專利名稱：一種分析與分離制備石杉堿甲和石杉堿乙的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及分析化學(xué)領(lǐng)域以及一種中藥提取方法，具體涉及分析與分離制備石杉堿甲和石杉堿乙的方法。
背景技術(shù)：
石杉堿甲是從中藥石杉屬植物千層塔中分離出的新生物堿，它是一種強效、可逆和高選擇性乙酰膽堿酯酶(AChE)抑制劑，屬第二代AChE抑制劑，也是目前國內(nèi)開發(fā)最為成功的治療阿爾茨海默病(Alzheimer’s Disease，AD，又被稱為老年性癡呆癥)的藥物，在國內(nèi)已作為治療AD的藥物應(yīng)用于臨床，在美國被FDA批準(zhǔn)作為食品添加劑或營養(yǎng)保健品用于改善記憶力。另外，千層塔中尚含有其它具較強AChE抑制活性的生物堿，其中以石杉堿乙最具代表性，且其含量僅次于石杉堿甲。由于石杉堿乙和石杉堿甲結(jié)構(gòu)相似，因此成為石杉堿甲生產(chǎn)中最難分離的物質(zhì)，石杉堿乙的AChE抑制活性雖為石杉堿甲的十分之一，但由于它具有更長的活性持續(xù)時間，因此能表現(xiàn)出更高的治療指數(shù)。
已報道的相關(guān)分析方法主要集中于用高效液相色譜法測定石杉堿甲，色譜柱的填料均采用十八烷基鍵合相硅膠，由于石杉堿甲分子中的基團(tuán)與固定相中未全封閉的硅羥基的吸附，因此導(dǎo)致峰拖尾嚴(yán)重、靈敏度低、重復(fù)性差等問題。利用在流動相中添加有機(jī)胺、離子對試劑及采用梯度洗脫、提高柱溫等方法能在一定程度上解決上述問題，但增加了分析的復(fù)雜性，同時也使分析方法受到了儀器條件的限制。另外目前的高效液相色譜分析方法很少涉及石杉堿乙的定量分析。
目前對分離制備石杉堿甲的方法主要是傳統(tǒng)的溶劑萃取結(jié)晶法，或者同時結(jié)合以硅膠為填料的正相柱層析及正相高效液相色譜法，這些方法需要消耗大量如氯仿、乙醚、丙酮等有毒有害溶劑，而且繁瑣費時、收率低，均在萬分之一以下。同時，生產(chǎn)中石杉堿乙被作為雜質(zhì)除去，使石杉堿乙得不到有效回收利用，造成資源的浪費。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種簡便而準(zhǔn)確的分析石杉堿甲和石杉堿乙含量的方法，并克服現(xiàn)有分離制備石杉堿甲工藝中存在的大量消耗有毒有害有機(jī)溶劑，工藝周期長，收率低，有效成分如石杉堿乙被拋棄等缺陷，從而提供一種利用層析集成技術(shù)，使用低毒的有機(jī)溶劑，高效分離提純石杉堿甲和石杉堿乙的方法，以獲得高純度和高回收率的石杉堿甲和石杉堿乙純品。
本發(fā)明的目的是通過以下的技術(shù)方案實現(xiàn)的本發(fā)明提供的制備石杉堿甲和石杉堿乙的方法，其特征在于包括采用非烷基鍵合相硅膠介質(zhì)作為色譜柱填料進(jìn)行柱層析分離石杉堿甲和石杉堿乙的步驟。
所述的非烷基鍵合相硅膠介質(zhì)指以硅膠為基質(zhì)的表面鍵合非烷基基團(tuán)的介質(zhì)；所述的非烷基基團(tuán)包括苯基、五氟苯基、腈基和酚基。
本發(fā)明提供的制備石杉堿甲和石杉堿乙的方法，其特征在于將非烷基鍵合相硅膠介質(zhì)裝柱，千層塔原料經(jīng)浸泡提取、富集濃縮、提純后進(jìn)料，用一定濃度的有機(jī)溶劑水溶液洗脫，分別收集石杉堿甲和石杉堿乙所在洗脫峰的洗脫液，兩種洗脫液分別結(jié)晶、干燥后得到石杉堿甲和石杉堿乙成品。所述有機(jī)溶劑的水溶液為濃度20～100％(v/v)的甲醇、乙醇或丙酮的水溶液。
本發(fā)明提供的從原料中浸泡提取石杉堿甲和石杉堿乙的方法為將原料千層塔粉碎后，用0.1％～2％(v/v)硫酸或硝酸的水溶液浸泡提取，得到千層塔浸出液。
本發(fā)明提供的石杉堿甲和石杉堿乙的富集濃縮的方法為將千層塔浸出液用氨水、氫氧化鈉或氫氧化鉀調(diào)pH值為8～14后通過大孔吸附樹脂柱進(jìn)行吸附洗脫，洗脫液減壓濃縮得到初分離產(chǎn)物。
本發(fā)明提供的石杉堿甲和石杉堿乙的提純方法為采用反相層析的方法，將以硅膠為基質(zhì)的反相介質(zhì)或以聚合物為基質(zhì)的反相介質(zhì)裝柱，將初分離產(chǎn)物進(jìn)料后，用5％～80％(v/v)甲醇、乙醇或丙酮的水溶液洗脫，收集石杉堿甲和石杉堿乙所在洗脫峰的洗脫液。其中以硅膠為基質(zhì)的反相介質(zhì)為市售的C8和C18反相介質(zhì)，以聚合物為基質(zhì)的反相介質(zhì)包括以聚苯乙烯等為基質(zhì)的反相介質(zhì)。
本發(fā)明提供的分析石杉堿甲和石杉堿乙的方法，其特征在于包括采用非烷基鍵合相硅膠介質(zhì)為色譜柱填料進(jìn)行色譜分析的步驟。
本發(fā)明提供的分析石杉堿甲和石杉堿乙的方法，其特征在于所述的非烷基鍵合相硅膠指以硅膠為基質(zhì)的表面鍵合非烷基基團(tuán)如苯基、五氟苯基、腈基和酚基的介質(zhì)。
本發(fā)明提供的分析石杉堿甲和石杉堿乙的方法，其特征是樣品配制成與分離體系相匹配的分析樣品溶液，然后用高效液相色譜法(HPLC法)測定石杉堿甲和石杉堿乙的濃度，換算成樣品中石杉堿甲和石杉堿乙的含量。
本發(fā)明提供的分析石杉堿甲和石杉堿乙的方法，色譜分析條件為柱溫20～35℃，流動相為甲醇和水的體積比＝50∶50～90∶10，流速為0.5～2.0ml/min。待測試樣品得以分離后，采用液相色譜紫外檢測器測定石杉堿甲和石杉堿乙的峰面積，用標(biāo)準(zhǔn)曲線校正方程計算石杉堿甲和石杉堿乙的濃度，換算成樣品中石杉堿甲和石杉堿乙的含量。
本發(fā)明與已有技術(shù)相比具有以下的優(yōu)點1.CN1430059A公開了希普林及石杉堿甲血藥濃度分析方法，在此方法中石杉堿乙作為內(nèi)標(biāo)物加入到樣品中，用LC/MS/MS系統(tǒng)進(jìn)行分析，從專利附圖3中可以看出石杉堿甲和石杉堿乙分離度低，峰擴(kuò)展嚴(yán)重，且應(yīng)用昂貴的LC/MS/MS系統(tǒng)，不易在大多數(shù)分析實驗室中實施；本發(fā)明分析石杉堿甲和石杉堿乙含量的方法利用了非烷基鍵合相硅膠為色譜柱填料的高效液相色譜法，具有簡單快速、呈現(xiàn)性好、分辨率高、靈敏度高等特點，能排除其他物質(zhì)對石杉堿甲及石杉堿乙的干擾，線性范圍廣，石杉堿甲和石杉堿乙的最小檢出量分別為0.5和0.6ng。本發(fā)明對樣品中石杉堿甲和石杉堿乙的回收率95％以上，RSD小于1.00％。
2.現(xiàn)有石杉堿甲的分離制備工藝如US5177082、CN1306960A、CN1448390A均采用傳統(tǒng)的生物堿提取方法從浸出液中富集濃縮石杉堿甲，有機(jī)溶劑耗量大，過程繁瑣費時，同時液液萃取方法由于易產(chǎn)生乳化現(xiàn)象，產(chǎn)物的損失非常嚴(yán)重，從而導(dǎo)致收率下降；本發(fā)明利用大孔吸附樹脂吸附浸出液中的石杉堿甲和石杉堿乙，而大部分雜質(zhì)由于不被吸附而在吸附和水洗過程中被除去，從而一步達(dá)到富集濃縮石杉堿甲和石杉堿乙的目的，效果與溶劑萃取相似，但耗時短，所用溶劑毒性小、用量少且產(chǎn)物收率高。
3.CN1448390A將萃取液干燥后得到浸膏，拌入硅膠并濕法裝柱，用氯仿-甲醇進(jìn)行梯度洗脫，過程的檢測用薄層層析法，此工藝與CN1035503A、US5177082層析工藝相似，均為正相層析法，具有檢測方法自動化程度低、洗脫液毒性大等缺點；本工藝采用中低壓反相層析，可以用紫外在線檢測，經(jīng)大孔吸附樹脂的初分離產(chǎn)物經(jīng)此一步層析可將絕大部分雜質(zhì)除去，得到石杉堿甲和石杉堿乙的混合物，洗脫液用甲醇、乙醇等毒性較小的溶劑的水溶液。
4.由于石杉堿乙和石杉堿甲的結(jié)構(gòu)相似，采用常規(guī)的方法較難將兩者分離，本發(fā)明采用制備色譜法，石杉堿甲和石杉堿乙的混合物在非烷基鍵合相硅膠介質(zhì)上得到完全的分離并回收制得各自的產(chǎn)品，設(shè)備投資低，處理量大。
5.本發(fā)明所用層析介質(zhì)如大孔吸附樹脂、反相層析介質(zhì)及非烷基鍵合相硅膠介質(zhì)均可再生后重復(fù)使用；所用有機(jī)溶劑均可蒸發(fā)回收，從而降低生產(chǎn)成本。
6.現(xiàn)有生產(chǎn)工藝未提到石杉堿甲和石杉堿乙回收率，而以得率來表示，而原料千層塔由于來源不同，其石杉堿甲和石杉堿乙的含量差別較大，因此用得率無法體現(xiàn)工藝的適用性；本發(fā)明由于采用了一種簡單快速的高效液相色譜方法分析原料、中間產(chǎn)物和產(chǎn)品中的石杉堿甲和石杉堿乙，從而可對中間產(chǎn)物和終產(chǎn)物的純度和回收率進(jìn)行檢測，同時本發(fā)明利用層析集成技術(shù)，可從含量相差非常大的不同的千層塔原料中提取石杉堿甲和石杉堿乙，工藝具有較高的適用性，石杉堿甲和石杉堿乙的回收率分別可達(dá)85％和80％以上，純度均為98％以上。
7.本發(fā)明工藝簡單，效率高，生產(chǎn)周期短(小于7天)，成本低且環(huán)境污染小。


圖1為采用本發(fā)明的方法得到的千層塔浸出液，利用本發(fā)明提供的分析方法檢測的HPLC圖譜；圖2為采用本發(fā)明的方法得到的初分離產(chǎn)物，利用本發(fā)明提供的分析方法檢測的HPLC圖譜；圖3為采用本發(fā)明的方法，將初分離產(chǎn)物純化后得到的石杉堿甲和石杉堿乙混合物，利用本發(fā)明提供的分析方法檢測的HPLC圖譜；圖4為采用非烷基鍵合相硅膠介質(zhì)作為色譜柱填料進(jìn)行柱層析得到的石杉堿甲溶液，利用本發(fā)明提供的分析方法檢測的HPLC圖譜；圖5為采用非烷基鍵合相硅膠介質(zhì)作為色譜柱填料進(jìn)行柱層析得到的石杉堿乙溶液，利用本發(fā)明提供的分析方法檢測的HPLC圖譜。
具體實施例方式
本發(fā)明結(jié)合以下實施例作進(jìn)一步描述，但并不限制本發(fā)明。
本發(fā)明分離制備石杉堿甲和石杉堿乙的工藝流程為原料粉碎浸泡→大孔吸附樹脂富集濃縮→反相柱層析→非烷基鍵合相硅膠介質(zhì)柱層析→濃縮結(jié)晶→成品。其中每個步驟得到的產(chǎn)物均用本發(fā)明提供的分析方法檢測石杉堿甲和石杉堿乙的含量。
實施例1、以含石杉堿甲0.053％，石杉堿乙0.013％的千層塔為原料，分離提純制備99.1％的石杉堿甲和98.4％的石杉堿乙，過程采用高效液相色譜法分析石杉堿甲和石杉堿乙的含量。
樣品的HPLC分析條件為Waters Alliance 2695高效液相色譜儀，2996紫外二極管陣列檢測器，色譜柱填料為苯基鍵合相硅膠Inertsil Ph-3，流動相甲醇∶水＝90∶10，進(jìn)樣量為20μl，流速1ml/min。
1)1公斤含石杉堿甲0.053％，石杉堿乙0.013％的干燥千層塔粉碎后，用10升0.1％硝酸浸泡24小時；傾出上層清液后，向殘余物再加入5升0.1％硝酸浸泡12小時；過濾，用同樣的酸液洗滌濾渣數(shù)次；合并濾液及洗滌液，得到浸出液約20升。HPLC分析結(jié)果表明浸出液中含520mg石杉堿甲和129mg石杉堿乙，浸出率分別為98.1％和99.2％；2)浸出液用氫氧化鈉調(diào)pH值為8，過濾，濾液通過南開大學(xué)化工廠生產(chǎn)的X-5樹脂進(jìn)行吸附；吸附完畢后用蒸餾水洗滌樹脂，1％鹽酸洗脫，減壓濃縮所收洗脫液，得到初分離產(chǎn)物17.5g。初分離產(chǎn)物精密稱定，用80％甲醇溶解后進(jìn)樣，測定其中石杉堿甲含量為2.92％，回收率為98.3％；石杉堿乙含量為0.72％，回收率為97.7％。
3)將C18反相介質(zhì)裝柱，用20％乙醇水溶液平衡；將步驟2)得到的初分離產(chǎn)物20％乙醇水溶液充分溶解后進(jìn)料；用25～40％乙醇水溶液梯度洗脫；紫外在線檢測，收集洗脫峰HPLC檢測；減壓濃縮石杉堿甲和石杉堿乙所在的洗脫液并回收溶劑，得到石杉堿甲和石杉堿乙混合物716mg，經(jīng)HPLC測定其中石杉堿甲含量為68.2％，回收率為95.5％；石杉堿乙含量為16.6％，回收率94.3％。
4)將五氟苯基鍵合硅膠介質(zhì)裝柱，用30％的甲醇水溶液平衡；用30％甲醇水溶液將步驟3)得到的混合物充分溶解后進(jìn)料，30％甲醇洗脫，紫外在線檢測，收集洗脫峰得到石杉堿甲溶液；70％甲醇洗脫，收集洗脫峰得到石杉堿乙溶液。HPLC分析表明石杉堿甲溶液中含480mg石杉堿甲，回收率98.2％；石杉堿乙溶液中含114mg石杉堿乙，回收率95.6％。
5)分別減壓濃縮步驟4)得到的石杉堿甲溶液和石杉堿乙溶液至有結(jié)晶析出，冷凍干燥，得475mg純度為99.1％的石杉堿甲和110mg純度為98.4％的石杉堿乙，回收率分別為98.1％和94.9％。
本工藝總回收率分別為石杉堿甲88.8％，石杉堿乙83.3％。
實施例2、以含石杉堿甲0.016％，石杉堿乙0.0033％的千層塔為原料，分離提純制備98.5％的石杉堿甲和98.2％的石杉堿乙，過程采用高效液相色譜法分析石杉堿甲和石杉堿乙的含量。
樣品的HPLC分析方法為Beckman FL750高效液相色譜儀，紫外多波長檢測器，色譜柱填料為五氟苯基鍵合相硅膠Curosil-PFP，流動相甲醇∶水＝70∶30，進(jìn)樣量為10μl，流速2ml/min。
1)將含石杉堿甲0.016％，石杉堿乙0.0033％的干燥千層塔粉碎后，用1％硫酸浸泡24小時；傾出上層清液后，向殘余物再加入1％硫酸浸泡12小時；過濾，用同樣的酸液洗滌濾渣數(shù)次；合并濾液及洗滌液，得到浸出液。
2)浸出液用氫氧化鈉調(diào)pH值為10，過濾，濾液通過Romn Hass生產(chǎn)的XAD-4樹脂進(jìn)行吸附；吸附完畢后用蒸餾水洗滌樹脂，50％丙酮洗脫，減壓濃縮所收洗脫液，得到初分離產(chǎn)物。
3)將C8反相介質(zhì)裝柱，用10％乙醇水溶液平衡；將步驟2)得到的初分離產(chǎn)物10％乙醇水溶液充分溶解后進(jìn)料；用50％乙醇水溶液洗脫；紫外在線檢測，收集洗脫峰HPLC檢測；減壓濃縮石杉堿甲和石杉堿乙所在的洗脫液并回收溶劑，得到石杉堿甲和石杉堿乙混合物。
4)將腈基鍵合硅膠介質(zhì)裝柱，用40％的甲醇水溶液平衡；用40％甲醇水溶液將步驟3)得到的混合物充分溶解后進(jìn)料，40％甲醇洗脫，紫外在線檢測，收集洗脫峰得到石杉堿甲溶液；100％甲醇洗脫，收集洗脫峰得到石杉堿乙溶液。
5)分別減壓濃縮步驟4)得到的石杉堿甲溶液和石杉堿乙溶液至有結(jié)晶析出，冷凍干燥，得純度為98.5％的石杉堿甲和純度為98.2％的石杉堿乙。
本工藝總回收率分別為石杉堿甲86.9％，石杉堿乙82.2％。
實施例3、以含石杉堿甲0.0035％，石杉堿乙0.0014％的千層塔為原料，分離提純制備98.5％的石杉堿甲和98.1％的石杉堿乙，過程采用高效液相色譜法分析石杉堿甲和石杉堿乙的含量。
樣品的HPLC分析方法為Agilent 1100高效液相色譜儀，紫外多波長檢測器，色譜柱填料為腈基鍵合相硅膠Lichrospher 100 CN，流動相甲醇∶水＝60∶40，進(jìn)樣量為20μl，流速0.5ml/min。
1)將含石杉堿甲0.053％，石杉堿乙0.013％的干燥千層塔粉碎后，用2％硫酸浸泡36小時；傾出上層清液后，向殘余物再加入2％硫酸浸泡12小時；過濾，用同樣的酸液洗滌濾渣數(shù)次；合并濾液及洗滌液，得到浸出液。
2)浸出液用氫氧化鈉調(diào)pH值為14，過濾，濾液通過西安藍(lán)深交換吸附材料有限公司生產(chǎn)的LSA-21樹脂進(jìn)行吸附；吸附完畢后用蒸餾水洗滌樹脂，95％乙醇洗脫，減壓濃縮所收洗脫液，得到初分離產(chǎn)物。
3)將Polyspher PST 10(MERCK，苯乙烯-二乙烯基苯共聚物)反相介質(zhì)裝柱，用30％甲醇水溶液平衡；將步驟2)得到的初分離產(chǎn)物30％乙醇水溶液充分溶解后進(jìn)料；用80％甲醇水溶液洗脫；紫外在線檢測，收集洗脫峰HPLC檢測；減壓濃縮石杉堿甲和石杉堿乙所在的洗脫液并回收溶劑，得到石杉堿甲和石杉堿乙混合物。
4)將苯基鍵合硅膠介質(zhì)裝柱，用60％的乙醇水溶液平衡；用60％乙醇水溶液將步驟3)得到的混合物充分溶解后進(jìn)料，60％乙醇洗脫，紫外在線檢測，收集洗脫峰得到石杉堿甲溶液；80％乙醇洗脫，收集洗脫峰得到石杉堿乙溶液。
5)分別減壓濃縮步驟4)得到的石杉堿甲溶液和石杉堿乙溶液至有結(jié)晶析出，冷凍干燥，得純度為98.5％的石杉堿甲和純度為98.1％的石杉堿乙。
本工藝總回收率分別為石杉堿甲85.2％，石杉堿乙80.1％。
實施例4、以含石杉堿甲2.92％，石杉堿乙0.72％的大孔吸附樹脂初分離產(chǎn)物為原料，用制備型高效液相色譜法分離制備石杉堿甲和石杉堿乙，樣品的制備方法為使用AKTA purifier 10層析系統(tǒng)，紫外多波長檢測器，色譜柱填料為酚基鍵合相硅膠，流動相甲醇∶水＝90∶10，流速5ml/min，將含石杉堿甲2.92％，石杉堿乙0.72％的大孔吸附樹脂初分離產(chǎn)物進(jìn)料后洗脫。收集石杉堿甲和石杉堿乙洗脫峰所在的洗脫液，洗脫液分別減壓濃縮至有結(jié)晶析出，冷凍干燥，得到純度為99.9％的石杉堿甲和99.8％的石杉堿乙。
本實施例中用到的有機(jī)溶劑都可以回收后再次循環(huán)使用。
權(quán)利要求
1.一種制備石杉堿甲和石杉堿乙的方法，其特征是包括采用非烷基鍵合相硅膠介質(zhì)作為色譜柱填料進(jìn)行柱層析分離石杉堿甲和石杉堿乙的步驟。
2.權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于非烷基鍵合相硅膠指以硅膠為基質(zhì)的表面鍵合非烷基基團(tuán)如苯基、五氟苯基、腈基和酚基的介質(zhì)。
3.權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于將非烷基鍵合相硅膠介質(zhì)裝柱，千層塔原料經(jīng)浸泡提取、富集濃縮、提純后進(jìn)料，用一定濃度的有機(jī)溶劑水溶液洗脫，分別收集石杉堿甲和石杉堿乙所在洗脫峰的洗脫液，兩種洗脫液分別結(jié)晶、干燥后得到石杉堿甲和石杉堿乙成品。
4.權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于所述有機(jī)溶劑的水溶液為濃度20～100％(v/v)的甲醇、乙醇或丙酮的水溶液。
5.權(quán)利要求3所述的方法，其特征是從原料中浸泡提取石杉堿甲和石杉堿乙的方法為將原料千層塔粉碎后，用濃度為0.1％～2％(v/v)硫酸或硝酸的水溶液浸泡提取，得到千層塔浸出液。
6.權(quán)利要求3或5所述的方法，其特征是石杉堿甲和石杉堿乙的富集濃縮的方法為將千層塔浸出液用氨水、氫氧化鈉或氫氧化鉀調(diào)pH值為8～14后通過大孔吸附樹脂柱進(jìn)行吸附洗脫，洗脫液減壓濃縮得到初分離產(chǎn)物。
7.權(quán)利要求3或6的方法，其特征是石杉堿甲和石杉堿乙的提純方法為采用反相層析的方法，將以硅膠為基質(zhì)的反相介質(zhì)或以聚合物為基質(zhì)的反相介質(zhì)裝柱，將初分離產(chǎn)物進(jìn)料后，用5％～80％(v/v)甲醇、乙醇或丙酮的水溶液洗脫，收集石杉堿甲和石杉堿乙所在洗脫峰的洗脫液。
8.權(quán)利要求3或7所述的方法，其特征在于所述的以硅膠為基質(zhì)的反相介質(zhì)為市售的C8和C18反相介質(zhì)，以聚合物為基質(zhì)的反相介質(zhì)包括以聚苯乙烯等為基質(zhì)的反相介質(zhì)。
9.一種分析石杉堿甲和石杉堿乙的方法，其特征在于包括采用非烷基鍵合相硅膠介質(zhì)為色譜柱填料進(jìn)行色譜分析的步驟。
10.按權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于非烷基鍵合相硅膠指以硅膠為基質(zhì)的表面鍵合非烷基基團(tuán)如苯基、五氟苯基、腈基和酚基的介質(zhì)。
11.權(quán)利要求9或10所述的方法，其特征是樣品配制成與分離體系相匹配的分析樣品溶液，然后用高效液相色譜法(HPLC法)測定石杉堿甲和石杉堿乙的濃度，換算成樣品中石杉堿甲和石杉堿乙的含量。
12.按權(quán)利要求9、10或11所述的方法，其特征在于色譜分析條件為柱溫20～35℃，流動相為甲醇和水的體積比＝50∶50～90∶10(v/v)，流速為0.5～2.0ml/min，待測試樣品得以分離后，采用高效液相色譜紫外檢測器測定石杉堿甲和石杉堿乙的峰面積，用標(biāo)準(zhǔn)曲線校正方程計算石杉堿甲和石杉堿乙的濃度，換算成樣品中石杉堿甲和石杉堿乙的含量。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種分析和分離制備石杉堿甲和石杉堿乙的方法。本發(fā)明的分析方法選用非烷基鍵合相硅膠介質(zhì)為色譜柱填料，用高效液相色譜法測定樣品中石杉堿甲和石杉堿乙的含量，具有簡單快速、分辨率好、靈敏度高等特點，可用于分離制備石杉堿甲和石杉堿乙時中間產(chǎn)物的含量分析和成品的質(zhì)量控制。本發(fā)明分離制備的方法包括采用非烷基鍵合相硅膠介質(zhì)作為色譜柱填料進(jìn)行柱層析分離石杉堿甲和石杉堿乙的步驟，工藝實施方法為原料粉碎浸泡→大孔吸附樹脂富集濃縮→反相柱層析→非烷基鍵合相硅膠介質(zhì)柱層析→濃縮結(jié)晶→成品，最后可獲得純度＞98％的石杉堿甲和石杉堿乙，本發(fā)明工藝簡單，效率高，所用資源可再生利用，大大降低了生產(chǎn)成本和社會成本。
文檔編號C07D221/22GK1704405SQ200410042760
公開日2005年12月7日 申請日期2004年5月26日 優(yōu)先權(quán)日2004年5月26日
發(fā)明者蘇志國, 李秀男, 孫海虹, 馬潤宇 申請人:中國科學(xué)院過程工程研究所