去；③第二次使用15-70 %的乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙 醇，得提取物浸膏； 高速逆流色譜純化以石油醚-正丁醇-磷酸鹽緩沖液為溶劑系統(tǒng)，將上述得到的 石杉?jí)A甲粗提物應(yīng)用高速逆流色譜法進(jìn)行純化，即得到高純度的石杉?jí)A甲，純度在98%以 上。
實(shí)施例1 : 取粉碎好的千層塔藥材100g，加人1. 5L 1 %的硫酸，常溫浸泡24小時(shí)，滲漉至流 出液中檢測(cè)不出石杉?jí)A甲，用氨水調(diào)提取液的pH至8。 將上述調(diào)好pH的提取液上大孔吸附樹脂柱，以5%的乙醇洗脫至流出液無色，洗 脫液棄去。再以30%的乙醇洗脫，檢測(cè)洗脫液中無石杉?jí)A甲，收集洗脫液，減壓蒸餾回收溶 劑，得到石杉?jí)A甲的提取物。 采用石油醚_正丁醇_磷酸鹽緩沖液為高速逆流色譜兩相溶劑系統(tǒng)分離純化石杉 堿甲的提取物，固定相為石油醚-正丁醇(1.5 : 3.5，V/V)，流動(dòng)相為含磷酸二氫鈉和磷酸
氫二鈉均為1%的磷酸鹽緩沖液。
實(shí)施例2 : 取粉碎好的千層塔藥材100g，加人1. 5L 1 %的硫酸，常溫浸泡24小時(shí)，超聲波
超聲處理30min，分離出藥液。向藥渣中加入藥渣量1L的1 %的硫酸，用超聲波超聲處理
20min，分離出藥液。合并藥液，過濾除去提取液中的雜質(zhì)，調(diào)提取液的pH至8。 將上述調(diào)好pH的提取液上大孔吸附樹脂柱，以5%的乙醇洗脫至流出液無色，洗
脫液棄去。再以30%的乙醇洗脫至流出液中無石杉?jí)A甲，收集洗脫液，減壓蒸餾回收溶劑，
得到石杉?jí)A甲的提取物。 采用石油醚-正丁醇-磷酸鹽緩沖液為高速逆流色譜兩相溶劑系統(tǒng)分離純化石杉 堿甲的提取物，固定相為石油醚-正丁醇(1.5 : 3.5，V/V)，流動(dòng)相為含磷酸二氫鈉和磷酸 氫二鈉均為1%的磷酸鹽緩沖液。
權(quán)利要求
一種從千層塔中提取分離高純度石杉?jí)A甲的新方法，其工藝步驟為(1)提取液的制備將千層塔藥材粉碎，粉碎粒度控制在0.1-0.5cm，將粉碎的千層塔藥材放入容器中，加3-25倍量的0.2-2％硫酸水溶液常溫浸泡1-24小時(shí)，滲漉提取至流出液中檢測(cè)不出石杉?jí)A甲，收集提取液備用；(2)大孔樹脂預(yù)分離①將提取液用氨水調(diào)pH至8-10，上大孔吸附樹脂柱；②第一次使用5-15％的乙醇洗脫，洗脫液棄去；③第二次使用15-70％的乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇，得提取物浸膏；(3)高速逆流色譜純化以石油醚-正丁醇-磷酸鹽緩沖液為溶劑系統(tǒng)，將提取物浸膏應(yīng)用高速逆流色譜法進(jìn)行純化，即得到高純度的石杉?jí)A甲，純度在98％以上。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的從中藥千層塔中提取分離石杉?jí)A甲的方法，其特征在于，步 驟(3)高速逆流色譜純化采用如下方法實(shí)現(xiàn)，即應(yīng)用石油醚-正丁醇-磷酸鹽緩沖液作為 高速逆流色譜的兩相溶劑系統(tǒng)進(jìn)行分離純化，固定相為石油醚-正丁醇，兩者比例在1 : 5 到5 : l之間，流動(dòng)相為磷酸鹽緩沖溶液，其pH在3-9之間。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種從千層塔中提取分離高純度石杉?jí)A甲的新方法，該方法包括下述三個(gè)工藝步驟(1)提取液的制備將粉碎好的千層塔，采用酸液浸泡并滲漉或超聲提取，提取液備用；(2)大孔樹脂預(yù)分離將上述提取液調(diào)pH至8-10，過大孔吸附樹脂柱，分別用不同濃度的乙醇洗脫，乙醇洗脫液回收溶劑后得到提取物浸膏；(3)高速逆流色譜純化以石油醚-正丁醇-磷酸鹽緩沖液為溶劑系統(tǒng)，將上述得到的浸膏應(yīng)用高速逆流色譜法進(jìn)行純化，即得到高純度的石杉?jí)A甲。
文檔編號(hào)C07D221/22GK101693689SQ20091001486
公開日2010年4月14日 申請(qǐng)日期2009年5月4日 優(yōu)先權(quán)日2009年5月4日
發(fā)明者孫愛玲, 柳仁民 申請(qǐng)人:聊城大學(xué);