專(zhuān)利名稱(chēng)：千層塔石杉?jí)A甲的提取方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種生物堿的提取方法，特別是一種千層塔石杉?jí)A甲的提取方法。
背景技術(shù)：
千層塔為石杉科 石杉屬蕨類(lèi)植物，又名蛇足石杉、救命王。主布東北、長(zhǎng)江流域和閩、粵、桂、滇、黔等省區(qū)。民間常將全草入藥，有毒，用于退熱、止血、消腫散毒、跌打損傷等。千層塔中含有的生物堿石杉?jí)A甲(HupA)是具有低毒、高效、可逆和高選擇性等優(yōu)點(diǎn)的乙酰膽堿酯酶抑制劑，對(duì)于治療重癥肌無(wú)力、中老年癡呆及提高記憶力具有良好的療效，并對(duì)抑制有機(jī)磷酸中毒有一定的作用。由于其獨(dú)特的藥用價(jià)值，千層塔及其提取物正日益受到國(guó)內(nèi)外市場(chǎng)的廣泛重視。目前，千層塔石杉?jí)A甲的提取方法很多，但均存在不同程度的缺點(diǎn)和不足。一般都市將千層塔粉碎后，加稀酸或有機(jī)溶劑浸泡萃取。如專(zhuān)利號(hào)200410052688. 4 “一種高純度石杉?jí)A甲的制備方法”，以及專(zhuān)利號(hào)200710018515. 4“一種從千層塔中提取分離石杉?jí)A甲的方法”，只是簡(jiǎn)單的采用有機(jī)溶劑浸泡萃取，雖然純度很高，但收率很低，且生產(chǎn)量小，無(wú)法推廣；專(zhuān)利申請(qǐng)?zhí)?00910014866. 7 “一種從千層塔中提取分離高純度石杉?jí)A甲的新方法”，也只是簡(jiǎn)單的采用稀硫酸浸泡萃取，這些方法只能少量的使藏在細(xì)胞壁中的生物堿析出，回收率同樣很低，提取效率不高。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種使原材料藥物中的石杉?jí)A甲充分析出，同時(shí)又能得到高純度石杉?jí)A甲的方法，為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是采用稀酸浸泡，結(jié)合超聲波輔助提取，稀酸稀堿萃取，活性炭除雜，低溫重結(jié)晶等工序提取石杉?jí)A甲，具體方法如下。⑴粉碎凈選千層塔藥材，粉碎，粒度為10-20目，過(guò)篩。⑵提取連續(xù)兩次提取，第一次提取是將千層塔粉粒用O. 8%的鹽酸溶液按照固液比為I :20-25的標(biāo)準(zhǔn)浸泡60min，再用600W功率的超聲波提取15min，然后再浸泡60min，接著將提取液離心，取上清液；第二次提取是將濾渣用O. 8%的鹽酸溶液按照固液比為I :18-22的標(biāo)準(zhǔn)浸泡45min，再用600W功率的超聲波提取lOmin，然后再浸泡45min，接著將提取液離心，取上清液，最后將兩次上清液合并。⑶濃縮用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將上清液濃縮至原材料重量的10倍體積。⑷氯仿萃取加10%的氨水調(diào)ph值為9-10，加入1/6體積的氯仿與濃縮液混合，萃取4次，合并氯仿相，再萃取一次。(5)濃縮用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，即得石杉總堿氯仿濃縮液。(6)稀堿萃取加入相同體積的l%NaH0溶液，混合，萃取6次，取下層。(7)稀酸反萃取加入相同體積的1%HC1溶液，混合，反萃取6次，至萃取顏色很淡為止，取酸水層。
(8)活性炭除雜加入15倍O. 8%的鹽酸溶液，調(diào)整pH值為1_2，加入相當(dāng)于濃縮液3%體積的活性炭,攪拌脫色4h，濾去活性炭，留取濾液。
(9)結(jié)晶將濾液用濃氨水調(diào)至pH值為9-10。用等體積氯仿萃取I次,然后將氯仿層蒸干，得淡紅色固體；然后加入適量丙酮，加熱回流使之完全溶解，靜置冷卻，然后放入5°C冷藏室靜置24h，得微紅色固體。(1Φ重結(jié)晶再用少量氯仿溶解蒸干，用丙酮溶解低溫重結(jié)晶，得類(lèi)白色固體；然后重復(fù)一次，得白色固體。(11)干燥將所得白色固體于烘箱中干燥5h，得純度大于99%的純品石杉?jí)A甲。本發(fā)明的有益效果是稀酸浸泡，可將生物堿轉(zhuǎn)變?yōu)樯飰A鹽溶出，在提取過(guò)程中用超聲波輔助提取，可以使千層塔細(xì)胞壁破裂，從而更好地讓生物堿溶解在浸泡液中，提高回收率，經(jīng)檢驗(yàn)，采用這種方法提取石杉?jí)A甲，其回收率可達(dá)98. 3% ;采用稀酸和稀堿進(jìn)行萃取和反萃取，可以很好地去除雜質(zhì)，再用活性炭除雜，可以更好地除去雜質(zhì)，最后采用低溫重結(jié)晶反復(fù)除去殘留雜質(zhì)，可得到高純度石杉?jí)A甲。


圖I為本發(fā)明千層塔石杉?jí)A甲的提取方法流程示意圖。圖2為本發(fā)明實(shí)施例I石杉?jí)A甲的高效液相色譜圖。圖3為本發(fā)明實(shí)施例2石杉?jí)A甲的高效液相色譜圖。圖4為本發(fā)明實(shí)施例3石杉?jí)A甲的高效液相色譜圖。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明。實(shí)施例I。凈選千層塔藥材100kg，粉碎，粒度為10-20目，過(guò)篩。加入2000L0. 8%的鹽酸溶液，浸泡60min，然后用600W功率的超聲波提取15min，然后再浸泡60min。然后用離心機(jī)離心，取上清液。再將濾渣加入1800L0. 8%的鹽酸溶液，浸泡45min，然后用600W功率的超聲波提取lOmin，然后再浸泡45min。然后用離心機(jī)離心,取上清液。將兩次上清液合并,用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將濾液濃縮至1000L。然后加10%的氨水調(diào)ph值為9-10，加入17L氯仿與濃縮液混合，萃取4次，合并氯仿相，再萃取一次。再用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至100L，即得石杉總堿氯仿濃縮液。然后加入l%NaH0溶液100L，混合，萃取6次，取下層。然后加入1%HC1溶液100L，混合，反萃取6次，至萃取顏色很淡為止，取酸水層。接著加入1500L0. 8%的鹽酸溶液，調(diào)整PH值為1-2，加入3kg活性炭，攪拌脫色4h，濾去活性炭，留取濾液。然后將濾液用濃氨水調(diào)至PH值為9-10。用等體積氯仿萃取I次，然后將氯仿層蒸干，得淡紅色固體。再加入適量丙酮，加熱回流使之完全溶解，靜置冷卻，然后放入5°C冷藏室靜置24h，得微紅色固體。再用少量氯仿溶解蒸干，用丙酮溶解低溫重結(jié)晶，得類(lèi)白色固體。再用少量氯仿溶解蒸干，用丙酮溶解低溫重結(jié)晶，得白色固體。最后將所得白色固體于烘箱中干燥5h，得到白色固體16.Olg0經(jīng)檢測(cè)，AgilentlOO高效液相色譜儀，色譜柱為Hypersil0DS(150mmX4. 6mm，5 μ )，流動(dòng)相為乙腈磷酸鹽緩沖液=14:86 ;檢測(cè)波長(zhǎng)為310nm ;流速為lml/min ;進(jìn)樣量20 μ L。測(cè)得白色固體為石杉?jí)A甲，純度為99. 03%HPLC，見(jiàn)圖2。實(shí)施例2。凈選千層塔藥材100kg，粉碎，粒度為10-20目，過(guò)篩。加入2500L濃度為O. 8%的鹽酸溶液，浸泡60min，然后用600W功率的超聲波提取15min，然后再浸泡60min。然后用離心機(jī)離心，取上清液。再將濾渣加入2200L0. 8%的鹽酸溶液，浸泡45min，然后用600W功率的超聲波提取lOmin，然后再浸泡45min。然后用離心機(jī)離心,取上清液。將兩次上清液合并，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將濾液濃縮至1000L。然后加10%的氨水調(diào)ph值為10，加入17L氯仿與濃縮液混合，萃取4次，合并氯仿相，再萃取一次。再用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至100L，即得石杉總堿氯仿濃縮液。然后加入l%NaH0溶液IOOL，混合，萃取6次，取下層。然后加入1%HC1溶液100L，混合，反萃取6次，至萃取顏色很淡為止，取酸水層。接著加入1500L0. 8%的鹽酸溶液，調(diào)整PH值為2，加入3kg活性炭，攪拌脫色4h，濾去活性炭，留取濾液。然后將濾液用濃氨水調(diào)至PH值為10。用等體積氯仿萃取I次，然后將氯仿層蒸干，得淡紅色固體。再加入適量丙酮，加熱回流使之完全溶解，靜置冷卻，然后放入5°C冷藏室靜置24h，得微紅色固體。再用少量氯仿溶解蒸干，用丙酮溶解低溫重結(jié)晶，得類(lèi)白色固體。再用少量氯仿溶解蒸干，用丙酮溶解低溫重結(jié)晶，得白色固體。最后將所得白色固體于烘箱中干燥5h，得到白色固體 16. 09g。經(jīng)檢測(cè)，AgilentlOO高效液相色譜儀，色譜柱為Hypersil0DS(150mmX4. 6mm，5 μ )，流動(dòng)相為乙腈磷酸鹽緩沖液=14:86 ;檢測(cè)波長(zhǎng)為310nm ;流速為lml/min ;進(jìn)樣量20 μ L。測(cè)得白色固體為石杉?jí)A甲，純度為99. 04%HPLC，見(jiàn)圖3。實(shí)施例3。凈選千層塔藥材100kg，粉碎，粒度為10-20目，過(guò)篩。加入2200L濃度為O. 8%的鹽酸溶液，浸泡60min，然后用600W功率的超聲波提取15min，然后再浸泡60min。然后用離心機(jī)離心，取上清液。再將濾渣加入2000L0. 8%的鹽酸溶液，浸泡45min，然后用600W功率的超聲波提取lOmin，然后再浸泡45min。然后用離心機(jī)離心,取上清液。將兩次上清液合并，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將濾液濃縮至1000L。然后加10%的氨水調(diào)ph值為10，加入17L氯仿與濃縮液混合，萃取4次，合并氯仿相，再萃取一次。再用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至100L，即得石杉總堿氯仿濃縮液。然后加入l%NaHO溶液IOOL，混合，萃取6次，取下層。然后加入1%HC1溶液100L，混合，反萃取6次，至萃取顏色很淡為止，取酸水層。接著加入1500L0. 8%的鹽酸溶液，調(diào)整PH值為2，加入3kg活性炭，攪拌脫色4h，濾去活性炭，留取濾液。然后將濾液用濃氨水調(diào)至PH值為10。用等體積氯仿萃取I次，然后將氯仿層蒸干，得淡紅色固體。再加入適量丙酮，加熱回流使之完全溶解，靜置冷卻，然后放入5°C冷藏室靜置24h，得微紅色固體。再用少量氯仿溶解蒸干，用丙酮溶解低溫重結(jié)晶，得類(lèi)白色固體。再用少量氯仿溶解蒸干，用丙酮溶解低溫重結(jié)晶，得白色固體。最后將所得白色固體于烘箱中干燥5h，得到白色固體 16. 20g。經(jīng)檢測(cè)，AgilentlOO高效液相色譜儀，色譜柱為Hypersil0DS(150mmX4. 6mm，5 μ )，流動(dòng)相為乙腈磷酸鹽緩沖液=14:86 ;檢測(cè)波長(zhǎng)為310nm ;流速為lml/min ;進(jìn)樣量20 μ L。測(cè)得白色固體為石杉?jí)A甲，純度為99. 11%HPLC，見(jiàn)圖4。
權(quán)利要求
1.千層塔石杉?jí)A甲的提取方法，包括稀酸浸泡、超聲波和微波輔助提取、稀酸稀堿萃取、活性炭除雜、低溫重結(jié)晶等工序，其特征在于具體步驟如下 ⑴粉碎凈選千層塔藥材，粉碎，粒度為10-20目，過(guò)篩； ⑵提取連續(xù)兩次提取，第一次提取是將千層塔粉粒用O. 8%的鹽酸溶液按照固液比為I 20-25的標(biāo)準(zhǔn)浸泡60min，再用600W功率的超聲波提取15min，然后再浸泡60min，接著將提取液離心，取上清液；第二次提取是將濾渣用O. 8%的鹽酸溶液按照固液比為I :18-22的標(biāo)準(zhǔn)浸泡45min，再用600W功率的超聲波提取lOmin，然后再浸泡45min，接著將提取液離心，取上清液，最后將兩次上清液合并； ⑶濃縮用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將上清液濃縮至原材料重量的10倍體積； ⑷氯仿萃取加10%的氨水調(diào)ph值為9-10，加入1/6體積的氯仿與濃縮液混合，萃取4次，合并氯仿相，再萃取一次； (5)濃縮用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，即得石杉總堿氯仿濃縮液； (6)稀堿萃取加入相同體積的l%NaH0溶液，混合，萃取6次，取下層； 00稀酸反萃取加入相同體積的1%HC1溶液,混合,反萃取6次,至萃取顏色很淡為止，取酸水層； ⑶活性炭除雜加入15倍O. 8%的鹽酸溶液，調(diào)整pH值為1-2，加入相當(dāng)于濃縮液3%體積的活性炭，攪拌脫色4h，濾去活性炭，留取濾液； ⑶結(jié)晶將濾液用濃氨水調(diào)至PH值為9-10，用等體積氯仿萃取I次，然后將氯仿層蒸干，得淡紅色固體；然后加入適量丙酮，加熱回流使之完全溶解，靜置冷卻，然后放入5°C冷藏室靜置24h，得微紅色固體； (10)重結(jié)晶再用少量氯仿溶解蒸干，用丙酮溶解低溫重結(jié)晶，得類(lèi)白色固體；然后重復(fù)一次，得白色固體； (ID干燥將所得白色固體于烘箱中干燥5h，得純度大于99%的純品石杉?jí)A甲。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的提取方法，其特征在于步驟⑵所述的綜合提取方法為首先將千層塔粉粒用O. 8%的鹽酸溶液按照固液比為I :22的標(biāo)準(zhǔn)浸泡60min，再用600W功率的超聲波提取15min，然后再浸泡60min，接著將提取液離心，取上清液；然后再將濾渣用O. 8%的鹽酸溶液按照固液比為I :20的標(biāo)準(zhǔn)浸泡45min，再用600W功率的超聲波提取lOmin，然后再浸泡60min，接著將提取液離心，取上清液，最后將兩次上清液合并。
全文摘要
千層塔石杉?jí)A甲的提取方法，包括稀酸浸泡、超聲波輔助反復(fù)提取、稀酸稀堿反復(fù)萃取、活性炭除雜、多次低溫重結(jié)晶等工序，其有益效果是稀酸浸泡可將生物堿轉(zhuǎn)變?yōu)樯飰A鹽溶出，在提取過(guò)程中用超聲波輔助提取，可以使千層塔細(xì)胞壁破裂，從而更好地讓生物堿溶解在浸泡液中，提高回收率，經(jīng)檢驗(yàn)，采用這種方法提取石杉?jí)A甲，其回收率可達(dá)98.3%；采用稀酸和稀堿進(jìn)行萃取和反萃取，可以很好地去除雜質(zhì)，再用活性炭除雜，可以更好地除去雜質(zhì)，最后采用低溫重結(jié)晶反復(fù)除去殘留雜質(zhì)，可得到高純度石杉?jí)A甲，經(jīng)實(shí)施例檢測(cè)，所提取的石杉?jí)A甲純度達(dá)99.11%HPLC。
文檔編號(hào)C07D221/22GK102617469SQ20121010058
公開(kāi)日2012年8月1日 申請(qǐng)日期2012年4月9日 優(yōu)先權(quán)日2012年4月9日
發(fā)明者何全慧, 向廷軍, 楊再江, 祝利, 趙勇彪 申請(qǐng)人:重慶市秀山紅星中藥材開(kāi)發(fā)有限公司