meter))。在調(diào)整 試樣糖液的濃度之后，使用〇. 2~0. 45 μ m的過(guò)濾器來(lái)去除試樣溶液中含有的異物，之后將 該試樣使用為高效液相色譜法（HPLC)分析試樣。
[0050] 高效液相色譜法（HPLC)分析條件如下。
[0051] 一高效液相色譜法（HPLC)分析用柱：多胺（Polyamine)系列的柱（YMC-Pack多胺 (Polyamine) - II / 日本（Japan))
[0052] -柱尺寸、粒度：250 X 4. BmmT. D. s_5 μ m、12nm
[0053] 一檢測(cè)器（Detector):折光指數(shù)檢測(cè)器（RID，Refractive Index Detector)
[0054] 一柱溫度（Column oven temperature) :25 ~30°C
[0055] 一溶劑（Solvent) :64% 乙腈（Acetonitrile)
[0056] 一流量（Flow rate) ： 1.0 mT,/min
[0057] 一分析時(shí)間（Run time) :25 分鐘
[0058] 一試樣注入量（Injection volume) :20 μ L
[0059] -標(biāo)準(zhǔn)試劑：葡萄糖（Dextrose)、半乳糖（Galactose)、乳糖（Lactose)
[0060] 首先，在分析相應(yīng)試樣之前，以與上述高效液相色譜法（HPLC)分析方法相同的 方法，利用高效液相色譜法（HPLC)來(lái)分析標(biāo)準(zhǔn)試劑，從而確認(rèn)在各標(biāo)準(zhǔn)試劑的色譜圖 (chromatogram)中繪制的峰值的保持時(shí)間（retention time)。然后，在向高效液相色譜 法（HPLC)注入預(yù)處理后的分析試樣，從而求得高效液相色譜法（HPLC)色譜圖之后，比較 標(biāo)準(zhǔn)試劑的葡萄糖、半乳糖和乳糖的保持時(shí)間和試樣的保持時(shí)間，若保持時(shí)間（retention time) -致，則視為相同的成分，并根據(jù)下列式3求得低聚半乳糖的含量。
[0061] 式 3
[0062] 低聚半乳糖的含量（DB% )= 100 -（葡萄糖含量+半乳糖含量+乳糖含量）
[0063] 注:干基（Dry Basis)，意味著以無(wú)水物為基準(zhǔn)。
[0064] 實(shí)施例1
[0065] 購(gòu)買(mǎi)市場(chǎng)銷(xiāo)售中的乳糖來(lái)做準(zhǔn)備。在向反應(yīng)罐投入上述乳糖之后，添加熱水，并運(yùn) 行攪拌器，使得100重量百分比的乳糖溶液內(nèi)的乳糖成為約40~45重量百分比。若乳糖溶 液的濃度在40~45%范圍內(nèi)，則調(diào)整反應(yīng)罐的溫度，使得酶的反應(yīng)溫度成為55~60°C。在 調(diào)整反應(yīng)罐的溫度之后，向反應(yīng)罐投入乳糖酶和β-半乳糖苷酶，從而發(fā)生酶反應(yīng)。此時(shí)， β -半乳糖苷酶將乳糖合成為低聚半乳糖，而乳糖酶發(fā)生特異性地分解乳糖成分的反應(yīng)。
[0066] 上述酶反應(yīng)執(zhí)行36小時(shí)。此時(shí)，使用高效液相色譜法（HPLC)來(lái)分析反應(yīng)糖液的 糖組成成分，當(dāng)?shù)途郯肴樘堑暮繛?0重量百分比以上時(shí)，向反應(yīng)罐投入酵母，使得存在 于已生成的低聚半乳糖的葡萄糖和半乳糖成分發(fā)酵，并轉(zhuǎn)化為乙醇和醋酸。在酶反應(yīng)和酵 母反應(yīng)全部結(jié)束之后，向反應(yīng)罐投入粉末活性炭，在75°C溫度下攪拌約30分鐘，并吸附糖 液的顏色物質(zhì)。
[0067] 之后，在以使糖液得到過(guò)濾的方式去除糖液的活性炭和異物之后，通過(guò)離子純化 工序去除了醋酸成分。
[0068] 在對(duì)糖液進(jìn)行離子純化處理，并去除醋酸之后，以使糖液內(nèi)的固體成分的濃度成 為75%的方式濃縮了糖液。即，所濃縮的糖液內(nèi)的糖的固體成分為75重量百分比，水為25 重量百分比。
[0069] 實(shí)施例2
[0070] 購(gòu)買(mǎi)市場(chǎng)銷(xiāo)售中的乳糖做準(zhǔn)備。并且，以與上述實(shí)施例1相同的方法制備了乳糖 溶液，并調(diào)整了反應(yīng)罐的溫度，使得酶的反應(yīng)溫度成為55~60°C。之后，向反應(yīng)罐同時(shí)投入 β-半乳糖苷酶、葡萄糖氧化酶及過(guò)氧化氫酶，并進(jìn)行了 60小時(shí)的酶反應(yīng)。此時(shí)，在酶反應(yīng) 中，從乳糖生成的葡萄糖成分通過(guò)與葡萄糖氧化酶發(fā)生反應(yīng)來(lái)轉(zhuǎn)化為葡萄糖酸。
[0071] 在酶反應(yīng)結(jié)束之后，以與上述實(shí)施例1相同的方法吸附糖液內(nèi)顏色物質(zhì)，并在過(guò) 濾糖液之后，執(zhí)行了離子純化工序。在酶反應(yīng)中生成的葡萄糖酸在離子純化工序中被去除。
[0072] 實(shí)施例3
[0073] 購(gòu)買(mǎi)乳清做準(zhǔn)備，并從上述乳清分離了乳糖。上述分離以如下方式執(zhí)行，即，在將 乳清的pH調(diào)整為ρΗ4. 4至ρΗ4. 6之后，將溫度加熱至約60°C，再放置約1小時(shí)左右，使蛋白 質(zhì)成分凝固，之后，通過(guò)過(guò)濾糖液來(lái)分離蛋白質(zhì)成分和乳糖成分。并且，除了利用以這種方 式分離的乳糖之外，以與上述實(shí)施例1相同的方法制備了糖液。
[0074] 比較例1
[0075] 借助現(xiàn)有方法制備了糖液。具體地，首先，在向反應(yīng)罐投入乳糖之后，添加熱水，并 運(yùn)行攪拌器，使得乳糖溶液內(nèi)的固體成分的濃度成為約40~45重量百分比。若乳糖溶液 內(nèi)的固體成分的濃度在40~45重量百分比范圍內(nèi)，則向反應(yīng)罐投入β -半乳糖苷酶，從而 進(jìn)行酶反應(yīng)。上述酶反應(yīng)執(zhí)行60小時(shí)，并在酶反應(yīng)結(jié)束之后，向反應(yīng)罐投入粉末活性炭，在 75°C溫度下攪拌約30分鐘，并吸附了糖液的顏色物質(zhì)。之后，通過(guò)過(guò)濾糖液來(lái)去除糖液的 活性炭和異物，再利用離子交換樹(shù)脂來(lái)執(zhí)行了離子純化工序。并且，對(duì)離子純化的糖液進(jìn)行 殺菌，并以50%的濃度濃縮之后，執(zhí)行了色譜法。之后，利用離子交換樹(shù)脂對(duì)糖液進(jìn)行純化， 再通過(guò)投入粉末活性炭來(lái)吸附顏色物質(zhì)并進(jìn)行殺菌，之后，以75%的濃度進(jìn)行了濃縮（圖 3) 〇
[0076] 實(shí)驗(yàn)例1 :基于制備方法的糖液內(nèi)的糖組成成分的差異
[0077] 分析了上述實(shí)施例1至實(shí)施例3的糖液內(nèi)的糖組成成分。其結(jié)果可知，與比較例 相比，實(shí)施例1至實(shí)施例3的半乳糖乳糖的含量顯著高（表1)。
[0078] 表 1
[0079]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種半乳糖乳糖的含量為40重量百分比以上的低聚半乳糖的制備方法，其特征在 于，包括： 使乳糖溶解于水的步驟； 向乳糖溶液添加選自1)乳糖酶、2)葡萄糖氧化酶及3)過(guò)氧化氫酶中的一種以上的酶 及e -半乳糖苷酶，來(lái)發(fā)生酶反應(yīng)的步驟；以及 對(duì)上述酶反應(yīng)液進(jìn)行純化的步驟。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的半乳糖乳糖的含量為40重量百分比以上的低聚半乳糖的制 備方法，其特征在于， 在向乳糖溶液添加上述乳糖酶及上述0 -半乳糖苷酶之后，再添加酵母，由此執(zhí)行上 述酶反應(yīng)的步驟。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的半乳糖乳糖的含量為40重量百分比以上的低聚半乳糖的制 備方法，其特征在于， 在向乳糖溶液添加上述乳糖酶及上述0 -半乳糖苷酶之后，當(dāng)上述乳糖溶液內(nèi)的低聚 半乳糖的含量成為50重量百分比以上時(shí)，再添加酵母。
4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的半乳糖乳糖的含量為40重量百分比以上的低聚半乳糖的制 備方法，其特征在于， 葡萄糖及半乳糖借助上述酵母轉(zhuǎn)化為乙醇及醋酸。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的半乳糖乳糖的含量為40重量百分比以上的低聚半乳糖的制 備方法，其特征在于， 向乳糖溶液添加上述葡萄糖氧化酶及過(guò)氧化氫酶，由此執(zhí)行上述酶反應(yīng)的步驟。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的半乳糖乳糖的含量為40重量百分比以上的低聚半乳糖的制 備方法，其特征在于， 向乳糖溶液同時(shí)添加上述葡萄糖氧化酶及過(guò)氧化氫酶，或者連續(xù)添加上述葡萄糖氧化 酶及過(guò)氧化氫酶。
7. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的半乳糖乳糖的含量為40重量百分比以上的低聚半乳糖的制 備方法，其特征在于， 葡萄糖借助上述葡萄糖氧化酶轉(zhuǎn)化為葡萄糖酸。
8. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的半乳糖乳糖的含量為40重量百分比以上的低聚半乳糖的制 備方法，其特征在于， 借助上述過(guò)氧化氫酶去除過(guò)氧化氫。
9. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的半乳糖乳糖的含量為40重量百分比以上的低聚半乳糖的制 備方法，其特征在于， 上述低聚半乳糖中半乳糖乳糖的含量為40重量百分比以上。
10. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的半乳糖乳糖的含量為40重量百分比以上的低聚半乳糖的制 備方法，其特征在于， 上述酶反應(yīng)液內(nèi)的糖中的葡萄糖及半乳糖的含量小于20重量百分比。
11. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的半乳糖乳糖的含量為40重量百分比以上的低聚半乳糖的制 備方法，其特征在于， 上述乳糖從牛奶加工過(guò)程中所產(chǎn)生的副產(chǎn)物而獲得。
12.根據(jù)權(quán)利要求1所述的半乳糖乳糖的含量為40重量百分比以上的低聚半乳糖的制 備方法，其特征在于， 上述乳糖來(lái)源于乳清。
【專利摘要】本發(fā)明涉及利用酶來(lái)制備半乳糖乳糖的含量為40重量百分比以上的低聚半乳糖的方法。
【IPC分類(lèi)】C12P19-04, C12P7-58, C12P7-06, C12P19-44
【公開(kāi)號(hào)】CN104812908
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201480002546
【發(fā)明人】權(quán)赫健, 金那日, 徐藝瑟
【申請(qǐng)人】新克萊瑪有限公司
【公開(kāi)日】2015年7月29日
【申請(qǐng)日】2014年7月23日
【公告號(hào)】WO2015012597A1