專(zhuān)利名稱(chēng)：一種高純度石杉?jí)A甲的生產(chǎn)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及植物有效成分提取和生產(chǎn)方法，特別是一種高純度石杉?jí)A甲的生產(chǎn)方法。
背景技術(shù)：
石杉?jí)A甲是一種很有發(fā)展前途的治療AD的藥物。對(duì)老年性癡呆癥，單純記憶障礙以及重癥肌無(wú)力癥治療有顯著療效，且藥效持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，無(wú)嚴(yán)重不良反應(yīng)，是國(guó)內(nèi)外上述病癥最有效的藥物，深受關(guān)注，國(guó)內(nèi)已批準(zhǔn)上市，并被列入醫(yī)保目錄。在國(guó)際上已被列為第二代膽堿酯酶的抑制劑之一。石杉?jí)A甲(huperzine A)為我國(guó)首創(chuàng)的可逆性強(qiáng)效乙酰膽堿酯酶(AChE)抑制劑，是近年來(lái)從石杉屬植物千層塔Huperzia serrata(Thunb.)Tre V.中分離到的一種新的生物堿。
石杉?jí)A甲的結(jié)構(gòu)式如下 化學(xué)名稱(chēng)為(5R，9R，11E)-5-氨基-11-乙叉基-5，6，9，10-四氫-7-甲基-5，9-甲撐環(huán)辛并(6)吡啶-2(1H)酮。
分子式C15H18N2O，分子量242.32
由于人工合成石杉?jí)A甲的成本太高，目前主要還是依靠從石杉屬植物千層塔中提取，然而石杉?jí)A甲在天然植物中含量極低，而且存在形式多樣，同時(shí)還伴有一些成分復(fù)雜、結(jié)構(gòu)類(lèi)似的共生生物堿，因此運(yùn)用常規(guī)方法想獲得大量的天然石杉?jí)A甲相當(dāng)困難，至今國(guó)內(nèi)外有大量研究人員在探索尋找理想的方法。目前主要有以下幾種生產(chǎn)方法使用硅膠柱層析法進(jìn)行分離提取用酸液浸泡千層塔干粉→提取液經(jīng)堿酸處理，反復(fù)用氯仿萃取→濃縮成流浸膏→硅膠柱層析→多相溶劑洗脫并收集餾分→濃縮干燥→重結(jié)晶→成品。該方法雖然能獲得少量產(chǎn)品，但很費(fèi)時(shí)(一個(gè)生產(chǎn)周期超過(guò)一個(gè)月)而且得率低(低于百萬(wàn)分之五)，純度不高(95％)，難以應(yīng)用于產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。
使用稀酸反萃取和活性炭脫色用稀酸加熱充分浸泡千層塔干燥粉→稀堿酸處理氯仿萃取→濃縮→稀堿萃取除雜→稀酸反萃取→活性炭脫色→堿調(diào)、氯仿萃取并濃縮至干→丙酮重結(jié)晶→成品。由于該方法不用過(guò)硅膠柱，避免了柱填料對(duì)石杉?jí)A甲的吸附損失，因而得率可略高。然而，由于萃取技術(shù)本身的回收率并不很高，使用次數(shù)過(guò)多必然對(duì)得率有一定影響，加上該工藝得到的粗品純度不夠高(90％)，不得不多次使用重結(jié)晶以得到純品，對(duì)得率也有一定影響，因而其最后得率并不很高，作為產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)，不夠經(jīng)濟(jì)。
使用制備高效液相色譜法用原料處理粉碎→浸漬→濃縮→反復(fù)萃取→柱層析→結(jié)晶→高效液相色譜選段→濃縮干燥→成品。由于對(duì)石杉?jí)A甲粗品進(jìn)行精制，將石杉?jí)A甲與石杉?jí)A乙完全分離，從而避免了反復(fù)重結(jié)晶，提高了得率，另外，該方法采用超微粉碎技術(shù)粉碎藥材，可使石杉?jí)A甲的溶出更徹底，對(duì)得率的提高也有一定貢獻(xiàn)，可比使用硅膠柱層析法進(jìn)行分溶出更徹底，對(duì)得率的提高也有一定貢獻(xiàn)，可比使用硅膠柱層析法進(jìn)行分離提取方法提高約60％，純度達(dá)到98％以上，基本上可用于石杉?jí)A甲的產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。然而，該方法仍然使用了硅膠柱層析，柱填料對(duì)石杉?jí)A甲的吸附損耗較大，一部分吸附到柱上的石杉?jí)A甲無(wú)法洗脫下來(lái)。另外，洗脫下來(lái)的石杉?jí)A甲也沒(méi)有全部回收，石杉?jí)A甲含量低的流份由于含大量雜質(zhì)，不得不被棄去；同時(shí)制備高效液相色譜精制步驟中的制備柱也為硅膠柱，同樣會(huì)有部分石杉?jí)A甲吸附到柱上難以洗脫下來(lái)，所以該方法的得率仍然比較低，難以滿足工業(yè)化生產(chǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是克服傳統(tǒng)分離技術(shù)的缺陷，用高速逆流色譜法(HSCCC)，提供一種高純度石杉?jí)A甲的生產(chǎn)方法。該方法具有收率高，成本低的優(yōu)點(diǎn)。本發(fā)明的技術(shù)方案包括如下步驟1.前處理采用常規(guī)方法將千層塔干粉用1.2％酒石酸液充分浸泡后用氨水調(diào)溶液的PH值至弱堿性，用氯仿反復(fù)萃取，將萃取液濃縮蒸干后，得到石杉?jí)A甲粗品.將粗品用適量固定相溶液溶解后過(guò)即可用于下一步的進(jìn)樣。
2.制備型高速逆流色譜儀分離選取溶劑體系，采用制備型高速逆流色譜系統(tǒng)分離。溶劑體系由A、B、C三個(gè)組分構(gòu)成，A組分可選自正庚烷、正己烷、正戊烷等正構(gòu)烷烴，B組分可選自甲醇、乙醇、正丁醇、丙酮等脂肪醇及脂肪酮，C組分為水。三個(gè)組分的體積比依次為1-10∶0.1-3∶1-10。使用前將溶劑體系按上述體積比置于分液漏斗中，搖勻靜置分層。待平衡一定時(shí)間后，將上相和下相分開(kāi)，上相作為固定相使用，下相作為流動(dòng)相使用。進(jìn)樣前，先用固定相存滿整個(gè)柱子，調(diào)整主機(jī)轉(zhuǎn)速，將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)；待整個(gè)體系建立動(dòng)態(tài)平衡后，由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，根據(jù)檢測(cè)器紫外圖譜接收目標(biāo)成分。
3.后處理將收集到的石杉?jí)A甲的溶液減壓濃縮至干，得到類(lèi)白色固體，然后用適量丙酮溶解，于0～10℃下結(jié)晶，將結(jié)晶干燥后得到白色粉末狀固體。
經(jīng)HPLC檢測(cè)，純度在99％以上。
高速逆流色譜是一種連續(xù)的無(wú)需任何固體支持物的高效、快速的液液分配色譜分離技術(shù)，其原理是利用螺旋柱在行星運(yùn)動(dòng)時(shí)產(chǎn)生的離心力，使互不相溶的兩相不斷混合，同時(shí)保留其中的一相(固體相)，利用恒流泵連續(xù)輸入另一相(流動(dòng)相)，隨流動(dòng)相進(jìn)入螺旋柱的溶質(zhì)在兩相之間反復(fù)分配，按分配系數(shù)的次序，被依次洗脫。在流動(dòng)相中分配比例大的先被洗脫，反之，在固定相中分配比例大的后被洗脫。該技術(shù)可以在短時(shí)間內(nèi)實(shí)現(xiàn)待分離物質(zhì)的高效分離和制備。與高效液相色譜不同的是，它不使用固相載體作固定相，克服了固相載體帶來(lái)的樣品吸附、損失、污染和峰形拖尾等缺點(diǎn)，因而具有很高的回收率(理論上可達(dá)100％)。另外，該技術(shù)還具有分離量大、分離效率高、分離環(huán)境緩和，節(jié)約溶劑等優(yōu)點(diǎn)。
本發(fā)明采用高速逆流色譜對(duì)石杉?jí)A甲粗品進(jìn)行精制，有很高的回收率，石杉?jí)A甲的收率比使用制備高效液相色譜法高出70％左右，而且產(chǎn)品純度達(dá)到99％以上，由于大量節(jié)省千層塔原料，這對(duì)于保護(hù)我國(guó)日益稀少的千層塔資源無(wú)疑具有重大的意義，而且單臺(tái)儀器一次分離粗品可得克量級(jí)以上的石杉?jí)A甲純品。一個(gè)生產(chǎn)周期只需1.5個(gè)工作日，完全滿足工業(yè)化生產(chǎn)的需要。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1將千層塔干粉用1.2％酒石酸充分浸泡后用氨水調(diào)溶液的PH值至弱堿性，用氯仿反復(fù)萃取，將萃取液濃縮蒸干后，得到石杉?jí)A甲粗品；將粗品用適量固定相溶液溶解后即可用于進(jìn)樣，選取適當(dāng)?shù)娜軇w系，采用柱容積為1000ml的高速逆流色譜系統(tǒng)分離。溶劑體系由A、B、C三個(gè)組分構(gòu)成，A組分可選自正庚烷、正己烷、正戊烷等正構(gòu)烷烴，B組分可選自甲醇、乙醇、正丁醇、丙酮等脂肪醇及脂肪酮，C組分為水。三個(gè)組分的體積比依次為1-4∶0.2-2∶1-3。使用前將溶劑體系按上述體積比置于分液漏斗中，搖勻靜置分層。待平衡一定時(shí)間后，將上相和下相分開(kāi)，上相作為固定相使用，下相作為流動(dòng)相使用。進(jìn)樣前，先用固定相存滿整個(gè)柱子，調(diào)整主機(jī)轉(zhuǎn)速，將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)；待整個(gè)體系建立動(dòng)態(tài)平衡后，由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，根據(jù)檢測(cè)器紫外圖譜接收目標(biāo)成分；將收集到的石杉?jí)A甲的溶液置于圓底燒瓶中減壓濃縮至干，得到類(lèi)白色固體；然后用丙酮溶解，于0～10℃下結(jié)晶，將結(jié)晶干燥后得到的白色粉末狀固體即為成品。
實(shí)施例2將千層塔干粉用1.2％酒石酸充分浸泡后用氨水調(diào)溶液的PH值至弱堿性，用氯仿反復(fù)萃取，將萃取液濃縮干后得到石杉?jí)A甲粗品；
將粗品用適量固定相溶液溶解后即可用于進(jìn)樣；選取溶劑體系，采用柱容積為5000ml的高速逆流色譜系統(tǒng)分離。溶劑體系由A、B、C三個(gè)組分構(gòu)成，A組分可選自正庚烷、正己烷、正戊烷等正構(gòu)烷烴，B組分可選自甲醇、乙醇、正丁醇、丙酮等脂肪醇及脂肪酮，C組分為水。三個(gè)組分的體積比依次為1.2-3∶0.3-2∶1.2-3。使用前將溶劑體系按上述體積比置于分液漏斗中，搖勻靜置分層。待平衡一定時(shí)間后，將上相和下相分開(kāi)，上相作為固定相使用，下相作為流動(dòng)相使用。進(jìn)樣前，先用固定相存滿整個(gè)柱子，調(diào)整主機(jī)轉(zhuǎn)速，將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)；待整個(gè)體系建立動(dòng)態(tài)平衡后，由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，根據(jù)檢測(cè)器紫外圖譜接收目標(biāo)成分；將收集到的石杉?jí)A甲的溶液置于圓底燒瓶中減壓濃縮至干，得到類(lèi)白色固體；然后將上述類(lèi)白色固體用適量丙酮溶解，于0～10℃下結(jié)晶，將結(jié)晶干燥后得到的白色粉末狀固體即為成品。
實(shí)施例3將千層塔干粉用1.2％酒石酸充分浸泡后用氨水調(diào)溶液的PH值至弱堿性，用氯仿反復(fù)萃取，將萃取液濃縮蒸干后，得到石杉?jí)A甲粗品；將粗品用適量固定相溶液溶解后即可用于進(jìn)樣；采用柱容積為5000ml的高速逆流色譜系統(tǒng)分離。溶劑體系由正己烷、甲醇、水三個(gè)組分構(gòu)成，體積比依次為2∶1.5∶4。使用前將溶劑體系按上述體積比置于分液漏斗中，搖勻靜置分層。待平衡一定時(shí)間后，將上相和下相分開(kāi)，上相作為固定相使用，下相作為流動(dòng)相使用。進(jìn)樣前，先用固定相存滿整個(gè)柱子，調(diào)整主機(jī)轉(zhuǎn)速，將流動(dòng)相泵入柱內(nèi)；待整個(gè)體系建立動(dòng)態(tài)平衡后，由進(jìn)樣閥進(jìn)樣，根據(jù)檢測(cè)器紫外圖譜接收目標(biāo)成分；將收集到的石杉?jí)A甲的溶液置于圓底燒瓶中減壓濃縮至干，得到類(lèi)白色固體，然后用適量丙酮溶解，于0～10℃下結(jié)晶，將結(jié)晶干燥后得到的白色粉末狀固體即為成品。
權(quán)利要求
1.一種高純度石杉?jí)A甲的生產(chǎn)方法，包括如下步驟(1)前處理采用常規(guī)方法將千層塔干粉用1.2％酒石酸液充分浸泡后用氨水調(diào)溶液的PH值至弱堿性，用氯仿反復(fù)萃取，將萃取液濃縮蒸干后，得到石杉?jí)A甲粗品；將粗品用適量固定相溶液溶解后即可用于進(jìn)樣；(2)制備型高速逆流色譜儀分離選取溶劑體系，采用制備型高速逆流色譜系統(tǒng)分離；(3)后處理將收集到的石杉?jí)A甲的溶液減壓濃縮蒸干，得到類(lèi)白色固體，，然后用適量丙酮溶解，于0～10℃下結(jié)晶，將結(jié)晶干燥后得到的白色粉末狀固體即為成品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高純度石杉?jí)A甲的生產(chǎn)方法，其特征在于所述的溶劑體系由A、B、C三個(gè)組分構(gòu)成，A組分是正構(gòu)烷烴，B組分是脂肪醇或脂肪酮，C組分是水。三個(gè)組分的體積比依次為1-10∶0.1-3∶1-10。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高純度石杉?jí)A甲的生產(chǎn)方法，其特征在于所述的溶劑體系由A、B、C三個(gè)組分構(gòu)成，A組分是正構(gòu)烷烴，B組分是脂肪醇或脂肪酮，C組分是水。三個(gè)組分的體積比依次為1-4∶0.2-2∶1-3。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高純度石杉?jí)A甲的生產(chǎn)方法，其特征在于所述的溶劑體系由A、B、C三個(gè)組分構(gòu)成，A組分是正構(gòu)烷烴，B組分是脂肪醇或脂肪酮，C組分是水。三個(gè)組分的體積比依次為1.2-3∶0.3-2∶1.2-3。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高純度石杉?jí)A甲的生產(chǎn)方法，其特征在于所述的溶劑體系由A、B、C三個(gè)組分構(gòu)成，A組分是正構(gòu)烷烴，B組分是脂肪醇或脂肪酮，C組分是水。三個(gè)組分的體積比依次為2∶1.5∶4。
6.根據(jù)權(quán)利要求2或3或4或5所述的一種高純度石杉?jí)A甲的生產(chǎn)方法，其特征在于所述的正構(gòu)烷烴是正庚烷、正己烷、或正戊烷，所述的脂肪醇是甲醇、乙醇或正丁醇，所述的脂肪酮是丙酮。
全文摘要
一種高純度石杉?jí)A甲的生產(chǎn)方法，該方法包括如下步驟用常規(guī)方法制備石杉?jí)A甲粗品，用制備型高速逆流色譜系統(tǒng)分離，濃縮、結(jié)晶后得到成品。溶劑體系由A、B、C三個(gè)組分構(gòu)成，A組分是正構(gòu)烷烴等，B組分是脂肪醇及脂肪酮等，C組分是水。三個(gè)組分的體積比依次為1－10∶0.1－ 3∶1－10。本發(fā)明方法具有收率高，質(zhì)量好，節(jié)省原料，綜合成本低的特點(diǎn)，適用于石杉?jí)A甲的產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號(hào)C07D221/22GK1781907SQ20051002871
公開(kāi)日2006年6月7日 申請(qǐng)日期2005年8月12日 優(yōu)先權(quán)日2005年8月12日
發(fā)明者劉麗, 鄧秋云 申請(qǐng)人:上海同田生化技術(shù)有限公司