專利名稱：流感疫苗血凝素含量分析方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬生物醫(yī)藥分析技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及人用或獸用傳統(tǒng)疫苗、基因工程疫苗、單克隆抗體和免疫診斷試劑等抗原或抗體的標(biāo)準(zhǔn)化定量分析。
背景技術(shù)：
應(yīng)用單向免疫擴(kuò)散方法進(jìn)行抗原或抗體含量的測定已廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)藥的檢測、分析及質(zhì)量控制領(lǐng)域，中國藥典(2005版)四部收錄的多種生物制品的制造及檢定規(guī)程中采用此種方法進(jìn)行抗原含量的測定。接種流感疫苗(滅活疫苗、裂解疫苗、亞單位疫苗)是目前有效預(yù)防流行性感冒的有效手段。流感疫苗的成分標(biāo)識(shí)為血凝素含量，經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)上市的流感疫苗制造檢定規(guī)程中血凝素含量測定采用單向免疫擴(kuò)散方法。目前該方法在數(shù)據(jù)采集、數(shù)據(jù)處理過程中仍采用手工測量、手工計(jì)算的方式，費(fèi)時(shí)費(fèi)工，誤差較大，無法適應(yīng)GMP、GLP的標(biāo)準(zhǔn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的提供一種流感疫苗血凝素含量分析方法，以解決現(xiàn)有技術(shù)存在的在數(shù)據(jù)采集、數(shù)據(jù)處理過程中仍采用手工測量、手工計(jì)算的方式，費(fèi)時(shí)費(fèi)工，誤差較大，無法適應(yīng)GMP、GLP的標(biāo)準(zhǔn)的問題。
本發(fā)明采用以下技術(shù)方案該方法在常規(guī)連接的圖片采樣儀器、計(jì)算機(jī)和輸出設(shè)備上實(shí)施，包括數(shù)據(jù)收集、數(shù)據(jù)處理、誤差分析、數(shù)據(jù)存儲(chǔ)輸出步驟；所述的圖片采樣儀器為高端掃描儀。
所述的輸出設(shè)備為顯示器或打印機(jī)。
本發(fā)明的有益效果是應(yīng)用本發(fā)明對(duì)流感疫苗血凝素含量進(jìn)行測定，符合生物制品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及其質(zhì)量控制的標(biāo)準(zhǔn)化、數(shù)字化、規(guī)范化的要求。與當(dāng)前的測量方法對(duì)比具有以下的優(yōu)勢1、單向免疫擴(kuò)散試驗(yàn)圖片能夠?qū)崿F(xiàn)永久保存，同時(shí)其電子文本可以方便傳輸。2、數(shù)據(jù)采集采用多種方式，自動(dòng)計(jì)算出平行樣的平均值，減少人為測量誤差。3、自動(dòng)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，比較直觀觀察標(biāo)準(zhǔn)品及樣品點(diǎn)在標(biāo)準(zhǔn)曲線中的分布情況，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)。4、利用誤差分析系統(tǒng)自動(dòng)計(jì)算出一組標(biāo)準(zhǔn)品數(shù)據(jù)的相關(guān)系數(shù)，實(shí)現(xiàn)對(duì)樣品結(jié)果可信度評(píng)價(jià)。同時(shí)可以制定相關(guān)系數(shù)的可信度標(biāo)準(zhǔn)。5、能夠自動(dòng)實(shí)現(xiàn)檢定原始數(shù)據(jù)的永久性電子存檔，同時(shí)依據(jù)需要輸出在同一圖片中含有不同批號(hào)組合的檢定報(bào)告。


圖1是本發(fā)明的流程圖；圖2是本發(fā)明實(shí)施例所處理的流感疫苗血凝素單向免疫擴(kuò)散圖片；圖3是本發(fā)明實(shí)施例的標(biāo)準(zhǔn)品的X-Y曲線。
具體實(shí)施例方式
參見圖1，本發(fā)明包括該方法包括依次進(jìn)行的數(shù)據(jù)收集步驟1、數(shù)據(jù)處理步驟2、誤差分析步驟3和數(shù)據(jù)存儲(chǔ)輸出步驟4。其中數(shù)據(jù)收集步驟1包括(1)圖片的導(dǎo)入和命名采用圖片采集儀器(如掃描儀)將流感疫苗血凝素測定圖片以jpg格式的導(dǎo)入到計(jì)算機(jī)內(nèi)，并將其命名和保存在圖片文檔中。
(2)標(biāo)準(zhǔn)品數(shù)據(jù)的采集操作人員可以采用平行線測量或點(diǎn)線測量方法對(duì)所述圖片上的標(biāo)準(zhǔn)品沉淀環(huán)直徑進(jìn)行測量，其測量結(jié)果自動(dòng)存入數(shù)據(jù)庫中，通過對(duì)二個(gè)或三個(gè)平行樣的測定，自動(dòng)計(jì)算其(沉淀環(huán)直徑)平均值。同理依次對(duì)若干個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行測量采集；(3)被測樣品數(shù)據(jù)采集依據(jù)上述“標(biāo)準(zhǔn)品數(shù)據(jù)的采集(2)”的方法進(jìn)行樣品數(shù)據(jù)采集，采集數(shù)據(jù)前需輸入樣品的稀釋倍數(shù)；采集系統(tǒng)同時(shí)支持手工錄入、修改及刪除功能。
數(shù)據(jù)處理步驟2包括(1)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制系統(tǒng)采用最小二乘法求出方程Y2＝A+BX中的A、B值，并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
(2)樣品測量值的計(jì)算利用方程Y2＝A+BX，依據(jù)稀釋倍數(shù)求出樣品的X值，其中Y為標(biāo)準(zhǔn)品或樣品的沉淀環(huán)直徑(系統(tǒng)采集數(shù)據(jù))，標(biāo)準(zhǔn)品的X值為手工錄入值，樣品的X值即為流感疫苗的血凝素含量。A為標(biāo)準(zhǔn)曲線的截距，B為標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率。
誤差分析步驟3通過對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的測量，利用誤差分析軟件(給出軟件具體的名稱和來源)計(jì)算出此組數(shù)據(jù)的具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義相關(guān)系數(shù)，對(duì)實(shí)驗(yàn)誤差進(jìn)行定量分析；同時(shí)也可通過觀察標(biāo)準(zhǔn)品及樣品點(diǎn)在標(biāo)準(zhǔn)曲線中的分布情況，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)說明測量值與真實(shí)值的誤差及測量結(jié)果是否在標(biāo)準(zhǔn)曲線可讀范圍內(nèi)。
數(shù)據(jù)存儲(chǔ)輸出步驟4標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的測量結(jié)果分別存儲(chǔ)，可以選用實(shí)驗(yàn)序號(hào)或樣品批號(hào)調(diào)出所需要的實(shí)驗(yàn)及樣品報(bào)告，并分別進(jìn)行輸出。
所述的圖片導(dǎo)入步驟采用的圖片采樣儀器為高端掃描儀，并與計(jì)算機(jī)連接。
所述的數(shù)據(jù)處理、誤差分析和數(shù)據(jù)存儲(chǔ)輸出步驟均在計(jì)算機(jī)及與其連接的輸出設(shè)備上進(jìn)行。
所述的輸出設(shè)備為顯示器或打印機(jī)。
下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的過程作進(jìn)一步詳細(xì)說明實(shí)施例本發(fā)明采用的設(shè)備由高端掃描儀、計(jì)算機(jī)和輸出設(shè)備(顯示器或/和打印機(jī))，采用常規(guī)連接方式相互連接。
一、首先進(jìn)行數(shù)據(jù)采集步驟1、待分析圖片備好如圖2所示的樣品(即流感疫苗血凝素單向免疫擴(kuò)散圖片)。圖片為瓊脂糖濃度為1％凝膠(內(nèi)含抗體)，內(nèi)圈為上樣圈，周圍環(huán)形部分為抗原擴(kuò)散環(huán)。圖2中的中間一排從左邊數(shù)4個(gè)圖形為抗原標(biāo)準(zhǔn)品，下面一排從左邊數(shù)4個(gè)圖形為抗原標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)孔，中間一排最右邊的二孔為陰性對(duì)照?qǐng)D形(B、H3N2型別的流感血凝素標(biāo)準(zhǔn)品42μg/ml)，下面一排最右邊的一孔為陰性對(duì)照?qǐng)D形(H1N1型別的流感血凝素標(biāo)準(zhǔn)品0μg/ml)。圖中的上面一排為被側(cè)樣品，其中1、2號(hào)樣為單孔，3、4號(hào)樣為復(fù)孔?？乖瓨?biāo)準(zhǔn)品1-4的濃度分別為56μg/ml、42μg/ml、28μg/ml、14μg/ml。
2、圖片采集采用所述的高端掃描儀將圖2所示的待分析圖片進(jìn)行圖片掃描采集，將該掃描得到的圖片以jpg格式命名和保存在圖片文檔中。
二、數(shù)據(jù)處理步驟1、圖片分析(1)血凝素標(biāo)準(zhǔn)品數(shù)據(jù)輸入、標(biāo)準(zhǔn)品擴(kuò)散圈直徑數(shù)據(jù)的采集選擇標(biāo)準(zhǔn)品序號(hào)，并輸入標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)準(zhǔn)抗原含量如下標(biāo)準(zhǔn)品1血凝素56μg/ml；標(biāo)準(zhǔn)品2血凝素42μg/ml；標(biāo)準(zhǔn)品3血凝素28μg/ml；標(biāo)準(zhǔn)品4血凝素14μg/ml。
采用平行線法或點(diǎn)線法多次采集數(shù)據(jù)庫中標(biāo)準(zhǔn)品圖樣的擴(kuò)散圈的直徑，并計(jì)算出多次采集的各數(shù)據(jù)的平均值。
采用相同的方法采集樣品擴(kuò)散圈直徑數(shù)據(jù)，并計(jì)算出多次采集的各數(shù)據(jù)的平均值。
(2)樣品測量值的計(jì)算利用方程Y2＝A+BX，依據(jù)稀釋倍數(shù)求出樣品的X值，其中Y為標(biāo)準(zhǔn)品或樣品的沉淀環(huán)直徑(系統(tǒng)采集數(shù)據(jù))，標(biāo)準(zhǔn)品的X值為手工錄入值，樣品的X值即為流感疫苗的血凝素含量。各數(shù)據(jù)參見表1，表1中的血凝素值為標(biāo)準(zhǔn)品輸入值，直徑的平方值及平均值為采集數(shù)據(jù)值。
三、標(biāo)準(zhǔn)品曲線輸出和誤差分析將上述表1中處理的標(biāo)準(zhǔn)品數(shù)據(jù)繪制成圖3所示的Y-X曲線，圖3的橫坐標(biāo)表示X值(X值為輸入標(biāo)準(zhǔn)品數(shù)值或待測樣品的血凝素值)圖像(斜線)是依據(jù)Y2＝A+BX方程得出，并進(jìn)行相關(guān)系數(shù)的誤差分析，得到相關(guān)系數(shù)為99.54％(參見表2)。表2的A、B回歸系數(shù)依據(jù)Y2＝A+BX方程得出，線性相關(guān)性檢驗(yàn)與相關(guān)系數(shù)是依據(jù)下列公式得出。
對(duì)于變量y與x的一組觀測值來說，我們把r=Σi=1x(xi-x‾)(yi-y‾)Σi=1x(xi-x‾)2Σi=1x(yi-y‾)2=Σi=1xxiyi-nx‾y‾(Σi=1xxi2-nx‾2)(Σi=1xyi2-ny‾2)]]>稱為變量y與x之間的樣本相關(guān)系數(shù)(相關(guān)系數(shù))
|r|≤1當(dāng)|r|越接近于1，相關(guān)程度越大；當(dāng)|r|越接近于0，相關(guān)程度越小。
四、樣品結(jié)果數(shù)據(jù)存儲(chǔ)輸出將上述的樣品的批號(hào)、稀釋倍數(shù)、血凝素測量值結(jié)果(參見表3)、標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)據(jù)采集圖表、標(biāo)準(zhǔn)曲線、誤差分析等結(jié)果儲(chǔ)存在微機(jī)數(shù)據(jù)庫中，可在顯示器顯示，也可用打印機(jī)打印輸出。表3中樣品批號(hào)和稀釋倍數(shù)均為手工輸入值，直徑的平方值及平均值為采集數(shù)據(jù)值，血凝素值為依據(jù)Y2＝A+BX方程得出。
表1

表2分析結(jié)果

回歸方程Y＝2588.5447+113.9039X表3樣品表格

權(quán)利要求
1.一種流感疫苗血凝素含量分析方法，其特征在于該方法在常規(guī)連接的圖片采樣儀器、計(jì)算機(jī)和輸出設(shè)備上實(shí)施，包括數(shù)據(jù)收集、數(shù)據(jù)處理、誤差分析、數(shù)據(jù)存儲(chǔ)輸出步驟；其中數(shù)據(jù)收集步驟包括(1)圖片的導(dǎo)入和命名通過所述的圖片采集儀器將流感疫苗血凝素測定圖片以jpg格式的導(dǎo)入到計(jì)算機(jī)內(nèi)，并將其命名和保存在圖片文檔中；(2)標(biāo)準(zhǔn)品數(shù)據(jù)的采集采用平行線測量或點(diǎn)線測量方法對(duì)所述圖片上的標(biāo)準(zhǔn)品沉淀環(huán)直徑進(jìn)行測量，其測量結(jié)果自動(dòng)存入計(jì)算機(jī)的數(shù)據(jù)庫中，通過對(duì)二個(gè)或三個(gè)平行樣的測定，自動(dòng)計(jì)算其平均值；同理依次對(duì)若干個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行測量采集；(3)待測樣品數(shù)據(jù)采集依據(jù)上述步驟(2)的方法進(jìn)行樣品采集；數(shù)據(jù)處理步驟包括(1)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制系統(tǒng)采用最小二乘法求出方程Y2＝A+BX中的A、B值，并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；(2)樣品測量值的計(jì)算利用方程Y2＝A+BX，依據(jù)稀釋倍數(shù)求出樣品的X值，其中Y為標(biāo)準(zhǔn)品或樣品的沉淀環(huán)直徑(系統(tǒng)采集數(shù)據(jù))，標(biāo)準(zhǔn)品的X值為手工錄入值，樣品的X值即為流感疫苗的血凝素含量；誤差分析步驟包括利用誤差分析軟件對(duì)所述的標(biāo)準(zhǔn)品的測量數(shù)據(jù)進(jìn)行定量誤差分析并繪出相應(yīng)的誤差曲線；同時(shí)通過觀察標(biāo)準(zhǔn)品及樣品點(diǎn)在標(biāo)準(zhǔn)曲線中的分布情況，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)，即說明測量值與真實(shí)值的誤差及測量結(jié)果是否在標(biāo)準(zhǔn)曲線可讀范圍內(nèi)。數(shù)據(jù)存儲(chǔ)輸出步驟包括標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的測量結(jié)果分別存儲(chǔ)，可以選用實(shí)驗(yàn)序號(hào)或樣品批號(hào)調(diào)出所需要的實(shí)驗(yàn)及樣品報(bào)告，并分別通過輸出設(shè)備進(jìn)行輸出。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的流感疫苗血凝素含量分析方法，其特征在于所述的圖片采樣儀器為高端掃描儀。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的流感疫苗血凝素含量分析方法，其特征在于所述的輸出設(shè)備為顯示器或打印機(jī)。
全文摘要
一種流感疫苗血凝素含量分析方法，該方法在常規(guī)連接的圖片采樣儀器、計(jì)算機(jī)和輸出設(shè)備上實(shí)施，包括數(shù)據(jù)收集、數(shù)據(jù)處理、誤差分析、數(shù)據(jù)存儲(chǔ)輸出步驟。本發(fā)明與當(dāng)前的測量方法對(duì)比具有以下的優(yōu)勢單向免疫擴(kuò)散試驗(yàn)圖片能夠?qū)崿F(xiàn)永久保存，同時(shí)其電子文本可以方便傳輸。數(shù)據(jù)采集采用多種方式，自動(dòng)計(jì)算出平行樣的平均值，減少人為測量誤差。自動(dòng)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，比較直觀觀察標(biāo)準(zhǔn)品及樣品點(diǎn)在標(biāo)準(zhǔn)曲線中的分布情況，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)。利用誤差分析系統(tǒng)自動(dòng)計(jì)算出一組標(biāo)準(zhǔn)品數(shù)據(jù)的相關(guān)系數(shù)，實(shí)現(xiàn)對(duì)樣品結(jié)果可信度評(píng)價(jià)。同時(shí)可以制定相關(guān)系數(shù)的可信度標(biāo)準(zhǔn)。能夠自動(dòng)實(shí)現(xiàn)檢定原始數(shù)據(jù)的永久性電子存檔，同時(shí)依據(jù)需要輸出含有不同批號(hào)組合的檢定報(bào)告。
文檔編號(hào)G06K9/00GK1892227SQ20051008034
公開日2007年1月10日 申請(qǐng)日期2005年7月1日 優(yōu)先權(quán)日2005年7月1日
發(fā)明者石晶, 劉培嵩, 王茂祥 申請(qǐng)人:長春創(chuàng)新藥物器械研究有限公司