專利名稱：治療疼痛的方法和組合物的制作方法
治療疼痛的方法和組合物
相關(guān)申請
本申請請求2005年12月22日提交的美國臨時(shí)申請順序號 US60/753, 665和2006年6月29日提交的美國臨時(shí)申請順序號 US60/817， 892的優(yōu)先權(quán)利益。將上述申請的說明書各自完整地引入本 文作為參考。
背景
存在各種介導(dǎo)通過細(xì)胞膜的離子流的離子通道蛋白。離子通道蛋 白的適當(dāng)表達(dá)和功能是維持細(xì)胞功能，胞內(nèi)通訊等所必需的。許多疾 病是膜電位錯(cuò)誤調(diào)節(jié)或異常鋦處理的結(jié)果。由于得知了離子通道在調(diào) 節(jié)細(xì)胞中膜電位和離子流中的關(guān)鍵重要性，所以鑒定可以促進(jìn)或抑制 特定離子通道的活性劑作為研究工具和可能的治療劑具有重大意義。
一種這類通道為瞬時(shí)型感受器電位Al (TRPA1)通道(ANKTM1)。 TRPA1為鉤可透過通道，特別是非選擇性鈞可透過的陽離子通道。除 鈣離子外，TRPA1通道還可透過其它陽離子，例如鈉。因此，TRPAl 通道通過調(diào)節(jié)諸如鉤和鈉離子這類陽離子流調(diào)節(jié)膜電位。盡管諸如 TRPAl這類非選擇性陽離子通道調(diào)節(jié)鋦離子流等，但是它們在機(jī)制上 不同于電壓控制鈣通道。 一般而言，電壓控制鉤通道對通過膜的電位
水平或濃度快:i增加:相反，非選擇性陽離子通道一般^信號轉(zhuǎn)導(dǎo)控
制的，持續(xù)長久的，并且在離子濃度上產(chǎn)生的快速改變較小。這些機(jī) 制上的差異伴隨電壓控制和陽離子可透過通道中的結(jié)構(gòu)差異。因此， 盡管許多不同的通道起調(diào)節(jié)各種細(xì)胞類型中的離子流和膜電位的作用 并且對大量刺激起反應(yīng)，但是重要的是認(rèn)識到不同類離子通道中的顯 著結(jié)構(gòu)，功能和機(jī)制差異。
因?yàn)殡x子通道錯(cuò)誤調(diào)節(jié)通常與病理學(xué)情況相關(guān)，所以期望鑒定和
制備可以調(diào)節(jié)離子通道，包括TRPA1的一種或多種功能的化合物。這 類化合物具有各種體外和體內(nèi)應(yīng)用。
概述
實(shí)現(xiàn)細(xì)胞動(dòng)態(tài)平衡的一個(gè)重要方面在于維持發(fā)育過程中不同細(xì)胞 類型中的適當(dāng)離子濃度和對大量刺激物的反應(yīng)。大量不同類型的離子 通道通過使離子通過質(zhì)膜運(yùn)動(dòng)進(jìn)入和離開細(xì)胞和通過細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞器使 離子運(yùn)動(dòng)通過膜起維持細(xì)胞動(dòng)態(tài)平衡的作用所述的細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞器包 括，例如內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，肌質(zhì)網(wǎng)，線粒體和胞吞細(xì)胞器，包括內(nèi)顆粒和溶酶 體。 一種這類離子通道為非選擇性陽離子通道TRPA1。 TRPA1為陽離子 可透過的并且屬于較大家族的TRP離子通道。
已經(jīng)將TRP通道分類為至少6族TRPC(短)，TRPV(香草素)， T醒(長，melastatin) ， TRPP(多嚢蛋白)，T醒L(mucolipins)和 TRPA(ANKTM1)?？梢曰谛蛄型葱院凸δ芟嗨菩詫RPC族分成4 個(gè)亞族(TRPC1， TRPC4，5， TRPC3， 6， 7和TRPC2)。目前TRPV家族具有 6個(gè)成員。TRPV5和TRPV6比TRPV1, TRPV2， TRPV3或TRPV4更接近 于彼此相關(guān)。TRPA1最接近于與TRPV3相關(guān)并且比TRPV5和TRPV6更 接近于與TRPV1和TRPV2相關(guān)。TRPM家族具有8個(gè)成員。組成包括下 列基礎(chǔ)成員T固l (Melastatin或LTRPC1) ， TRPM3 (KIAA1616或 LTRPC3) , TRPM7(TRP-PLIK， ChaK(l), LTRPC7) ， TRPM6 (ChaK2)， TRPM2(TRPC7或LTRPC2)， TRPM8 (Trp-p8或CMR1), TRPM5(Mtrl或 LTRPC5)和TRPM4 (FLJ20041或LTRPC4) 。 TRPA家族的唯一哺乳動(dòng)物成 員為ANKTM1。TRPML家族由mucolipins組成，包括TRPML1 (mucolipins 1)， TRPML2 (mucolipins 2)和TRPML3 (mucolipin3) 。 TRPP家族由2 族通道組成預(yù)測具有6個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域的那些和具有11個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域 的那些。預(yù)測TRPP2(PKD2)， TRPP3(PKD2L1) ， TRPP5 (PKD2L2)均具有 6個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域。認(rèn)為TRPP1 (PKD1， PC1) ， PKD-REJ和PKD-1L1均具 有11個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域。
TRP通道構(gòu)成了涉及調(diào)節(jié)細(xì)胞動(dòng)態(tài)平衡的大和重要類型通道。本 發(fā)明提供了調(diào)節(jié)至少一種TRP家族成員的方法和組合物。特別地，本 發(fā)明提供了用于拮抗TRPA1功能的方法和組合物。調(diào)節(jié)TRPA1功能提 供了調(diào)節(jié)細(xì)胞中鈣動(dòng)態(tài)平衡，鈉動(dòng)態(tài)平衡，細(xì)胞內(nèi)鈣水平，膜極化(靜 息膜電位)和/或陽離子水平的方式?？梢哉{(diào)節(jié)一種或多種TRPA1功能 的化合物用于許多方面，包括，但不限于維持4丐動(dòng)態(tài)平衡；維持鈉動(dòng) 態(tài)平衡；調(diào)節(jié)胞內(nèi)鈣水平；調(diào)節(jié)膜極化(膜電位)；調(diào)節(jié)陽離子水平； 和/或治療或預(yù)防與釣動(dòng)態(tài)平衡，鈉動(dòng)態(tài)平衡，鈣或鈉生理紊亂或膜極 化/超極化(包括低興奮性和超興奮性)相關(guān)的疾病，病癥或疾患，和/ 或治療或預(yù)防與調(diào)節(jié)或錯(cuò)誤調(diào)節(jié)TRPA1表達(dá)或功能相關(guān)的疾病，病癥 或疾患。另外，本發(fā)明在某些實(shí)施方案中提供了拮抗TRPA1功能和一 種或多種另外的TRP通道功能中的方法和組合物。
本申請?zhí)峁┝丝梢哉{(diào)節(jié)TRPA1功能的合物。還提供了使用這些化 合物的方法。某些實(shí)施方案提供了調(diào)節(jié)細(xì)胞或動(dòng)物的TRPA1功能的方 法，包括給予有效量的抑制TRPA1功能的化合物，其中該化合物抑制 TRPA1-介導(dǎo)的離子流。某些實(shí)施方案提供了調(diào)節(jié)細(xì)胞中TRPA1功能的 方法，包括對該細(xì)胞給予有效量的抑制TRPA1功能的化合物，其中該 化合物抑制TRPA1介導(dǎo)的外向電流。某些實(shí)施方案提供了調(diào)節(jié)細(xì)胞中 TRPA1功能的方法，包括對該細(xì)胞給予有效量的抑制TRPA1功能的化 合物，其中該化合物抑制TRPA1介導(dǎo)的內(nèi)向電流。某些實(shí)施方案提供 了調(diào)節(jié)細(xì)胞中TRPA1功能的方法，包括對該細(xì)胞給予有效量的抑制 TRPA1功能的化合物，其中該化合物抑制TRPA1介導(dǎo)的內(nèi)向和外向電 流。某些實(shí)施方案還提供了預(yù)防或治療與受試者TRPA1功能相關(guān)的疾 病或疾患的方法，包括對該受試者給予治療有效量的抑制TRPA1功能 的化合物，其中該化合物抑制TRPA1介導(dǎo)的內(nèi)向電流。某些實(shí)施方案 還提供了預(yù)防或治療與受試者TRPA1功能相關(guān)的疾病或疾患的方法， 包括對該受試者給予治療有效量的抑制TRPA1功能的化合物，其中該 化合物抑制TRPA1介導(dǎo)的外向電流。某些實(shí)施方案還提供了預(yù)防或治 療與受試者TRPA1功能相關(guān)的疾病或疾患的方法，包括對該受試者給
予治療有效量的抑制TRPA1功能的化合物，其中該化合物抑制TRPA1 介導(dǎo)的內(nèi)向和外向電流。某些實(shí)施方案提供了預(yù)防或治療與受試者 TRPA1功能相關(guān)的疾病或疾患的方法，包括對該受試者給予治療有效 量的抑制TRPA1功能的化合物，其中該化合物抑制TRPA1介導(dǎo)的離子 流。注意抑制特定的電流意旨化合物在體外或體內(nèi)試驗(yàn)中抑制該電流 (例如，內(nèi)向和/或外向)的能力。在體內(nèi)或體外試驗(yàn)中抑制特定電流用 作特定化合物的特定功能活性的代表。
下列文章為有關(guān)TRPA1結(jié)構(gòu)和功能的本領(lǐng)域技術(shù)狀態(tài)中的典型 (Jordt等(20(H) Nature 427: 260-265; Bautista等，(2005) PNAS: 102 (34): 12248-12252)。將上述文章完整地引入作為參考。
本發(fā)明的一個(gè)方面涉及治療或預(yù)防涉及TRPA1活化或降低的 TRPA1活性能減輕其嚴(yán)重性的疾患的方法，通過給予抑制TRPA1-介導(dǎo) 的電流和/或TRPAl-介導(dǎo)的離子流的TRPA1拮抗劑來進(jìn)行。下文詳細(xì) 描述了 TRPA1拮抗劑，它們具有測定的IO微摩爾或IO微摩爾以下，5 微摩爾或5微摩爾以下，2微摩爾或2微摩爾以下，l微摩爾或l微摩 爾以下，500納摩爾或500納摩爾以下，200納摩爾或200納摩爾以下， 100納摩爾或100納摩爾以下和甚至10納摩爾或10納摩爾以下的 TRPA1的IC5。。在某些實(shí)施方案中，TRPA1拮抗劑以1微摩爾，或l微 摩爾以下，更以優(yōu)選500納摩爾或500納摩爾以下，200納摩爾或200 納摩爾以下，100納摩爾或100納摩爾以下，25納摩爾或25納摩爾以 下和甚至IO納摩爾或IO納摩爾以下的IC5。抑制內(nèi)向和外向TRPAl-介 導(dǎo)的電流之一或兩者。在某些實(shí)施方案中，在以5微摩爾或5微摩爾 以下和甚至更優(yōu)選1微摩爾或1微摩爾給藥時(shí)，TRPA1拮抗劑抑制至 少95%的TRPAl-介導(dǎo)的電流或TRPAl-介導(dǎo)的離子流。
在某些實(shí)施方案中，主題TRPA1拮抗劑以低于其抑制TRPV5， TRPV6， NaV 1.2， TRPV1，線粒體單向轉(zhuǎn)運(yùn)體和hERG通道活性中的一
種或多種的ICs。至少一個(gè)數(shù)量級且甚至更優(yōu)選低于其兩個(gè)乃至三個(gè)數(shù)
量級的ICs。抑制TRPA1。
在某些實(shí)施方案中，主題TRPA1拮抗劑對抑制TRPA1活性的選擇
性是對抑制TRPV5， TRPV6， NaV 1. 2， TRPV1，線粒體單向轉(zhuǎn)運(yùn)體或hERG 通道活性至少10， 20, 30, 40或50倍。換句話說，該拮抗劑抑制TRPA1 活性(TRPA1中一種或多種功能)的功效是上述通道中的一種或多種 10， 20， 30， 40或50倍。
在某些實(shí)施方案中，主題TRPA1拮抗劑以比其對AMPA受體的Ki 更有效至少一個(gè)數(shù)量級的ICs。抑制TRPA1。在某些實(shí)施方案中，主題 TRPA1拮抗劑以比其對AMPA受體的Ki更有效至少兩個(gè)數(shù)量級或乃至 三個(gè)數(shù)量級或四個(gè)數(shù)量級的ICs。抑制TRPA1。在某些實(shí)施方案中，主 題TRPA1拮抗劑并非明顯地結(jié)合AMPA受體。換句話說，主題拮抗劑以 特定的ICs。抑制TRPA1，并且在以該濃度給藥時(shí)，該拮抗劑并非明顯 地結(jié)合AMPA受體(例如，特異性和明顯地結(jié)合AMPA受體)。在某些實(shí) 施方案中，本發(fā)明的化合物以比其對AMPA受體的Ki更有效的ICsq抑 制TRPAl-介導(dǎo)的電流。在這類實(shí)施方案中，主題TRPA1抑制劑減輕疼 痛的能力由此不依賴于結(jié)合和調(diào)節(jié)涉及接受神經(jīng)性疼痛的(a-氨基 -3-羥基-5-甲基-4-異喁唑丙酸(AMPA)受體。
在某些實(shí)施方案中，TRPA1拮抗劑以低于其抑制TRPV1的ICs。至 少一個(gè)數(shù)量級的，甚至更優(yōu)選兩個(gè)或乃至低于其三個(gè)數(shù)量級的ICs。抑 制TRPA1。在某些實(shí)施方案中，基于具有大于IO微摩爾的TRPV1抑制 的ICs。選擇對TRPA1比對TRPV1具有選擇性的主題TRPA1拮抗劑。
在某些實(shí)施方案中，TRPA1拮抗劑以IO微摩爾或IO微摩爾以下 的ICs。抑制TRPV2， TRPV4， TRPV3和/或TRPM8中的一種或多種。
在某些實(shí)施方案中，TRPA1拮抗劑具有的使用所述化合物治療所 述疾患的治療指數(shù)(T. I.)為10或IO以上且甚至更優(yōu)選具有的T. I.至 少為25， 50或乃至100。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，TRPA1抑制劑具有TRPA1抑制的IC5。，在該 濃度下，它不會(huì)導(dǎo)致患者的QT間隔延長，也不會(huì)改變患者的溫度調(diào)節(jié)。
在某些實(shí)施方案中，TRPA1抑制劑用于治療或改善疼痛?？梢允?用TRPA1抑制劑治療的典型類型的疼痛包括，但不限于傷害性疼痛， 炎性疼痛和神經(jīng)性疼痛?？梢杂肨RPA1抑制劑治療的疼痛可以為慢性
或急性的。
在某些實(shí)施方案中，TRPA1抑制劑用于治療或改善失禁癥狀。
在某些實(shí)施方案中，TRPA1抑制劑為非鎮(zhèn)靜劑且?guī)缀鯖]有或無鎮(zhèn) 靜副作用。在某些其它實(shí)施方案中，TRPA1抑制劑可以以少于鎮(zhèn)靜疼 痛緩解劑的副作用用于治療或改善疼痛。在TRPV3抑制劑的有效劑量 下基本上不存在的典型副作用包括眼球突出，僵直性昏厥，腸能動(dòng)性 破壞和身體非損傷區(qū)域中的感覺抑制中的一種或多種。
在某些實(shí)施方案中，用于治療本文披露的疾病或適應(yīng)征中的任意 種的TRPAl抑制劑具有本文披露的結(jié)構(gòu)或功能特征中的 一種或多種。
在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了治療或預(yù)防涉及TRPA1活化的 疾患或降低的TRPA1活性能減輕其嚴(yán)重性的疾患的方法，包括給予有 效量的式I的化合物，或其鹽，或該化合物或其鹽的溶劑合物，水合 物，氧化代謝物或前體藥物
其中
W表示0或S，優(yōu)選S;
R每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地表示H或低級烷基，優(yōu)選H;
r表示取代或未被取代的烷基，或取代或未被取代的芳基； E表示羧酸(C02H)，酯或酰胺；且 Ar表示取代或未被取代的芳基環(huán)；且
其中所述的化合物以10微摩爾或10微摩爾以下的ICs。抑制 TRPA1。
在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了治療或預(yù)防涉及TRPA1活化或 降低的TRPA1活性能減輕其嚴(yán)重性的疾患的方法，包括給予有效量的 式II的化合物，或其鹽，或該化合物或其鹽的溶劑合物，水合物，氧 化代謝物或前體藥物
<formula>formula see original document page 29</formula>
其中n為1 - 3的整數(shù)；且 Rz表示取代基；且
其中所述的化合物以10微摩爾或10微摩爾以下的ICs。抑制 TRPA1。
在某些實(shí)施方案中，R2表示任選取代的烷基，任選取代的芳基， 任選取代的雜芳基，任選取代的芳烷基，任選取代的環(huán)烷基，任選取 代的雜環(huán)基或任選取代的雜芳烷基。
1
在某些實(shí)施方案中，當(dāng)n-l時(shí)，R2不為 <formula>formula see original document page 29</formula>在 某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了治療或預(yù)防涉及TRPA1活化或降低的 TRPA1活性能減輕其嚴(yán)重性的疾患的方法，包括給予有效量的式III 的化合物，或其鹽，或該化合物或其鹽的溶劑合物，水合物，氧化代 謝物或前體藥物<formula>formula see original document page 29</formula>其中
n為1-3的整數(shù)；且 R2表示取代基；且 其中所述的化合物以10微> TRPA1。
爾或10微摩爾以下的ICs。抑制
在某些實(shí)施方案中，R2表示任選取代的烷基，任選取代的芳基，
任選取代的雜芳基，任選取代的芳烷基，任選取代的環(huán)烷基，任選取 代的雜環(huán)基或任選取代的雜芳烷基。
在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了治療或預(yù)防涉及TRPA1活化或 降低的TRPA1活性能減輕其嚴(yán)重性的疾患的方法，包括給予有效量的 式IV的化合物，或其鹽，或該化合物或其鹽的溶劑合物，水合物，氧 化代謝物或前體藥物
其中
l每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地表示H或低級烷基； R2的一次出現(xiàn)不存在且R2的一次出現(xiàn)為MmR3; R3表示取代或未被取代的芳基；
M每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地表示取代或未被取代的亞甲基(例如用低級 烷基，氧代，羥基等取代)，
NR:， 0， S， S(0)或S(02)，優(yōu)選進(jìn)行選擇，以便沒有兩個(gè)雜原子 是彼此連接的；且
m為0-10的整數(shù)；且
其中所述的化合物以IO微摩爾或其以下的ICs。抑制TRPAl介導(dǎo)的 電流。
在某些實(shí)施方案中，NUl3表示 x ，其中n為0-4的整 數(shù)；且
X為-C(-O)O-或-C(=0)NR4-，其中R4為H或低級烷基，優(yōu)選 -C (=0)NH-。
本發(fā)明的一個(gè)方面提供了適用于人類患者或獸類應(yīng)用的藥物制 劑，其包含有效量的如上所示化合物中的任意種(例如式I，式II,式
in或式iv的化合物，或其鹽，或該化合物或其鹽的溶劑合物，水合
物，氧化代謝物或前體藥物)和一種或多種藥學(xué)上可接受的賦形劑。在
某些實(shí)施方案中，該藥物制劑可以用于治療或預(yù)防涉及TRPA1活化或 降低的TRPA1活性能減輕其嚴(yán)重性的疾患。在某些實(shí)施方案中，該藥 物制劑具有適用于人類患者或獸類應(yīng)用的足夠低的熱原活性。在某些 實(shí)施方案中，該藥物制劑包含有效量的如上所示化合物中的任意種， 其中該化合物以IO微摩爾或IO微摩爾以下的ICs。抑制TRPA1 (例如， TRPAl-介導(dǎo)的電流和/或TRPAl-介導(dǎo)的離子流)。在某些實(shí)施方案中， 該化合物以5微摩爾或5微摩爾以下，2微摩爾或2微摩爾以下，1 微摩爾或1微摩爾以下的IC5。，或乃至500 nM或500 nM以下，250 nM 或250 nM以下，200 nM或200 nM以下，或乃至100 nM或100 nM以 下的ICs。抑制TRPA1。
在某些實(shí)施方案中，用于本發(fā)明方法或藥物制劑的TRPA1抑制劑 選自表1-2中所示的化合物。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明關(guān)注表l-2 中所示任意化合物在本發(fā)明的任何方法或藥物制劑中的應(yīng)用。
本發(fā)明的TRPA1拮抗劑可以用作預(yù)防或治療各種病癥和疾患的組 成部分，所示的病癥和疾患包括，但不限于急性和/或慢性痛，觸摸敏 感性，灼傷，炎癥，糖尿病性神經(jīng)病，銀屑病，濕疹，皮炎，皰疹后 神經(jīng)痛(帶狀皰滲)，偏頭痛，失禁，發(fā)熱，熱潮紅，骨關(guān)節(jié)炎，口腔 粘膜炎，癌性痛，膀胱炎，與克羅恩病和腸易激綜合征(IBS)相關(guān)的疼 痛，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，格-巴綜合征(更熟知為灼熱足綜合征)，口灼傷 綜合征(BMS)和咳嗽；或本發(fā)明的TRPA1拮抗劑可以用作促進(jìn)或抑制患 者毛發(fā)生長的脫毛藥?？梢允褂帽景l(fā)明TRPA1拮抗劑治療的其它典型 疾病或疾患在本說明書中詳細(xì)描述。本發(fā)明關(guān)注具有本說明書中提供 的任何結(jié)構(gòu)的化合物在治療或減輕本申請中披露的疾病或疾患的癥狀 中的應(yīng)用。本發(fā)明進(jìn)一步關(guān)注具有本說明書中提供的任何結(jié)構(gòu)的化合 物在制備治療或減輕本說明書中提供的任何疾病或疾患癥狀的藥劑或 藥物制劑中的應(yīng)用?？梢詫⒂糜谥委熖囟膊』蚣不嫉幕衔锱渲瞥?可通過適合于特定疾病或疾患的途經(jīng)給藥。
可以單獨(dú)或與其它治療劑一起給予TRPA1拮抗劑。例如，將TRPA1
拮抗劑與抗炎藥，抗痤瘡藥，抗皺紋藥，抗瘢痕形成藥，抗牛皮癬藥， 抗增殖藥，抗真菌藥，抗病毒藥，殺菌劑，抗偏頭痛藥，角質(zhì)層分離 劑或毛發(fā)生長抑制劑中的 一種或多種共同給藥。
可以通過局部，口服，透皮，直腸，陰道，非腸道，鼻內(nèi)，目艮內(nèi)，
靜脈內(nèi)，肌內(nèi)，動(dòng)脈內(nèi)，鞘內(nèi)，嚢內(nèi)，B匡內(nèi)，心內(nèi)，皮內(nèi)，腹膜內(nèi)， 經(jīng)氣管，皮下，表皮下，關(guān)節(jié)內(nèi)，嚢下，蛛網(wǎng)膜下，脊柱內(nèi)，胸骨內(nèi) 或通過吸入給予TRPA1拮抗劑。
在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，通過局部給予TRPA1拮抗劑。 在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，通過口服給予TRPA1拮抗劑。 在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，通過非腸道給予TRPA1拮抗劑。 在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，給予TRPA1拮抗劑以便預(yù)防，治療或 緩解急性痛，慢性痛，觸摸敏感性，瘙癢敏感性的體征和癥狀或作為 治療灼傷，諸如，例如術(shù)后痛，癌性痛或神經(jīng)性疼痛的組成部分。
在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，給予TRPA1拮抗劑以便預(yù)防，治療或 緩解偏頭痛的體征和癥狀。
在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，給予TRPA1拮抗劑以便預(yù)防，治療或 緩解病癥或疾患的體征和癥狀，所示的病癥或疾患選自糖尿病性神經(jīng) 病，炎癥，銀屑病，濕滲，皮炎，皰疹后神經(jīng)痛(帶狀皰疹)，失禁， 尿失禁，發(fā)熱，熱潮紅，胰腺炎，慢性區(qū)域性疼痛綜合征，法布里 (Fabray，s)病和咳嗽。
在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，給予TRPA1拮抗劑以便預(yù)防，治療或 緩解骨關(guān)節(jié)炎的體征和癥狀。
在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，給予TRPA1拮抗劑以便預(yù)防，治療或 緩解類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的體征和癥狀。
在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，給予TRPA1拮抗劑以便預(yù)防，治療或 緩解口腔粘膜炎的體征和癥狀。
在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，給予TRPA1拮抗劑以便促進(jìn)患者毛發(fā) 生長的缺失或抑制。
本發(fā)明的另一個(gè)方面涉及TRPA1拮抗劑，例如，以l微摩爾或l
微摩爾以下的I C5。抑制內(nèi)向TRP Al -介導(dǎo)的電流的小分子活性劑在制備 預(yù)防，治療或緩解患者的涉及TRPA1活化或降低的TRPA1活性能減輕 其嚴(yán)重性的疾病，病癥或疾患癥狀的藥劑中的應(yīng)用。
本發(fā)明在另一個(gè)方面中涉及藥物制劑，其包含以1微摩爾或1微 摩爾以下的I C5。抑制內(nèi)向TRP A1 -介導(dǎo)的電流的活性劑和藥學(xué)上可接受
的賦形劑或溶劑，其中以提供有效預(yù)防，治療或緩解患者涉及TRPA1 活化或降低的TRPA1活性能減輕其嚴(yán)重性的疾病，病癥或疾患癥狀的 用量的劑型提供該活性劑。在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，該藥物制劑不 會(huì)導(dǎo)致患者QT間隔延長。
在某些例證性實(shí)施方案中，所述的藥物制劑包含以其低于其抑制 NaV 1.2功能，TRPV1功能，TRPV5功能，TRPV6功能，線粒體單向轉(zhuǎn) 運(yùn)體功能和HERG功能的ICs。至少一個(gè)數(shù)量級的ICs。抑制TRPA1-介導(dǎo) 的電流的活性劑和藥學(xué)上可接受的賦形劑或溶劑，其中以提供有效預(yù) 防，治療或緩解患者涉及TRPA1活化或降低的TRPA1活性能減輕其嚴(yán) 重性的疾病，病癥或疾患癥狀的用量的劑型提供該活性劑，但不會(huì)導(dǎo) 致患者QT間隔延長。
在另一個(gè)例證性實(shí)施方案中，所述的藥物制劑包含以l微摩爾或 l微摩爾以下的ICs。抑制TRPA1-介導(dǎo)的電流的活性劑和藥學(xué)上可接受 的賦形劑或溶劑，其中以提供有效預(yù)防，治療或緩解患者涉及TRPA1 活化或降低的TRPA1活性能減輕其嚴(yán)重性的疾病，病癥或疾患癥狀的 用量的劑型提供該活性劑，該藥物制劑不會(huì)導(dǎo)致患者QT間隔延長。
一種優(yōu)選的制劑為用于降低皮膚或粘膜中TRPA1活性的局部用制 劑，它包含以l微摩爾或l微摩爾以下的ICs。抑制TRPAl-介導(dǎo)的電流 的活性劑。
另一種優(yōu)選的制劑為可除去的貼劑或繃帶，其包含(i)聚合物 基質(zhì)；和(ii)以1微摩爾或1微摩爾以下的IC5。抑制TRPAl-介導(dǎo)的 電流的活性劑。
另一種例證性制劑為用于局部施用于動(dòng)物受試者的皮膚剝脫組合 物，其包含局部用載體； 一種或多種皮膚剝脫組分，它們選自羧酸，
酮基酸，oc-羥基酸，p-羥基酸，維生素a酸類，過氧化物和有機(jī)醇類， 所述的一種或多種皮膚剝脫組分以至少約12%重量的總量包含并且能 夠?qū)λ鍪茉囌哒T導(dǎo)皮膚刺激和進(jìn)行皮膚剝脫；和以1微摩爾或1微 摩爾以下的ICs。抑制TRPA1-介導(dǎo)的電流的活性劑，在施用于皮膚時(shí)以 有效止痛，抗刺激和/或抗炎作用的用量提供該活性劑。
另一個(gè)實(shí)施方案為用于口服給藥的鎮(zhèn)咳組合物，其包含以l微摩 爾或l微摩爾以下的ICs。抑制兩種TRPAl-介導(dǎo)的電流的活性劑和口服 可接受的基于水的液體或可溶于嘴中的固體形式的藥用載體，該組合 物選自糖漿劑，酏劑，混懸液，噴霧劑，錠劑，咀嚼錠劑，粉末和咀 嚼片。這類鎮(zhèn)咳組合物可以包括一種或多種另外的用于治療咳嗽，過 敏反應(yīng)或哮喘癥狀的活性劑，它們選自抗組胺藥，5-脂氧合酶抑制 劑，白細(xì)胞三烯抑制劑，H3抑制劑，臺-腎上腺素能受體激動(dòng)劑，黃嘌 呤衍生物，a-腎上腺素能受體激動(dòng)劑，肥大細(xì)胞穩(wěn)定劑，祛痰藥，NK1， NK2和NK3速激肽受體拮抗劑和GABAB激動(dòng)劑。
另一個(gè)實(shí)施方案為可計(jì)量劑量的氣溶膠配藥器，包括用于肺部或 鼻部遞送的氣溶膠藥物組合物，該組合物包含以l微摩爾或其以下的 ICs。抑制TRPA1介導(dǎo)的電流的活性劑。例如，它可以為計(jì)量劑量的吸 入器，干粉吸入器或空氣噴射噴霧器。
另一個(gè)實(shí)施方案為用于眼部給藥的眼用軟骨或滴眼液。這類眼用 組合物可以用于治療或緩解眼部疼痛，包括因眼部磨損或術(shù)后痛多種 的眼部疼痛。
本發(fā)明在另 一個(gè)方面中關(guān)注本發(fā)明的任何TRPA1抑制劑，包括具 有本文披露特征中的一種或多種的抑制劑可以用于抑制TRPA1功能， 例如TRPAl-介導(dǎo)的電流和/或TRPA1-介導(dǎo)的離子流。在某些實(shí)施方案 中，所述的化合物可以用于在體外，例如在培養(yǎng)細(xì)胞中抑制TRPA1介 導(dǎo)的電流。在某些實(shí)施方案中，所述的化合物可以用于在體內(nèi)抑制 TRPA1介導(dǎo)的電流。在某些實(shí)施方案中，所述的化合物內(nèi)向和外向 TRPAl-介導(dǎo)的電流。在某些實(shí)施方案中，所述的化合物在體外，例如 在培養(yǎng)細(xì)胞中抑制TRPA1介導(dǎo)的離子流。在某些實(shí)施方案中，所述的
化合物在體內(nèi)抑制TRPA1介導(dǎo)的流量。
本發(fā)明關(guān)注具有上述或下述特征的任意組合和本文所述TRPA1拮 抗劑的結(jié)構(gòu)或功能特征的任意組合的TRPA1拮抗劑的藥物制劑和應(yīng) 用。任何這類拮抗劑或制劑可以用于治療本文所述的任何疾病或疾患。 任何這類拮抗劑或制劑可以用于抑制TRPA1功能，例如TRPAl-介導(dǎo)的 電流和/或TRPAl-介導(dǎo)的離子流。
附圖詳細(xì)描述
圖la和lb概括了表示TRPA1拮抗劑在減輕緩激肽疼痛模型中的 疼痛癥狀中的功效的實(shí)驗(yàn)。
圖2概括了表示TRPA1拮抗劑在減輕福爾馬林疼痛模型中的疼痛 中的功效的實(shí)驗(yàn)。
圖3a和3b概括了表示TRPA1拮抗劑在減輕角叉菜膠誘導(dǎo)的炎癥 中的功效的實(shí)驗(yàn)。
圖4概括了表示TRPA1拮抗劑在減輕CFA疼痛模型中的疼痛中的 功效的實(shí)驗(yàn)。圖4中所示的結(jié)果還表明TRPA1拮抗劑的作用對受損的 爪而言是特異性的。
表的詳細(xì)描述
表1提供了具有作為在膜片箝實(shí)驗(yàn)中評價(jià)的體外活性的典型式I 化合物。該表還包括表示各種測試化合物抑制TRPA1活性與其它離子 通道活性的比較的特異性的數(shù)據(jù)。在膜片箝中評價(jià)了對其它離子通道 的對比數(shù)據(jù)。
表2提供了具有作為在膜片箝實(shí)驗(yàn)中評價(jià)的體外活性的典型式H 化合物。該表還包括表示各種測試化合物抑制TRPA1活性與其它離子 通道活性的比較的特異性的數(shù)據(jù)。在膜片箝中評價(jià)了對其它離子通道 的對比數(shù)據(jù)。表現(xiàn)為以低于500 nM的ICs。抑制TRPA1介導(dǎo)的電流的化 合物中的至少兩種以低于200 nM的ICs。抑制TRPA1介導(dǎo)的電流。表現(xiàn) 為以低于500 nM的ICs。抑制TRPA1介導(dǎo)的電流的化合物中的至少一種
以低于100 nM的ICs。抑制TRPA1介導(dǎo)的電流。 發(fā)明詳述
細(xì)胞動(dòng)態(tài)平衡是涉及離子流和膜電位調(diào)節(jié)等的調(diào)節(jié)系統(tǒng)的總和結(jié) 果。細(xì)胞動(dòng)態(tài)平衡至少部分因離子通過質(zhì)膜進(jìn)入和離開細(xì)胞和通過胞 內(nèi)細(xì)胞器膜在細(xì)胞內(nèi)運(yùn)動(dòng)而實(shí)現(xiàn)，所述的胞內(nèi)細(xì)胞器包括，例如內(nèi)質(zhì) 網(wǎng)，肌質(zhì)網(wǎng)，線粒體和胞吞細(xì)胞器，包括內(nèi)顆粒和溶酶體。
離子通過細(xì)胞膜的運(yùn)動(dòng)通過專門的蛋白質(zhì)來進(jìn)行。TRP通道為起
有助于調(diào)節(jié)離子流和膜電位功能的一大族非選擇性陽離子通道。將 TRP通道亞分成6個(gè)亞族，包括TRPA(ANKTM1)家族。TRPA1為TRP通 道的TRPA類中的成員。
非選擇性陽離子通道，諸如TRPA1調(diào)節(jié)通過細(xì)胞膜的鈣和鈉離子。 鈉和鉤流入導(dǎo)致細(xì)胞去極化。這增加了電壓控制的離子通道達(dá)到活化 所需閾值的可能性。作為結(jié)果，非選擇性陽離子通道活化可以增加電 興奮性和增加電壓依賴性事件的頻率。電壓依賴性事件包括，但不限 于神經(jīng)元?jiǎng)幼麟娢唬呐K動(dòng)作電位，平滑肌收縮，心肌收縮和骨駱肌 收縮。
非選擇性陽離子通道，諸如TRPA1活化導(dǎo)致的鈣流入還政變了胞 內(nèi)游離4丐濃度。釣為細(xì)胞內(nèi)遍在的第二信使分子。因此，胞內(nèi)鈣水平 的改變對信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和基因表達(dá)具有顯著作用。因此，非選擇性陽離子 通道，諸如TRPA1活化導(dǎo)致基因表達(dá)和細(xì)胞表型改變。基因表達(dá)事件 包括，但不限于編碼細(xì)胞表面受體，離子通道和激酶的mRNAs產(chǎn)生。 這些基因表達(dá)的改變可以在該細(xì)胞中產(chǎn)生超興奮性。TRPA1阻滯劑由 此還具有減輕或預(yù)防疼痛和/或減少膀胱活動(dòng)過度的潛能。
TRPA1蛋白質(zhì)為受體操作的在感覺神經(jīng)元中表達(dá)的通道(例如，參 見Jordt等(2004) Nature 427: 260-265)，包括因存在于背根神經(jīng)節(jié)， 三叉神經(jīng)節(jié)和結(jié)節(jié)性神經(jīng)節(jié)中的細(xì)胞體產(chǎn)生的那些(參見Jordt等 (2004) Nature 427: 260-265， Nagata等(2005) J. Neurosci 25(16) 4052-61)。此外，低水平的TRPA1信息可以在某些類型的成纖維細(xì)胞
中找到(參見Jaquemar等(1999) JBC 274 (11): 7325-33)。還報(bào)導(dǎo)了 TRPA1在膀胱中表達(dá)。刺激大量胞外受體，包括，但不限于G-蛋白偶 聯(lián)受體或受體酪氨酸激酶足以活化TRPA1。
適用于本文提供的方法的TRPA1蛋白質(zhì)包括，例如人(分別由 SEQ ID NO: 2和SEQ ID NO: 4核苷酸序列編碼的SEQ ID NO: 1和 SEQ ID NO: 3氨基酸序列)和鼠(由SEQ ID NO: 6核苷酸序列編碼的 SEQ ID NO: 5氨基酸序列)。特定的TRPAl蛋白質(zhì)還包括由可以在嚴(yán) 格條件下與TRPAl序列(參見SEQ ID NO: 2)雜交的cDMs編碼的蛋白 質(zhì)。
TRPAl為對芥子油起響應(yīng)的離子通道。芥子油中的活性組分(異硫 氰酸烯丙酯)和大蒜中的活性組分(大蒜素)均能夠活化TRPAl。其它刺 激物也能夠活化TRPA1。據(jù)報(bào)導(dǎo)4 - 15 'C的嚴(yán)寒溫度活化TRPAl (參見 Story等,(2003) Cell 112 (6): 819-829)。然而，這一發(fā)現(xiàn)有爭論(參 見Jordt等(2004) Nature 427: 260-265; Nagata等(2005) J. Neurosci 25 (16): 4052-61)。此外，在對機(jī)械性刺激響應(yīng)的低等動(dòng)物中TRPAl 與TRP通道(即TRPN1，果蠅屬(Drosophila) TRPAl)共有許多結(jié)構(gòu)相 似性。
TRPAl在內(nèi)耳的毛細(xì)胞上皮等組織中表達(dá)，并且斑馬魚和小鼠中 這種通道的破壞抑制毛細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)。因此，在本領(lǐng)域中提出了 TRPAl作 為用于機(jī)械敏感性脊推動(dòng)物聽覺轉(zhuǎn)導(dǎo)通道的候選物(參見Corey等， (2004) Nature 432 (7018): 723-730)。如果這屬實(shí)，那么可以提示 TRPAl阻滯劑可以導(dǎo)致聽力損失且由此不具有任何作為治療劑的實(shí)際 應(yīng)用。然而，驚恐反應(yīng)在TRPAl基因敲除小鼠中基本上未受損的觀察 結(jié)果使得我們得出結(jié)論TRPAl拮抗劑不會(huì)損傷聽覺且由此可以成為 合適的藥物候選物。
調(diào)節(jié)TRPAl蛋白質(zhì)功能提供了調(diào)節(jié)該動(dòng)態(tài)平衡，鈉動(dòng)態(tài)平衡，膜 極化和/或胞內(nèi)鈣水平的方式，并且可以調(diào)節(jié)TRPAl功能的化合物在許 多方面是有用的，包括，但不限于維持鈣動(dòng)態(tài)平衡，調(diào)節(jié)胞內(nèi)鈣水平， 調(diào)節(jié)膜極化和治療或預(yù)防與鈣和/或鈉動(dòng)態(tài)平衡或生理紊亂相關(guān)的疾
病，病癥或疾患。
在某些方面中，本發(fā)明提供了使用以低于IO微摩爾的ICs。抑制 TRPA1 -介導(dǎo)的電流和/或TRPA1 -介導(dǎo)的離子流的小分子治療或改善疾 病和疾患的作用的方法。典型的合適的用于本發(fā)明任何方法的化合物 (例如，治療本文披露的任何疾病或疾患)包括具有本文公開的結(jié)構(gòu)或 功能特征中的一種或多種(例如，結(jié)構(gòu)，特異性，功效，溶解性等)的 化合物。本發(fā)明關(guān)注具有本文所述功能或結(jié)構(gòu)屬性中的一種或多種的 任何TRPA1拮抗劑的應(yīng)用。另外，本發(fā)明關(guān)注式I， II， III或IV的 TRPA1拮抗劑的應(yīng)用和表1和2中提供的任何特定拮抗劑的應(yīng)用。在 本申請的上下文中，如果特定的功能屬性歸因于TRPA1拮抗劑，那么 可以理解這類屬性可以表征在結(jié)構(gòu)上與式I， II， III或IV的化合物 相關(guān)或與之不同的TRPA1抑制劑。
在某些實(shí)施方案中，合適的化合物以低于IO微摩爾的ICs。抑制內(nèi) 向和/或外向TRPA1介導(dǎo)的電流。在某些實(shí)施方案中，合適的化合物另 外地或可選擇地以低于IO微摩爾的ICs。抑制TRPA1介導(dǎo)的離子流。例 如，可以在體外試驗(yàn)中計(jì)算IC5。。例如，可以一使用對電流的電生理學(xué) 測定，諸如標(biāo)準(zhǔn)膜片箝分析計(jì)算IC5。。還可以采用離子指示劑濃度或 流量的改變，諸如本文所述的鉤流量法評價(jià)IC5。。
在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了治療或預(yù)防涉及TRPA1活化或 降低的TRPA1活性能減輕其嚴(yán)重性的疾患的方法，包括給予有效量的 式I的化合物，或其鹽，或該化合物或其鹽的溶劑合物，水合物，氧 化代謝物或前體藥物
<formula>formula see original document page 38</formula>(I)
其中
W表示0或S，優(yōu)選S;
R每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地表示H或低級烷基，優(yōu)選H;
R'表示取代或未被取代的烷基或取代或未被取代的芳基； E表示羧酸(C(hH)，酯或酰胺；且 Ar表示取代或未被取代的芳基環(huán)；且
其中所述的化合物以10微摩爾或10微摩爾以下的ICs。抑制 TRPA1。
上述式中的化合物的實(shí)例包括<formula>formula see original document page 39</formula>
式I中化合物的另外實(shí)例如表1與其相應(yīng)的體外數(shù)據(jù)中所示。 在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了治療或預(yù)防涉及TRPA1活化或 降低的TRPA1活性能減輕其嚴(yán)重性的疾患的方法，包括給予有效量的 式II的化合物，或其鹽，或該化合物或其鹽的溶劑合物，水合物，氧 化代謝物或前體藥物<formula>formula see original document page 39</formula>
其中n為1 - 3的整數(shù)；且 l表示取代基；且
其中所述的化合物以10微摩爾或10微摩爾以下的ICs。抑制 TRPA1。
在某些實(shí)施方案中，R2表示任選取代的烷基，任選取代的芳基， 任選取代的雜芳基，任選取代的芳烷基，任選取代的環(huán)烷基，任選取 代的雜環(huán)基或任選取代的雜芳烷基。
在某些實(shí)施方案中，當(dāng)11=1時(shí)，R2不為
在某些實(shí)施方案中，式II的化合物對其TRPA1活性的選擇性是對 其激肽原酶抑制活性10倍。
式II化合物的實(shí)例包括，但不限于化合物200-204， 206-243， 245-255， 257—282， 284-287， 289-290， 294-295， 298， 304-306, 308-310， 312-313， 316-317, 319, 321, 323, 325-326， 330， 332-333， 335， 337-341， 343-386， 389-390， 395-398和400-409，正如表2 與其體外數(shù)據(jù)中所示。
在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了治療或預(yù)防涉及TRPA1活化或 降低的TRPA1活性能減輕其嚴(yán)重性的疾患的方法，包括給予有效量的 式III的化合物，或其鹽，或該化合物或其鹽的溶劑合物，水合物， 氧化代謝物或前體藥物
其中
n為1 - 3的整數(shù)；且 R2表示取代基；且
其中所述的化合物以10微摩爾或10微摩爾以下的ICs。抑制 TRPA1。
在某些實(shí)施方案中，R2表示任選取代的烷基，任選取代的芳基， 任選取代的雜芳基，任選取代的芳烷基，任選取代的環(huán)烷基，任選取 代的雜環(huán)基或任選取代的雜芳烷基。
在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了治療或預(yù)防涉及TRPA1活化或 降低的TRPA1活性能減輕其嚴(yán)重性的疾患的方法，包括給予有效量的
式IV的化合物，或其鹽，或該化合物或其鹽的溶劑合物，水合物，氧 化代謝物或前體藥物
其中
Ri每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地表示H或低級烷基；
R2的一次出現(xiàn)為不存在且R2的一次出現(xiàn)為MmR3;
R3表示取代或未被取代的芳基；
M每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地表示取代或未被取代的亞曱基(例如用低級 烷基，氧代，羥基等取代)，NRi， 0， S， S(O)或S(O》，優(yōu)選進(jìn)行選擇， 以便沒有兩個(gè)雜原子是彼此連接的；且
m為0-10的整數(shù)；且
其中所述的化合物以IO微摩爾或其以下的ICs。抑制TRPA1。 在某些實(shí)施方案中，NU3表示、x ，其中n為0-4的整數(shù)；
且
X為-C(-0)0-或-C(-O)NR廣，其中R4為H或低級烷基，優(yōu)選 -C (=0)NH-。
在某些實(shí)施方案中，式IV的化合物對其TRPA1活性的選擇性是對 其激肽原酶抑制活性10-倍。
式IV化合物的實(shí)例包括，但不限于化合物200-202， 204， 207-210， 212-215, 217， 219-224, 226-229， 231， 236-238， 240， 245-254， 256-268， 273, 275-277， 280-286， 288， 290-306， 309-311, 313-316， 318-320， 322， 324-331， 333-334， 336-338， 342, 344-347， 350-351， 353-355， 358- 366， 371， 373-375， 377, 379-380和383-409，正 如表2與其體外數(shù)據(jù)中所示。
本發(fā)明的一個(gè)方面提供了適用于人類患者或獸類應(yīng)用的藥物制 劑，其包含有效量的如上所示化合物中的任意種(例如式I，式II，式
III或式IV的化合物，或其鹽，或該化合物或其鹽的溶劑合物，水合
物，氧化代謝物或前體藥物)和一種或多種藥學(xué)上可接受的賦形劑。在
某些實(shí)施方案中，該藥物制劑可以用于治療或預(yù)防涉及TRPA1活化或 降低的TRPA1活性能減輕其嚴(yán)重性的疾患。在某些實(shí)施方案中，該藥 物制劑具有適用于人類患者或獸類應(yīng)用的足夠低的熱原活性。在某些 實(shí)施方案中，該藥物制劑包含有效量的如上所示化合物中的任意種， 其中該化合物以IO微摩爾或IO微摩爾以下的ICs。抑制TRPA1。在某 些實(shí)施方案中，所述的藥物制劑包含該化合物，其以l微摩爾或l微 摩爾以下的IC5。，或乃至500 nM或500 nM以下，250 nM或250 nM 以下，200 nM或200 nM以下，或乃至100 nM或100 nM以下的IC50 抑制TRPA1。
在某些實(shí)施方案中，用于本發(fā)明方法或藥物制劑的TRPA1抑制劑 選自表1-2中所示的化合物。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明關(guān)注表1-2 中所示任意化合物在本發(fā)明的任何方法或藥物制劑中的應(yīng)用。
本發(fā)明的一個(gè)方面提供了 TRPA1抑制劑在制備治療或預(yù)防涉及 TRPA1活化或降低的TRPA1活性能減輕其嚴(yán)重性的疾患的藥劑中的應(yīng) 用，其中所述的TRPA1抑制劑由如上所示的任意化合物表示(例如式I, 式II，式III或式IV的化合物，或其鹽，或該化合物或其鹽的溶劑 合物，水合物，氧化代謝物或前體藥物)。在某些實(shí)施方案中，所述的 化合物以低于IO微摩爾的ICs。抑制TRPA1介導(dǎo)的電流。
在上述式的某些實(shí)施方案中，取代的取代基可以被如下基團(tuán)中的 一個(gè)或多個(gè)取代烷基，鏈烯基，炔基，環(huán)烷基，雜環(huán)基，芳基，雜 芳基，環(huán)烷基烷基，雜環(huán)基烷基，芳烷基或雜芳烷基，它們中任一自 身可以進(jìn)一步被取代，或卣素，羥基，羰基(例如，酯，羧基或曱?；?， 硫羰基(例如，硫酯，硫代羧酸酯或硫代甲酸酯)，酮，醛，氨基，酰 基氨基，酰氨基，脒基，氰基，硝基，疊氮基，磺酰基，亞砜基，硫 酸酯，磺酸酯，氨磺?；?，磺酰氨基和磷酰基。
表1和2中提供了典型化合物。表1中概括了對各種測試化合物 釆集的數(shù)據(jù)。表1提供了抑制TRPA1介導(dǎo)的電流的ICs。數(shù)據(jù)。表1還
提供了選擇性數(shù)據(jù)，如果可利用，那么表明某些化合物還抑制其它離 子通道的程度。另外，注意到表1中表示的化合物具有不同程度的抑
制TRPA1的選擇性。表2提供了抑制TRPA1介導(dǎo)的電流的ICs。數(shù)據(jù)。 表2還提供了選擇性數(shù)據(jù)，如果可利用，那么表明某些化合物還抑制 其它離子通道的程度。注意到表2中表示的化合物中以500 nM或500 nM以下的ICs。抑制TRPA1介導(dǎo)的電流的至少兩種以200 nM或200 nM 以下的IC5。抑制TRPA1介導(dǎo)的電流。此外，表2中表示的化合物中以 500 nM或500 nM以下的ICs。抑制TRPA1介導(dǎo)的電流的至少一種以100 nM或100 nM以下的ICs。抑制TRPA1介導(dǎo)的電流。另外，注意到表2 中表示的化合物對抑制TRPA1具有不同程度的選擇性。
在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明關(guān)注可以給予表1或2中所示的具體 化合物以便治療本文披露的任何疾病或疾患。在某些實(shí)施方案中，在 給藥前將所述的化合物配制成藥物制劑。在某些實(shí)施方案中，用于本 發(fā)明方法或藥物制劑的TRPA1抑制劑選自表1或2中所示的化合物。 在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明關(guān)注如表1或2中所示的任意化合物在本 發(fā)明方法或藥物制劑中的應(yīng)用。
本文披露的具體化合物和結(jié)構(gòu)式僅為典型的。類似地關(guān)注具有本 文所述功能或結(jié)構(gòu)特征中的一種或多種的小分子TRPA1抑制劑的應(yīng) 用。
上述任何結(jié)構(gòu)的化合物可以用于制備治療本文披露的任何疾病的 藥劑。
上述任何結(jié)構(gòu)的化合物可以用于體外或體內(nèi)抑制TRPA1通道功能。
在某些實(shí)施方案中，包括任何上述結(jié)構(gòu)的所用或功能部分的化合 物可以用于制備治療本文披露的任何疾病的藥劑。另外或可選擇地， 這類化合物可以在體外或體內(nèi)用于抑制TRPA1功能，諸如TRPAl-介導(dǎo) 的電5危的方法。
在某些實(shí)施方案中，用于本發(fā)明方法的TRPA1拮抗劑為并非氨基 糖甙的小分子。
在具體的實(shí)施方案中，為應(yīng)用選擇小分子TRPA1拮抗劑，因?yàn)樗?對一種TRP同種型比對另一種更具有選擇性，例如，對TRPA1的選擇 性是對TRPC6, TRPV5, TRPV6， TRPM8， TRPV1, TRPV2， TRPV4和/或 TRPV3中的一種或多種IO倍且更優(yōu)選至少20， 40， 50， 60, 70， 80 或至少100或乃至1000倍。在其它實(shí)施方案中，例如，差別越小，則 它抑制TRPA1比抑制TRPM8， TRPV1， TRPV2， TRPV3和/或TRPV4更強(qiáng) 烈，優(yōu)選更強(qiáng)烈至少2倍，3倍，5倍或乃至10倍。例如，可以通過 比較I"值進(jìn)行這類比較。
在具體的實(shí)施方案中，為應(yīng)用選擇小分子TRPA1拮抗劑，因?yàn)樗?對一種TRPA1同種型比對其它非TRP離子通道更具有選擇性，例如， 對TRPA1的選擇性是對NaVl. 2， Cavl.2， Cav3. 1， HERG和/或線粒體 單向轉(zhuǎn)運(yùn)體中的一種或多種IO倍且更優(yōu)選至少20， 40， 50, 60， 70， 80或至少IOO或乃至IOOO倍。在其它實(shí)施方案中，例如，差別越小， 則它抑制TRPA1比抑制NaVl. 2， Cavl.2， Cav3.1， HERG和/或線粒體 單向轉(zhuǎn)運(yùn)體更強(qiáng)烈，優(yōu)選更強(qiáng)烈至少2倍，3倍，5倍或乃至10倍。 例如，可以通過比較ICs。值進(jìn)行這類比較。
在某些實(shí)施方案中，選擇TRPA1拮抗劑的化合物，以便對TRPA1 的選擇性拮抗超過其它離子通道，例如，該化合物對TRPA1活性的調(diào) 節(jié)比它對NaV1.2， Cavl.2, Cav3. 1， HERG和/或線粒體單向轉(zhuǎn)運(yùn)體中 的一種或多種活性的調(diào)節(jié)更強(qiáng)烈至少一個(gè)數(shù)量級，優(yōu)選更強(qiáng)烈至少兩 個(gè)數(shù)量級，甚至更優(yōu)選更強(qiáng)烈至少三個(gè)數(shù)量級。在某些實(shí)施方案中， 該化合物對TRPA1活性的調(diào)節(jié)比它對NaV1.2， Cavl.2， Cav3. 1， HERG 或線粒體單向轉(zhuǎn)運(yùn)體中的一種或多種活性的調(diào)節(jié)更強(qiáng)烈至少1.5個(gè)數(shù) 據(jù)級。例如，可以通過比較IC5。值進(jìn)行這類比較。
類似地，在具體的實(shí)施方案中，為應(yīng)用選擇小分子，因?yàn)樗狈?對一種或多種非TRPA1的靶標(biāo)的顯著活性。例如，該化合物可以具有 高于500 nM，高于1 pM或乃至高于10 (iM或100 ^tM的抑制TRPC6， TRPV5, TRPV6， Cavl. 2, Cav3. 1， NaVl. 2， HERG和線粒體單向轉(zhuǎn)運(yùn)體 中的一種或多種的IC5。。
在具體的實(shí)施方案中，為應(yīng)用選擇小分子，因?yàn)樗鼘σ环NTRP同 種型比對其它更具有選擇性，例如，對TRPAl的選擇性是對TRPC6， TRPV5， TRPV6, TRPM8， TRPV1， HERG， NaVl. 2，線粒體單向轉(zhuǎn)運(yùn)體， TRPV3和/或TRPV4中的一種或多種的10倍且更優(yōu)選至少100或乃至 IOOO倍。在其它實(shí)施方案中，例如，差別越小，則它抑制TRPA1比抑 制TRPM8, TRPV1和/或TRPV4更強(qiáng)烈，優(yōu)選更強(qiáng)烈至少2倍，3倍，5 倍或乃至10倍。例如，可以通過比較ICs。值進(jìn)行這類比較。
在某些實(shí)施方案中，為應(yīng)用選擇小分子，因?yàn)樗卓筎RPA1和 TRPM8， TRPH和/或TRPV3的功能。盡管這類化合物選擇性拮抗兩種 離子通道功能，但是IC5。值不需要相同。
在任意上述的某些實(shí)施方案中，可以選擇小分子，因?yàn)樗軌蛞?制受體介導(dǎo)的(或冷/應(yīng)激介導(dǎo)的)TRPA1活化。在某些實(shí)施方案中， TRPA1拮抗劑抑制受體介導(dǎo)的TRPA1活化和芥子油誘導(dǎo)的TRPA1活化。 在某些其它實(shí)施方案中，TRPA1拮抗劑抑制受體操縱的TRPA1活化， 但不會(huì)抑制芥子油誘導(dǎo)的TRPA1活化。在某些實(shí)施方案中，TRPA1拮 抗劑抑制芥子油誘導(dǎo)的TRPA1活化，但不會(huì)抑制冷介導(dǎo)的TRPA1活化。
在上述任意的某些實(shí)施方案中，可以選擇小分子，因?yàn)樗孕∮?或等于1 |iM，或乃至小于或等于700, 600， 500, 400, 300， 250， 200或100 nM的ICs。抑制TRPA1功能。在其它實(shí)施方案中，選擇小分 子，因?yàn)樗孕∮诨虻扔?5 nM，小于或等于50nM，或乃至小于或等 于25， 10， 5或lnM的ICs。抑制TRPA1功能。在上述任意的某些其它 實(shí)施方案中，所述的小分子以小于或等于IO微摩爾，或小于或等于5 微摩爾，或小于或等于2. 5微摩爾，或小于或等于1.5微摩爾的ICs。 抑制TRPA1功能。
在上述任意的某些實(shí)施方案中，可以基于抑制TRPA1功能的速率 選擇化合物小分子。在一個(gè)實(shí)施方案中，化合物在少于5分鐘，優(yōu)選 少于4, 3或2分鐘內(nèi)抑制TRPA1功能。在另一個(gè)實(shí)施方案中，化合物 在少于約1分鐘內(nèi)抑制TRPA1功能。在另一個(gè)實(shí)施方案中，化合物少 于約30秒內(nèi)抑制TRPA1功能。
在上述任意的某些實(shí)施方案中，TRPA1功能的小分子拮抗劑可以 抑制外向電流，內(nèi)向電流或這些電流中的一種或多種的任意的組合。 抑制上述電流中的一種以上的化合物可以以具有相同或不同ICs。值進(jìn) 行。在任意上述實(shí)施方案中，可以在體外或體內(nèi)評價(jià)化合物抑制特定 電流的能力?？梢詫⒃隗w外或體內(nèi)試驗(yàn)中抑制任意上述電流的化合物 表征為抑制TRPA1功能的化合物。所述的另一種方式，可以用本發(fā)明 化合物抑制的TRPA1的典型功能為TRPAl-介導(dǎo)的電流。另外或可選擇 地，可以用本發(fā)明化合物抑制的TRPA1功能為TRPA1介導(dǎo)的離子流。
在任意上述或下列實(shí)施方案中，小分子的特征在于與其它離子通 道相比的某些活性水平(例如，某些化合物對抑制TRPA1的選擇性且其 它化合物表現(xiàn)出對一種或多種其它離子特定的交叉反應(yīng)性水平)。當(dāng)小 分子的特征在于其對另一種離子通道的活性時(shí)，按照與定義TRPA1通 道功能類似的方式定義另一離子通道的功能或活性。因此，抑制另一 種離子通道的功能意旨，例如抑制另 一 離子通道介導(dǎo)的離子流或抑制 另一離子通道介導(dǎo)的電流。
在任意上述的某些實(shí)施方案中，抑制TRPA1功能意旨一種功能， 例如TRPA1介導(dǎo)的電流在存在有效量的化合物存在下比不存在該化合 物或比無效量化合物存在下下降50%以上。在某些其它實(shí)施方案中， 抑制TRPA1功能意旨一種功能，例如TRPA1介導(dǎo)的電流或TRPA1介導(dǎo) 的離子流在存在有效量的化合物存在下比不存在該化合物下下降至少 50%, 60%, 70%， 75%, 80%， 85%或90%。在其它實(shí)施方案中，抑制TRPA1 功能意旨一種功能，例如TRPA1介導(dǎo)的電流在存在有效量的化合物存 在下比不存在該化合物下下降至少92°/。， 95°/。， 97°/。， 98%, 99°/。或100%。
在任意上述的某些實(shí)施方案中，使用例如，膜片箝分析或標(biāo)準(zhǔn)釣 流量測定在體外測定ICs。值。用于基于鉤流量的ICs。估計(jì)的典型體外 方法描述在實(shí)施例1。用于獲得更確定ICs。測量值的描述在實(shí)施例2 中?？蛇x擇地，還可以計(jì)算電流或離子流的抑制％估計(jì)值并且用于評價(jià) 化合物作為抑制劑的功效。
不受理論約束，化合物可以通過共價(jià)結(jié)合或非共價(jià)結(jié)合到TRPA1
的部分上抑制TRPA1功能?？蛇x擇地，化合物可以例如，通過結(jié)合TRPAl 功能所必需的蛋白質(zhì)或非蛋白質(zhì)輔因子間接抑制TRPA1功能。本領(lǐng)域 技術(shù)人員易于理解抑制性化合物可以可逆或不可逆地結(jié)合TRPAl或其 輔因子。可逆結(jié)合TRPAl或其輔因子的化合物甚至可以在解離后持續(xù) 抑制TRPAl功能。
在任意上述的某些實(shí)施方案中，抑制TRPAl功能的化合物為小有 機(jī)分子或小無分子。典型的小分子包括，但不限于結(jié)合TRPAl通道和 抑制TRPAl通道的一種或多種功能的小分子。
在任意上述的某些實(shí)施方案中，TRPAl抑制劑用于治療或改善疼 痛。可以使用TRPAl抑制劑治療的典型疼痛類型包括，但不限于傷害 性疼痛，炎性疼痛和神經(jīng)性疼痛?？梢允褂肨RPAl抑制劑治療的疼痛 可以為慢性或急性的。在本說明書的上下文中，詳細(xì)討論了特征至少 部分在于疼痛的各種疾患和疾病。本發(fā)明關(guān)注可以使用本文所述的任 何TRPAl抑制劑治療與任意這些疾病或疾患相關(guān)的疼痛?？梢詫⒃撘?制劑配制成適合于指定給藥途徑的藥物制劑。
在某些實(shí)施方案中，TRPAl抑制劑為非麻醉藥并且?guī)缀鯖]有或無 麻醉副作用。在某些其它實(shí)施方案中，TRPAl抑制劑可以用于以低于 麻醉性疼痛緩解劑的副作用治療或改善疼痛。在TRPAl抑制劑有效劑 量下基本上不存在的典型副作用包括眼球突出，僵直性昏厥，腸能動(dòng) 性破壞和身體非損傷區(qū)域中的感覺抑制中的一種或多種。
在某些實(shí)施方案中，TRPAl抑制劑可以用于治療失禁。在某些實(shí) 施方案中，TRPAl抑制劑用于通過降低神經(jīng)支配膀胱的神經(jīng)元活性而 減少膀胱活動(dòng)過度。在某些實(shí)施方案中，失禁伴隨疼痛。例如，附帶 膀胱炎的失禁或附帶損傷的失禁可能伴隨疼痛。當(dāng)失禁伴隨疼痛時(shí)， 可以給予TRPAl抑制劑治療失禁并且減輕疼痛。
可以單獨(dú)使用或與其它藥物活性劑聯(lián)用主題TRPAl抑制劑。這類 其它藥物活性劑的實(shí)例包括，但不限于抗炎藥(例如，NSAIDS，緩激肽 受體拮抗劑，激素和自體有效物質(zhì)，諸如皮質(zhì)類固醇)，抗痤瘡藥(例 如維生素a酸類)，抗皺紋藥，抗瘢痕形成藥，抗失禁藥(諸如Ml-受 體拮抗劑)，止吐藥(諸如NK1拮抗劑)，抗牛皮癬藥，抗酸藥，抗增殖 藥(例如，抗?jié)駶B藥，抗癌藥)，抗真菌藥，抗病毒藥，防腐劑(例如抗 菌藥)，局部麻醉藥，抗偏頭痛藥，角質(zhì)層分離劑，毛發(fā)生長刺激劑， 毛發(fā)生長抑制劑和用于治療皮膚疾病或疾患的其它活性劑。某些活性 劑屬于一種以上類型。
就任意上述實(shí)施方案而言，可以為通過適合于所治療疾病或損傷 的途經(jīng)配制TRPA1抑制劑。例如，可以將TRPA1抑制劑配制成，例如， 口服透皮，局部，腹膜內(nèi)，靜脈內(nèi)，血管內(nèi)，鞘內(nèi)，心包內(nèi)，心肌內(nèi)， 皮下，直腸，陰道或尿道遞送。此外，可以為通過裝置遞送配制TRPA1 抑制劑。典型裝置包括，但不限于導(dǎo)管，金屬絲，支架或其它管腔內(nèi) 裝置。其它典型遞送裝置還包括貼劑，繃帶，護(hù)口器或牙具。
本發(fā)明關(guān)注任意上述TRPA1抑制劑的藥物組合物。用藥學(xué)上可接 受的載體配制典型藥物組合物。
主題TRPA1抑制劑可以單獨(dú)^使用或作為治療方案的組成部分與適 合于所治療特定疾病，疾患，損傷或病癥的其它治療，療法或干預(yù)聯(lián) 用。當(dāng)作為治療方案的組成部分時(shí)，本發(fā)明關(guān)注TRPA1抑制劑與下列 治療方式中的一種或多種的聯(lián)合應(yīng)用給予非-TRPA1抑制劑藥物，化 療，放療，順勢療法，膳食，應(yīng)激處理和手術(shù)。
在某些實(shí)施方案中，當(dāng)單獨(dú)或作為治療方案的組成部分給藥時(shí)， 本發(fā)明關(guān)注給予TRPA1抑制劑治療特定的原發(fā)性疾病，損傷，病癥或 疾患。另外地或可選擇地，本發(fā)明關(guān)注給予TRPA1抑制劑治療與疾病， 損傷，病癥或疾患相關(guān)的疼痛。在其它實(shí)施方案中，本發(fā)明關(guān)注給予 TRPA1抑制劑治療原發(fā)性疾病，損傷，病癥或疾患的繼發(fā)性癥狀。
本發(fā)明關(guān)注具有上述或下列特征的任意組合以及本文所述TRPA1 拮抗劑的結(jié)構(gòu)或功能特征的任意組合的TRPA1拮抗劑的藥物制劑和應(yīng) 用。任何這類拮抗劑或制劑可以用于治療本文所述的任何疾病或疾患。 另外，本發(fā)明關(guān)注任何這類拮抗劑或制劑在治療本文所述的任何疾病 或疾患中的應(yīng)用。另外，本發(fā)明關(guān)注任何這類拮抗劑或制劑在體外抑 制TRPA1介導(dǎo)的電流中的應(yīng)用。還關(guān)注任意上述或下列方面和實(shí)施方
案的組合。例如，本發(fā)明關(guān)注可以配制用于適當(dāng)給藥途徑的具有本文
概括的任何特定功效和特異性的TRPA1拮抗劑，并且可以用于治療本 文詳述的任何疾患或疾病。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明關(guān)注表1或2 中所列的任何TRPA1拮抗劑的藥物制劑和應(yīng)用。
在任意上述的某些實(shí)施方案中，用于本發(fā)明方法的TRPA1拮抗劑 化合物具有任意上述特性中的一種或多種(例如，IC5。，特異性，選擇 性，活性，制劑等)。特別關(guān)注具有上述特性的任意組合的化合物和拮 抗劑化合物的應(yīng)用。
定義為
術(shù)語"拮抗劑"和"抑制劑"可以互換使用意指降低或抑制離子通道 生物活性，諸如抑制離子通道TRPA1活性的活性劑。TRPA1抑制劑包 括具有本文披露的結(jié)構(gòu)和/或功能特性的任意組合的抑制劑。
例如，TRPA1拮抗劑的"有效量"在本發(fā)明主題的抑制或治療方法 方面意旨在作為所需劑量方案組成部分施用的制劑中引起期望臨床或 功能效果的拮抗劑用量。不受理論約束，用于本發(fā)明方法的TRPA1拮 抗劑的有效量包括有效減少TRPA1通道的一種或多種體外或體內(nèi)功能 的TRPA1拮抗劑用量。典型的功能包括，但不限于，膜極化(例如，可 以促進(jìn)細(xì)胞超極化的拮抗劑)，離子流量，細(xì)胞內(nèi)的離子濃度，外向電 流和內(nèi)向電流。拮抗TRPA1功能的化合物包括拮抗TRPA1的體外或體 內(nèi)功能活性的化合物。當(dāng)特定的功能活性僅易于在體外試驗(yàn)中觀察到 時(shí)，化合物在該體外試驗(yàn)中抑制TRPA1功能的能力用作該化合物活性 的合理替代者。在某些實(shí)施方案中，有效量為足以抑制TRPA1-介導(dǎo)的 電流的用量和/或足以抑制TRPA1介導(dǎo)的離子流的用量。
用于本發(fā)明方法的TRPA1抑制劑可以根據(jù)其對一種或多種其它離 子通道的它們的活性或缺乏活性表征。當(dāng)涉及其它離子通道時(shí)，類似 地定義抑制這類其它離子通道的功能。例如，抑制離子通道或離子通 道活性意旨拮抗劑抑制其它離子通道的一種或多種功能活性。這類功 能包括特定離子通道，離子流量或膜極化介導(dǎo)的電流。術(shù)語"核酸"意旨核苷酸，即核糖核苷酸或脫氧核苷酸的聚合形式 或任一類核苷酸的修飾形式。該術(shù)語還應(yīng)理解為包括由核苷酸類似物
制成的RM或DNA類似物作為等效物并且適合于所述的實(shí)施方案，單 鏈(諸如有義或反義)和雙鏈多核苷酸。
術(shù)語"預(yù)防"為本領(lǐng)域公認(rèn)的并且在涉及疾患時(shí)，諸如局部復(fù)發(fā)(例 如疼痛)，疾病諸如癌癥，復(fù)雜綜合征諸如心力衰竭或任何其它醫(yī)學(xué)疾 患，為本領(lǐng)域充分理解的并且包括相對于不接受組合物的受試者而言 降低受試者醫(yī)學(xué)疾患癥狀發(fā)作頻率或延緩其發(fā)作的組合物。因此，預(yù) 防癌癥包括，例如比不治療對照群體減少接受預(yù)防性治療的患者群體 中可檢測到的癌癥生長的數(shù)量，和/或延緩治療群體比不治療對照群體 可檢測到的癌癥生長的出現(xiàn)，例如，其數(shù)量具有統(tǒng)計(jì)學(xué)和/或臨床意義。 預(yù)防感染包括，例如，減少治療群體比不治療對照群體的感染診斷數(shù) 量和/或延緩治療群體比不治療對照組群體的感染癥狀發(fā)作。預(yù)防疼痛 包括，例如，減小治療群體比不治療對照群體中受試者經(jīng)歷的疼痛感 覺的等級或可選擇地延緩它們。
在本文中可以互換使用的術(shù)語"多肽"和術(shù)語"蛋白質(zhì)"和"肽"意旨 氨基酸的聚合物。典型的多肽類包括基因產(chǎn)物，天然存在的蛋白質(zhì)， 同源物，同源體，paralogs，片段和上述的其它等效物，變體和類似 物。
術(shù)語"前體藥物"指定包括在生理?xiàng)l件下被轉(zhuǎn)化成本發(fā)明治療活性 劑的化合物。制備前體藥物的常用方法在于包括被選擇的在生理?xiàng)l件 下水解而展示出所需分子的部分。在其它實(shí)施方案中，前體藥物被宿 主動(dòng)物的酶活性轉(zhuǎn)化。
術(shù)語"序列同 一性"意旨在對比窗內(nèi)的序列相同(即對核酸基于核 苷酸與核苷酸，或?qū)Χ嚯念惢诎被崤c氨基酸)。術(shù)語"序列同一性 百分比"通過下列計(jì)算比較對比窗內(nèi)的兩種最佳序列對比序列，測定 兩序列內(nèi)出現(xiàn)的相同氨基酸的位置的數(shù)量而得到配對位置的數(shù)量，用 配對的位置數(shù)除以對比窗中位置總數(shù)并且將結(jié)果乘以100而得到序列 同一性百分比。計(jì)算序列同一性的方法為本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的并且
進(jìn)一步在下文中詳細(xì)描述。
術(shù)語"小分子"意旨具有低于約2500 amu,優(yōu)選低于約2000 amu， 甚至更優(yōu)選低于約1500 amu，更優(yōu)選低于約1000 amu或最優(yōu)選低于 約750 amu分子量的化合物。
術(shù)語"嚴(yán)格條件"或"嚴(yán)格雜交條件"意旨促進(jìn)兩條互補(bǔ)多核苷酸鏈 之間特異性雜交而形成雙鏈體的條件。可以將嚴(yán)格條件選為在確定離 子強(qiáng)度和pH下低于指定多核苷酸雙鏈體熱熔點(diǎn)(Tm)約5 'C?；パa(bǔ)多 核苷酸鏈長及其GC含量將決定雙鏈體的Tm和，并且由此獲得期望雜 交特異性所必需的雜交條件。Tm為50°/ 的多核苷酸序列與完全配對互 補(bǔ)鏈雜交時(shí)的溫度(在確定的離子強(qiáng)度和pH下)。在某些情況中，期望 增加基本上等于特定雙鏈體的Tm的雜交條件的嚴(yán)格性。在某些實(shí)施方 案中，嚴(yán)格雜交條件包括在65'C下的0. 2X SSC的洗滌步驟。
術(shù)語"TRPA1"， "TRPA1蛋白質(zhì)和"TRPA1通道"在本申請上下文中可 以互換使用。這些術(shù)語意旨包含SEQ IDNO: 1， SEQ ID NO: 3或SEQ ID NO: 5中所示氨基酸序列或其等效多肽或功能性生物活性片段的離子 通道(例如多肽)。在某些實(shí)施方案中，該術(shù)語意旨包含SEQ IDNO: 1， SEQ ID NO: 3或SEQ ID NO: 5中所示氨基酸序列，由其組成或基本上 由其組成的多肽。TRPA1包括多肽類，它們保持TRPA1功能并且包含 (i) SEQ ID NO: 1， SEQ ID NO: 3或SEQ ID NO: 5中所示氨基酸序列 的全部或部分；(ii)具有1至約2， 3， 5， 7, 10， 15， 20， 30， 50, 75或75個(gè)以上保守氨基酸取代的SEQ ID NO: 1， SEQ ID NO: 3或SEQ IDNO: 5中所示氨基酸序列;(iii)70%, 75%, 80%， 90%, 95%, 96%, 97%， 98%或99%與SEQ ID NO: 1， SEQ ID NO: 3或SEQ ID NO: 5相同 的氨基酸序列；和(iv)其功能性片段。本發(fā)明的多肽類還包括SEQ ID NO: 1， SEQ ID NO: 3或SEQ IDNO: 5的同源物，例如同源體和paralogs。
術(shù)語"TRPA1"還意旨編碼本發(fā)明多肽的核酸，例如包含由或基本上 由SEQ ID NO: 2， SEQ ID NO: 4或SEQ ID NO: 6中所示多核苷酸序 列組成的序列的核酸。本發(fā)明的核酸可以包含如下的全部或部分SEQ ID NO: 2， SEQ ID NO: 4或SEQ ID NO: 6的核苷酸序列；至少70%，
75%, 80%， 90%， 95%， 96%， 97%， 98°/?；?9%與SEQ ID NO: 2， SEQ ID NO: 4或SEQ ID NO: 6相同的核苷酸序列；在嚴(yán)格條件下與SEQ ID NO: 2， SEQ ID NO: 4或SEQ ID NO: 6雜交的核苷酸序列；編碼與本發(fā)明 多肽類功能等效的多肽類的核苷酸序列；編碼至少約70%, 75%， 80%, 85%， 90%， 95%, 98%， 99%與SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3或SEQ ID NO: 5同源或相同的多肽類的核苷酸序列；編碼具有本發(fā)明多肽活性并且 與SEQ ID NO: 1， SEQ ID NO: 3或SEQ ID NO: 5具有至少約70%， 75°/。， 80%， 85%， 90%， 95%, 98%， 99%或99%以上同源性或相同的多肽類的 核苷酸序列；不同方面在于1至約2， 3， 5， 7， 10， 15， 20， 30， 50, 75或75個(gè)以上核苷酸取代，添加或缺失的核苷酸序列，諸如SEQ ID NO: 2， SEQ ID NO: 4或SEQ ID NO: 6的等位基因變體；來源于SEQIDNO: 2， SEQ ID NO: 4或SEQ ID NO: 6并且在進(jìn)化上與之相關(guān)的核酸；和
由針對本發(fā)明所有上述和其它核酸而言的遺傳密碼簡并性產(chǎn)生的補(bǔ)體 和核苷酸序列。本發(fā)明的核酸還包括同源物，例如，SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4或SEQ ID NO: 6的同源體和paralogs，并且還包括為 在特定生物體(例如宿主細(xì)胞)中表達(dá)而密碼優(yōu)化的SEQIDNO: 2, SEQ ID NO: 4或SEQ ID NO: 6的變體。盡管未明確描述，但是本領(lǐng)域技 術(shù)人員易于評價(jià)TRPA1是否意旨核酸或蛋白質(zhì)。
術(shù)語"氧化代謝物"指定包括由母體化合物在正常生理?xiàng)l件下的代 謝產(chǎn)生的化合物。特別地，氧化代謝物因代謝過程中的氧化形成。例 如，石克醚基可以被氧化成相應(yīng)的亞砜或砜。
本文所用的術(shù)語"溶劑合物"意旨通過溶劑化形成的化合物(例如， 通過溶劑分子與溶質(zhì)分子或離子結(jié)合形成的化合物)。
本文所用的術(shù)語"水合物"意旨水與母體化合物結(jié)合形成的化合物。
術(shù)語"治療"包括預(yù)防性和/或治療性治療。術(shù)語"預(yù)防性或治療性" 治療為公認(rèn)的并且可對宿主給予本發(fā)明主題的組合物中的一種或多 種。如果在不需要情況(例如，宿主動(dòng)物疾病或其它不需要的狀態(tài))的 臨床表現(xiàn)前給藥，那么治療為預(yù)防性的(即防止宿主發(fā)生不需要的情
況)，而如果在不需要的情況表現(xiàn)后給藥，那么治療為治療性的(即期 望減輕，改善或穩(wěn)定存在的不需要的情況或其副作用)。
術(shù)語"化合物"和"活性劑"可以互換使用以便指本發(fā)明的抑制劑/ 拮抗劑。在某些實(shí)施方案中，化合物為小的有機(jī)或無機(jī)分子，例如，
它們具有低于7500 amu，優(yōu)選低于5000 amu且甚至更優(yōu)選低于2000， 1500， 1000或500 amu的分子量。小有機(jī)或無機(jī)分子的一類為非肽基 的，例如，包含2， l個(gè)或不含肽和/或糖鍵。在某些在其它實(shí)施方案 中，化合物為肽基試劑，諸如多肽類或抗體。在某些其它實(shí)施方案中， 化合物為蛋白質(zhì)，例如抗體或適體。這類化合物可以結(jié)合并且抑制 TRPA1功能。在某些其它實(shí)施方案中，化合物為核酸，例如，TRPA1 反義寡核苷酸或TRPAl.RMi構(gòu)建體。這類化合物可以抑制TRPA1表達(dá)， 由此抑制TRPA1活性?？梢宰鳛橐种苿┢鹱饔玫钠渌湫突衔锇?核酶和肽片段。
術(shù)語"?；?為公認(rèn)的并且意旨由式烴基C(O)-，優(yōu)選烷基C(O)-表示的基團(tuán)。
術(shù)語"酰氨基"為公認(rèn)的并且意旨可以由下式表示的部分
R9
其中R,如上述所定義且R'll表示氫，烷基，鏈烯基或-(CH2)m-R8， 其中m和R8如上述所定義。
本文的術(shù)語"脂族基團(tuán)"意旨直鏈，支鏈或環(huán)狀脂族烴基并且包括 飽和和不飽和脂族基團(tuán)，諸如烷基，鏈烯基和炔基。
本文所用的術(shù)語"鏈烯基"意旨包含至少一個(gè)雙鍵的脂族基團(tuán)并且 指定包括"未被取代的鏈烯基"和"取代的鏈烯基"，后者意旨鏈烯基部 分在鏈烯基的一個(gè)或多個(gè)碳上具有取代氫的取代基。這類取代基可以 出現(xiàn)在包括或不包括一個(gè)或多個(gè)雙鍵上的一個(gè)或多個(gè)碳上。此外，這 類取代基包括所有如下所述對烷基關(guān)注的那些取代基，但除外其中穩(wěn) 定性被抑制的情況。例如，關(guān)注鏈烯基被烷基，碳環(huán)基，芳基，雜環(huán) 基或雜芳基中的一種或多種取代。
本文所用的術(shù)語"烷氧基"意旨如下所定義的帶有與之結(jié)合的氧基 的烷基。有代表性的烷氧基包括甲氧基，乙氧基，丙氧基，叔丁氧基 等。"醚"為通過氧共價(jià)連接的兩個(gè)烴。因此，給予醚烷基的該烷基取
代基為或類似烷氧基，諸如可以由-0-烷基，-0-鏈烯基，-o-炔基， -0-(CH2)m-R8之一表示，其中m和R8如上所述。
術(shù)語"烷基"意旨飽和脂族基團(tuán)的基團(tuán)，包括直鏈烷基，支鏈烷基。 環(huán)烷基(脂環(huán)族)，垸基-取代的環(huán)烷基和環(huán)烷基-取代的烷基。在優(yōu)選 的實(shí)施方案中，直鏈或支鏈烷基在其骨架上帶有30或30個(gè)以下碳原 子(例如，直鏈為CI-C30，支鏈為C3-C30)且更優(yōu)選20或20個(gè)以下且 最優(yōu)選10或10個(gè)以下。同樣，優(yōu)選的環(huán)烷基在其環(huán)結(jié)構(gòu)上帶有3-10 個(gè)碳原子并且更優(yōu)選在其環(huán)結(jié)構(gòu)上帶有5， 6或7個(gè)碳。
此外，在本說明書，實(shí)施例和權(quán)利要求中的術(shù)語"烷基"(或"低級 烷基")指定包括"未被取代的烷基"和"取代的烷基"，后者意旨烷基在 烴骨架的一個(gè)或多個(gè)碳上具有取代氬的取代基的部分。這類取代基可 以包括，例如，g素，羥基，羰基(諸如羧基，烷氧羰基，甲?；蝓?基)，硫羰基(諸如疏酯，硫代乙酸酯或硫代甲酸酯)，烷氧基，磷?；?磷酸酯，膦酸酯，亞膦酸酯，氨基，酰氨基，脒，亞胺，氰基，硝基， 疊氮基，硫氫基，烷硫基，硫酸酯，磺酸酯，氨磺?；?，磺酰氨基， 磺?；?，雜環(huán)基，芳烷基或芳族或雜芳族部分。本領(lǐng)域技術(shù)人員理解， 如果合適，在烴鏈上取代的部分自身可以被取代。例如，取代的烷基 的取代基可以包括氨基，疊氮基，亞氨基，酰氨基，磷酰基(包括膦酸 酯和亞膦酸酯)，磺?；?包括硫酸酯，磺酰氨基，氨磺?；突撬狨? 的取代和未被取代的形式和甲硅烷基以及醚類，烷硫基，羰基(包括酮 類，醛類，羧酸酯類和酯類)，-CF3， -CN等。典型的取代烷基如下所 述。環(huán)烷基可以進(jìn)一步被烷基，鏈烯基，烷氧基，烷疏基，氨基烷基， 羰基-取代的烷基，-CF3， -CN等取代。
鏈烯基和炔基上可以進(jìn)行類似的取代以便產(chǎn)生，例如，氨基鏈烯 基，氨基炔基，酰氨基鏈烯基，酰氨基炔基，亞氨基鏈烯基，亞氨基 炔基，硫代鏈烯基，硫代炔基，羰基-取代的鏈烯基或炔基。
除非碳的數(shù)量另有指定，否則本文使用的"低級烷基"意旨如上述
所定義，但在其骨架結(jié)構(gòu)上具有1 - 10個(gè)碳，更優(yōu)選1 - 6個(gè)碳原子的 烷基。同樣，"低級鏈烯基"和"低級炔基"具有類似鏈長。在本申請的 上下文中，優(yōu)選的烷基為低級烷基。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本文指定 為烷基的取代基為低級烷基。
本文所用的術(shù)語"炔基"意旨包含至少一個(gè)三鍵的脂族基團(tuán)并且指 定包括"未被取代的炔基"和"取代的炔基"，后者意旨在炔基的一個(gè)或 多個(gè)碳上具有取代氫的取代基的炔基部分。這類取代基可以出現(xiàn)在包 括或不包括在一個(gè)或多個(gè)三鍵的一個(gè)或多個(gè)碳上。此外，這類取代基 包括對如上所述烷基關(guān)注的所有那些取代基，但除外其中穩(wěn)定性被抑 制的情況。例如，關(guān)注炔基被烷基，碳環(huán)基，芳基，雜環(huán)基或雜芳基 中的一個(gè)或多個(gè)取代。
術(shù)語"烷硫基"意旨如本文定義的帶有與之結(jié)合的硫基團(tuán)的烷基。 在優(yōu)選的實(shí)施方案中，"烷硫基"部分由-S-烷基，-S-鏈烯基，-S-炔基 和-S-(CH2)m-Rs之一表示，其中m和Rs如上述所定義。有代表性的烷 硫基包括甲硫基，乙疏基等。
術(shù)語"胺"和"氨基"為公認(rèn)的并且意旨未被取代和取代的胺類，例 如，可以由下式表示的部分
R R， 10
/Rio | +
—N\ 或 — —Rlc
其中R9， K。和R、。各自獨(dú)立地表示氫，烷基，鏈烯基，-(CH丄-Rs 或R,和IU。與連接它們的N原子共同構(gòu)成在環(huán)結(jié)構(gòu)上帶有4-8個(gè)原子 的雜環(huán)；Rs表示芳基，環(huán)烷基，環(huán)烯基，雜環(huán)或多環(huán)；和m為0或l -8的整數(shù)。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，僅Rs或R,。之一可以為羰基，例如 R9， Rw和氮彼此不構(gòu)成二酰亞胺。在某些這類實(shí)施方案中，IU和Rw均 不通過羰基連接N，例如，所述的胺不為酰胺或二酰亞胺且所述的胺 優(yōu)選為堿，例如，其共軛酸具有高于7的pKa。在甚至更優(yōu)選的實(shí)施方 案中，R,和R,。(和任選的R、)各自獨(dú)立地表示氫，烷基，鏈烯基或
-(CH上-Rs。因此，本文所用的術(shù)語"烷基胺"意旨如本文定義的具有與 之連接的取代或未被取代的烷基的胺基，即IU和H。中的至少一個(gè)為烷基。
術(shù)語"酰氨基"公認(rèn)為氨基-取代的羰基并且包括可以由下式表示 的部分
其中R" !^。如上述所定義。酰胺的優(yōu)選實(shí)施方案不包括可能不穩(wěn) 定的二酰亞胺類。
本文所用的術(shù)語"芳烷基"意旨被芳基取代的烷基(例如芳族或雜 芳族基團(tuán))。
本文所用的術(shù)語"芳基"包括可以包括0-4個(gè)雜原子的5-， 6-和 7-元單-環(huán)芳族基團(tuán)，例如，苯，吡咯，呋喃，噻吩，咪唑，喁唑，噻 唑，三唑，吡唑，吡啶，吡溱，噠"秦和嘧啶等。那些在環(huán)結(jié)構(gòu)上具有 雜原子的芳基還可以稱作"芳基雜環(huán)或"雜芳族化合物"。芳族環(huán)可以在 一個(gè)或多個(gè)位置上被這類如上所述的取代基取代，例如卣素，疊氮化 物，烷基，芳烷基，鏈烯基，炔基，環(huán)烷基，多環(huán)基，羥基，烷氧基， 氨基，硝基，硫氫基，亞氨基，酰氨基，磷酸酯，膦酸酯，亞膦酸酯， 羰基，羧基，甲硅烷基，醚，烷硫基，磺?；?，磺酰氨基，酮，醛， 酯，雜環(huán)基，芳族或雜芳族部分，_CF3， -CN等。術(shù)語"芳基"還包括帶 有兩個(gè)或多個(gè)環(huán)的多環(huán)系，其中兩個(gè)或多個(gè)碳通常與兩個(gè)相鄰環(huán)連接 (這些環(huán)為"稠合環(huán)")，其中環(huán)中的至少一個(gè)為芳族的，例如，另一個(gè) 環(huán)可以為環(huán)烷基，環(huán)烯基，環(huán)炔基，芳基和/或雜環(huán)基。
本文所用的術(shù)語"碳環(huán)"意旨芳族或非-芳族環(huán)，其中環(huán)的各原子為碳。
術(shù)語"羰基"為公認(rèn)的并且包括可以由下式表示的這類部分或其藥 學(xué)上可接受的鹽
其中X為鍵表示氧或硫，且Ru表示氫，烷基，鏈烯基，-(CH2) -R8， R、表示氫，烷基，鏈烯基或-(CH2)m-R8，其中m和Rs如上述所定義。 如果X為氧且Rn或R、不為氫，那么該式表示"酯"。如果X為氧且 Ru如上述所定義，那么該部分在本文中意旨羧基，且特別是當(dāng)Rn為 氫時(shí)，該式表示"羧酸"。如果X為氧且R'n為氫，那么該式表示"甲酸 酯"。 一般而言，如果上述式的氧原子被疏取代，那么該式表示"硫代 羰基"。如果X為硫且IU或R、不為氬，那么該式表示"硫酯"。如果X 為硫且Rn為氫，那么該式表示"硫代羧酸"。如果X為硫且R'u為氬， 那么該式表示"巰基甲酸酯"。另一方面，如果X為鍵且Ru不為氫，那 么上述式表示"酮"基。如果X為鍵且Rn為氫，那么上述式表示"醛" 基。
術(shù)語"吸電子基團(tuán)"意旨從連接吸電子基團(tuán)的原子或原子基團(tuán)上取 得電子密度的化學(xué)基團(tuán)。取得電子密度包括通過誘導(dǎo)和通過離域/共振 效應(yīng)取得。與芳族環(huán)連接的吸電子基團(tuán)的實(shí)例包括全卣代烷基，諸如 三氟曱基，囟素，疊氮化物，含羰基的基團(tuán)，諸如?；杌秃瑏?胺的基團(tuán)。
本文所用的術(shù)語"酯"意旨基團(tuán)-C(0)OR9,其中R'表示烴基。 本文所用的術(shù)語"卣素"意旨卣素且包括氯，氟，溴和碘。 本文所用的術(shù)語"雜芳烷基"意旨被雜芳基取代的烷基。 術(shù)語"雜環(huán)基"意旨3-至10-元環(huán)結(jié)構(gòu)，更優(yōu)選3-至7-元環(huán)，其環(huán) 結(jié)構(gòu)包括l-4個(gè)雜原子。雜環(huán)還可以為多環(huán)。雜環(huán)基包括，例如，瘞 吩，噻蒽，呋喃，吡喃，異苯并吹喃，色烯，站噸，吩蓬嚙，吡咯， 咪唑，咪唑，異遂唑，異"惡唑，吡^，吡漆，嘧咬，峻"秦，p引漆，異 p引咮，丐l咮，p引唑，嘌呤，奮喚，異會(huì)啉，全啉，酞嚷，萘咬，奮惺 啉，喹唑啉，噌啉，蝶啶，呼唑，<+啉，菲啶，吖啶，嘧啶，菲咯啉， 吩溱，吩吡溱，吩噻溱，呋咱，吩噁喚，吡咯烷，氧戊環(huán)，硫戊環(huán)， 嚙唑，哌啶，哌溱，嗎啉，內(nèi)酯類，內(nèi)酰胺類，諸如氮雜環(huán)丁酮類和
吡咯烷酮類，磺內(nèi)酰胺類，磺內(nèi)酯類等。雜環(huán)可以在一個(gè)或多個(gè)位置 上被如上所述這類取代基取代，例如為卣素，烷基，芳烷基，鏈烯基， 炔基，環(huán)烷基，鞋基，氨基，硝基，疏氫基，亞氨基，酰氨基，磷酸 酯，膦酸酯，亞膦酸酯，羰基，羧基，甲硅烷基，醚，烷硫基，磺酰
基，酮，醛，酯，雜環(huán)基，芳族或雜芳族部分，-CF3, -CN等。
術(shù)語"雜芳基"包括取代或未被取代的芳族單環(huán)結(jié)構(gòu)，優(yōu)選5-至 7-元環(huán)，更優(yōu)選5-至6-元環(huán)，其環(huán)結(jié)構(gòu)包括至少一個(gè)雜原子，優(yōu)選l -4個(gè)雜原子，更優(yōu)選1或2個(gè)雜原子。術(shù)語"雜芳基"還包括具有 兩個(gè)或多個(gè)環(huán)的多環(huán)環(huán)系，其中兩個(gè)或多個(gè)碳共用于兩個(gè)相鄰環(huán)，其 中環(huán)中的至少一個(gè)為雜芳族的，例如，另一個(gè)環(huán)可以為環(huán)烷基，環(huán)烯 基，環(huán)炔基，芳基，雜芳基和/或雜環(huán)基。雜芳基包括，例如，吡咯， 呋喃，漆汾，咪唑，噁唑，蓬唑，吡唑，吡吱，吡漆，峻漆和嘧啶等。 本文所用的術(shù)語"雜原子"意旨任意非碳或氫的元素的原子。優(yōu)選 的雜原子為氮，氧和硫。
術(shù)語"雜環(huán)基"和"雜環(huán)(heterocycle )"意旨取代或未被取代的非 -芳族環(huán)結(jié)構(gòu)，優(yōu)選3-至10-元環(huán)，更優(yōu)選3-至7-元環(huán)，其環(huán)結(jié)構(gòu)包 括至少一個(gè)雜原子，優(yōu)選1 - 4個(gè)雜原子，更優(yōu)選1或2個(gè)雜原子。術(shù) 語"雜環(huán)基"和"雜環(huán)"還包括具有兩個(gè)或多個(gè)環(huán)的多環(huán)環(huán)系，其中兩個(gè) 或多個(gè)碳共用于兩個(gè)相鄰環(huán)，其中環(huán)中的至少一個(gè)為雜環(huán)，例如，另 一個(gè)環(huán)可以為環(huán)烷基，環(huán)烯基，環(huán)炔基，芳基，雜芳基和/或雜環(huán)基。 雜芳基包括，例如，哌啶，哌嗪，吡咯烷，嗎啉，內(nèi)酯類，內(nèi)酰胺類 等。 本文所用的術(shù)語"雜環(huán)基烷基"意旨被雜環(huán)基取代的烷基。 本文所用的術(shù)語"烴基"意旨通過碳原子鍵合的不具有-O或-S取
代基并且一般具有至少一個(gè)碳-氫鍵和主要碳骨架，但可以任選包括雜 原子的基團(tuán)。因此，如甲基，乙氧基乙基，2-吡啶基和三氟甲基這類 基團(tuán)被視為用于本申請目的的烴基，但并非取代基，諸如乙酰基(在連 接碳上具有-O取代基)和乙氧基(通過氧而非碳連接)。烴基包括，但 不限于芳基，雜芳基，碳環(huán)，雜環(huán)，烷基，鏈烯基，炔基及其組合。
術(shù)語"低級"在與諸如?；?，酰氧基，烷基，鏈烯基，炔基或烷氧
基這類化學(xué)部分聯(lián)用時(shí)意旨包括在取代基上存在io個(gè)或io個(gè)以下原
子，優(yōu)選6個(gè)或6個(gè)以下原子的基團(tuán)。"低級烷基"，例如，意旨包含 10或10個(gè)以下碳原子，優(yōu)選6或6個(gè)以下碳原子的烷基。在某些實(shí) 施方案中，酰基，酰氧基，烷基，鏈烯基，炔基或烷氧基取代基分別 為低級酰基，低級酰氧基，低級烷基，低級鏈烯基，低級炔基或低級 烷氧基，無論它們是單獨(dú)出現(xiàn)還是與其它取代基組合出現(xiàn)，諸如描述 中的羥基烷基和芳烷基(在此情況中，例如，在統(tǒng)計(jì)烷基取代基上的碳 原子時(shí)不統(tǒng)計(jì)芳基內(nèi)的原子)。
本文所用的術(shù)語"硝基"意旨-N02;術(shù)語"鹵素"表示-F, -Cl， -Br 或-I;術(shù)語"硫氬基"意旨-SH;術(shù)語"羥基"意旨-OH;且術(shù)語"磺?；? 意旨-S0廣。
術(shù)語"多環(huán)基"意旨兩個(gè)或多個(gè)環(huán)(例如，環(huán)烷基，環(huán)鏈烯基，環(huán)炔 基，芳基和/或雜環(huán)基)，其中兩個(gè)或多個(gè)碳共用于相鄰環(huán)，例如，環(huán) 為"稠合環(huán)"。通過非相鄰原子連接的環(huán)稱作"橋連"環(huán)。多環(huán)的各環(huán)可 以被如上所述這類基團(tuán)取代，例如為卣素，烷基，芳烷基，鏈烯基， 炔基，環(huán)烷基，羥基，氨基，硝基，硫氫基，亞氨基，酰氨基，磷酸 酯，膦酸酯，亞膦酸酯，羰基，羧基，曱硅烷基，醚，烷硫基，磺酰 基，酮，醛，酯，雜環(huán)基，芳族或雜芳族部分，-CF3， -CN等。
本文所用的術(shù)語"保護(hù)基"意旨防止反應(yīng)官能基可能發(fā)生不需要的 化學(xué)轉(zhuǎn)化的臨時(shí)取代基。這類保護(hù)基的實(shí)例包括羧酸酯類醇的甲硅烷 基醚類以及分別為醛和酮的縮醛類和酮縮醇類。已經(jīng)綜述了保護(hù)基化 學(xué)領(lǐng)域(Greene, T. W. ; Wuts, P. G. M. Protective Groups in Organic Synthesis, 2nd ed. ; Wiley: New York, 1991)。
術(shù)語"取代的"意旨在骨架的一個(gè)或多個(gè)碳上具有取代氫的取代基 的部分。可以理解"取代"或"被取代"包括暗示條件為這類取代按照取 代原子和取代基的允許化合價(jià)且取代產(chǎn)生穩(wěn)定的化合物，例如不會(huì)諸 如通過重排，環(huán)化，消去等自發(fā)進(jìn)行轉(zhuǎn)化。關(guān)注本文所用的術(shù)語"取代 的"包括所有有機(jī)化合物的允許的取代基。在一個(gè)寬范的方面中，允許
的取代基包括有機(jī)化合物的無環(huán)和環(huán)狀支鏈和非支鏈碳環(huán)和雜環(huán)，芳 族和非-芳族取代基。允許的取代基可以為一種或多種并且對適當(dāng)?shù)挠?機(jī)化合物而言可以相同或不同。就本發(fā)明的目的而言，雜原子，諸如 氮可以具有氫取代基和/或本文所述滿足雜原子化合價(jià)的有機(jī)化合物 的任何允許的取代基。取代基可以包括本文所述的任何取代基，例如， 卣素，羥基，羰基(諸如羧基，烷氧羰基，甲?；蝓；?，硫代羰基(諸 如硫酯，硫代乙酸酯或硫代甲酸酯)，烷氧基，磷?；?，磷酸酯，膦酸 酯，亞膦酸酯，氨基，酰氨基，脒，亞胺，氰基，硝基，疊氮基，硫 氬基，烷硫基，硫酸酯，磺酸酯，氨磺?；酋０被?，磺?；?，雜 環(huán)基，芳烷基或芳族或雜芳族部分。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解，如果 合適，在烴鏈上取代的部分自身可以被取代。
可以理解"取代"或"被取代"包括暗示條件為這類取代按照取代原 子和取代基的允許化合價(jià)且取代產(chǎn)生穩(wěn)定的化合物，例如不會(huì)諸如通 過重排，環(huán)化，消去等自發(fā)進(jìn)行轉(zhuǎn)化。
術(shù)語"氨磺?；?為公認(rèn)的并且包括可以由下式表示的部分
其中R9和R10如上述所定義。
語"硫酸酯"為公認(rèn)的并且包括可以由下式表示的部分
<formula>formula see original document page 60</formula>
其中R41如上述所定義。
術(shù)語"磺酰氨基"為公認(rèn)的并且包括可以由下式表示的部分:
其中R9和R'll如上述所定義。
術(shù)語"磺酸酯"公認(rèn)的并且包括可以由下式表示的部分:
其中R41為電子對，氫，烷基，環(huán)烷基或芳基。
本文所用的術(shù)語"硫氧化物(sulfoxido)基"或"亞磺?；?意旨可
以由下式表示的部 o
<formula>formula see original document page 61</formula>
其中R44選自氬，烷基，鏈烯基，炔基，環(huán)烷基，雜環(huán)基，芳烷 基或芳基。
本文所用的術(shù)語"硫酯"意旨基團(tuán)-C(0)SR9或-SC(0)R9，其中R'表 示烴基。
本文所用的每種表達(dá)方式的定義，例如，烷基，m， n等在它在任 何結(jié)構(gòu)上出現(xiàn)一次以上時(shí)指定與其在其它處相同結(jié)構(gòu)上的定義獨(dú)立。
術(shù)語三氟曱磺酸酯基，曱苯磺酰基，甲磺酰基和nonaflyl為公認(rèn) 的并且分別意旨三氟甲磺?；妆交酋；?，甲磺酰基和九氟丁磺酰 基。術(shù)語三氟曱磺酸酯，曱苯磺酸酯，曱磺酰酯和nonaflate為公認(rèn)的 并且分別意旨三氟甲磺酸酯，對甲苯磺酸酯，甲磺酸酯和九氟丁磺酸 酯官能基和包含所述基團(tuán)的分子。
縮寫Me， Et， Ph, Tf， Nf， Ts， Ms分別表示曱基，乙基，苯基， 三氟曱磺?；?，九氟丁磺酰基，甲苯磺?；蜁趸酋；?。有機(jī)化學(xué)普 通技術(shù)人員使用的縮寫的更綜合性清單出現(xiàn)在Journal of Organic Chemistry每巻的第一版中；該清單一般以表的形式列出，標(biāo)題為 Standard List of Abbreviat ions。將在所述清單中包含的縮寫和有 機(jī)化學(xué)普通技術(shù)人員使用的所有縮寫引入本文作為參考。
本發(fā)明的某些化合物可以以特定的幾何或立體異構(gòu)體形式存在， 本發(fā)明關(guān)注所有這類化合物，包括順式-和反式-異構(gòu)體，R-和S-對映 體，非對映體，(d)-異構(gòu)體，(l)-異構(gòu)體，其外消旋混合物及其其它 混合物，因?yàn)閷儆诒景l(fā)明的范圍。另外的不對稱碳原子可以存在于取 代基，諸如烷基上。指定所有這類異構(gòu)體及其混合物均包括在本發(fā)明
中。
制備基本上為異構(gòu)體純的化合物的方法為本領(lǐng)域公知的。例如， 如果需要本發(fā)明化合物的特定對映體，那么可以通過不對稱合成或通 過使用手性助劑衍生制備它，其中分離所得非對映異構(gòu)體混合物并且 裂解輔助基團(tuán)而得到純的所需對映體。可選擇地，如果分子包含堿性 官能基，諸如氨基或酸性官能基，諸如羧基，那么可以使用適當(dāng)?shù)男?光酸或堿形成非對映異構(gòu)體鹽，隨后拆分通過分級結(jié)晶或本領(lǐng)域眾所 周知色鐠方式形成的非對映體，且隨后回收純的對映體?？蛇x擇地， 可以通過使用合成中間體與反應(yīng)制備富含對映體的混合物和純的對映 體化合物，所述的合成中間體為對映體純的，所述的反應(yīng)使得手性中 心上的立體化學(xué)不改變或?qū)е缕渫耆崔D(zhuǎn)。用于反轉(zhuǎn)或保留不改變的 特定立體中心的技術(shù)和用于拆分立體異構(gòu)體混合物的那些技術(shù)為本領(lǐng) 域眾所周知的并且充分屬于本領(lǐng)域技術(shù)人員選擇針對特定情況的適當(dāng)
方法的能力范圍。 一般參見F證iss等(eds.) ， Vogel's Encyclopedia of Practical Organic Chemistry 5th Ed， Longman Scientific and Technical Ud. , Essex, 1991, pp. 809- 816;和Heller， Acc. Chem. Res. 23: 128 (1990)。
所關(guān)注的上述化合物的等效物包括另外與之相當(dāng)并且具有其相同 的一般特性(例如，抑制TRPA1活性的能力)的化合物，其中進(jìn)行一種或 多種取代基的簡單變化形式，它們不會(huì)對化合物的功效產(chǎn)生不良影響。 一般而言，可以通過在一般反應(yīng)方案中例證的方法，例如，如下所述 的方法或其修改形式，使用易于利用的原料，試劑和常規(guī)的合成操作 制備本發(fā)明的化合物。在這些反應(yīng)中，還能夠利用自身公知，但本文 未提及的變化形式。
就本發(fā)明的目的而言，化學(xué)元素按照元素周期表CAS version, Handbook of Chemistry and Physics, 67th Ed. ， 1986-87 (內(nèi)封) 鑒定。另外，就本發(fā)明的目的而言，關(guān)注術(shù)語"烴"包括具有至少一個(gè) 氫和一個(gè)碳原子的所有允許的化合物。在一個(gè)寬范的方面中，允許的 烴類包括無環(huán)和環(huán)狀支鏈和非支鏈碳環(huán)和雜環(huán)，可以被取代或未被取代的芳族和非-芳族有機(jī)化合物。
本發(fā)明的化合物還可以包含非天然比例的構(gòu)成這類化合物的原子 的一種或多種上的原子同位素。例如，可以使用放射性同位素，諸如，
例如氚(310，碘-125 (1251)或碳-14(140放射性標(biāo)記化合物。指定本發(fā) 明化合物的所有同位素變化形式，無論是否未放射性的，均包括在本 發(fā)明范圍內(nèi)。
符號^ ，無論是作為鍵使用，還是展示出與鍵垂直均表示展示 部分與分子剩余部分，固相支持體等的連接點(diǎn)。
本發(fā)明的某些化合物可以以非溶劑化形式和溶劑化形式存在，包 括水化形式。 一般而言，溶劑化形式與非溶劑化形式等效并且包括在 本發(fā)明范圍內(nèi)。本發(fā)明的某些化合物可以以多晶型或非晶形形式存在。 一般而言，所有物理形式針對本發(fā)明關(guān)注的應(yīng)用而言均為等效的并且 指定它們屬于本發(fā)明的范圍內(nèi)。
其中取代基以其常規(guī)的從左到右的書寫的化學(xué)式專門指定，它們 同樣包括化學(xué)上相同的取代基，這些取代基可以由從右到左的結(jié)構(gòu)書 寫產(chǎn)生例如，還指定-CH20-描述-0CH廣；還指定-NHS(0)f表示 -S (0)2HN-等。
術(shù)語"藥學(xué)上可接受的鹽"包括使用相對無毒性的酸或堿制備的活 性化合物的鹽，這取決于在本文所述化合物上發(fā)現(xiàn)的特定的取代基。 當(dāng)本發(fā)明的化合物包含相對所需的官能基時(shí)，可以通過使這類化合物 的中性形式接觸足量的所需堿(可以是在凈的或在合適的溶劑中)獲 得堿加成的鹽。藥學(xué)上可接受的堿加成的鹽的實(shí)例包括鈉，鉀，釣， 銨，有機(jī)氨基或鎂鹽或類似的鹽。當(dāng)本發(fā)明的化合物包含相對堿性官 能基時(shí)，可以通過使這類化合物的中性形式接觸足量的所需酸(可以 是在凈的或在合適的溶劑中)獲得酸加成的鹽。藥學(xué)上可接受的酸加 成的鹽的實(shí)例包括那些來源于無機(jī)酸的鹽和來源于相對無毒性的有機(jī) 酸的鹽，所述的無機(jī)酸如鹽酸，氬溴酸，硝酸，碳酸， 一氫碳酸，磷 酸， 一氫磷酸，二氫磷酸，硫酸， 一氫硫酸，氫碘酸或磷酸等，所述 的有機(jī)酸如乙酸，三氟乙酸，丙酸，異丁酸，馬來酸，丙二酸，苯曱
酸，琥珀酸，辛二酸，富馬酸，乳酸，扁桃酸，苯二甲酸，苯磺酸， 對-甲苯磺酸，檸檬酸，酒石酸，曱磺酸等。還包括氨基酸的鹽，諸如 精氨酸鹽等，和有機(jī)酸的鹽，如葡糖醛酸或半乳糖醛酸等(例如，參見
Berge等，"Pharmaceutical Salts", Journal of Pharmaceutical Science, 1977， 66, 1-19)。本發(fā)明的某些具體化合物包含堿性和酸 性官能基，它們能夠使化合物轉(zhuǎn)化成堿或酸加成的鹽。
優(yōu)選通過使所述的鹽接觸堿或酸并且按照常規(guī)方式分離母體化合 物再生化合物的中性形式?；衔锏闹行孕问皆谀承┪锢硖匦苑矫娌?同于各種鹽形式，諸如在極性溶劑中的溶解性，但就本發(fā)明的目的而 言，這些鹽在其它方面與化合物的母體形式等效。
術(shù)語"足夠低的熱原活性"在涉及藥物制劑時(shí)意旨不含可能使該制 劑所給予的受試者產(chǎn)生不良反應(yīng)(例如，刺激，發(fā)熱，炎癥，腹竭，呼 吸窘迫，內(nèi)毒素休克等)的量的熱原。例如，該術(shù)語意旨包括不含或基 本上不含內(nèi)毒素，諸如，例如脂多糖(LPS)的制劑。
與TRPA1功能相關(guān)的疾病，病癥或疾患
在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了抑制體外或體內(nèi)TRPAl通道功能 的方法和組合物。典型功能包括，但不限于TRPAl-介導(dǎo)的電流。在某 些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了通過給予調(diào)節(jié)TRPAl蛋白質(zhì)的水平和/或 活性的活性劑預(yù)防或這類疾病或病癥或疾患的方法。在其它實(shí)施方案 中，該化合物選擇性地抑制TRPAl蛋白質(zhì)的表達(dá)水平和/或活性。換句 話說，在某些實(shí)施方案中，所述的化合物與一種或多種其它離子通道 活性相比優(yōu)先抑制TR P A1蛋白質(zhì)活性。
在預(yù)防或治療本文提供的疾病和病癥的方法的具體實(shí)施方案中， 所述的疾病或病癥可以為例如，疼痛或接觸敏感性，諸如與疾病或 病癥相關(guān)的疼痛，例如，癌性痛；皮膚病或病癥，例如4艮屑病和基底 細(xì)胞和鱗狀細(xì)胞癌；神經(jīng)變性疾病或病癥，例如，阿爾茨海默病(AD)， 帕金森病，亨廷頓病，肌萎縮側(cè)索硬化(ALS)和其它因創(chuàng)傷或其它損傷 導(dǎo)致的腦功能障礙，包括衰老，炎性疾病(例如，哞喘，慢性阻塞性肺
疾病，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，骨關(guān)節(jié)炎，炎癥性腸病，腎小球腎炎，神經(jīng)
炎癥疾病，多發(fā)性硬化和免疫系統(tǒng)病癥)；癌癥(例如脂肪肉瘤)或其它 增殖性疾病，腎疾病和肝疾病；代謝紊亂，諸如糖尿病。其它疾病和 疾患包括術(shù)后痛，皰滲后遺神經(jīng)痛，失禁和帶狀皰滲。
由于鈣調(diào)節(jié)在許多細(xì)胞過程，包括細(xì)胞活化，基因表達(dá)，細(xì)胞運(yùn) 輸和凋亡性細(xì)胞死亡中起作用的重要作用，所以鈣生理紊亂涉及許多 包4舌這類細(xì)力包活動(dòng)的疾病和病癥。這些疾病和病癥包括皮趺病和病癥； 神經(jīng)和神經(jīng)變性疾病和病癥；與各種疾病，病癥或疾患相關(guān)的發(fā)熱； 失禁；炎性疾病和病癥，諸如炎癥性腸病和克羅恩?。缓粑约膊『?病癥；諸如慢性咳嗽，哮喘和慢性阻塞性肺疾病(C0PD);消化性病癥， 諸如潰瘍和酸反流；代謝病和障礙，包括肥胖和糖尿??；肝和腎疾病 和病癥；惡性肺瘤，包4舌癌癥；與老化相關(guān)的病癥；和對疼痛和接觸 過敏。
可以治療的另外疾病或疾患包4舌ATP-相關(guān)疾病或病癥，包括癲癇 癥，認(rèn)知，嘔吐，疼痛(例如偏頭痛)，哞喘，外周血管疾病，高血壓 免疫和炎性疾患，腸易激綜合征，膀胱炎，抑郁癥，與衰老相關(guān)的變 性疾病，尿失禁，早泄，嚢性纖維化，糖尿病，避孕和不育癥，和傷 口愈合(例如，參見Foresta等(1992) J. Biol. Chem. 257:19443-19447; Wang等(1990) Biochim. Biophys. Res. Commun. 166:251—258; Burnstock和Wi 11 iams ， (2000) J. Pharmacol. Exp. Ther. 295: 862-869;和Burnstock， Pharmacol Rev (2006) 58:58-86)。
本文所述的TRPA1抑制劑可以用于治療4壬意上述或下列疾病或疾 患，包括治療與任意上述或下來疾病或疾患相關(guān)的疼痛。當(dāng)用于治療 方法時(shí)，可以基于指定給藥途徑選擇和配制抑制劑。抑制劑可以用于 治療潛在的疾病或疾患或緩解所述疾病或疾患的癥狀。典型癥狀包括 與疾病或疾患相關(guān)的疼痛。
a.對疼痛和觸纟莫的敏感性或疼痛-相關(guān)疾病或病癥
本文提供的組合物和方法與預(yù)防或治療疼痛或?qū)μ弁春陀|摸敏感 相關(guān)。疼痛或?qū)μ弁春陀|摸的敏感性可以涉及各種疾病，病癥或疾患， 包括，但不限于糖尿病性神經(jīng)病，乳腺痛，銀屑病，濕疹，皮炎，燒 傷，皰滲后神經(jīng)痛(帶狀皰疹)，傷害性疼痛，外周神經(jīng)和中樞神經(jīng)痛， 慢性痛，癌性和腫瘤痛，脊髓損傷，擠壓傷和創(chuàng)傷誘導(dǎo)的疼痛，偏頭 痛，腦血管和血管痛，鐮狀細(xì)胞病性疼痛，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎性疼痛，
肌肉骨骼痛，包括治療骨關(guān)節(jié)炎和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的征候和癥狀，口 面部和顏面痛，包括牙齒，暫時(shí)性下頜骨病癥和癌癥相關(guān)的疼痛，腰 部或骨盆痛，外科切口相關(guān)疼痛，炎性和非炎性疼痛，內(nèi)臟痛，精神 性疼痛和軟組織炎性痛，纖維肌痛-相關(guān)疼痛和反射性交感神經(jīng)營養(yǎng)障 礙和因腎結(jié)石或尿道感染導(dǎo)致的疼痛。本發(fā)明的化合物和方法可以用
于治療慢性以及急性痛。慢性或急性痛可以為損傷，衰老或疾病的結(jié) 果。
其它離子通道涉及疼痛的接受或傳輸。例如，已經(jīng)認(rèn)識到涉及將
疼痛信號從感覺傳入神經(jīng)細(xì)胞傳輸至中樞神經(jīng)系統(tǒng)的突觸傳遞中的N-型鉤通道。已經(jīng)證實(shí)某些特異性阻斷N-型鈣通道的天然存在的肽神經(jīng) 毒素作為廣泛動(dòng)物疼痛模型，包括炎癥和神經(jīng)性疼痛模型中的極為有 效和有效的止痛藥起作用。可利用的證據(jù)提示N-型鈣通道阻滯劑至少 與阿片類物質(zhì)同樣有效，避免了許多典型阿片類物質(zhì)的副作用(例如呼 吸抑制)且止痛作用并非經(jīng)歷耐受性的發(fā)生。
還證實(shí)5-a-誘導(dǎo)的神經(jīng)類固醇誘導(dǎo)的有效外周止痛部分通過對 T-型0&2+通道的作用介導(dǎo)(Pathirathna等，Pain. 2005 Apr; 114 (3) : 429-43)。
還證實(shí)抗癲癇藥和相對選擇性T-類鈣通道阻滯劑乙琥胺高度有效 地反轉(zhuǎn)以常用細(xì)胞毒性劑紫杉醇或長春新堿導(dǎo)致的神經(jīng)性疼痛 (Flatters和Bennett， Pain. 2004 May; 109 (1-2): 150-61)。
與電壓控制的鉤通道oc(2)-S蛋白質(zhì)亞單位發(fā)生相互作用的新藥 普瑞巴林可有效和安全地治療糖尿病性神經(jīng)病的疼痛(Richter等，J Pain. 2005 Apr; 6 (4): 253-60)。
上述內(nèi)容證實(shí)接受或傳輸疼痛中涉及各種非-TRP通道。特別地， 上述內(nèi)容證實(shí)疼痛中涉及各種鉤通道。
本發(fā)明提供了治療疼痛的方法，包括給予(i) TRPA1功能拮抗劑； (i i) TRPA1功能選擇性拮抗劑和TRPV1和/或TRPV3功能選擇性拮抗劑 的組合；或(iii)抑制TRPA1， TRPV1和TRPV3中的兩種或多種的功能 的全-TRP抑制劑。
除TRPV家族成員外，其它TRP通道也涉及疼痛接受和/或感覺。例 如，某些TRPM通道，包括TRPM8涉及疼痛的接受和/或感覺。因此，在 某些實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法包括通過給予下列藥物治療疼痛(i) 選擇性TRPA1拮抗劑和選擇性TRPM8拮抗劑的組合；(ii)選擇性TRPA1 拮抗劑，選擇性TRPM8拮抗劑和選擇性TRPV1和/或TRPV3拮抗劑中的一 種或多種的組合；(iii)拮抗TRPA1和TRPM8功能的交叉TRP抑制劑； 或(iv)拮抗TRPAl， TRPM8和TRPV1和TRPV3中的一種或多種的功能的全 抑制劑。
不受理論約束，我們提出了TRPA1拮抗劑如何有助于減輕疼痛的一 種可能的機(jī)制。TRPA1拮抗劑可以導(dǎo)致細(xì)胞超極化。這可以導(dǎo)致神經(jīng)元 發(fā)炎減輕和/或動(dòng)作電位頻率減少。此外，TRPA1抑制劑可以減少鈣流 入受損細(xì)胞并且可以防止有時(shí)伴隨損失的基因表達(dá)中的鈣依賴性改 變。
b. 皮膚病或病癥。
鈣通過皮膚細(xì)胞質(zhì)膜流入是參與皮膚表皮中細(xì)胞分化的關(guān)鍵信號 傳導(dǎo)要素(Dotto， 1999 Crit Rev Oral Biol Med 10: 442-457)。調(diào) 節(jié)或調(diào)制釣進(jìn)入途徑和由此皮膚細(xì)胞生長的臨界控制點(diǎn)可以治療或預(yù) 防特征在于表皮增生的皮膚病或病癥，即一種疾患，其中皮膚細(xì)胞增 殖過快且難以分化。這類疾病包括銀屑病和基底和鱗狀細(xì)胞癌。據(jù)估 計(jì)影響達(dá)7百萬美國人的銀屑病使得患病者有輕度到極度不適感，對繼 發(fā)性感染的易感性增強(qiáng)和因受侵害區(qū)域的損害導(dǎo)致的心里影響 (Lebwohl和Ali, .2001 J Am Acad Dermatol 45: 487-498)。皮膚的 基底細(xì)胞癌(BCC)和鱗狀細(xì)胞癌(SCC)代表了在每年在美國診斷的所有 癌癥病例中的至少三分之一。每報(bào)導(dǎo)有1百萬以上的新病例并且發(fā)病率 正在增加。盡管相對無侵害性，但是緩慢生長的癌癥BCCs能夠造成顯著的局部組織破壞和受損。SCCs更具侵害性且由此代表了甚至更巨大
的并發(fā)癥。此外，由于8oy。的損害發(fā)生在頭頸部，而在肩部，背部或胸
部還占15。/。，所以皮膚的BCCs和SCCs對受侵害患者的外觀和生活質(zhì)量具 有顯著影響。
許多皮膚病伴隨癢(瘙癢)。瘙癢和疼痛共有許多機(jī)械相似性。兩 者均與C-纖維活化相關(guān)，兩者均因溫度和炎癥介體的增加而強(qiáng)化并且 兩者均可以使用阿片類物質(zhì)壓制。降低神經(jīng)元興奮性，特別是C-纖維 的興奮性可以緩解與透析皮炎，妊娠，毒物常春藤，過敏反應(yīng)，干燥 皮膚，化療和濕療相關(guān)的瘙癢。
c.神經(jīng)或3申經(jīng)變性疾病和病癥
神經(jīng)變性疾病和病癥包括，但不限于阿爾茨海默病(AD)，帕金森 病，亨廷頓病，肌萎縮側(cè)索硬化(ALS)和其它因創(chuàng)傷或其它損傷，包括 衰老導(dǎo)致的腦功能障礙。
與鈣信號傳導(dǎo)相關(guān)的機(jī)制可能在許多因腦損傷導(dǎo)致的神經(jīng)變性疾 病和病癥中改變。例如，來自具有AD的患者的成纖維細(xì)胞或T-淋巴細(xì) 胞與對照組相比具有連續(xù)展示出的從胞內(nèi)儲(chǔ)存中釋放的Ca'+增加(Ito 等(1994) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 91 :534-538; Gibson等 (1996) Biochem. Biophys. ACTA 1316:71-77; Etchenberrigaray等 (1998) Neurobiology of Disease, 5: 37-45)。與這些觀察結(jié)果一致， 已經(jīng)證實(shí)與家族性AD(FAD)相關(guān)的早老素基因(PS1或PS2)中的突變增 加了 InsP3-介導(dǎo)的Ca"從內(nèi)部儲(chǔ)存中釋放(Guo等(1996) Neuro Report, 8: 379-383 ; Leissring等(1999) J. Neurochemistry , 72:1061-1068 ; Leissring 等(1999) J. Biol. Chem. 274(46): 32535-32538 ;Leissring等(2000)J.Cell Biol. 149 (4): 793-797; Leissring等(2000) Pro" Natl. Acad. Sci. U.S.A. 97 (15): 8590- 8593)。此外，據(jù)報(bào)導(dǎo)與AD中淀粉樣蛋白形成狀態(tài)淀粉 樣蛋白S肽產(chǎn)生增加相關(guān)的PS1或PS2中的突變與胞內(nèi)鈣水平下降相關(guān) (Yoo等(2000) Neuron, 27 (3) :561- 572)。
已經(jīng)證實(shí)實(shí)驗(yàn)性外傷性腦損傷啟動(dòng)腦中Ca"濃度巨大紊亂，這可能
促成進(jìn)一步的神經(jīng)元損害。胞內(nèi)Cah可以由許多不同的離子通道而升 高。進(jìn)一步證實(shí)通道阻滯劑可以在急性創(chuàng)傷后期中給藥時(shí)有益于治療 神經(jīng)運(yùn)動(dòng)功能障礙(Cheney等(2000) J. Neurotra職，17 (1): 83-91)。
d. 炎性疾病和病癥
本文提供的組合物和方法還可以用于涉及治療炎性疾病。這些疾 病包括，但不限于哞喘，慢性阻塞性肺疾病，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，骨關(guān) 節(jié)炎，炎癥性腸病，慢性阻塞性肺疾病，神經(jīng)炎癥疾病，諸如多發(fā)性 硬化和免疫系統(tǒng)病癥。
炎性介體活化中性白細(xì)胞(PMN)部分通過增加胞質(zhì)釣濃度實(shí)現(xiàn) ([Ca21》。特別認(rèn)為某些鈣通道介導(dǎo)的鈣流入在PMN活化中起重要作 用。已經(jīng)證實(shí)創(chuàng)傷增加PMN儲(chǔ)存-操縱的鈣流入(Hauser等(2000) J. Trauma Injury Infection and Critical Care 48(4) -592-598)， 并且因強(qiáng)化的儲(chǔ)存操縱的鈣流入導(dǎo)致的[Ca2+] i延長升高可以改變與趨 化因子偶聯(lián)的刺激反應(yīng)并且促成損傷后的PMN功能障礙。通過儲(chǔ)存操縱 的《丐通道調(diào)節(jié)PMN [Ca1i由此可以用于調(diào)節(jié)PMN-介導(dǎo)的炎癥和損傷， 休克或膿毒癥后剩余的心血管功能(Hauser等(2001) J. Leukocyte Biology 69 (1):63-68)。
周圍神經(jīng)病，例如糖尿病性神經(jīng)病為涉及神經(jīng)元和炎性成分的特 定疾患。不受機(jī)械理論約束，本發(fā)明的TRPA1拮抗劑可以用于這類周圍 神經(jīng)病，包括，但不限于糖尿病性神經(jīng)病。除在這類周圍神經(jīng)病中的 應(yīng)用(例如，減輕炎癥)外，本發(fā)明主題的抑制劑還可以用于減輕與周 圍神經(jīng)病相關(guān)的疼痛。
神經(jīng)源性炎癥通常在神經(jīng)元超興奮性導(dǎo)致引起炎癥的肽類釋放時(shí) 發(fā)生。這些肽類包括物質(zhì)P和CGRP。阻斷TRPA1可以降低神經(jīng)元活性且 由此可以阻斷神經(jīng)源性炎癥。
e. 癌癥和其它增殖性疾病
本文提供的組合物和方法還可以涉及這類惡性胂瘤，包括，但不 限于來源于淋巴網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞的惡性腫瘤，膀胱癌，乳腺癌，結(jié)腸癌， 子宮內(nèi)膜癌，頭頸癌，肺癌，黑素瘤，卵巢癌，前列腺癌和直腸癌，
還有上述皮膚癌。胞內(nèi)鈣水平可以在癌相比中的相比增殖中起重要作
用 (Weiss 等 (2001) International Journal of Cancer 92 (6): 877-882)。
此外，與癌癥或與癌癥這類相關(guān)的疼痛為慢性痛的重要原因。骨 癌，例如骨肉瘤特別被視為痛性的并且具有晚期骨癌的患者可能需要 鎮(zhèn)靜以便耐受強(qiáng)烈和持續(xù)性痛。因此，本發(fā)明的TRPAl拮抗劑代表了治 療疼痛，例如與癌癥或癌癥治療相關(guān)的疼痛的可能的重要治療劑。
由于TRPA1在轉(zhuǎn)化的相比中差別表達(dá)，所以TRPAl阻滯劑也可以影 響轉(zhuǎn)化相比的增殖且由此為緩解疾病的有用方式(參見Jaquemar等 (1999) JBC 274 (11): 7325-33)。因此，TRPAl拮抗劑可以緩解癌性 痛的原因和癥狀。
癌癥治療不僅為痛性的，而且它們甚至可能對健康組織產(chǎn)生毒性。 某些化療劑可以產(chǎn)生痛性神經(jīng)病。因此，本發(fā)明的TRPAl拮抗劑代表了 治療疼痛和/或與導(dǎo)致神經(jīng)病的癌癥治療相關(guān)的炎癥的可能的重要治 療劑。
前列腺素的主要功能在于保護(hù)胃粘膜。在這種功能中包括調(diào)節(jié)在 人胃細(xì)胞中起細(xì)胞增殖中關(guān)鍵作用的胞內(nèi)鈣水平。因此，非類固醇抗 炎藥(NSAIDs)抑制前列腺素可以抑制胃細(xì)胞中鉤流入(Kokoska等 (1998) Surgery(St Louis) 124 (2): 429-437)。緩解炎癥的NSAIDs還 最有效地產(chǎn)生最大的胃腸損害(Canadian Family Physician, January 1998， p. 101)。因此，在特異性細(xì)胞類型中的獨(dú)立地調(diào)節(jié)鉤通道的能 力可以有助于減輕抗炎療法的這類副作用。另外或可選擇地，給予本 發(fā)明的TRPAl抑制性化合物可以與NSAIDs聯(lián)用，由此使用減少劑量的 NSAIDs促進(jìn)疼痛緩解。
f.失禁
失禁為影響男性和女性的顯著社會(huì)和醫(yī)學(xué)難題。失禁有許多原因， 包括，但不限于年齡，妊娠，接觸放射，手術(shù)，損傷，癌癥，前列腺 擴(kuò)大，前列腺增生和支撐尿道的膀胱或肌肉組織疾病。本發(fā)明關(guān)注治 療因上述情況導(dǎo)致的失禁和未知原因的失禁或因焦慮，應(yīng)激或抑郁癥
導(dǎo)致的節(jié)欲。
本文提供的組合物和方法可以用于涉及治療失禁。失禁的動(dòng)物模 型通常與自發(fā)性動(dòng)作電位頻率增加和平滑肌細(xì)胞慢性去極化相關(guān)。證
據(jù)提示非-選擇性陽離子電流可以導(dǎo)致這種去極化。由于TRPA1 mRNA 在神經(jīng)支配膀胱的神經(jīng)元中表達(dá)，所以阻斷TRPA1可以有效地治失禁。 此外，通過刺激毒蕈堿性l型乙酰膽堿受體活化TRPAl(Ml,參見Jordt 等(2004) Nature 427: 260-265)。抗毒覃堿性藥為未治療諸如膀胱活 動(dòng)過度這類疾患的眾所周知的藥物。因此，阻斷M1受體的下游靶標(biāo)的 TRPA1可以緩解這類疾患，而沒有與毒覃堿性拮抗劑相關(guān)的副作用。
失禁可以由許多損傷，疾病和疾患中任意種導(dǎo)致。它們中的某些 可以導(dǎo)致明顯的不適感和疼痛以及失禁和失禁自身的窘迫。例如，膀 胱炎為也可能導(dǎo)致失禁的痛性疾患。就導(dǎo)致失禁和疼痛的損傷或疾患 而言，TRPA1抑制劑可以用于治療失禁并且緩解伴隨的疼痛。
就TRPA1抑制劑用于治療失禁的實(shí)施方案而言，本發(fā)明關(guān)注額外可 能的給藥途徑。例如，在某些實(shí)施方案中，可以通過導(dǎo)管或其它管腔 內(nèi)裝置的尿道或膀胱直接給予TRPA1抑制劑。然而，在其它實(shí)施方案中， 可以通過口服，靜脈內(nèi)，皮下等給予TRPA1抑制劑。
g. 溫度調(diào)節(jié)
由于離子流對動(dòng)脈張力和松弛的作用，所以本發(fā)明的主題的化合 物還可以用于影響熱敏感性。此外，由于TRPA1通道為涉及冷刺激接受 和感覺的熱反應(yīng)性的熱反應(yīng)性通道，所以TRPA1拮抗劑可以用于調(diào)節(jié)通 常伴隨疼痛的涼，冷和溫度下降感覺。
h. 高血壓
電壓控制的鉤通道阻滯劑屬于最初研發(fā)用于治療高血壓的藥物類 型。這類阻滯劑抑制鈣運(yùn)動(dòng)入心臟和動(dòng)脈的肌細(xì)胞。因?yàn)檫@些肌肉的 收縮需要鈣，所以這類阻滯劑通過降低心臟收縮反應(yīng)的力并且松弛動(dòng) 脈肌肉壁來降血壓。盡管TRPA1并非電壓控制的鈣通道，但是它仍然可 作為調(diào)節(jié)細(xì)胞和組織中鈣平衡以及其它離子平衡的手段。因此，本發(fā) 明的TRP A1拮抗劑可以用于治療高血壓。本發(fā)明主題的化合物的額外應(yīng)
用包括可以通過松弛血管肌壁完全或部分緩解的其它疾患。典型的疾 患包括頭痛和偏頭痛發(fā)作。
如上所述，拮抗TRPA1功能的化合物可以用于治療許多疾病，損傷， 病癥和疾患。在某些實(shí)施方案中，TRPA1抑制劑可以用于治療疼痛。如 上所述，TRPA1抑制劑可以用于治療因損傷或疾病導(dǎo)致的疼痛和作為治 療結(jié)果經(jīng)歷的疼痛。典型類型的疼痛包括傷害性疼痛，炎性疼痛和神 經(jīng)性疼痛。這類疼痛可以為慢性的或急性的。TRPA1抑制劑可以用于治 療任意上述類型疼痛中的一種或多種。在某些實(shí)施方案中，TRPA1抑制 劑可以用于治療傷害性疼痛。在某些其它實(shí)施方案中，TRPA1抑制劑可 以用于治療炎性疼痛。在某些其它實(shí)施方案中，TRPA1抑制劑可以用于 治療神經(jīng)性疼痛。
如上所述，TRPA1抑制劑特別可以用于治療與癌癥，骨關(guān)節(jié)炎，類 風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，皰滲后神經(jīng)痛，燒傷和其它上述適應(yīng)征相關(guān)的疼痛。 為了進(jìn)一步例證，可以使用本發(fā)明化合物所針對的額外典型適應(yīng)征包 括口腔疼痛，法布里病，復(fù)雜性區(qū)域性疼痛綜合征，胰腺炎和纖維肌 痛綜合征。
法布里病
手和足中不明的疼痛主訴可以為出現(xiàn)的特征。這些癥狀稱作肢端 感覺異常，因?yàn)樗鼈兎从吵鰹樵摬☆l繁表現(xiàn)的周圍神經(jīng)病。這種疼痛 可以為發(fā)作性的和慢性的。急性發(fā)作與因接觸極端的溫度，應(yīng)激，情 緒和/或疲勞引起。
纖維肌痛
纖維肌痛(FMS;纖維肌痛綜合征)為泛發(fā)性肌肉骨骼痛和疲勞病 癥。纖維肌痛的特征在于肌肉，韌帶和腱中的疼痛。該疾患對女性的 影響超過男性并且在所有年齡的人中發(fā)生?？傊?，據(jù)估計(jì)FMS影響3-6。/。 的人群。
患者描述的與纖維肌痛相關(guān)的疼痛，為深度肌肉酸痛，搏動(dòng)，急 痛和刺痛。疼痛有時(shí)包括強(qiáng)烈燒灼感。疼痛和僵硬通常在早晨或特定 肌群反復(fù)應(yīng)用后惡化。
另外，從輕度到致殘的不同水平的疲勞通常與纖維肌痛相關(guān)。纖
維肌痛的其它癥狀包括胃腸癥狀。在約40 - 70。/。的FMS患者中發(fā)生腸易 激綜合征和IBS-類癥狀，諸如便秘，腹瀉，頻繁腹痛，腹部脹氣和惡 心。酸反流或胃食管反流病(GERD)以類似頻率發(fā)生。
FMS的另一種頻繁和虛弱性癥狀為慢性頭痛，包括偏頭痛和和緊張 型頭痛。約70。/。的FMS患者經(jīng)歷這類疼痛。另外，F(xiàn)MS患者通常發(fā)生在顎， 牙齒和口腔中產(chǎn)生疼痛的顳下頜關(guān)節(jié)功能紊亂綜合征(也稱作TMJ)。
TMJ還可以加劇疼痛。
FMS的其它常見癥狀包括，但不限于經(jīng)前期綜合征和痛性期；胸 痛；晨僵；認(rèn)知或記憶缺陷；麻木和刺痛感；肌肉顫搐；膀胱過敏； 腫脹四肢感覺；皮膚敏感性；干眼和口干燥；頭暈；和協(xié)調(diào)受損。另 外，患者通常對氣味，噪音和亮光敏感。
FMS的原因仍然不明了。然而，該病的發(fā)作與感染(病毒或細(xì)菌性)， 類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，狼瘡和曱狀腺功能減退相關(guān)。這些有趣鐵可能的觸 發(fā)器之間的相關(guān)性不明確。
FMS對患者的影響直接與疼痛和疲勞水平相關(guān)。疼痛可以如此嚴(yán)重 至干擾正常工作或家族功能作用。目前無法治愈FMS且最新的療法主要 集中于改善睡眠(緩解疲勞)和治療疼痛。本發(fā)明的化合物可以用于輔 助控制與FMS相關(guān)的疼痛。這類疼痛包括，但不限于顎，牙齒和口腔中 的口腔疼痛。這類疼痛還包括非口腔肌肉骨骼肌疼痛，因頭痛導(dǎo)致的
疼痛和因胃腸癥狀導(dǎo)致的疼痛。
復(fù)雜性區(qū)域疼痛綜合征(CRPS;也稱作慢性區(qū)域性疼痛綜合征)為 慢性疼痛疾患。CRPS在先稱作反射性交感神經(jīng)營養(yǎng)不良(RSD)。 CRPS 為影響皮膚，肌肉，關(guān)節(jié)和骨的慢性痛性和進(jìn)行性神經(jīng)疾患。該綜合 征通常在受損四肢中發(fā)生，諸如斷腿或術(shù)后。然而，許多病例僅涉及 小的損傷，諸如扭傷，且有時(shí)不能鑒定沉淀性損傷事件。CRPS涉及與 損傷嚴(yán)重性不成比例的連續(xù)強(qiáng)烈疼痛。疼痛隨時(shí)間惡化而非改善。
盡管CRPS可以影響身體的各種區(qū)域，但是最常見的是影響臂，腿， 手或足。通常疼痛在肢體一部分中開始，并且隨時(shí)間擴(kuò)散以便包括整
個(gè)肢體乃至包括不同的肢體。典型特征包括在受損肢體或身體部分的 皮膚顏色和溫度顯著變化，伴隨強(qiáng)烈燒灼感疼痛，皮膚敏感性，出汗 和腫脹。
一般而言，CRPS的特征為兩類。I型在沒有沉淀性神經(jīng)損傷存在下 發(fā)生-不過，可以存在一定其它類型的沉淀性損傷。II型(在先稱作皮 膚灼痛)在神經(jīng)損傷后發(fā)生。這些類型僅為描述性的并且不與癥狀或預(yù) 后相關(guān)。
美國國立神經(jīng)病和卒中研究所(The National Institute of Neurological Disorders and Strokes, NINDS)報(bào)告有2% - 5%的周圍 神經(jīng)損傷患者和12%-21%的身體一側(cè)麻痹(偏癱)患者發(fā)生作為并發(fā)癥 的反射性交感神經(jīng)營養(yǎng)障礙。The Reflex Sympathetic Dystrophy Syndrome Association of America (RSDSA)報(bào)告該疾患在骨折后有 1-2%的發(fā)生。
與CRPS發(fā)作相關(guān)的沉淀性事件包括如下腦損害，心臟病，心臟 病發(fā)作，感染，身體一側(cè)麻痹(偏癱)，放療，反復(fù)運(yùn)動(dòng)病癥(例如，腕 管綜合征)，脊髓病癥，手術(shù)和創(chuàng)傷(例如，骨折，槍傷，交通事故)。 然而，在10-20%的病例中不能發(fā)現(xiàn)沉淀性事件。注意在CRPS發(fā)作前發(fā) 生的損傷可能顯著，也可能不顯著。
CRPS的癥狀可能在三個(gè)階段發(fā)展。急性階段在前l(fā)-3個(gè)月過程中發(fā) 生并且可以包括灼痛，腫脹，對觸摸的敏感性增加，受損區(qū)域中的毛 發(fā)增加和指曱生長，關(guān)節(jié)痛和顏色和溫度改變。營養(yǎng)不良階段可涉及 持續(xù)疼痛和胂脹。受影響的肢體通常感覺觸摸涼并且看起來淡藍(lán)色。
存在典型肌強(qiáng)直和消瘦(萎縮)以及早期骨損失(骨質(zhì)疏松癥)。這些癥 狀通常在發(fā)生所述病癥后的3-6個(gè)月發(fā)生。在萎縮階段過程中，皮膚變 涼和有光澤，發(fā)生肌強(qiáng)直增加和虛弱且癥狀可以擴(kuò)散至另一肢體。
其它癥狀包括灼痛，對觸摸極度敏感性，皮膚顏色改變(紅色或 淡藍(lán)色)，皮膚溫度改變(熱或冷)，關(guān)節(jié)痛，腫脹(水胂)，頻繁感染， 肌強(qiáng)直，肌痙攣，顫動(dòng)，虛弱，皮炎，濕療，出汗過多和偏頭痛。TRPA1 抑制劑不僅可以用于治療與CRPS相關(guān)的疼痛，而且可以緩解這些其它
癥狀中的許多，包括皮炎，濕滲和偏頭痛。
具有CRPS的患者通常患有因疾病對生活質(zhì)量的影響導(dǎo)致的抑郁癥 和焦慮。
目前無法治愈CRPS且由此治療的一般目的在于緩解痛性癥狀。醫(yī) 生可以開據(jù)局部止痛藥，抗抑郁藥，皮質(zhì)類固醇和用于緩解疼痛的阿 片類物質(zhì)的處方。然而，在這一點(diǎn)上，無單一藥物或藥物組合產(chǎn)生持 續(xù)長效的癥狀改善。其它治療可以包括物理療法，交感神經(jīng)阻滯，脊 髓刺激和鞘內(nèi)藥物泵以便通過脊髓遞送阿片類物質(zhì)和局部止痛藥。
治療目的在于控制疼痛并且盡可能地維持受侵害的肢體運(yùn)動(dòng)能 力。設(shè)計(jì)通常合并各種治療方式的個(gè)體化的治療計(jì)劃。目前使用物理 療法，藥物，神經(jīng)阻滯和心理支持?？梢允褂帽景l(fā)明的TRPA1抑制劑代 替目前的治療方式中的一種或多種，或除目前治療方式的一種或多種 外還使用本發(fā)明的TRPA1抑制劑。例如，TRPA1抑制劑可以用作目前藥
物的可替代選擇，但合并物理療法。
TRPA1抑制劑提供了控制CRPS患者疼痛的可替代選擇。TRPA1抑制 劑可以與任何目前用于治療CRPS患者的藥物聯(lián)用。可選擇地，TRPA1 抑制劑可以用作可選擇的藥物。
除藥物療法外，CRPS患者通常接受物理療法。除物理療法外還可 以使用TRPA1抑制劑。物理療法對輔助保持受侵害的肢體關(guān)節(jié)活動(dòng)度和 功能而言是重要的。例如使用TRPA1抑制劑適當(dāng)控制疼痛不僅增加患者 的舒適感，而且有利于物理療法的介入。
與用于控制CRPS患者疼痛的特定療法組合無關(guān)，心理支持具有重 要意義。TRPA1抑制劑可以與心理支持聯(lián)用。
本發(fā)明的TRPA1抑制劑可用于治療CRPS。例如，本發(fā)明的TRPA1抑 制劑可以用于輔助緩解與CRPS相關(guān)的疼痛。TRPA1抑制劑可以單獨(dú)使用 或作為輔助控制疼痛和與CRPS相關(guān)的其它癥狀的總體治療方案的組成 部分使用?？刂艭RPS患者疼痛對維持有意義的生活質(zhì)量而言是重要的。 此外，有效控制疼痛能夠使患者參與物理療法，以便輔助保持受侵害 肢體的運(yùn)動(dòng)能力和應(yīng)用。
胰腺炎為胰腺的炎癥。胰腺為胃后部的大腺體并且接近十二指腸。 一般而言，消化酶不會(huì)變?yōu)榛钚缘?，直到它們達(dá)到小腸，其中它們開 始消化食物。但如果這些酶在胰腺內(nèi)部變?yōu)榛钚缘?，那么它們就開始" 消化"胰腺自身。
急性胰腺炎突發(fā)，持續(xù)短時(shí)間期限并且通常自我消退。慢性胰腺 炎不會(huì)自我消退并且導(dǎo)致緩慢的胰腺破壞。任一形式均可以導(dǎo)致嚴(yán)重 并發(fā)癥，包括出血，組織損害和感染。
急性胰腺炎可以為嚴(yán)重的威脅生命的疾病，同時(shí)伴隨許多并發(fā)癥。
在美國每年發(fā)生約80, 000個(gè)病例并且這些病例中接近20%的特征為嚴(yán) 重性的。
盡管并非唯一的，但是急性胰腺炎通常由膽石或酒精濫用導(dǎo)致。 急性胰腺炎通常以上腹部中疼痛開始，可以持續(xù)幾天。疼痛可能是重 度的并且可以變成持續(xù)不斷的。疼痛可以局限于腹部或可以到達(dá)背部 和其它區(qū)域。有時(shí)并且對某些患者而言，疼痛為突發(fā)的和強(qiáng)烈的。其 它時(shí)間或?qū)τ谄渌颊叨?，疼痛開始為輕度疼痛，在進(jìn)餐后加劇。 具有急性胰腺炎的人通?？雌饋聿⑶腋杏X極為痛苦。其它癥狀可以包 括腹部腫脹和觸痛，惡心，嘔吐，發(fā)熱和疾脈。急性胰腺炎的嚴(yán)重病 例可以導(dǎo)致脫水和低血壓并且甚至可能導(dǎo)致器官衰竭，內(nèi)出血或死亡。
在急性胰腺炎發(fā)作過程中，淀粉酶和脂肪酶的血液水平通常增加 至少3倍。葡萄糖，鈣，鎂，鈉，鉀和碳酸氫根的血液水平也可能發(fā)生 變化。
目前的治療取決于發(fā)作的嚴(yán)重性。 一般而言，設(shè)計(jì)治療用于支持 重要身體功能，控制疼痛和預(yù)防并發(fā)癥。盡管急性胰腺炎一般在幾天 內(nèi)消退，但是通常需要控制發(fā)作過程中的疼痛。TPRV3抑制劑可以用于 緩解與急性胰腺炎相關(guān)的疼痛。
慢性胰腺炎-如果對胰腺的損傷持續(xù)發(fā)生，那么可以形成慢性胰腺 炎。慢性胰腺炎在消化酶攻擊和破壞胰腺和附近的組織時(shí)發(fā)生，導(dǎo)致 瘢痕形成和疼痛。慢性胰腺炎可以由酒精中毒或阻滯的，受損的或狹 窄的胰腺管導(dǎo)致。另外，遺傳因素看起來影響該病，并且在某些病例
中尚無可鑒定的原因(所謂的特發(fā)性胰腺炎)。
具有慢性胰腺炎的大部分人具有腹痛。疼痛在進(jìn)餐或飲水時(shí)可能 加劇，擴(kuò)散至背部或變成持續(xù)不斷并且可能致殘。其它癥狀包括惡心， 嘔吐，體重減輕和脂糞。
緩解疼痛為治療慢性胰腺炎的第一步。 一旦疼痛得到控制，就考 慮實(shí)施高碳水化合物和低脂肪膳食計(jì)劃。胰酶可以用于輔助補(bǔ)償減少 的從受損胰腺中產(chǎn)生的酶。有時(shí)需要胰島素或其它藥物控制血糖。
盡管一般使用藥物療法控制疼痛，但是手術(shù)對緩解疼痛而言可能 是必要的。有必要實(shí)施手術(shù)以便排空擴(kuò)大的胰腺管，乃至除去部分嚴(yán) 重受損的胰腺。
慢性胰腺炎經(jīng)常伴有疼痛。例如，在約75%的酒精性慢性胰腺炎患 者，50%的遲發(fā)性特發(fā)性慢性胰腺炎患者和100%的早發(fā)性特發(fā)性慢性胰 腺炎患者中存在疼痛(DiMagno， 1999， Gastroenterology 116(5): 1252- 1257)。
少數(shù)具有疼痛的患者具有易于鑒定的損害，它們相對易于采用手 術(shù)或內(nèi)窺鏡方式治療。在其他患者中，通常認(rèn)為疼痛因不同原因?qū)е拢?包括胰內(nèi)壓升高，局部缺血和纖維化。然而，不受理論約束，這些現(xiàn) 象可能并非疼痛的主要原因，而疼痛可能因?qū)ι窠?jīng)束膜的損害和隨后 的神經(jīng)接觸介體和炎癥產(chǎn)物誘導(dǎo)的神經(jīng)元致敏背景而產(chǎn)生。
由于有效控制疼痛對慢性胰腺炎患者的重要性，所以治療痛性癥 狀的其它療法是重要和有用的。TRPA1抑制劑可以用于控制與慢性胰腺 炎相關(guān)的疼痛。TRPA1抑制劑可以單獨(dú)使用或作為控制具有慢性胰腺炎 的患者的總體治療計(jì)劃的組成部分使用。例如，可以將TRPA1抑制劑與 作為為控制具有慢性胰腺炎患者設(shè)計(jì)的治療方案的組成部分的胰酶和 /或胰島素一起給藥。
口腔疼痛為可以使用本發(fā)明TRPAl抑制劑治療的特定疼痛類型。術(shù) 語"口腔疼痛"意旨任何在口腔，咽喉，唇，齒齦，舌或顎中的疼痛。
該術(shù)語的使用與疼痛的原因和口腔疼痛是特定疾病，損傷或疾患的原 發(fā)癥狀還是繼發(fā)癥狀無關(guān)。
口腔疼痛具有許多可能的原因。在某些實(shí)施方案中，口腔疼痛因 口腔，顎，牙齒，齒齦，咽喉，唇或舌損傷或疾病導(dǎo)致。在某些其它 實(shí)施方案中，口腔疼痛是主要侵害身體另一部分的損傷或疾病的后果。 在其它實(shí)施方案中，口腔疼痛是用于治療口腔或身體另一部分損傷或
疾病的療法的副作用。TRPA1抑制劑用于治療口腔疼痛，與其原因無關(guān)。 所有疼痛均對患者的健康和良好的生命質(zhì)量具有嚴(yán)重的負(fù)面影 響。然而，口腔疼痛可能對患者健康和生命質(zhì)量具有特別嚴(yán)重性的影 響。特別地，口腔疼痛可以干擾合適的飲食和^L水。因此，具有口腔
疼痛的個(gè)體易于發(fā)生體重減輕，營養(yǎng)不良和脫水。在某些情況中，口 腔疼痛可以如此嚴(yán)重地干擾水化和營養(yǎng)，以至于需要靜脈內(nèi)，鼻胃或
其它人工支持(例如，管飼和/或水化)。另外，口腔疼痛可以干擾適當(dāng) 的口腔衛(wèi)生?？谇恍l(wèi)生不良可以進(jìn)一步加劇口腔疼痛的許多原因，例 如，因感染或膿腫導(dǎo)致的口腔疼痛。
某些實(shí)施方案中，口腔疼痛因口腔中的潰瘍，瘍或其它損害導(dǎo)致。 例如，口腔疼痛可以由舌，齒齦，唇，咽喉或口腔中的其它組織的潰 瘍，瘍或其它損害導(dǎo)致?？蛇x擇地或另外，口腔疼痛可以由舌，齒齦， 唇，咽喉或口腔中的其它組織炎癥導(dǎo)致。炎癥可以伴隨潰瘍或其它損 害，或炎癥可以在潰瘍或其它損害形成前或沒有潰瘍或其它損害存在 下發(fā)生。
本發(fā)明關(guān)注通過經(jīng)本文所述的任何給藥途徑給予TRPA1抑制劑治 療口腔疼痛。在某些實(shí)施方案中，通過口服給予用于治療口腔疼痛的 TRPA1抑制劑。優(yōu)選口腔給予TRPA1抑制劑用于治療口腔疼痛的制劑為 漱口藥，凝膠，牙膏或其它糊劑，液體，錠劑，用拭子或結(jié)合護(hù)口器 或牙科裝置。給藥的制劑和特定方法取決于口腔疼痛的原因，患者的 總體健康狀況和主要的醫(yī)療條件，疼痛的嚴(yán)重性和患者同時(shí)接受的其 它藥物或療法。醫(yī)務(wù)人員容易地確定用于特定患者的最佳制劑。
下文提供的疾患指定例證可以導(dǎo)致口腔疼痛的不同病因的損傷和 疾病的范圍。本發(fā)明關(guān)注給予本發(fā)明的TRPA1抑制劑治療或預(yù)防口腔疼 痛。在某些實(shí)施方案中，可以口服給予本發(fā)明的化合物，例如作為凝
膠，糊劑，漱口藥或其它口服制劑，以便有助于治療或預(yù)防與4壬4可損 傷，疾病或疾患相關(guān)的口腔疼痛。與特定的制劑無關(guān)，本發(fā)明關(guān)注通 過例如直接施用于受侵害的口腔區(qū)域，沖洗整個(gè)口腔，用拭子，用注 射器或在護(hù)口器或其它牙科裝置上的給藥。
就這些疾患中的任意種而言，本發(fā)明關(guān)注單獨(dú)給予TRPA1抑制劑或 將其與適合于特定損傷或疾患的一種或多種其它化合物或治療方案聯(lián)
合給予。
口腔粘膜炎
口腔粘膜炎，也稱作口炎，為許多癌癥治療中的常見并發(fā)癥。接 受全身化療和/或局部放療的患者通常發(fā)生口腔粘膜的極度疼痛的潰 瘍。這種副作用并不限于患有頭頸癌的患者，而是使侵害全部化療患 者的約40%的虛弱'性副作用(Prevention and Treatment of Oral Mucositis in Cancer Patients, 1998, Best Practice: 2, l-6頁)。
口腔粘膜炎為極度疼痛的。另外，口腔粘膜炎干擾癌癥患者的適 當(dāng)營養(yǎng)和水化。由于進(jìn)行化療和/或放療的患者的已經(jīng)受損的狀態(tài)，所
以進(jìn)一步干擾營養(yǎng)和水化可能嚴(yán)重地?fù)p害患者的健康。此外，這些潰 瘍產(chǎn)生增加的感染風(fēng)險(xiǎn)。這種風(fēng)險(xiǎn)在免疫系統(tǒng)受損的患者中是特別嚴(yán) 重的。處于發(fā)生機(jī)會(huì)感染的特定風(fēng)險(xiǎn)中的患者的實(shí)例為治療包括除去 一個(gè)或多個(gè)淋巴結(jié)的患者，預(yù)先接受為準(zhǔn)備骨髓或干細(xì)胞移植而進(jìn)行 的高劑量化療的患者和具有潛在的免疫抑制病癥(例如，HIV或肝炎) 的患者。 口瘡
口瘡，也稱作口瘡性潰瘍(口瘡)可以相對小和看不見。然而，它 們通常疼痛，持久和惱人?？诏彏榭梢允惯M(jìn)食和交談不適的口腔中的 表淺潰瘍。它們可以在舌，軟上腭，面頰或唇內(nèi)或齒齦基上出現(xiàn)。口 瘡不同于感冒瘡的方面在于它們出現(xiàn)在口腔的內(nèi)部軟組織上，但并非 接觸傳染的。相反，感冒瘡幾乎始終從唇上開始并且通常不會(huì)擴(kuò)散至 口腔的軟組織。此外，感冒瘡由一種形式的皰瘆病毒導(dǎo)致，使得它們 具有極大的接觸傳染性。
研究人員一般認(rèn)為應(yīng)激或組織損傷可以導(dǎo)致口瘡發(fā)疹。在某些情 況中，小的損傷，例如口腔內(nèi)咬傷或食用粗糙的食物可以引起口瘡。
其它原因可以包括(i)有缺陷的免疫系統(tǒng)功能；(ii)營養(yǎng)問題， 諸如維生素B-12，鋅，葉酸或鐵缺乏；(iii)胃腸道疾??；(iv)食 物過敏；或(v)月經(jīng)周期。
口瘡可以在任何年齡段上發(fā)生，但通常它們首先出現(xiàn)在IO- 40歲 之間。盡管口瘡一般會(huì)自我消退，但是它們可以使人極為不適。牙科/ 牙膿腫
感染或腐敗可以導(dǎo)致膿肺。膿腫可以具有嚴(yán)重的牙科和醫(yī)學(xué)后果。 例如，牙膿腫導(dǎo)致的嚴(yán)重感染可以導(dǎo)致竇或全身感染。此外，膿腫可 以導(dǎo)致需要拔出一顆或多顆牙齒。拔牙可以因明顯的齲齒或因?yàn)楦腥?過重而難以在有壞牙存在下完全治療而是必需的。
與最終的結(jié)果無關(guān)，牙膿腫可以是極端疼痛的。不僅是不適感的 疼痛，而且可以干擾適當(dāng)?shù)臓I養(yǎng)和水化。減輕與牙膿腫相關(guān)的疼痛的 方法和組合物可以對其控制提供明顯的有益性。
胃食管反流疾病
胃食管反流疾病或GERD在食管下括約肌(LES)無法適當(dāng)閉合和胃 內(nèi)容物滲漏回食道時(shí)發(fā)生。LES是作為食道與胃之間的閥門起作用的食 道下部的肌肉環(huán)。當(dāng)反流的胃酸接觸食道內(nèi)層時(shí)，它在胸或咽喉中產(chǎn) 生燒灼感。這通常顯示為胃灼熱。反流的流體甚至可以在返回到口腔 這被嘗到，即通常稱作酸消化不良的感覺。
盡管偶然的胃灼熱并不常見并且不一定表示GERD，但是每周發(fā)生 兩次以上的胃灼熱可能是GERD的征兆。除胃灼熱和消化不良的不適感 外，GERD還可以導(dǎo)致其它嚴(yán)重的健康問題。例如，隨時(shí)間的推移，酸 反流回咽喉可以導(dǎo)致口腔，齒齦，舌，咽喉或唇中的口瘡，損害或潰 瘍。這些損害可以產(chǎn)生明顯的疼痛，可以干擾營養(yǎng)和水化并且可以使 人易受感染。
給予本發(fā)明的TRPA1抑制劑可以用于治療因GERD造成的損吝產(chǎn)生 的口腔疼痛。TRPA1抑制劑可以作為治療方案的組成部分，其中給予
T RP A1抑制劑以便有助于控制口腔損害的不適感，同時(shí)將其它活性劑或 治療干預(yù)用于控制GERD。 齦口炎
齦口炎為涉及因病毒感染導(dǎo)致的口腔和齒齦上的潰瘍的病癥。齦 口炎的特征在于齒齦和粘膜炎癥和多發(fā)性口腔潰瘍。炎癥和潰瘍因病 毒感染，特別是那些導(dǎo)致常見兒童疾病的病毒感染，諸如皰滲病毒(感 冒瘡和急性皰滲性口炎)和皰滲性口炎病毒(手足口病和皰滲性咽峽 炎)所致。這些病毒產(chǎn)生在齒齦組織(牙齦)，面頰內(nèi)層(頰粘膜)或口腔 中的其它軟組織上具有淺灰色或淺黃色基底和淺紅色邊緣的表淺潰 瘍。盡管該疾患可以發(fā)生在任何年齡的患者中，但是特別在兒童中常 見。
因這些病毒導(dǎo)致的口腔潰瘍可能極為疼痛。這些潰瘍通常伴隨發(fā) 熱。大體上，該疾患可以持續(xù)幾周才能消退。對齦口炎7>認(rèn)的治療集 中于減輕因口腔潰瘍導(dǎo)致的疼痛。這對可能因其不適感而拒絕食物或 液體的兒童而言特別重要，由此使他們尤其易發(fā)生脫水。本發(fā)明的化 合物可以用于治療于這些口腔潰瘍相關(guān)的疼痛。
鵝口齊
鵝口瘡是一般由因口腔粘膜中酵母真菌白色假絲酵母(Candida albicans)導(dǎo)致的真菌感染。嚴(yán)格地講，鵝口瘡僅為嬰兒口腔中暫時(shí) 性的假絲酵母屬(Candida)感染。然而，該術(shù)語一般應(yīng)用指在兒童和 成年人口腔和咽喉中的真菌感染。
假絲酵母屬存在于幾乎半數(shù)群體的口腔中。例如，每位戴有補(bǔ)齒 的人存在假絲酵母屬，但不一定患有任何疾病作用。 一般而言，假絲 酵母屬不會(huì)產(chǎn)生問題，直到在口腔中存在化學(xué)改變，使得有利于假絲 酵母屬的生長超過了一般棲息于口腔和咽喉中的其它微生物。足以允 許假絲酵母屬生長的口腔化學(xué)改變可以作為服用抗生素或化療劑的副 作用發(fā)生。患者的整體健康也可以影響口腔化學(xué)。HIV感染，糖尿病， 營養(yǎng)不良，老化和免疫缺陷為典型情況，它們可以轉(zhuǎn)換口腔化學(xué)以便 足以允許口腔和咽喉中假絲酵母屬過度生長。
除了 口腔化學(xué)改變之后，補(bǔ)齒不充分適合的人可能持續(xù)在其口腔 粘膜中發(fā)生破損。這些破損為口腔和唇中的假絲酵母屬感染提供了機(jī) 會(huì)。
鵝口瘡在口腔中產(chǎn)生白霜色或黃斑。這些斑點(diǎn)為輕度隆起的。如 果刮取這些斑點(diǎn)，那么它們趨向于出血。鵝口療可以極為不適并且可 能導(dǎo)致口腔和咽喉中的燒灼感。這種不適感可以干擾水化和營養(yǎng)。此 外，這種不適感可以干擾適當(dāng)?shù)目谇恍l(wèi)生，諸如刷牙和剔牙。
鵝口瘡的標(biāo)準(zhǔn)治療通過給予抗真菌藥來進(jìn)行?？梢詫谇恢苯咏o 予這些活性劑，例如，吸入的軟錠劑形式或在吞咽前在口腔中保持的 口服混懸液劑。實(shí)例包括制霉菌素(例如，制霉素口服混懸劑)，兩性
霉素(例如，兩性霉素B錠劑)或咪康唑(例如，達(dá)克寧口服凝膠)。除標(biāo) 準(zhǔn)抗真菌療法外，還可以給予本發(fā)明的化合物以便控制與鵝口掩相關(guān) 的疼痛和不適感。 舌炎
舌炎為因炎癥導(dǎo)致的舌異常。舌炎在舌的急性或慢性炎癥存在時(shí) 發(fā)生。它導(dǎo)致舌腫脹和顏色改變。在舌表面上的指狀突出物(乳頭)消 失，使舌表現(xiàn)出平滑。舌炎有許多原因，包括，但不限于如下細(xì)菌 感染；病毒感染(包括口單純皰滲)；損傷或創(chuàng)傷；接觸刺激物(例如煙 草，酒精，熱食物，香辛料調(diào)味品)；過敏反應(yīng)；維生素或礦物缺乏(例 如，缺鐵性貧血，惡性貧血和其它B-維生素缺乏)；或作為其它疾病或 病癥的副作用。
舌炎的癥狀包括腫脹，酸痛和舌壓痛。另外，舌通常改變外觀， 變平滑和顏色暗紅。作為腫脹和不適感的結(jié)果，舌炎通常使得咀嚼， 吞咽和說話困難。
治療舌炎的典型療法取決于炎癥的主要原因。與可以給予的特定 的抗生素，抗炎藥或抗病毒藥以抗擊舌炎的主要原因無關(guān)，可以給予 本發(fā)明的化合物以便減輕與舌炎相關(guān)的疼痛和不適感。減輕與舌炎相 關(guān)的疼痛在它干擾適當(dāng)?shù)臓I養(yǎng)和水化或在它干擾或阻止了適當(dāng)?shù)目谇?衛(wèi)生時(shí)尤其是重要的。 皮肢病
口腔潰瘍可以因任意許多皮膚病導(dǎo)致。例如，扁平苔癬，天皰瘡， 類天皰瘡和多形紅斑可以導(dǎo)致口腔潰瘍。這類口腔潰瘍可以產(chǎn)生明顯 的疼痛，而這種疼痛可以使用本發(fā)明的化合物治療。
減輕疼痛可以輔助有利于愈合。這對具有發(fā)生口腔潰瘍的天皰瘡 和類天皰瘡的患者而言尤其重要。這類患者易于免疫抑制并且由此可 能更易發(fā)生來自口腔中的損害的機(jī)會(huì)感染。
胃腸疾病
口腔潰瘍可以因任意許多胃腸疾病導(dǎo)致。對適當(dāng)?shù)南杆岷?其它消化性酸的控制和流動(dòng)，運(yùn)動(dòng)性和排除產(chǎn)生干擾的疾患可以導(dǎo)致 口腔潰瘍和其它損害。在某些情況中，口腔潰瘍?yōu)樗峄虿糠窒澄?反流入食道的結(jié)果。在其它情況中，口腔潰瘍因嘔吐所致。在其它情 況中，口腔潰瘍因維生素缺乏，礦物缺乏或胃腸疾病繼發(fā)的其它營養(yǎng) 缺乏而發(fā)生。在其它情況中，口腔潰瘍?yōu)樘卣髟谟诰S胃腸疾病的復(fù)雜 病原的組成部分。
因胃腸疾病或作為胃腸疾病的組成部分產(chǎn)生的口腔潰瘍可能極端 疼痛。它們可以破壞患者適當(dāng)?shù)臓I養(yǎng)和水化，該患者的胃腸疾病已經(jīng) 對膳食產(chǎn)生了多種局限性。因此，減輕與這些口腔潰瘍相關(guān)的不適感 和疼痛的方法和組合物為具有潛在胃腸疾患的患者提供了重要的有益 性。
可以導(dǎo)致炎癥，損害或潰瘍的典型胃腸疾患包括，但不限于克羅 恩病，潰瘍性結(jié)腸炎，腸易激綜合征，口炎性腹瀉和瘡滲樣皮炎
(Dermatitis herpetiformis)?？梢允褂蒙攀?，應(yīng)激控制和藥物控 制這些疾患的主要癥狀。本發(fā)明的TRPA1抑制劑可以用于輔助控制因任 意這些胃腸疾患導(dǎo)致的口腔炎癥，損害或潰瘍的疼痛和不適感。 類風(fēng)濕病
幾種類風(fēng)濕病的后果在于口腔潰瘍。例如，狼瘡，貝切特綜合征， Sweet綜合征和萊特爾病可以導(dǎo)致口腔潰瘍。這類口腔潰瘍可以產(chǎn)生可 以使用本發(fā)明化合物治療的明顯口腔疼痛。
斯耶格倫綜合征
口腔干燥為與斯耶格倫綜合征相關(guān)的常見癥狀?？谇桓稍镆蛲僖?產(chǎn)生減少所致。唾液是防護(hù)和保護(hù)口腔和口腔功能的主要體液。盡管
唾液大部分為水，但是它還包含60種以上用于下列重要功能的物質(zhì) 保護(hù)，潤滑和清潔口腔粘膜；輔助咀嚼，吞咽和談話；防止牙齦腐?。?防止口腔，牙齒和咽喉受到細(xì)菌，酵母和病毒感染；支持和有利于味覺。
由于唾液的重要功能，所以唾液分泌減少可以產(chǎn)生許多問題。如 果這種情況持續(xù)數(shù)月或數(shù)年，那么患者可能發(fā)生口腔并發(fā)癥，諸如吞 咽困難，嚴(yán)重和進(jìn)行性齲齒，口腔感染(特別是真菌)或它們的組合。 這些情況中的許多可以單獨(dú)產(chǎn)生不適感，并且還可以產(chǎn)生口腔損害或潰瘍。
可利用幾種藥物輔助增加具有口腔干燥的患者唾液分泌。毛果蕓 香堿(Salagen )和西維美林(Evoxac )減輕了 口腔干燥癥狀并且增加 了唾液分泌。然而，這些藥物不會(huì)預(yù)防齲齒或治療與口腔干燥癥狀或 效應(yīng)相關(guān)的口腔疼痛。本發(fā)明的化合物可以用于治療與口腔干燥相關(guān) 的疼痛。
維生素或礦物缺乏
在某些情況中，維生素或礦物缺乏可以導(dǎo)致口腔中的潰瘍或其它 潰瘍。例如，維生素C缺乏可以導(dǎo)致特征為壞血病的口腔損害。維生素 Bl, B2， B6或B12缺乏也可以導(dǎo)致口腔損害。另外，鋅，葉酸，鐵，硒 或4丐缺乏可以導(dǎo)致口腔損害。
在某些實(shí)施方案中，維生素或礦物缺乏為導(dǎo)致口瘡的誘發(fā)因素。 然而，維生素或礦物缺乏也可以產(chǎn)生其它類型的口腔潰瘍和損害。與 損害的性質(zhì)無關(guān)，本發(fā)明的化合物可以用于輔助控制相關(guān)疼痛。
過敏反應(yīng)
過敏反應(yīng)有時(shí)導(dǎo)致口瘡和其它口腔損害。因過敏反應(yīng)導(dǎo)致的口腔 損害在人口腔組織接觸致病過敏原時(shí)更為可能。然而，過敏原與口腔 組織之間的接觸不一定是產(chǎn)生口腔損害所需要的。可以導(dǎo)致口腔損害 的典型過敏原包括食物過敏原，諸如水果和蔬菜(例如，草莓，檸檬，
橙，菠蘿，蘋果，無花果，蕃茄)；貝類；巧克力；堅(jiān)果；乳制品(例 如，奶和干酪)；谷物(例如，蕎麥，小麥，燕麥，黑麥，大麥，谷物
中發(fā)現(xiàn)的谷蛋白)；添加劑(例如，肉桂醛(矯味劑)，苯甲酸(防腐劑)； 牙膏(例如，某些人對在某些牙骨和漱口液中發(fā)現(xiàn)的十二烷基硫酸鈉敏 感)；非類固醇抗炎藥(NSAID;某些人具有導(dǎo)致對作為對該類藥物反應(yīng) 的口瘡敏感)。
其它典型疾患和損傷
上述僅為產(chǎn)生或?qū)е卵装Y，損害，潰瘍或其它口腔疼痛來源的疾 病和疾患的典型。在其它實(shí)施方案中，口腔疼痛因口腔，顎，唇，齒 齦或牙齒損傷所致。在其它實(shí)施方案中，口腔疼痛因口腔手術(shù)所致， 例如，癌癥手術(shù)，拔牙或顎再塑。潰瘍導(dǎo)致口腔潰瘍和由此的口腔疼 痛的其它疾患包括，但不限于水痘(chickpox)，帶狀皰滲，傳染性 單核細(xì)胞增多癥，梅毒，肺結(jié)核，急性壞死性牙齦炎和口灼傷綜合征。 另外，導(dǎo)致免疫系統(tǒng)受損的疾患使患者處于口腔炎癥，損害或潰瘍等 并發(fā)癥風(fēng)險(xiǎn)中。HIV感染，AIDS和肝炎均為破壞免疫系統(tǒng)并且潰瘍導(dǎo)致 口腔損害或潰瘍的疾患。另外，服用免疫抑制劑的個(gè)體(例如，器官移 植接受者，骨髓接受者，千細(xì)胞接受者，具有自身免疫疾病的患者) 處于發(fā)生痛性口腔損害的風(fēng)險(xiǎn)增加。
本發(fā)明關(guān)注本發(fā)明的TRPA1抑制劑在治療口腔疼痛中的應(yīng)用-與潛 在原因無關(guān)。在某些實(shí)施方案中，可以通過口服給予治療口腔疼痛的 TRPA1抑制劑，例如，作為糊劑，漱口液，凝膠或其它液體制劑。在某 些實(shí)施方案中，通過拭子，護(hù)口器或其它牙科裝置給予糊劑，漱口液, 凝膠或其它液體制劑。在某些實(shí)施方案中，將所述的制劑通過局部施 用于口腔，但不攝入。例如，可以使用不吞咽的漱口劑。與制劑和給 藥途徑無關(guān)，本發(fā)明關(guān)注給予本發(fā)明主題的T R P A1抑制劑作為總體治療 策略的組成部分，該策略還包括適合于導(dǎo)致口腔炎癥，損害或潰瘍的 特定疾病或疾患的療法。
TRPA1抑制劑可用于治療因任意前述損傷，疾病或疾患導(dǎo)致的口腔
疼痛。另外，申請人注意到本發(fā)明主題的TRPA1抑制劑還可以用于治療 上述主要疾病和疾患自身。特別地，TRPA1抑制劑可以用于治療炎癥并 且由此用于治療具有炎性成分的疾病或疾患，無論這些癥狀是自身在 口腔中表現(xiàn)還是在身體的其它部分表現(xiàn)，只要它們本身可以用本發(fā)明 主題的TRPA1抑制劑治療。因此，本發(fā)明關(guān)注和認(rèn)識到對某些疾患而言， 給予TRPA1抑制劑的治療作用可以為雙重的(i)減輕與疾病或疾患的 一種或多種癥狀相關(guān)的疼痛；和(ii)治療主要癥狀或疾病。
疾病和損傷模型
拮抗TRPA1功能的化合物可以用于預(yù)防和治療任意上述損傷，疾 病，病癥或疾患。除這些化合物活性的體外測定外，易于在一種或?qū)?致動(dòng)物模型中測試其功效。作為實(shí)例，存在大量眾所周知的動(dòng)物模型。 可以選擇一種或多種合適的動(dòng)物模型(例如，就特定適應(yīng)征而言適合 的)。
一般可以將疼痛分類為慢性痛和急性痛。這兩類疼痛在期限和潛 在機(jī)制上不同。慢性痛不僅是持久的，而且一般性對使用目前可利用 的止痛藥，非類固醇抗炎藥和阿片類物質(zhì)治療不會(huì)有充分反應(yīng)。
慢性痛的兩個(gè)廣泛的亞類為神經(jīng)性疼痛和癌性痛。Wang和 Wang (2003) Advanced Drug Delivery Reviews 55: 949—965。神經(jīng) 性疼痛意旨因中樞系統(tǒng)(例如，神經(jīng)，脊髓，CNS， PNS)損害(例如，因 疾病，損傷，老化)導(dǎo)致的疼痛。與癌癥相關(guān)的疼痛可以因腫瘤浸潤， 神經(jīng)壓電，腫瘤分泌的物質(zhì)或特定的治療方案(例如，；改療，化療劑， 手術(shù))導(dǎo)致。
通常還根據(jù)機(jī)制將疼痛分類為傷害性的，炎性的或神經(jīng)性的。傷 害性疼痛為例如溫度改變或極端，接觸酸，接觸化學(xué)試劑，接觸力或 接觸壓力后經(jīng)歷的疼痛。痛性刺激的接受將沖動(dòng)送至背根神經(jīng)節(jié)。反 應(yīng)一般為反射性反應(yīng)(例如，射開刺激)和情緒反應(yīng)的組合。炎癥為免 疫系統(tǒng)對損傷或疾病的反應(yīng)。作為對損傷或疾病的反應(yīng)，補(bǔ)充免疫系 統(tǒng)的巨噬細(xì)胞，肥大細(xì)胞和其它細(xì)胞。這種細(xì)胞浸潤與細(xì)胞因子和其
它因子(例如，組胺，5-羥色胺，緩激肽，前列腺素，ATP， H+,神經(jīng) 生長因子，TNFa,內(nèi)皮縮血管肽，白細(xì)胞介素)的釋放一起可以導(dǎo)致 發(fā)熱，腫脹和疼痛。炎癥疼痛的目前治療包括Cox2抑制劑和阿片類物 質(zhì)。神經(jīng)性疼痛意旨因神經(jīng)系統(tǒng)(例如，神經(jīng)，脊髓，CNS， PNS)損害(例 如，因疾病，損傷，老化)導(dǎo)致的疼痛。神經(jīng)性疼痛的目前治療包括三 環(huán)抗抑郁藥，抗驚厥藥，Na+通道阻滯劑，NMDA受體拮抗劑和阿片類物質(zhì)。
存在大量用于研究疼痛的動(dòng)物模型。各種模型均使用不同活性劑 或操作以便刺激由損傷，疾病或其它疾患導(dǎo)致的疼痛。 Blackburn-Munro (2004) Trends in Pharmacological Sciences 25: 299-305 (例如，參見表l)。然后可以觀察受攻擊的動(dòng)物的行為特征。 易于通過在有與沒有測試化合物或操作存在下受攻擊動(dòng)物的行為特征 來測試能減輕動(dòng)物疼痛的化合物或操作。
用于研究慢性痛的典型行為試驗(yàn)包括自發(fā)性疼痛，異常性疼痛和 痛覺過敏試驗(yàn)。文獻(xiàn)同上。為了評價(jià)自發(fā)性疼痛，可以觀察姿勢，步 態(tài)，防傷害性征兆(例如，舔爪，過度修飾，過度探查行為，受損身體 部分保護(hù)和自殘)。為了測定引起的疼痛，可以在接觸熱(例如，熱損 傷模型)后檢驗(yàn)行為反應(yīng)。
疼痛的典型動(dòng)物模型包括，但不限于Chung模型，角叉菜膠誘發(fā)的 痛覺過敏模型，弗氏完全佐劑誘發(fā)的痛覺過敏模型，熱損傷模型，福 爾馬林模型和Bennett模型。神經(jīng)性疼痛(無炎癥)的Chung模型包括結(jié) 扎一條或多條脊神經(jīng)。Chung等(2004) Methods Mol Med 99: 35-45; Kim和Chung(1992) Pain 50: 355-363。結(jié)扎脊神經(jīng)導(dǎo)致動(dòng)物的各種 行為改變，包括熱痛覺過敏，冷異常性疼痛和進(jìn)行性疼痛。可以對結(jié)
在下觀察到的減少了這些結(jié)扎誘發(fā)的行為改變。
角叉菜膠誘發(fā)的痛覺過敏和弗氏完全佐劑(FCA)誘發(fā)的痛覺過敏 為炎性疼痛才莫型。Walker等(2003) Journal of Pharmacol Exp Ther 304: 56-62; McGaraughty等(2003) Br J Pharmacol 140: 1381 -1388;
Honore等(2005) J Pharmacol Exp Ther?？梢詫遣娌四z或FCA攻擊
在下觀察到的減少了熱痛覺過敏。此外，還可以在這些模型中評價(jià)化 合物拮抗TRPAl功能以便減輕冷和/或機(jī)械性超敏反應(yīng)的能力。 一般而 言，認(rèn)為角叉菜膠誘發(fā)的痛覺過敏模型模擬急性炎性疼痛，并且認(rèn)為 CFA模型模擬慢性痛和慢性炎性疼痛。
Bennett模型使用延長的爪局部缺血反映慢性痛。Xanthos等 (2004) J Pain 5: Sl。這提供了慢性痛的動(dòng)物模型，包括術(shù)后痛，復(fù) 雜性區(qū)域性疼痛綜合征和反射性交感神經(jīng)營養(yǎng)障礙。延長的局部缺血 誘導(dǎo)動(dòng)物的行為改變，包括對機(jī)械刺激的痛覺過敏，對冷的敏感性， 疼痛行為(例如，搖動(dòng)，舔和/或喜爪)和痛覺過度?？梢詫κ芄魟?dòng)物
察到;減少了任意或所有這些行為?？梢栽谟糜谀M術(shù)后痛的熱損傷 或UV-灼傷模型中進(jìn)行類似的實(shí)驗(yàn)。
偏頭痛與明顯的疼痛和不能完成正常工作相關(guān)。存在偏頭痛的幾 種模型，包括大鼠神經(jīng)神經(jīng)源性炎癥模型(參見Buzzi等(1990) Br J Pharmacol; 99: 202—206)和Burstein才莫型(參見Strassman等，(1996) Nature 384: 560-564)。
神經(jīng)性疼痛的其它模型包括基于脊髓損傷的中樞痛模型。慢性痛 通過誘導(dǎo)脊髓損傷，例如通過使重量落在脊髓手術(shù)暴露區(qū)上(例如落重 法模型)。脊髓損傷還可以通過粉碎或壓迫脊髓，通過遞送神經(jīng)毒素， 使用光化學(xué)或通過切成對半來誘導(dǎo)。Wang和Wang(2003)。
神經(jīng)性疼痛的其它模型包括周圍神經(jīng)損傷模型。術(shù)語周圍神經(jīng)病 包括各種疾病，疾患和損傷。本領(lǐng)域技術(shù)人員容易根據(jù)研究中的特定 疾患或疾病選擇合適的模型。典型模型包括，但不限于神經(jīng)瘤模型， Bennett模型,Seltzer模型，Chung模型(在L5或L5/L6上結(jié)扎)，坐骨 神經(jīng)水凍神經(jīng)松解術(shù)模型，下尾部主干切除術(shù)模型和坐骨神經(jīng)炎性神 經(jīng)炎模型。文獻(xiàn)同上。
炎性疼痛的典型模型包括足底內(nèi)緩激肽注射大鼠模型。簡言之，
使用Hargreave儀評價(jià)動(dòng)物的基線熱敏感性。然后全身給予TRPA1阻滯 劑。隨后將緩激肽注入爪并且使痛覺過敏發(fā)生。然后在接下來的幾小 時(shí)內(nèi)的多個(gè)時(shí)間點(diǎn)測定熱逃逸潛伏期(Chuang等，2001; Vale等，2004)。 還可以利用與特定疾病相關(guān)的神經(jīng)性疼痛的典型模型。糖尿病和 帶狀皰滲為通常伴隨神經(jīng)性疼痛的兩種疾病。甚至在急性帶狀皰滲發(fā) 作后，某些患者仍然持續(xù)患有帶狀皰滲后神經(jīng)痛并且經(jīng)歷持續(xù)數(shù)年的 持續(xù)性痛。可以在帶狀皰滲后神經(jīng)痛模型(PHN)中研究由帶狀皰滲導(dǎo)致 的神經(jīng)性疼痛和/或帶狀皰療后神經(jīng)痛?？梢栽谔悄虿⌒∈竽Ｐ鸵约疤?尿病性神經(jīng)病的化學(xué)誘導(dǎo)的模型中研究糖尿病性神經(jīng)病。Wang和 Wang (2003)。
如上所述，癌性痛可以具有任意許多原因且存在大量檢驗(yàn)涉及例 如化療劑或腫瘤浸潤的癌性痛的動(dòng)物模型。毒素相關(guān)的癌性痛的典型 模型包括長春新堿-誘導(dǎo)的周圍神經(jīng)病模型，泰素-誘導(dǎo)的周圍神經(jīng)病 模型和順鉑-誘導(dǎo)的周圍神經(jīng)病模型。Wang和Wang(2003)。由肺瘤浸潤 導(dǎo)致的癌性痛的典型模型為癌癥侵入疼痛模型(CIP)。文獻(xiàn)同上。
原發(fā)性和轉(zhuǎn)移性骨癌與巨痛相關(guān)。存在幾種骨癌性痛的模型，包 括小鼠股骨癌性痛模型(FBC)，小鼠跟骨癌性痛模型(CBC)和大鼠脛骨 癌模型(TBC)。文獻(xiàn)同上。
疼痛的其它模型為福爾馬林模型。類似于角叉菜膠和CFA模型，福 爾馬林模型包括將刺激物經(jīng)真皮內(nèi)或腹膜內(nèi)注入動(dòng)物。福爾馬林注射 液，即37%的曱醛溶液為最常用的真皮內(nèi)爪注射的試劑(福爾馬林試 驗(yàn))。將O. 5- 15%福爾馬林的溶液(通常約3. 5%)注入前-或后爪背側(cè)或 足面，在注射后的約60分鐘產(chǎn)生了增加和減少強(qiáng)度的雙相痛性反應(yīng)。 典型反應(yīng)包括舉，舔，嚙咬或搖動(dòng)爪。這些反應(yīng)被視為傷害性的。持 續(xù)3-5分鐘的反應(yīng)初期(也稱作早期)可能是因傷害感受器的直接化學(xué) 刺激所致。隨后是10-15分鐘，在此過程中，動(dòng)物幾乎未展示出暗示 傷害感受的行為。該反應(yīng)的第二期(也稱作晚期)在福爾馬林注射后約 15 - 2O分鐘開始并且持續(xù)20-4O分鐘，最初為傷害感受行為的次數(shù)和 頻率升高，達(dá)到峰值，然后減少。這些傷害性感受行為的強(qiáng)度依賴于
所用福爾馬林的濃度。第二期包括致敏期，在此過程中，炎癥現(xiàn)象發(fā) 生。對福爾馬林注射的反應(yīng)性的兩期使得福爾馬林模型為研究傷害性 感受和急性炎性痛的合適的模型。在某些方面中，它還可以成為神經(jīng) 性疼痛的模型。
除上述慢性痛的任意模型外，還可以在一種或多種急性痛模型中
測試拮抗TRPA1功能的化合物。Valenzano等(2005) Neuropharmacology 48: 658-672。與在慢性痛，急性痛或它們兩者 的模型中測試化合物無關(guān)， 一般用例如小鼠，大鼠或豚鼠進(jìn)行這些研 究(不過并非排它的)。另外，可以在提供體外疼痛測定的各種細(xì)胞系 中測試化合物。Wang和Wang(2003)。
許多尋求治療疼痛的個(gè)體患有內(nèi)臟痛。內(nèi)臟痛的動(dòng)物模型包括炎 性子宮疼痛的大鼠模型(Wesselmann等，(1997) Pain 73: 309-317)， 將芥子油注入胃腸道以便模擬腸易激綜合征(Kimball等，(2005) Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol, 288 (6): G1266-73)，將芥子 油注入膀胱以便模擬膀胱活動(dòng)過度或膀胱炎(Riazimand(2004) , BJU. 94: 158-163)?？梢酝ㄟ^扭體，胃腸炎癥或膀胱興奮性下降評價(jià)TRPAl 化合物的有效性。
上述動(dòng)物模型廣泛地用于疼痛研究。下面提供了描述這些模型在 研究疼痛中的應(yīng)用的額外典型參考熱損傷模型(Jones和Sorkin， 1998 ， Brain Res 810: 93-99 ; Nozaki-Taguchi和Yaksh， 1998 ， Neuroscience Lett 254: 25_ 28; Jun和Yaksh, 1998， Anesth Analg 86: 348-354)，福爾馬林模型(Yaksh等，2001， J Appl Physiol 90: 2386-2402),角叉菜膠-模型(Hargreaves等，1988， Pain 32: 77-88) 和CFA模型(Nagakura等，2003, J Pharmacol Exp Ther 306: 490-497)。
炎癥通常為疼痛的重要促成因素。照此，有用的是鑒定作為抗炎 藥起作用的化合物。減少神經(jīng)活動(dòng)的許多化合物也預(yù)防神經(jīng)源性癥。 為了直接測定炎癥，可以使用器官充滿度測量器評價(jià)大鼠爪體積。在 取基線測量值后，可以將角叉菜膠注入爪并且可以在用載體或藥物治 療的動(dòng)物中在數(shù)小時(shí)內(nèi)監(jiān)測體積。減輕爪腫脹的藥物被視為抗炎性的。
為了測試TRPAl拮抗劑在治療咳嗽中的功效，可以容易地進(jìn)行使用 有意識咳嗽豚鼠模型的實(shí)驗(yàn)。Tanaka和Maruyama(2003) Journal Pharmacol Sci 93: 465-470; McLeod等(2001) Br J Pharmacol 132: 1175-1178。簡言之，豚鼠用作有用的咳嗽動(dòng)物模型，因?yàn)椴煌谄渌?嚙齒動(dòng)物如小鼠和大鼠，豚鼠確實(shí)咳嗽。此外，豚鼠咳嗽表現(xiàn)出在咳 嗽動(dòng)物的姿態(tài)，行為和表現(xiàn)方面模擬人咳嗽。
為了誘導(dǎo)咳嗽，使有意識的豚鼠接觸誘導(dǎo)劑，諸如檸檬酸或辣椒 辣素。通過對咳嗽次數(shù)進(jìn)行計(jì)數(shù)測定動(dòng)物反應(yīng)?？梢酝ㄟ^給予活性劑 并且評價(jià)該活性劑在減少接觸檸檬酸，辣椒辣素或其它類似的咳嗽-誘導(dǎo)劑引起的咳嗽次數(shù)的能力來測定咳嗽抑制劑，例如抑制TRPA1的化 合物的有效性。按照這種方式，易于評價(jià)和鑒定用于治療咳嗽的TRPAl 抑制劑。
其它咳嗽模型包括無意識的豚鼠模型。Rouget等(2004) Br J Pharmacol 141: 1077-1083。任一上述模型可以適用于能夠咳嗽的其 它動(dòng)物。能夠咳嗽的其它典型動(dòng)物包括貓和狗。
存在大量嚙齒動(dòng)物失禁模型。它們包括通過神經(jīng)損害，尿道侵害 和炎癥誘導(dǎo)的失禁模型。尿道侵害模型包括大鼠膀胱流出道梗阻模型 (Pandita ， RK和 Andersson KE. Effects of intravesical administration of the K+ channel opener, Z.D6169, in conscious rats with and without bladder outflow obstruction. J Urol 162: 943-948， 1999)。炎癥模型包括將芥子油注入膀胱。
為了測試TRPA1抑制劑化合物在治療失禁中的有效性，可以在手術(shù) 實(shí)施部分膀胱流出道梗阻(B00)后對大鼠給予不同濃度的化合物(例 如，低，中和高濃度)。可以將不同劑量的TRPAl抑制性化合物的功效 與僅給予賦形劑的對照組(假擬對照組)進(jìn)行比較?？梢赃M(jìn)一步將功效 與給予陽性對照，諸如阿托品的大鼠進(jìn)行比較。預(yù)計(jì)阿托品減少BOO 模型中部分膀胱流出道梗阻后的膀胱活動(dòng)過度。注意在B00模型中測試 化合物時(shí)，可以對膀胱或尿道直接給予化合物(例如，通過導(dǎo)管)或全 身(例如，口服，靜脈內(nèi)，腹膜內(nèi)等)給予化合物。
如上所述，TRPA1抑制劑可以用于治療與胰腺炎相關(guān)的疼痛癥狀。 可以在一種或多種動(dòng)物模型中測試TRPA1抑制劑在胰腺炎疼痛控制中 的功效?？梢栽谝话愕奶弁磩?dòng)物模型中測試抑制劑，例如炎性疼痛或 內(nèi)臟痛模型。可選擇地或另外，可以在特別模擬伴隨疼痛的胰腺炎或 其它胰腺損傷的動(dòng)物模型中測試TRPA1抑制劑。
近期描述了胰腺疼痛的幾種大鼠模型(Lu， 2003， Anesthesiology 98 (3): 734-740; Winston等，2003, Journal of Pain 4 (6): 329-337)。 Lu等通過在大鼠中全身遞送dibutylin dichloride誘發(fā)胰腺炎。大鼠 在7天期限過程中表現(xiàn)出腹部von Frey絲刺激后退縮情況增加和熱刺 激后退縮潛伏期下降。在這些動(dòng)物誘導(dǎo)的疼痛狀態(tài)的特征還在于物質(zhì)P 在脊髓中的水平增加(Lu等，2003)。為了測試TRPA1抑制劑在該模型中 的功效，可以在遞送dibutylin dichloride后或與之同時(shí)給予TRPA1 抑制劑。可以對對照組動(dòng)物給予載體或公知的疼痛緩解劑。可以測定 疼痛指標(biāo)?？梢酝ㄟ^比較在接受TRPA1抑制劑的動(dòng)物中觀察到的疼痛指 標(biāo)與不接受TRPA1抑制劑的動(dòng)物的疼痛指標(biāo)來評價(jià)TRPA1抑制劑的功 效。另外，可以將TRPA1抑制劑的功效與公知疼痛藥物的功效比較。
還通過用全身L-精氨酸給藥誘發(fā)胰腺炎證實(shí)了 von Frey絲測試作 為測定傷害行為的方式的功效(Winston等，2003)?？梢灶愃频赝ㄟ^在 全身L-精氨酸給藥誘發(fā)胰腺炎后測試TRPA1抑制劑的功效。
Lu等還描述了使用在清醒和自由活動(dòng)的大鼠中通過內(nèi)在導(dǎo)管對胰 腺進(jìn)行急性傷害性刺激的胰腺疼痛的直接行為測定。這些測定包括套 籠交配，銅養(yǎng)和后肢伸展作為對胰腺內(nèi)緩激肽輸注的反應(yīng)。鞘內(nèi)給予 D-APV (NMDA受體拮抗劑)或單獨(dú)的嗎啡部分減輕了這種模型中的內(nèi)臟 痛行為。兩者的聯(lián)合用藥將疼痛行為降至基線?？梢灶愃频卦谠撓到y(tǒng) 中測試TRP A1抑制劑的功效。
任意上述動(dòng)物模型可以用于評價(jià)TRPA 1抑制劑在治療與胰腺炎相 關(guān)的疼痛中的功效。將該功效與無治療的組或安慰劑對照組比較。另 外或可選擇地，可以與 一種或多種公知疼痛緩解藥物比較評價(jià)功效。
疼痛治療的優(yōu)化
本發(fā)明的TRPA1抑制劑可以用于治療各種損傷，疾病，疾患和病癥。 TRPA1抑制劑的 一個(gè)重要治療應(yīng)用在于治療疼痛。正如疼痛為明顯且有 時(shí)虛弱性癥狀的損傷，疾患和疾病的廣泛實(shí)例例證的，用于治療疼痛 的改進(jìn)方法和組合物為大量患者提供了重大的有益性。這類方法和組 合物有可能改善患有不同范圍損傷，疾病和疾患的患者的護(hù)理質(zhì)量和 生活質(zhì)量。本申請關(guān)注抑制TRPA1的化合物可以用于治療任意上述損 傷，疾患或疾病。
治療疼痛的重要問題在于如何控制疼痛，同時(shí)減輕使用許多止痛 藥的副作用。例如，盡管許多阿片類物質(zhì)和其它麻醉品有效地減輕疼 痛，但是患者通常在服用這些藥物的同時(shí)不能駕車，工作或精力集中。 因此，盡管阿片類物質(zhì)，諸如嗎啡或dilaudin適合于短期應(yīng)用或在住 院期間應(yīng)用，但是它們對長期應(yīng)用而言不是最佳的。另外，阿片類物 質(zhì)和其它麻醉品會(huì)形成習(xí)慣并且患者一般發(fā)生對這些藥物的耐藥性。 阿片類物質(zhì)和其它麻醉品的這些特征使得它們對疼痛控制而言尚未達(dá) 到最佳。
本發(fā)明提供了體外和體內(nèi)應(yīng)用的TRP A1抑制劑。本發(fā)明還提供了包 含抑制TRP A1活性的特定類型化合物的組合物和藥物組合物。在某些實(shí) 施方案中，本發(fā)明主題的TRPA1抑制劑為選擇性的。換句話說，在某些 實(shí)施方案中，該化合物對TRPA1活性的抑制優(yōu)選超過了對其它離子通道 活性的抑制。在某些實(shí)施方案中，該化合物對TRPA1活性的抑制優(yōu)選超 過了對TRPV1， TRPV2， TRPV3， TRPV4和/或TRPM8活性的抑制。在某些 其它實(shí)施方案中，選擇該化合物是因?yàn)樗c涉及疼痛的一種或多種其 它TRP通道發(fā)生交叉反應(yīng)。例如，在某些實(shí)施方案中，該化合物抑制 TRPA1活性并且還抑制TRPV1， TRPV2， TRPV3, TRPV4和TRPM8中的一種 或多種的活性。
聯(lián)合療法
本發(fā)明的另一個(gè)方面提供了聯(lián)合療法，其中將一種或多種其它治
療劑與TRPA1調(diào)節(jié)劑一起給予。這類聯(lián)合療法可以通過同時(shí)，依次或單 獨(dú)給予治療中的各成分來進(jìn)行。
在某些實(shí)施方案中，將本發(fā)明的化合物與止痛藥聯(lián)合給予。合適 的止痛藥包括，但不限于阿片類物質(zhì)，糖皮質(zhì)類固醇，非類固醇抗炎 藥，萘基烷酮類，昔康類，對-氨基苯酚衍生物，丙酸類，丙酸衍生物， 水楊酸鹽，滅酸酯類，滅酸酯衍生物，吡唑類和吡唑衍生物。這類止 痛化合物的實(shí)例包括，但不限于可待因，氫可酮，氫嗎啡酮，左啡諾 (levorpharnol )，嗎啡，羥考酮，羥嗎啡酮，布托啡諾，地佐辛， 納布啡，噴他佐辛，依托度酸，吲咮美辛，舒林酸，托美丁，萘丁美 酮，吡羅昔康，對乙酰氨基酚，非諾洛芬，氟比洛芬，布洛芬，酮洛 芬，萘普生，雙氯芬酸，奧沙普秦，阿司匹林，二氟尼柳，曱氯芬那 酸，曱芬那酸，潑尼松龍和地塞米松。優(yōu)選的止痛藥為非類固醇抗炎 藥和阿片類物質(zhì)(優(yōu)選嗎啡)。
在某些實(shí)施方案中，將本發(fā)明的化合物與非類固醇抗炎藥共同給 予。合適的非類固醇抗炎化合物包括，但不限于吡羅昔康，雙氯芬酸， 依托度酸，巧l咮美辛，酮咯酸(ketoralac),奧沙普秦，托美丁，萘 普生，氟比洛芬，非諾洛芬，酮洛芬，布洛芬，曱滅酸，舒林酸，阿 扎丙宗，保泰松，阿司匹林，塞來考昔和羅非昔布。
在某些實(shí)施方案中，將本發(fā)明的化合物與抗病毒藥共同給予。合 適的抗病毒藥包括，但不限于金剛烷胺，阿昔洛韋，西多福韋，地昔 洛韋，脫氧阿昔洛韋，泛昔洛韋，膦甲酸(foscamet)，更昔洛韋， 噴昔洛韋，疊氮尿苷，anasmycin，金剛烷胺，溴乙烯基脫氧尿苷 (bromovinyldeoxusidine ) ， 氯乙烯基脫氧尿香 (chlorovinyldeoxusidine)， 阿糖胞脊(cytarbine)，去羥肌苷， 脫氧野尻霉素，雙脫氧胞二磷膽堿，雙脫氧肌苷，雙脫氧核苷，依度 尿苷(edoxuidine)，恩韋將，非西他濱，膦曱酸，非阿尿苷，氟胸 苷，氟尿苷，金絲桃素，干擾素，白細(xì)胞介素，羥乙基磺酸鹽，奈韋 拉平，噴他脒，利巴韋林，金剛乙胺，司他夫定(stavirdine )， sargramostin，舒拉明，天花粉蛋白，三溴胸苷，三氯胸苷，阿糖腺
苷，齊多夫定(zidoviridine )，扎昔他賓3-疊氮基-3-脫氧胸苷，2' ， 3' -雙脫氧腺苷(ddA)， 2'， 3'-雙脫氧鳥苷(ddG) , 2、3'-雙脫氧胞苷 (ddC)， 2'，3'-雙脫氧胸苷(ddT)， 2'3'-雙脫氧-雙脫氧胸苷(d4T)， 2'-脫氧-3'-硫雜-胞嘧啶(3TG或lamivudime) ， 2' ， 3'-雙脫氧-2'-氟 腺苷，2'， 3'-雙脫氧-2'-氟肌苷，2'， 3'-雙脫氧-2'-氟胸苷，2'，3'-雙脫氧-2'-氟胞嘧啶，2、 3'-雙脫氧-2', 3'-雙脫氫-2'-氟胸苷 (Fd4T)， 2'3'-雙脫氧-2'-p-氟腺苷(F-ddA)， 2。'-雙脫氧-2'-p-氟 -肌苷(F-ddl)和2'， 3'-雙脫氧-2'-l3-氟胞嘧啶(F-ddC)，磷酸一甲酸 三鈉，三氟胸苷，3'疊氮基-3'胸苷(AZT)，雙脫氧肌苷(ddl)和碘苷。 在某些實(shí)施方案中，將本發(fā)明的化合物與抗菌藥共同給予。合適 的抗菌藥包括，但不限于化合物鹽酸金剛烷胺(amanfadine hydrochloride) ， ^L酸金岡寸坑胺(amanfadine sulfate),阿米卡 星，硫酸阿米卡星，氨基糖甙類(amoglycosides)，阿莫西林，氨千 西林，amsamycins，桿菌肽，p-內(nèi)酰胺類，殺念珠菌素，巻曲霉素， 羧千西林，頭孢氨節(jié)，頭孢噻啶，頭孢漆吩，頭孢唑林，頭孢匹林， 頭孢拉定，頭孢來星，chilomphenicols，氯己定，葡糖酸氯己定 (chloshexidine gluconate ),鹽酸氯己定，氯鬼星，chlorquiraldol, 金霉素，鹽酸金霉素，環(huán)丙沙星，多肽菌素，克林霉素，鹽酸克林霉 素，克霉唑，氯唑西林，地美環(huán)素，diclosxacillin， 二多典會(huì)啉，多 西環(huán)素，乙胺丁醇，鹽酸乙胺丁醇，紅霉素，依托紅霉素，硬脂酸紅 霉素(erhmycin stearate)，法尼醇，氟氯西林，慶大霉素，疏酸慶 大霉素，短桿菌肽，giseofulvin，卣普羅近，haloquinol，六氯酚， iminocylcline，氯碘羥喹，卡那霉素，硫酸卡那霉素，林可霉素， lineomycin， lineomycin hydrochloride, 大環(huán)內(nèi)酉旨類，曱氯環(huán)素, 美他環(huán)素，鹽酸美他環(huán)素，methenine，馬尿酸烏洛托品，扁桃酸烏洛 托品，曱氧西林，metonidazole，咪康唑，鹽酸咪康峻，米諾環(huán)素， 鹽酸米諾環(huán)素，莫匹羅星，萘夫西林，新霉素，硫酸新霉素，奈替米 星，硫酸奈替米星，呋喃西林，諾氟沙星，制霉菌素，制霉菌素，竹 桃霉素，orcephalosporins，苯峻西林，oxyteacline，鹽酸土霉素，
對氯間二甲酚，巴龍霉素，硫酸巴龍霉素，青霉素類，青霉素G,青霉 素V，噴他脒，鹽酸噴他脒，非奈西林，多黏菌素類，喹諾酮類，硫酸 鏈霉素，四環(huán)素，妥布霉素，托萘酯，三氯生，trifampin,利福霉素， 羅利環(huán)素，大觀霉素，螺旋霉素，struptomycin,磺胺，四環(huán)素類， 四環(huán)素，妥布霉素，石克酸妥布霉素，triclocarbon，三氯生，甲氧芐 啶-磺胺曱喁唑，泰洛星，萬古霉素和yrothricin。
在某些實(shí)施方案中，將本發(fā)明的化合物與咳嗽抑制劑，減充血?jiǎng)?或祛痰藥共同給予。
與本發(fā)明主題TRPAl抑制劑共同給予的維生素a酸類(例如，其中 TRPAl抑制劑可以用于減輕維甲酸類的疼痛和/或炎癥效應(yīng))的實(shí)例包 括，但不限于化合物，諸如維甲酸(順式和反式)，視黃醇，阿達(dá)帕 林，維生素A和他扎羅汀。維生素a酸類用于治療痤瘡，銀屑病，酒渣 鼻，皺紋和皮膚癌和癌前體，諸如黑素瘤和光化性角化病。
類似地，可以與本發(fā)明主題TRPA1抑制劑聯(lián)用的角質(zhì)層分離劑包括 過氧化苯甲酰，a羥基酸，果酸，乙醇酸，水楊酸，壬二酸，三氯乙 酸，乳酸和吡羅克酮。
本發(fā)明主題的TRPA1抑制劑還可以與脫毛藥(毛發(fā)脫失) 一起給予。
本發(fā)明主題的TRPA1抑制劑可以與抗痤瘡藥，抗-濕滲藥和抗牛皮 痺藥(anti-psoratic agents) —起〗吏用。特別用于治療痤齊的化合 物包括壬二酸(具有抗痤瘡特性的脂族二元酸)，地蒽酚(具有抗真菌和 抗牛皮癬特性的二酚類化合物)和馬索羅酚(去甲二氫愈創(chuàng)木酸，具有 抗氧化特性的四酚類化合物，還用于治療光化性角化病)及其類似物 (諸如奧斯貝木酚素6，氧代奧斯貝木酚素6， 4'-0-甲基-7，7'-二氧代 奧斯貝木酚素6，肉豆蔻木酚素，去甲基二氫愈創(chuàng)木酸，3, 3'，4-三幾 基-4'-甲氧基木酚素，Saururenin， 4-羥基-3， 3'， 4'-三甲氧基木酚素 和異安五脂素)。抗-濕滲藥包括吡美莫司和他克莫司。適用于本發(fā)明 的抗牛皮癉活性劑包括維生素a酸類(包括維甲酸的異構(gòu)體和衍生物以 及其它結(jié)合維甲酸受體的其它化合物，諸如維曱酸，阿維a， 13-順式-維甲酸(異維a酸)，9-順式-維甲酸，生育酚-維曱酸酯(維曱酸的生育
酚酯(反式-或順式-))，阿維a酯，莫維A胺，1-(13-順式-視黃酰氧 基)-2-丙酮，1-(13-順式-視黃酰氧基)-3-癸酰氧基-2-丙酮，1,3-雙 -(13-順式-視黃酰氧基)-2-丙酮，2- (13-順式-視黃酰氧基)-乙酰苯， 13-順式-視黃酰氧基曱基-2， 2-二曱丙酸酯，2-(13-順式-視黃酰氧 基)-n-甲基-乙酰胺，1- (13-順式-視黃酰氧基)-3-羥基-2-丙酮， 1 - ( 13-順式-視黃酰氧基)-2， 3-二油?；?，13-順式-視黃酸琥珀酰 亞胺酯，阿達(dá)帕林和他扎羅汀)，水楊酸(一銨鹽)，地蒽酚，6-阿扎尿 苷，維生素D衍生物(包括，但不限于羅蓋全(Roche Laboratories)， EB 1089 (24a，26a，27a-三高-22，24-二烯—la，25-(OH)廣D3) , KH 1060 (20-表-22-氧雜-24a， 26a, 27a-三高-la， 25-(OH)2-D3) ， MC 1288， GS 1558， CB 1093， 1， 25-(0H) 2-16-烯-D3， 1， 25-(0H) 2-16-烯-23-炔 -D3和25-(OH) 2-16-烯-23-炔-D3 ，22-氧雜骨化三醇； la-(OH)D5 (UniversityofIllinois) ， ZK161422 和 ZK 157202 (Institute of Medical Chemistry—Schering AG),阿法骨化 醇，骨化二醇，卡泊三醇(卡泊三烯)，馬沙骨化三醇，膽骨化醇，度 骨化醇，麥角沉鈣醇，.氟骨三醇，來沙骨化醇，馬沙骨化醇，帕立骨 化醇，司骨化醇，西奧骨化醇，他卡西醇，卡泊三烯，骨化三醇和披 露在美國專利5， 994, 332中的其它類似物)，焦沒食子酚和他卡西醇。
本發(fā)明主題的TRPA1抑制劑還可以與維生素及其衍生物一起給藥， 包括維生素A，抗壞血酸(維生素C)， ot-生育酚(維生素E)， 7-脫氫膽 甾醇(維生素D)，維生素K， a-硫辛酸，脂溶性抗氧化劑等。
本發(fā)明主題的TRPA1抑制劑還可以與皮膚防護(hù)劑，諸如尿嚢素和七 葉苷聯(lián)用。
在某些實(shí)施方案中，可以共同給予本發(fā)明的兩種或多種化合物。 當(dāng)共同給予本發(fā)明的兩種或多種化合物時(shí)，兩種或多種化合物可以具 有類似的選擇特性和功能活性，或兩種或多種化合物可以具有不同的 選擇特性和功能活性。作為實(shí)例，兩種或多種化合物在拮抗TRPA1功能
方面的選擇性超過對TRPV1， TRPV5和TRPV6約10， 100或1000倍(例如， 兩種或多種化合物具有類似的選擇特性)并且可以以類似的IC50進(jìn)一
步抑制TRPA1功能(例如，類似的功能活性)?？蛇x擇地，兩種或多種化 合物之一可以選擇性地抑制TRPA1，而兩種或多種化合物中的另一種抑 制TRPA1和TRPV1 (例如，兩種或多種化合物具有不同的選擇特性)。關(guān) 注給予本發(fā)明具有類似或不同特性的兩種或多種化合物的組合給藥。
在某些實(shí)施方案中，可以將本發(fā)明的化合物與一種或多種拮抗不 同通道功能的其它化合物共同給予。作為實(shí)例，可以將本發(fā)明的化合 物與一種或多種拮抗TRPV1， TRPM8和/或TRPV3的化合物共同給予。拮 抗TRPV1， TPRM8或TRPV3的化合物可對TRPV1， TRPM8或TRPV3具有選擇 性(例如抑制TRPV1或TRPV3比抑制TRPA1強(qiáng)10， IOO或IOOO倍以上)。可 選擇地，拮抗TRPV 1或TRPV3的化合物可以與其它TRP通道發(fā)生交叉反 應(yīng)。
在某些其它實(shí)施方案中，可以將本發(fā)明的化合物與一種或多種適 合于所治療特定損傷，疾病，疾患或病癥的額外的活性劑或治療方案 共同給予。
藥物組合物
盡管可以單獨(dú)給予本發(fā)明的化合物，但是優(yōu)選作為藥物制劑(組合 物)的形式給予該化合物?？梢詾槿魏斡糜谌嘶颢F藥應(yīng)用的便利給藥方 式配制本發(fā)明的化合物。在某些實(shí)施方案中，包括在藥物制劑中的化 合物可以為活性成分自身或可以為例如能夠在生理環(huán)境中轉(zhuǎn)化成活性 化合物的前體藥物。
與選擇的給藥途徑無關(guān)，通過諸如如下所述的或本領(lǐng)域技術(shù)人員 公知的其它常規(guī)方法將可以以合適的水合物形式使用的本發(fā)明化合物 和/或本發(fā)明的藥物組合物配制成藥學(xué)上可接受的劑型。
因此，本發(fā)明的另一個(gè)方面提供了藥學(xué)上可接受的組合物，其包 含與上述一種或多種藥學(xué)上可接受的載體(添加劑)和/或稀釋劑一起 配制的治療有效量的一種或多種化合物。如下文詳細(xì)描述的，可以專 門將本發(fā)明的藥物組合物配制成固體或液體給藥劑型，包括適合于如 下給藥的那些劑型(1) 口服給藥，例如，獸用頓服藥(水或非水溶液
或混懸液)，片劑，大丸劑，粉末，顆粒，施用于舌的糊劑；(2)非腸 道給藥，例如，通過皮下，肌內(nèi)或靜脈內(nèi)注射，例如，為無菌溶液或 混懸液；(3)局部施用，例如，為施用于皮膚的霜?jiǎng)浨鄤┗驀婌F 劑；(4)通過陰道內(nèi)或通過直腸內(nèi)，例如，為陰道環(huán)，霜?jiǎng)┗蚺菽?或(5)用于吸入。然而，在某些實(shí)施方案中，可以將本發(fā)明主題的化 合物簡單溶于或懸浮于無菌水中。在某些實(shí)施方案中，藥物制劑為無
熱原的，即不會(huì)升高患者體溫。
本文所用的術(shù)語"治療有效量"意旨有效產(chǎn)生一定期望的治療作用 的化合物，物質(zhì)或包含本發(fā)明化合物的組合物的用量，該用量通過在 至少動(dòng)物細(xì)胞亞群中抑制TRPA1功能并由此阻斷在治療細(xì)胞中起作用 的生物學(xué)后果而有效地產(chǎn)生某種期望的治療效果，具有可應(yīng)用于任何 醫(yī)療的合理的有益性/風(fēng)險(xiǎn)度之比。
本文所用的術(shù)語"全身給藥"，"通過全身給藥"，"外周給藥"和" 通過外周給藥"意旨以非直接進(jìn)入中樞神經(jīng)系統(tǒng)的方式給予化合物，藥 物或其它物質(zhì)，使得它進(jìn)入患者系統(tǒng)且由此進(jìn)行代謝和其它類似過程， 例如，皮下給藥。
術(shù)語"藥學(xué)上可接受的"在本文中使用時(shí)意旨那些在合理的醫(yī)學(xué)判 斷范圍內(nèi)適用于接觸人和動(dòng)物組織，但沒有過度的毒性，刺激性，過 敏反應(yīng)或其它問題或并發(fā)癥的那些化合物，物質(zhì)，組合物和/或劑型， 它們與合理的有益性/風(fēng)險(xiǎn)度匹配。
本文所用的術(shù)語"藥學(xué)上可接受的載體"意旨藥學(xué)上可接受的物 質(zhì)，組合物或載體，諸如液體或固體填充劑，稀釋劑，賦形劑，溶劑 或包嚢材料，它們涉及將本發(fā)明主題的拮抗劑從身體的一個(gè)器官或部 分?jǐn)y帶或轉(zhuǎn)運(yùn)至身體的另一個(gè)器官或部分。每種載體必需是"可接受的 "，其含義為與制劑中的其它組分相容并且對患者無害?？梢杂米魉帉W(xué) 上可接受的載體的物質(zhì)的某些實(shí)例包括(1)糖類，諸如乳糖，葡萄 糖和蔗糖；(2)淀粉，諸如玉米淀粉和馬鈴薯淀粉；(3)纖維素及其 衍生物，諸如羧甲基纖維素鈉，乙基纖維素和乙酸纖維素；(4)西黃 蓍膠粉；(5)麥芽；(6)明膠；(7)滑石粉；(8)賦形劑，諸如可可
脂和栓劑蠟；(9)油，諸如花生油，棉子油，紅花油，芝麻油，橄欖
油，玉米油和大豆油；(10) 二醇類，諸如丙二醇；(11)多元醇類， 諸如甘油，山梨醇，甘露糖醇和聚乙二醇；(12)酯類，諸如油酸乙酯 和月桂酸乙酯；(13)瓊脂；(14)緩沖劑，諸如氫氧化鎂和氫氧化鋁； (15)藻酸；(16)無熱原水；(17)等滲鹽水；(18)林格液；(19)乙 醇；(20)磷酸鹽緩沖溶液；和(21)其它藥物制劑中使用的無毒性相 容性物質(zhì)。
如上所述，本發(fā)明化合物的某些實(shí)施方案可以包含堿性官能基， 諸如氨基或烷基氨基，且由此能夠與藥學(xué)上可接受的酸形成藥學(xué)上可 接受的鹽。在這方面術(shù)語"藥學(xué)上可接受的鹽"意旨本發(fā)明化合物的相 對無毒性的無機(jī)和有機(jī)酸加成鹽?？梢栽诒景l(fā)明化合物最終的分離和 純化過程中原位制備，或通過單獨(dú)地使本發(fā)明純化的化合物以其游離 堿形式與合適的有機(jī)或無機(jī)酸反應(yīng)并且分離由此形成的鹽來制備。有 代表性的鹽包括氬溴酸鹽，鹽酸鹽，疏酸鹽，疏酸氫鹽，磷酸鹽，硝 酸鹽，乙酸鹽，戊酸鹽，油酸鹽，棕櫚酸鹽，硬脂酸鹽，月桂酸鹽， 苯甲酸鹽，乳酸鹽，磷酸鹽，甲苯磺酸鹽，檸檬酸鹽，馬來酸鹽，富 馬酸鹽，琥珀酸鹽，酒石酸鹽，萘甲酸鹽，曱磺酸鹽，葡戾酸鹽，乳 糖醛酸鹽和月桂基磺酸鹽等(例如，參見Berge等(1977) "Pharmaceutical Salts", J. Pharm. Sci. 66:1-19)。
本發(fā)明主題化合物的藥學(xué)上可接受的鹽包括這些化合物的常規(guī)無 毒性鹽或季銨鹽，例如來自無毒性的有機(jī)或無機(jī)酸。例如，這類常規(guī) 的無毒性鹽包括那些來源于無機(jī)酸，諸如鹽酸，氫溴酸鹽，硫酸，氨 基磺酸，磷酸，硝酸等的鹽；和由有機(jī)酸制備的鹽，所述的有機(jī)酸諸 如乙酸，丙酸，琥珀酸，乙醇酸，硬脂酸，乳酸，蘋果酸，酒石酸， 檸檬酸，抗壞血酸，棕櫚酸，馬來酸，羥基馬來酸，苯乙酸，谷氨酸， 苯曱酸，水楊酸，磺胺酸，2-乙酰氧基苯甲酸，富馬酸，甲苯磺酸， 甲磺酸，乙二磺酸，草酸，異硫羰酸等.
在其它情況中，本發(fā)明的化合物可以包含一個(gè)或多個(gè)酸性官能基， 且由此能夠與藥學(xué)上可接受的堿形成藥學(xué)上可接受的鹽。術(shù)語"藥學(xué)上
可接受的鹽"在這些情況中意旨本發(fā)明的相對無毒性的無機(jī)和有機(jī)堿 加成鹽。同樣可以在本發(fā)明化合物最終的分離和純化過程中原位制備， 或單獨(dú)地通過使純化的化合物以其游離酸形式與合適的堿，諸如藥學(xué) 上可接受的金屬陽離子的氫氧化物，碳酸鹽或碳酸氫鹽，與氨或與藥 學(xué)上可接受的有機(jī)的伯，仲或叔胺反應(yīng)并且分離由此形成的鹽來制備。 有代表性的堿金屬或堿土金屬鹽包括鋰，鈉，鉀，鈣，鎂和鋁鹽等。 用于形成堿加成鹽的有代表性的有機(jī)胺類包括乙胺，二乙胺，乙二胺，
乙醇胺，二乙醇胺，哌噪等(例如，參見Berge等，上文)。
濕潤劑，乳化劑和潤滑劑，諸如十二烷基硫酸鈉和硬脂酸鎂以及 著色劑，釋放劑，包衣劑，甜味劑，矯味劑和香味劑，防腐劑和抗氧 化劑也可以存在于組合物中。
藥學(xué)上可接受的抗氧化劑的實(shí)例包括(1)水溶性抗氧化劑，諸如 抗壞血酸，鹽酸半胱氨酸，硫酸氫鈉，焦亞硫酸鈉，亞硫酸鈉等；(2) 油溶性抗氧化劑，諸如棕櫚酸抗壞血酸酯，丁羥茴醚(BHA)， 丁羥曱苯 (BHT)，卵磷脂，掊酸丙酯，a生育酚等；和(3)金屬螯合劑，諸如檸 檬酸，乙二胺四乙酸(EDTA),山梨醇，酒石酸，磷酸等。
本發(fā)明的制劑包括那些適合于口服，鼻部，局部(包括口含和舌 下)，直腸，陰道和/或非腸道給藥的制劑。可以便利地將制劑制成單 位劑型并且可以通過制藥領(lǐng)域眾所周知的任意方法制備。可以與載體 物質(zhì)合并產(chǎn)生單一劑型的活性組分的量根據(jù)所治療宿主，具體給藥方 式的不同而改變?？梢耘c載體物質(zhì)合并而產(chǎn)生單一劑型的活性組分的 量一般為該化合物產(chǎn)生治療作用的量。 一般而言，在100%中，該量在 約1%-約99%分活性組分，優(yōu)選約5%-約70%，最優(yōu)選約10%-約30%。
制備這些制劑或組合物的方法包括將本發(fā)明的化合物與載體和任 選的一種或多種輔助組分混合的步驟。 一般而言，通過均勻和緊密混 合本發(fā)明化合物與液體載體或固體細(xì)粉載體或它們兩者且然后如果必 要使產(chǎn)物成形來制備制劑。
適合于口服給藥的本發(fā)明制劑可以為膠嚢，扁嚢劑，丸劑，片劑， 錠劑(使用矯味基質(zhì)，通常為蔗糖和阿拉伯膠或黃蓍膠)，粉末，顆粒，
或?yàn)樵诤蚍撬后w中的溶液或混懸液，或?yàn)樗托突蛴桶鼩晷?液體乳劑，或?yàn)轸齽┗蛱菨{劑，或?yàn)檐涘V劑(使用惰性基質(zhì)，諸如明膠 和甘油，或蔗糖和阿拉伯膠)和/或?yàn)槭趧┑?，它們各自包含預(yù)定量 的本發(fā)明化合物作為活性組分。還可以將本發(fā)明的化合物作為大丸劑， 藥糖劑或糊劑給藥。
在本發(fā)明用于口服給藥的固體劑型(膠嚢，片劑，丸劑，錠劑，粉 末，顆粒等)中，將活性組分與一種或多種藥學(xué)上可接受的載體混合，
所述載體諸如檸檬酸鈉或磷酸二鈣和/或任意如下成分(l)填充劑或 增容劑，諸如淀粉，乳糖，蔗糖，葡萄糖，甘露糖醇和/或硅酸；(2)粘 合劑，諸如，例如，羧曱基纖維素，藻酸鹽，明膠，聚乙烯吡咯烷酮， 蔗糖和/或阿拉伯膠；(3)保濕劑，諸如甘油；(4)崩解劑，諸如瓊 脂，碳酸鉤，馬鈴薯或木薯淀粉，藻酸，某些硅酸鹽和碳酸鈉；(5)溶 解阻滯劑，諸如石蠟；(6)吸收促進(jìn)劑，諸如季銨化合物；(7)濕潤 劑，諸如，例如鯨蠟醇和單硬脂酸甘油酯；(8)吸收劑，諸如高嶺土 和皂粘土； (9)潤滑劑，諸如滑石粉，硬脂酸鈣，硬脂酸鎂，固體聚 乙二醇，十二烷基硫酸鈉及其混合物；和(IO)著色劑。就膠嚢，片劑 和丸劑而言，藥物組合物還可以包含緩沖劑。相似類型的固體組合物 也可以用作軟膠嚢和硬膠嚢中的填充劑，其中使用諸如乳糖(lactose) 或乳糖(milk sugars)以及高分子量聚乙二醇等作為賦形劑。
可以通過制備片劑，任選地使用 一種或多種輔助組分壓制或模制。 可以使用粘合劑(例如，明膠或羥丙基曱基纖維素)，潤滑劑，惰性稀 釋劑，防腐劑，崩解劑(例如，羥基乙酸淀粉鈉或交聯(lián)羧曱基纖維素鈉)， 表面活性劑或分散劑制備壓制片?？梢酝ㄟ^在合適的機(jī)器中模制用惰 性液體稀釋劑濕潤的粉狀化合物混合物制備模制片。
可以任選給本發(fā)明的藥物組合物的片劑和其它固體劑型，諸如錠 劑，膠嚢，丸劑和顆?？毯刍蛑苽錇榫哂邪潞屯鈿ぃT如腸溶衣和 其它藥物制劑領(lǐng)域眾所周知的包衣。還可以使用提供期望的釋放特性 的例如不同比例的羥丙基曱基纖維素，其它聚合物基質(zhì)，脂質(zhì)體和/ 或微球?qū)⑺鼈兣渲瞥善渲械幕钚越M分緩釋或控釋。例如，通過經(jīng)保留
細(xì)菌的濾器過濾或通過以無菌固體組合物形式摻入滅菌劑給它們滅 菌，其中所述的固體組合物可以在使用前即刻溶于無菌水或某些其它 無菌可注射介質(zhì)。這些組合物還可以任選包含遮光劑并且可以為這類 組合物，它們僅或優(yōu)選在胃腸道的某些部分中任選以延遲方式釋放活 性組分?？梢允褂玫陌窠M合物的實(shí)例包括聚合物物質(zhì)和蠟。如果合
適，還可以使用上述賦形劑中的一種或多種使活性組分^:嚢化。
用于本發(fā)明化合物口服給藥的液體劑型包括藥學(xué)上可接受的乳 劑，微乳，溶液，混懸液，糖漿劑和酏劑。除活性組分外，液體劑型 可以包含本領(lǐng)域中常用的惰性稀釋劑，諸如，例如，水或其它溶劑， 增溶劑和乳化劑，諸如乙醇，異丙醇，碳酸乙酯，乙酸乙酯，芐醇， 苯曱酸千酯，丙二醇，1,3-丁二醇，油(特別是棉子油，花生油，玉米 油，胚油，橄欖油，荒麻油和芝麻油)，甘油，四氫呋喃醇，聚乙二醇 和脫水山梨糖醇的脂肪酸酯類、及其混合物。
除惰性稀釋劑外，口服組合物還可以包括佐劑，諸如濕潤劑，乳
化劑和懸浮劑，甜味劑，矯味劑，著色劑，香味劑和防腐劑。
除活性化合物外，混懸液還可以包含懸浮劑，例如，乙氧基化異 十八烷醇，聚氧乙烯山梨醇和脫水山梨糖醇酯類，微晶纖維素，偏氫 氧化鋁，皂粘土，瓊脂和黃蓍膠及其混合物。
公知固醇類，諸如膽固醇與環(huán)糊精形成復(fù)合物。因此，在優(yōu)選的 實(shí)施方案中，如果抑制劑為甾類生物堿，那么可以使用環(huán)糊精配制它， 諸如a-， P-和y-環(huán)糊精，二曱基-p環(huán)糊精和2-羥丙基-p-環(huán)糊精。
可以將本發(fā)明的直腸，陰道或尿道給藥的藥物組合物制劑制成栓 劑，可以通過將本發(fā)明的 一種或多種化合物與 一種或多種合適的無刺 激性賦形劑或載體混合來制備所述栓劑，所述的無刺激性賦形劑或載 體例如為可可脂，聚乙二醇，栓劑蠟或水楊酸酯，并且該栓劑在室溫 下為固體，而在體溫下為液體且由此在直腸或陰道腔中熔化并且釋放 活性化合物。
可選擇地或另外，可以配制通過導(dǎo)管，支架，金屬線或其它管腔 內(nèi)裝置遞送的組合物。通過這類裝置遞送尤其用于遞送至膀胱，尿道，
輸尿管，直腸或腸。
適合于陰道給藥的本發(fā)明制劑還包括陰道環(huán)，棉塞，霜?jiǎng)?，凝膠， 糊劑，泡沫或噴霧劑，它們包含諸如本領(lǐng)域公知為合適的這類載體。
用于本發(fā)明化合物局部或透皮給藥的劑型包括粉末，噴霧劑，軟 膏劑，糊劑，霜?jiǎng)磩?，凝膠，溶液，貼劑和吸入劑?？梢栽跓o菌 條件下將活性化合物與藥學(xué)上可接受的載體和任意所需的防腐劑，緩 沖劑或拋射劑混合。
軟膏劑，糊劑，霜?jiǎng)┖湍z除包含本發(fā)明的活性化合物外，還可 以包含賦形劑，諸如動(dòng)物和植物脂肪，油，蠟，石蠟，淀粉，黃蓍膠， 纖維素衍生物，聚乙二醇，硅氧烷類，皂粘土，硅酸，滑石粉和氧化 鋅，或其混合物。
粉末和噴霧劑除包含本發(fā)明的化合物外，還可以包含賦形劑，諸 如乳糖，滑石粉，硅酸，氫氧化鋁，硅酸鈣和聚酰胺粉末，或這些物 質(zhì)的混合物。噴霧劑還可以包含常用拋射劑，諸如氯氟烴類和揮發(fā)性 的未被取代的烴類，諸如丁烷和丙烷。
透皮貼劑具有將本發(fā)明化合物以受控方式遞送至身體的附加優(yōu) 點(diǎn)。可以通過將化合物溶于或分散于適當(dāng)?shù)慕橘|(zhì)制備這類劑型。吸收 促進(jìn)劑也可以用于增加化合物流過皮膚?？梢酝ㄟ^提供速率控制膜或 將化合物分散于聚合物基質(zhì)或凝膠中控制這類流量的速率。
還將眼用制劑，眼用軟骨劑，粉末，溶液等關(guān)注為本發(fā)明的范圍。
本文所用的術(shù)語"非腸道給藥"和"通過非腸道給藥"意旨非腸道和 局部給藥的，通常通過注射的給藥方式，并且包括，但不限于靜脈內(nèi)， 肌內(nèi)，動(dòng)脈內(nèi)，鞘內(nèi)，嚢內(nèi)，眶內(nèi)，目匡內(nèi)，心內(nèi)，真皮內(nèi)，腹膜內(nèi)， 經(jīng)氣管，皮下，表皮下，關(guān)節(jié)內(nèi)，嚢下，蛛網(wǎng)膜下，脊柱內(nèi)和胸骨內(nèi) 注射和輸注。
本發(fā)明適合于非腸道給藥的藥物組合物包含本發(fā)明的一種或多種 化合物與一種或多種藥學(xué)上可接受的無菌等滲水或非水溶液，分散液， 混懸液或乳劑或恰在使用前再溶解成無菌可注射溶液或分散液的無菌 粉末，它們可以包含抗氧化劑，緩沖劑，制菌劑，使制劑與指定接受
者血流等滲的溶質(zhì)或懸浮劑或增稠劑。
可以用于本發(fā)明藥物組合物的合適的水和非水載體的實(shí)例包括 水，乙醇，多元醇類(諸如甘油，丙二醇，聚乙二醇等)及其混合物， 植物油，諸如橄欖油和可注射的有機(jī)酯類，諸如油酸乙酯。例如，可 以通過使用包衣材料，諸如卵磷脂，就分散體而言通過維持所需的粒 度和通過使用表面活性劑維持適當(dāng)?shù)牧鲃?dòng)性。
這些組合物還可以包含佐劑，諸如防腐劑，濕潤劑，乳化劑和分 散劑?？梢酝ㄟ^包含各種抗菌劑和抗真菌劑，例如，對羥基苯曱酸酯， 三氯叔丁醇，苯酚，山梨酸等確保預(yù)防微生物的作用。還需要在組合 物中包括等滲劑，諸如糖類，氯化鈉等。此外，可以通過包含延緩吸 收的試劑，諸如單硬脂酸鋁和明膠使可注射藥物劑型的吸收延長。
在某些情況中，為了延長藥物釋放，需要減緩藥物從皮下或肌內(nèi) 注射中吸收。可以通過使用具有難溶于水的晶體或非晶形物質(zhì)的液體 混懸液達(dá)到這一目的。然后藥物的吸收速率可以取決于其溶出速率， 由此可以依賴于晶體粒度和晶型?？蛇x擇地，可以通過將藥物溶于或 懸浮于油媒介物中使非腸道給藥的藥物延緩吸收。
通過在生物可降解聚合物，諸如聚丙交酯-聚乙交酯中形成本發(fā)明 主題化合物的微嚢基質(zhì)制備可注射的長效劑型。根據(jù)藥物與聚合物之 比和所用特定聚合物的性質(zhì)的不同，可以控制藥物釋放速率。其它生 物可降解的聚合物的實(shí)例包括聚(原酸酯)和聚(酸酐)。還通過將藥物
俘獲在與身體組織相容的脂質(zhì)體或微乳內(nèi)制備長效可注射制劑。
當(dāng)將本發(fā)明的化合物作為藥物給予人和動(dòng)物時(shí)，可以將它們本身
給予或作為包含例如O. 1 - 99. 5°/。(更優(yōu)選0. 5 - 90%)的活性組分與藥學(xué) 上可接受的載體的藥物組合物給予。
優(yōu)選通過制備包含有效量活性組分的合適的飼料預(yù)混合物并且將 該預(yù)混合物摻入最終的定量飼料中將本發(fā)明的化合物添加到動(dòng)物飼料 中。
可選擇地，可以在飼料中摻入包含活性組分的中間體濃縮物或飼 料添加劑?？梢灾苽溥@類塑料預(yù)混合物和最終的定量飼料的方式描述
在參考書中(諸如"Applied Animal Nutrition", W. H. Freedman and
CO.， San Francisco, U.S.A., 1969或"Livestock Feeds and Feeding"
0 and B books, Corvallis， Ore., U.S.A., 1977)。
還可以通過可再填充的或生物可降解裝置提供導(dǎo)入方法。進(jìn)年來
已經(jīng)研發(fā)并且在體內(nèi)測試了用于控釋藥物的各種緩釋聚合物裝置，包
括蛋白質(zhì)生物藥劑。各種生物相容性聚合物(包括水凝膠)，包括生物 可降解和不可降解的聚合物可以用于形成在特定靶點(diǎn)持續(xù)釋放化合物
的植入物。
活性組分在本發(fā)明藥物組合物中的實(shí)際劑量水平可以改變，以便 獲得對于特定患者，組合物和給藥方式有效實(shí)現(xiàn)期望的治療反應(yīng)而對 患者無毒性的活性組分用量。
選擇的劑量水平取決于各種因素，包括所用本發(fā)明特定化合物或 其酯，鹽或酰胺的活性，給藥途徑，給藥時(shí)間，所用特定化合物的排 泄速率，治療期限，與所用特定化合物聯(lián)用的其它藥物，化合物和/ 或物質(zhì)，所治療患者的年齡，性別，體重，狀況， 一般健康情況和在 先的醫(yī)療史等醫(yī)學(xué)領(lǐng)域眾所周知的因素。
具有本領(lǐng)域普通技能的臨床醫(yī)師或獸醫(yī)能夠容易地確定并且開據(jù) 有效量的所需藥物組合物處方。例如，臨床醫(yī)師或獸醫(yī)可以以低于獲 得期望治療作用所需的水平開始使用藥物組合物中所用本發(fā)明化合物 的劑量，并且逐步增加劑量，直到獲得期望的作用。
一般而言，本發(fā)明化合物的合適的每日劑量為有效產(chǎn)生治療作用 的最低劑量的化合物用量。這類有效劑量一般取決于上述因素。 一般 而言，針對患者的本發(fā)明化合物的靜脈內(nèi)，腦室內(nèi)和皮下劑量為約 0. 0001 -約IOO mg/千克體重/天。
如果需要，可以將活性化合物的有效日劑量在全天以適當(dāng)?shù)拈g隔 分別給予兩次，三次，四次，五次，六次或6六次以上的亞劑量，任選 以單位劑型的形式。
接受該治療的患者為有此需要的任何動(dòng)物，包括靈長類特別是人，
和其它哺乳動(dòng)物，諸如馬，牛，豬和綿羊；和一般的家禽和寵物。
可以將本發(fā)明的化合物照此給予或作為與藥學(xué)上可接受的載體和 /或無菌載體的混合物給予，并且還可以與其它抗微生物劑 一起給予， 諸如青霉素類，頭孢菌素類，氨基糖苷類和糖肽類。聯(lián)合療法由此包 括依次，同時(shí)和分別給予活性化合物，按照這類方式首先給予的藥物 在給予隨后療法時(shí)仍然可檢測到。
本發(fā)明關(guān)注本發(fā)明主題的化合物在任意上述藥物組合物和制劑中 的制劑。此外，本發(fā)明關(guān)注通過任意上述給藥途徑給藥。本領(lǐng)域技術(shù) 人員可以基于所治療的疾患和所治療患者的總體健康狀況，年齡和大 小選擇適當(dāng)?shù)闹苿┖徒o藥途徑。
核酸和氨基酸組合物
本發(fā)明在另一個(gè)方面中提供了包含特定的TRPA1多肽類和核酸，由 其組成或主要由其組成的組合物和藥物組合物。例如，可以在藥物篩
TRPA1在細(xì)胞，組織或生物體中的表達(dá)或活性。本文所用的術(shù)語"分離 的"在用于指核酸和多肽組合物時(shí)意旨以非它們實(shí)際在天然狀態(tài)下存 在的狀態(tài)下存在的核酸或多肽類。換句話說，該術(shù)語用于表示將蛋白 質(zhì)與內(nèi)源性發(fā)現(xiàn)的與其在一起的其它蛋白質(zhì)和細(xì)胞成分以一定水平分 離。分離的在本文上下文中使用時(shí)不一定意旨以純化形式提供蛋白質(zhì) 或核酸。另外，術(shù)語"分離的"不一定指從生物體中分離多肽或核酸。 而該術(shù)語還包括重組產(chǎn)生的核酸和多肽類。
在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了分離的多肽，其包括SEQ ID N0: l中表示的氨基酸序列，由其組成或主要由其組成。這類多肽可以包括 相同序列或可以包括一種，兩種或三種保守取代，添加或缺失。在某 些其它實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了由包含SEQ ID NO: 2中表示的核苷 酸序列，由其組成或主要由其組成的核酸序列或由因遺傳密碼簡并性 而與SEQ ID NO: 2不同的核苷酸序列編碼的分離的多肽。
在某些其它實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了包含SEQ ID NO: 2中表示 的核苷酸序列，由其組成或主要由其組成或包含因遺傳密碼簡并性而 與SEQIDN0: 2不同的核苷酸序列的分離的核酸。在其它實(shí)施方案中， 本發(fā)明提供了包含一核苷酸序列，由其組成或主要由其組成的分離的 核酸，所述的核普酸序列編碼包含SEQ ID No. l中表示的氨基酸序列 的多肽。
在其它實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了表達(dá)栽體，它在原核細(xì)胞和真 核細(xì)胞中的至少一種中復(fù)制。該表達(dá)載體包含任意上述TRPA1核酸。類 似地提供了包含這些表達(dá)載體的細(xì)胞，這些細(xì)胞表達(dá)由表達(dá)的核酸編 碼的TRPA1蛋白質(zhì)。在某些實(shí)施方案中，表達(dá)的多肽保持了TRPA1的一 種或多種功能。例如，包含該表達(dá)載體的細(xì)胞表達(dá)TRPA1并且介導(dǎo)電流 和/或離子流(例如，TRPAl-介導(dǎo)的電流)。還提供了生產(chǎn)多肽的方法。 該方法包括在合適的細(xì)胞培養(yǎng)基中培養(yǎng)上述細(xì)胞之一 (例如，表達(dá) TRPA1多肽的細(xì)胞)以表達(dá)所述多肽。
在某些實(shí)施方案中，使用所述的表達(dá)載體瞬時(shí)轉(zhuǎn)染細(xì)胞并且該細(xì) 胞瞬時(shí)表達(dá)TRPA1蛋白質(zhì)。在某些其它實(shí)施方案中，使用所述的表達(dá)載 體穩(wěn)定轉(zhuǎn)染所述細(xì)胞并且建立表達(dá)TRPA1的穩(wěn)定細(xì)胞系。在某些實(shí)施方 案中，包含所述表達(dá)栽體的細(xì)胞無法內(nèi)源性表達(dá)TRPA1蛋白質(zhì)(例如， 細(xì)胞在沒有表達(dá)載體存在下不表達(dá)可檢測水平的TRPA1蛋白質(zhì)).在其 它實(shí)施方案中，包含所述表達(dá)載體的細(xì)胞內(nèi)源性表達(dá)TRPA1蛋白質(zhì)。
在某些實(shí)施方案中，表達(dá)TRPA1的細(xì)胞，例如，操縱以包含TRPA1 表達(dá)載體的細(xì)胞可以用于篩選試驗(yàn)，以便鑒定調(diào)節(jié)TRPA1介導(dǎo)的電流的 化合物。合適的細(xì)胞包括，但不限于原核細(xì)胞和真核細(xì)胞。典型的真 核生物包括脊推動(dòng)物和無脊稚動(dòng)物。典型的真核生物包括，但不限于 人，小鼠，大鼠，貓，狗，家兔，綿羊，牛，馬，山羊，非人的靈長 類，蛙，蟾蜍，魚，小雞，蒼蠅，蠕蟲和酵母。典型的原核生物包括 細(xì)菌。涉及當(dāng)"細(xì)胞"時(shí)，應(yīng)理解意旨在至少一種細(xì)胞中(例如，單一細(xì) 胞或細(xì)胞培養(yǎng)物)篩選。將細(xì)胞制成混懸液或使其粘附生長。可以使用 任何發(fā)育時(shí)間和組織的細(xì)胞。典型的細(xì)胞包括胚胎細(xì)胞，幼體細(xì)胞， 青少年細(xì)胞，胎兒細(xì)胞和成年人細(xì)胞。典型的細(xì)胞和細(xì)胞系可以來源 于任何組織或細(xì)胞類型。在某些實(shí)施方案中，這些細(xì)胞為感覺神經(jīng)元
或結(jié)狀神經(jīng)節(jié)。細(xì)胞包括初級細(xì)胞和轉(zhuǎn)化的細(xì)胞系。
在某些實(shí)施方案中，如上所述，本發(fā)明關(guān)注包含如本文提供的
TRPA1蛋白質(zhì)編碼序列的表達(dá)載體。"載體"為復(fù)制子，諸如質(zhì)粒，噬菌 體或粘粒，另一種DM片段可以與之結(jié)合。術(shù)語"栽體"意旨能夠轉(zhuǎn)運(yùn)與 其連接的另一種核酸的核酸分子。 一種類型的載體為附加體，其為能 夠在染色體外復(fù)制的核酸。還可以使用能夠自主復(fù)制和/或自動(dòng)表達(dá)與 它們連接的核酸的載體。能夠指導(dǎo)可操作地與之連接的基因表達(dá)的載 體在本文中稱作"表達(dá)載體"。 一般而言，在重組DNA技術(shù)中應(yīng)用的表達(dá) 載體通常為"質(zhì)粒"形式，它一般涉及其載體形式不結(jié)合染色體的環(huán)狀 雙鏈DNA環(huán)區(qū)。然而，本發(fā)明指定包括這類表達(dá)載體的其它形式，它們 具有等效的功能且今后為本領(lǐng)域中公知的。
DNA或核酸"編碼序列"為在適當(dāng)調(diào)節(jié)序列控制下時(shí)在體內(nèi)轉(zhuǎn)錄和 翻譯成多肽的DNA序列。編碼的邊界由5'(氨基)末端的起始密碼子和 3'(羧基)末端上的翻譯終止密碼子決定。本發(fā)明的編碼序列可以包括， 但不限于來自真核生物mRNA的cDNA，來自真核生物(例如哺乳動(dòng)物)DNA 的基因組DNA序列和合成DNA序列。聚腺普酸化信號和轉(zhuǎn)錄終止序列可 以位于該編碼序列的3'上。
核酸或DNA調(diào)節(jié)序列或調(diào)節(jié)元件為轉(zhuǎn)錄和翻譯控制序列，諸如啟動(dòng) 子，增強(qiáng)子，聚腺苷酸化信號和終止子，它們提供和/或調(diào)節(jié)宿主細(xì)胞 中編碼序列的表達(dá)。指導(dǎo)某些實(shí)施方案的真核細(xì)胞離子通道和可檢測
擇。調(diào)節(jié)序歹'j的實(shí)例描迷在Goeddel， Gene Expression Technology: Methods in Enzymology(Academic Press, San Diego, CA(1990))中。 例如，任何控制DM序列表達(dá)的各種表達(dá)控制序列在可操作地與之連接 時(shí)可以用于這些載體以表達(dá)編碼離子通道和可檢測標(biāo)記的DNA序列。這 類有用的表達(dá)控制序列包括例如，SV40的早期和晚期啟動(dòng)子，p2微 管蛋白，腺病毒或巨細(xì)胞病毒立即早期啟動(dòng)子，lac系統(tǒng)，trp系統(tǒng)， TAC或TRC系統(tǒng)，表達(dá)由T7 RNA聚合酶指導(dǎo)的T7啟動(dòng)子，3-磷酸甘油酸 酯激酶或其它糖酵解酶的啟動(dòng)子，酸性磷酸酶啟動(dòng)子，例如，Pho5和
酵母a-交配因子和已知控制原核或真核細(xì)胞或其病毒中的基因表達(dá) 的其它序列的啟動(dòng)子，和各種組合。應(yīng)理解表達(dá)載體的設(shè)計(jì)可以取決 于諸如轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞的選擇這類因素。此外，還應(yīng)考慮載體的拷貝 數(shù)，控制該拷貝數(shù)的能力和該載體編碼的任何其它蛋白質(zhì)，諸如抗生 素標(biāo)記的表達(dá)。
本發(fā)明關(guān)注可以驅(qū)動(dòng)原核或真核細(xì)胞中TRPA1蛋白質(zhì)表達(dá)的任何 啟動(dòng)子的應(yīng)用。本文所用的術(shù)語"啟動(dòng)子"意旨調(diào)節(jié)選擇的DM序列表達(dá) 的DNA序列，所述選擇的DNA序列可操作地與啟動(dòng)子連接并且影響選擇 的DNA序列在細(xì)胞中的表達(dá)。"啟動(dòng)子"一般為能夠結(jié)合細(xì)胞中RNA聚合 酶并且啟動(dòng)編碼序列轉(zhuǎn)錄的DNA調(diào)節(jié)元件。例如，啟動(dòng)子序列可以通過 與其3'末端結(jié)合轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)并且向上游延伸(5'方向)以便包括啟動(dòng)
高于背景的可檢測水平的轉(zhuǎn)錄所必需的最小數(shù)量的堿基或元件。在啟 動(dòng)子序列中可以發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)和負(fù)責(zé)結(jié)合RNA聚合酶的蛋白質(zhì)結(jié)
合結(jié)構(gòu)域。真核啟動(dòng)子通常，但并非始終包含"TATA"箱和"CAAT"箱。
各種啟動(dòng)子，包括誘導(dǎo)型啟動(dòng)子可以用于驅(qū)動(dòng)本發(fā)明的各種載體。
術(shù)語"啟動(dòng)子"還包括原核和/或真核啟動(dòng)子和啟動(dòng)子元件。本文所 用的術(shù)語"啟動(dòng)子"包括"細(xì)胞特異性"啟動(dòng)子，即僅在特異性細(xì)l包(例 如，特異性組織細(xì)胞)中影響選擇的DNA序列表達(dá)的啟動(dòng)子。該術(shù)語還 覆蓋所謂的"易漏"啟動(dòng)子，它們調(diào)節(jié)選擇的DNA主要在一種組織中的表 達(dá)，并且也在其它組織中產(chǎn)生表達(dá)。該術(shù)語還包括非組織特異性啟動(dòng) 子和組成型表達(dá)或?yàn)檎T導(dǎo)型的啟動(dòng)子(即可以控制表達(dá)水平)。
如上所述并且在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明關(guān)注包含TRPA1核酸序列 并且能夠表達(dá)TRPA1蛋白質(zhì)的表達(dá)載體。當(dāng)在細(xì)胞中表達(dá)時(shí)，這些載體 表達(dá)TRPA1蛋白質(zhì)，優(yōu)選功能性蛋白質(zhì)。功能性TRPA1蛋白質(zhì)介導(dǎo)電流 和/或離子流和/或膜電位。
達(dá)。例如，可以使用蛋白質(zhì)印跡分析，免疫細(xì)胞化學(xué)或免疫組織化學(xué) 證實(shí)蛋白質(zhì)表達(dá)。另外或可選擇地，可以使用，例如評價(jià)離子流的鈣 成像分析或評價(jià)電流的電生理學(xué)方法(例如，膜片箝分析)檢測TRPA1 功能。
合成方案和活性拮抗劑的鑒定 組合文庫
具有不同有代表性類型的取代基的本發(fā)明化合物，特別是變體庫
適合于組合化學(xué)和其它平行合成方案(例如，參見PCT W0 94/08051)。 結(jié)果為可以在高流通量測定法中快速篩選相關(guān)化合物的大文庫，例如 上述化合物的各種文庫，以便鑒定潛在的TRPA1激動(dòng)劑或拮抗劑前導(dǎo)化 合物，并且精制前導(dǎo)化合物的特異性，毒性和/或細(xì)胞毒性-動(dòng)力學(xué)特 性。例如，TRPA1生物化學(xué)測定，諸如本文披露的那些可以用于篩選具 有對TRP A1的激動(dòng)劑活性或拮抗劑活性的那些化合物文庫。
只作為例證，用于本發(fā)明目的的組合文庫為化學(xué)上相關(guān)的化合物 的混合物，可以針對所需的特性將它們一起篩選。在單一反應(yīng)中制備 許多相關(guān)化合物明顯減少并且簡化了需要進(jìn)行的篩選過程的數(shù)量。可 以通過常規(guī)方法進(jìn)行使得物理特性的篩選。
可以在文庫中生成各種不同水平的多樣性。例如，用于組合反應(yīng)
的底物芳基在核芳基部分方面可以不同，例如，在環(huán)結(jié)構(gòu)方面可以各 種各樣和/或可以在其它取代基方面改變。
可以利用本領(lǐng)域中產(chǎn)生小有機(jī)分子如本發(fā)明主題的化合物的組合 文庫的各種技術(shù)。例如，參見Blondelle等(1995) Trends Anal. Chem. 14:83; Affymax的美國專利5， 359， 115和5， 362， 899; Ellman的美國專 利5， 288， 514; Sti 11等的PCT公開號W0 94/08051; ArQule的美國專利 5， 736， 412和5， 712， 171; Chen等(1994) JACS 116: 2661; Kerr等(1993) JACS 115: 252; PCT公開號W092/10092， WO93/09668和WO91/07087; 和Lerner等PCT公開號W093/20242)。因此，可以合成相當(dāng)于約100-1， 000， OOO或更多本發(fā)明主題化合物的多變體(diversomers)的各種 文庫并且針對特定的活性或特性進(jìn)行篩選。
對上迷和相關(guān)途徑的許多改變能夠合成廣泛不同的化合物文庫， 可以將它們作為TRP A1抑制劑或激動(dòng)劑測試。
實(shí)施例
實(shí)施例1:高流通量篩選測定
本測定法依賴于可誘導(dǎo)地表達(dá)TRPA1通道的細(xì)胞中通道活化后檢 測的胞內(nèi)Ca2+濃度([Ca21 J升高。使用栽入細(xì)胞且此后指示[Ca2+] i的熒 光Ca2+指示劑定量Ca"升高。TRPA1通道的活化之后發(fā)生Ca"流入。將 抑制[Ca2+]i升高的化合物視為用于進(jìn)一步研究的選中物(hits)。
用TRPA1構(gòu)建體(特別是編碼具有SEQ ID NO: 1中所示氨基酸序 列的TRPA1蛋白質(zhì)的構(gòu)建體)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染商購HEK293/TREx品系 (Invitrogen)，并且通過常規(guī)的鈣成像篩選，以便在使用1 ng/ml四 環(huán)素刺激后找到具有TRPA1表達(dá)的克隆。將這些細(xì)胞維持在補(bǔ)充了 100 pg/ml潮霉素的制造商推薦的生長培養(yǎng)基中，以便促進(jìn)TRPA1構(gòu)建體 保留。在生長至近匯合后，以 25，000個(gè)細(xì)胞/孔的密度在有1 pg/ml 四環(huán)素存在下的384孔CellBind平板(Corning)中鋪板，并且使其生 長20-30小時(shí)。得到幾乎匯合的單層。然后給細(xì)胞加載Ca"染料將 Fura-2/AM或Fluo4/AM加入到各孔中至終濃度分別為2 )iM或1 joM 并且在室溫下分別孵育80分鐘或60分鐘。然后通過在急劇拍打的同 時(shí)倒置平板從細(xì)胞中除去上清液，然后向各孔中加入40 pL Hank平 衡鹽溶液(HBSS; 0. 185 g/1 D-葡萄糖，0. 9767 g/1 MgS04 (無水)，0.4 g/1 KC1， 0.06 g/1 KH2P04(無水)，0.35 g/1 NaHC03， 8.0 g/1 NaCl 和0. 04788 g/1肘2肝04(無水);pH 7.4)。在用于從加載回收的 1小 時(shí)后， <吏用Hamamatsu FDSS 6000系統(tǒng)測定細(xì)胞，該系統(tǒng)允許可選擇 地在340 nM和380 nM處照射以便進(jìn)行Fura-2實(shí)驗(yàn)或在485 nM下照 射以便進(jìn)行Fluo4實(shí)驗(yàn)。以0.2 Hz的速率獲得結(jié)構(gòu)。在測定過程中， 連續(xù)渦旋平板，在添加每種試劑后使用移液管在孔中混合。為了進(jìn)行 篩選測定，在收集短(4個(gè)結(jié)構(gòu))基線后將13 |LiL稀釋儲(chǔ)備溶液(在50 下)加入到各孔中2分鐘。然后將13 nL 37. 5 nM AITC(異硫氰酸烯丙 西旨)加入到各孔中，實(shí)現(xiàn)各化合物的終濃度為10pM和AITC為7. 5^iM。 在添加AITC后收集數(shù)據(jù) 3分鐘，其中熒光強(qiáng)度(就Fluo4而言)和
F340/F38Q之比(就Fura-2而言)與[Ca2+] i成正比。陰性對照由接觸 AITC，但不接觸化合物的HEK293/TREx TRPA1細(xì)月包組成。陽性對照通 常為接觸AITC，但不接觸化合物的HEK293/TREx("親代")細(xì)胞，而有 時(shí)還使用正常，但不接觸AITC或化合物的HEK/293 TRExTRPAl細(xì)胞。 這些對照組確定了篩選窗并且將"選中物"定義為將熒光反應(yīng)抑制至少 40%的那些化合物。測定定義為"選中物"的化合物的IC5。值。將基于 Fluo4細(xì)胞的熒光測定法用于測定在有不同藥物濃度存在下的胞內(nèi) Ca"濃度。測試濃度為40 |iM， 20 ^iM， 10 )iM， 5 |iM， 2. 5 (^M， 1. 25 和O. 625jLiM。在所有濃度下一式三份測試化合物。標(biāo)準(zhǔn)軟件用于擬合
ICs。曲線。
另外或可選擇地，可以將效率表示為在有(指定濃度化合物)存在 下與沒有化合物存在下或與對照化合物相比的抑制％。例如，將效率表 示為在有與沒有化合物存在下相比的離子流抑制％。
實(shí)施例2:膜片箝實(shí)驗(yàn)
膜片箝實(shí)驗(yàn)允許檢測通過上迷細(xì)胞系中的TRPA1通道的電流。為 了能夠記錄穩(wěn)定水平下的電流和防止其它實(shí)驗(yàn)室觀察到的"衰減"，有 必要使用穿孔的膜片技術(shù)，其防止細(xì)胞質(zhì)與移液管溶液發(fā)生透析。在 正常全細(xì)胞膜片箝記錄中，使玻璃電極接觸單一細(xì)胞并且用細(xì)胞膜建 立高電阻(gigaohm)密封物。然后使膜破碎以便獲得全細(xì)胞結(jié)構(gòu)，從而 能夠使用與電極連接的放大器控制細(xì)胞膜電壓并且測定通過膜的電 流，并且用移液管溶液替代細(xì)胞質(zhì)。相反，在穿孔的膜片方式中，有 抗生素兩性霉素存在于移液管溶液中并且在獲得密封物后幾分鐘過程 內(nèi)擴(kuò)散接觸細(xì)胞。兩性霉素在移液管下的膜中形成離子可透過的孔， 從而能夠通過某些離子，但保持大部分天然胞質(zhì)成分。灌流系統(tǒng)能夠 控制胞外溶液，包括添加的電流阻滯劑和活化劑。通過添加5pMAITC 到該溶液中活化電流。
將TRPA1細(xì)胞誘導(dǎo)20-48小時(shí)，從生長平板中取出并且以低密度 在玻璃蓋玻片上再鋪板(以便實(shí)現(xiàn)良好的單細(xì)胞物理分離)以便測^_ 。
在某些情況中，使細(xì)胞在玻璃蓋玻片上以低密度生長過夜。在具有-40 mV保持電位的全細(xì)胞方式中進(jìn)行膜片箝記錄。每隔5秒將電壓從-120 等變至+100 mV，期限為400 ms。在-80 mV和+80 mV下將引起的電流 定量。內(nèi)部溶液由140 mM天冬氨酸銫，10 mM EGTA， 2. 2 mM CaCl2， 2.08 inM MgCL和10 mM HEPES， pH 7.2組成并且在實(shí)驗(yàn)前即刻加入 50nM計(jì)算的游離Ca"和60mg/ml兩性霉素。外部溶液由150mMNaCl， 4.5mMKCl， 3 mM MgCh， 10 mM HEPES， 10mM谷氨酰胺，lmM EGTA， pH 7. 4組成。在添加AITC時(shí)，僅在表達(dá)TRPA1的細(xì)胞，但不在親代 HEK293 TREx細(xì)胞中誘導(dǎo)TRPA1電流。除去AITC刺激物導(dǎo)致大部分電 流消失。測試可能的阻滯劑在連續(xù)有AITC存在下阻斷內(nèi)向和外向電流 的能力。
通過測試5 )LiM和500 nM的每種化合物評估化合物的IC5。。當(dāng)5 |liM 化合物未表現(xiàn)出阻斷時(shí)，將ICs評估為〉10 joM。當(dāng)5 jnM化合物表現(xiàn) 出50%或50%以下的阻斷時(shí)，ICs?？梢赃_(dá)到5-10 ^M的ICs。近似評估值。 類似地評估了 500 nM-5 ^M的化合物的IC5。。在多個(gè)濃度下重新測試 在500 nM下具有50%或50%以上阻斷的化合物并且通過標(biāo)準(zhǔn)方程擬合 每次時(shí)的阻斷％以便使用5-6點(diǎn)濃度/相應(yīng)實(shí)驗(yàn)精確測定IC5。。除所示 的外，還從膜片箝實(shí)驗(yàn)值獲得了表1和2中所示的ICs。值。
實(shí)施例3.其它篩選測定
盡管使用實(shí)施例1和2中所述的測定法鑒定了本文提供的典型 TRPA1抑制劑，但是其它基于細(xì)胞的測定法可以用于鑒定和/或表征 TRPA1抑制劑。 一種這類測定法描述在2005年3月11日提交的美國 申請順序號US11/078，188中，將該文獻(xiàn)的內(nèi)容完整地引入本文作為參 考?？梢栽谏暾?zhí)?1/078, 188中所述的原核細(xì)胞系統(tǒng)中表達(dá)TRPA1 蛋白質(zhì)，并且可以將該系統(tǒng)用于篩選調(diào)節(jié)TRPA1蛋白質(zhì)活性的化合物。 可選擇地，可以在原核細(xì)胞系統(tǒng)中表達(dá)非TRPA1的離子通道，并且可 以將該系統(tǒng)用于評價(jià)鑒定的TRPA1抑制劑在其它離子通道方面的活性 i普。
可以以高流通量方式進(jìn)行為鑒定和/或表征抑制TRPA1活性的化 合物而進(jìn)行的任何測定，或可以將其按照小規(guī)模進(jìn)行以便檢驗(yàn)單個(gè)的 化合物或少量化合物。另外，可以如下進(jìn)行任何這些測定(i)作為 初步測定以便鑒定抑制TRPA1功能的化合物；(ii)作為二次測定以便 評價(jià)化合物在其對其它離子通道活性方面的特異性；(Hi)作為用于 藥物化學(xué)程序中的測定以便優(yōu)化受試化合物。
實(shí)施例4: TRPA1抑制劑的血漿水平
化合物200在37。C下的大鼠血漿中保持穩(wěn)定^:l小時(shí)。
在單一靜脈內(nèi)推注劑量0. 9mg/kg，腹膜內(nèi)劑量12mg/kg(混懸液) 和口服劑量12 mg/kg(混懸液)之后，通過HPLC/MS/MS，測定雄性 Sprague-Dawley大鼠中的化合物200血漿水平。
對于靜脈內(nèi)給藥，用30。/。w/vCAPTIS0L配制化合物200溶液，目 標(biāo)濃度為0.25 mg/mL，作為通過有意識的大鼠尾部以4 mL/kg劑量體 積的快速推注(2-3秒)給藥。
對于腹膜內(nèi)給藥，將化合物200配制成在CMC(羧甲基纖維素)中 的均勻混懸液，目標(biāo)濃度為lmg/mL并且以10mL/kg的劑量體積給藥。
對于口服給藥，將化合物200配制成在CMC(羧甲基纖維素)中的 均勻混懸液，目標(biāo)濃度為1 mg/mL，以管飼法對有意識的禁食 Sprague-Dawley大鼠給藥，劑量體積為10 mL/kg。
半衰期，血漿清除率和分布體積的估計(jì)值分別為32分鐘，27 mL/kg/分鐘和1276 mL/kg。在禁食大鼠中給予混懸液后的生物利用度 估計(jì)值為~8%。血漿-濃度-時(shí)間曲線圖提示，化合物200被快速吸收， 正如通過45分鐘后出現(xiàn)Cmax的觀察結(jié)果所突出顯示的。
在以12 mg/kg腹膜內(nèi)給藥后(15 - 60分鐘)并且還在以12 mg/kg 口服給予后(45分鐘)觀察到與對TRPA1的ICw類似的血漿水平(lOOO nM = 355 ng/mL)。
制備制劑形式的TRPA1抑制劑并且通過幾種不同給藥途徑給藥。 這表明可以以許多方式配制TRPA1抑制劑并且它們適合于最有效地治
療特定的疾病或損傷。這些特性與對大鼠給予TRPA1抑制劑后觀察到 的最少副作用的組合表明，TRPA1抑制劑具有合適的藥物和藥物候選 物特征。
實(shí)施例5: TRPAl拮抗劑在失禁模型中的測試
為了測試TRPAl抑制劑化合物(化合物200)在治療失禁中的有效 性，在以手術(shù)方式使膀胱部分出口阻塞(BOO)后對大鼠給予不同濃度的 化合物[例如，低濃度(2. 2微摩爾)，中濃度(6. 6微摩爾)和高濃度(2 0 微摩爾濃度)]。將不同劑量的TRPAl抑制劑性化合物的功效與單獨(dú)給 予賦形劑的對照組(偽對照組)功效進(jìn)行比較。還將功效與給予陽性對 照如阿托品的大鼠進(jìn)行比較。阿托品并非TRPAl抑制劑，但它確實(shí)減 少了 BOO模型中部分膀胱出口阻塞后的膀胱過度活動(dòng)。
在這些研究中4吏用雌性Sprague Dawley大鼠。大鼠進(jìn)行手術(shù)部分 膀胱出口阻塞(BOO)或假擬手術(shù)。BOO(或假擬)手術(shù)后5周，以手術(shù)方 式將膀胱內(nèi)導(dǎo)管植入膀胱半球以便進(jìn)行尿流動(dòng)力學(xué)檢查。導(dǎo)管植入后 1周(BOO或假擬手術(shù)后6周)開始尿流動(dòng)力學(xué)檢查。使膀胱導(dǎo)管與壓力 傳感器的一個(gè)出口連接并且使該壓力傳感器的另一個(gè)出口與注射泵連 接。金屬絲底的動(dòng)物籠下的分析天平測定了在連續(xù)膀胱測壓過程中排 泄的尿量。將單一膀胱內(nèi)壓圖(CMG)定義為單一充盈-排泄循環(huán)過程中 的膀胱壓力，輸注體積和排泄體積的同時(shí)記錄值。
在假擬阻塞和BOO動(dòng)物中測試每種濃度的TRPAl抑制劑(化合物 200)。還測試了給予載體的動(dòng)物。實(shí)驗(yàn)由至少20CMG個(gè)循環(huán)組成。簡 言之，將等滲鹽水(O. 9%)以175 ul/分鐘(10. 5ml/小時(shí))的速率輸注入 膀胱。在鹽水輸注后，以175 ul/分鐘輸注拮抗劑化合物。
就每個(gè)CMG周期而言，評價(jià)下列參數(shù)輸注體積(每個(gè)CMG循環(huán)輸 注的鹽水或藥物量)；排泄體積(每個(gè)CMG循環(huán)動(dòng)物排泄的尿量)；最小 壓力(充盈過程中的最小壓力)；閾值壓(在膀胱壓力開始快速升高時(shí)排 尿前的壓力)；平均壓力(在充盈過程中和閾值前的平均壓力)；最大壓 力；排尿間隔(兩次依次排泄過程之間的時(shí)間)；尿流量指數(shù)。
這些實(shí)驗(yàn)證實(shí)TRPA1抑制劑被膀胱阻塞的動(dòng)物所耐受。另外，這 些實(shí)驗(yàn)證實(shí)TRPA1抑制劑降低了失禁BOO模型中膀胱壓力閾值和最大 膀胱壓力。這些作用為特異性的并且在單獨(dú)給予載體后未觀察到。
實(shí)施例6: TRPA1拮抗劑在緩激肽誘導(dǎo)的疼痛模型中的測試 如上所述，緩激肽模型涉及足底內(nèi)注射5 ng/jiL緩激肽溶液。注 射緩激肽溶液一般導(dǎo)致快速致敏。通過評價(jià)作為對由改進(jìn)的 Hargreaves儀器遞送的輕度熱刺激物反應(yīng)的注射爪的熱逃逸潛伏期 測定致敏作用。


圖1 a和1 b概括了在緩激肽模型中測試化合物2 00后獲得的數(shù)據(jù)。 本研究檢驗(yàn)了 200mg/kg， 50mg/kg和12. 5mg/kg腹膜內(nèi)化合物200對 緩激肽誘導(dǎo)的觸覺異常性疼痛的鎮(zhèn)痛作用。
雄性Holtzmann大鼠在緩激肽注射前30分鐘接受給予的TRPA1 抑制劑或載體(O. 5%曱基纖維素)。通過腹膜內(nèi)(IP)注射抑制劑或載體。 對接受TRPA1抑制劑的動(dòng)物給予12. 5 mg/kg, 50 mg/kg或200 mg/kg 劑量。在遞送的TRPA1抑制劑的每個(gè)濃度下以及載體下評價(jià)8只動(dòng)物。 給予藥物或載體后30分鐘，在右后爪中遞送30ug/10(^L劑量的緩激 肽。
在整個(gè)研究過程中，在每次觀察期限過程中進(jìn)行一般行為評價(jià)。 觀察結(jié)果包括觸覺異常性疼痛(通過施加于體表的輕度觸摸誘導(dǎo)的發(fā) 聲/躁動(dòng))，自發(fā)發(fā)聲，體表撕咬和咀嚼，后肢放置和步進(jìn)反射喪失， 后肢承重喪失和正向反射喪失。另外，評價(jià)和測定機(jī)械性異常性疼痛。 圖la和lb中提供的結(jié)果基于對機(jī)械性異常性疼痛的測量值。
緩激肽產(chǎn)生了引起退縮行為所需的觸覺閾值的顯著降低。這種異 常性疼痛持續(xù)達(dá)240分鐘。以達(dá)200mg/kg的劑量IP遞送TRPA1抑制 劑預(yù)治療表現(xiàn)出對緩激肽注射后機(jī)械性閾值的劑量依賴性作用，它持 續(xù)約60分鐘。然而同時(shí)未注意到行為參數(shù)的改變并且僅在給予最高劑 量的8只大鼠中的3只中觀察到了輕度的鎮(zhèn)靜作用。
在大鼠足底內(nèi)的緩激肽產(chǎn)生了顯著性長期持續(xù)的觸覺異常性疼
痛。這些研究證實(shí)TRPA1抑制劑產(chǎn)生了異常性疼痛的劑量依賴性降低。 此外，該藥物減輕了疼痛癥狀約60分鐘。這些實(shí)驗(yàn)證實(shí)TRPA1抑制劑 有效減輕緩激肽疼痛模型中的疼痛癥狀(例如，機(jī)械性異常性疼痛)。
實(shí)施例7: TRPA1拮抗劑在福爾馬林疼痛模型中的測試 如上所述，福爾馬林模型涉及透皮或通過腹膜內(nèi)注射福爾馬林溶 液。注射福爾馬林溶液激活了 二相反應(yīng)且由此提供了傷害性和炎性疼 痛方式。福爾馬林模型用于評價(jià)典型TRPA1抑制劑在治療疼痛中的有 效性。
圖2概括了化合物200在福爾馬林模型中測試后獲得的數(shù)據(jù)。簡 言之，遵循下列方案。雄性Holtzmann大鼠接受足底內(nèi)注射50pL 2% 福爾馬林。通過檢測注射的后爪上放置的小金屬條的運(yùn)動(dòng)的自動(dòng)化傳 感器檢測爪的退縮。在注射福爾馬林前約15分鐘給予藥物或載體。通 過在早期(注射福爾馬林后約5分鐘)，晚期(注射福爾馬林后約30分 鐘)和介入疼痛免除期過程中計(jì)數(shù)每分鐘的退縮次數(shù)測定動(dòng)物對注射 刺激物的反應(yīng)。在圖2中，每一數(shù)據(jù)組(早期和晚期)的最右側(cè)棒形 圖表示單獨(dú)給予載體，且最左棒形圖表示給予加巴噴丁。給予的TRPA1 抑制性化合物的最高濃度為與描繪加巴噴丁給藥相鄰的棒形圖，而給 予的TRPA1抑制性化合物的最低濃度為與描繪給予載體相鄰的棒形 圖。
將典型實(shí)驗(yàn)結(jié)果概括在圖2中。在接受不同劑量的TRPA1抑制劑 (化合物200),加巴噴丁或載體對照的動(dòng)物中注射福爾馬林后測定每 分鐘退縮次數(shù)，即動(dòng)物經(jīng)歷的疼痛和不適的量度。給予TRPA1抑制劑 基本上減少了早期和晚期過程中每分鐘退縮的次數(shù)。這些結(jié)果表明 TRPA1抑制劑減少了福爾馬林模型中疼痛的兩個(gè)時(shí)期。TRPA1抑制劑在 傷害性和炎性疼痛模型的兩個(gè)時(shí)期中的功效支持了 TRPA1抑制劑在治 療嚴(yán)重性疼痛，包括慢性和急性痛中的應(yīng)用。
實(shí)施例8:TRPA1拮抗劑在急性炎性疼痛的角叉菜膠模型中的測
試
如上所述，角叉菜膠模型為急性炎性疼痛模型。照此，它可以用 于評價(jià)在緩解炎癥導(dǎo)致的疼痛，例如因關(guān)節(jié)炎導(dǎo)致的疼痛中的有效性。
圖3概括了化合物200在角叉菜膠模型中測試后獲得的數(shù)據(jù)。簡 言之，使用Hargreaves儀器預(yù)測試首次用于實(shí)驗(yàn)的大鼠對熱刺激的敏 感性。第二天，在測試前約4.5小時(shí)將100 jiL X-角叉菜膠注入右后 爪的足底表面。測試前30-60分鐘給大鼠經(jīng)腹膜內(nèi)注射載體或藥物(化 合物200或雙氯芬酸以便評價(jià)IP給予TRPA1抑制劑的功效)。
在本研究中，給予的藥物為TRPA1抑制劑或非類固醇抗炎藥雙氯 芬酸。在給予角叉菜膠和藥物或載體對照后，測量爪體積并且用于評 價(jià)減輕的炎癥。
圖3概括了這些實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。就每種"藥物"(TRPA1或雙氯芬酸) 或載體而言，顯示了給藥劑量(以mg/kg計(jì))和給藥途徑(IP)。圖3a 和3b中概括的結(jié)果表明TRPA1抑制劑減小了爪體積(例如減輕的炎 癥) 炎癥減輕與給予雙氯芬酸后觀察到的結(jié)果類似。
圖3中概括的結(jié)果表明TRPA1抑制劑減輕了角叉茱膠模型中的炎 癥。這種炎癥的減輕可能伴隨因炎癥導(dǎo)致的疼痛的同時(shí)減輕。TRPA1 抑制劑在這種炎性疼痛模型中的功效支持了 TRPA1抑制劑在治療炎癥 和炎性疼痛，例如因關(guān)節(jié)炎導(dǎo)致的炎性疼痛中的應(yīng)用。
注意到在本研究中，測定了爪體積的改變。給予TRPA1抑制劑后 觀察到的體積減小(例如，炎癥減輕)可能伴隨相應(yīng)的與炎癥相關(guān)的疼 痛或不適感的減輕。可選擇地或另外，可以直接評價(jià)疼痛指數(shù)。簡言 之，遵循上述概括的方案并且在注射角叉菜膠和藥物或載體對照后， 可以測定熱逃逸潛伏期。將數(shù)據(jù)表示為記錄的爪退縮潛伏期(PWLs)， 以秒計(jì))。
實(shí)施例9: TRPA1拮抗劑在炎性疼痛的CFA模型中的測試 如上所述，完全弗氏佐劑(CFA)模型為炎性疼痛模型。照此，它可 以用于評價(jià)在緩解炎癥導(dǎo)致的疼痛，例如因關(guān)節(jié)炎和其它炎性疾患導(dǎo)
致的疼痛中的有效性。
圖4概括了化合物200在CFA模型中測試后獲得的數(shù)據(jù)。使用 Hargreaves儀器預(yù)測試首次用于實(shí)驗(yàn)的大鼠對熱刺激的敏感性。第二 天，將100 |iL完全弗氏佐劑(CFA)注入右后爪的足底表面。2天后， 在早晨再次預(yù)先測試大鼠。在下午，給大鼠注射載體對照或藥物(TRPAl 抑制劑200或非類固醇抗炎藥雙氯芬酸)。經(jīng)腹膜內(nèi)注射藥物或載體并 且在45分鐘后通過將熱源施加于注射和未注射CFA的后爪并且測定退
縮潛伏期來測試大鼠的痛覺過敏。
圖4概括了這些實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，它們表明這種TRPA1抑制劑減輕了 炎性疼痛的CFA模型中的疼痛。特別地，TRPA1抑制劑減輕了這種炎 性疼痛模型中的熱痛覺過敏。這種TRPA1抑制劑的功效優(yōu)于雙氯芬酸 (非類固醇抗炎藥)。另外，這些實(shí)驗(yàn)顯示，TRPA1抑制劑減輕了受傷 害爪的疼痛，而不干擾正常的感覺。這一結(jié)果通過對未受侵害的對照 爪(非發(fā)炎的)的分析得以證實(shí)。
TRPA1抑制劑在這種炎性疼痛模型中的功效支持了 TRPA1抑制劑 在治療炎性疼痛，例如，因關(guān)節(jié)炎導(dǎo)致的疼痛中的應(yīng)用。測試的TRPA1 抑制劑表現(xiàn)出在沒有毒性和不使正常感覺遲緩的情況下減輕疼痛。另 外，測試的TRPA1抑制劑以與非類固醇抗炎藥類似或比它更大的功效 減輕了疼痛。由于觀察到非類固醇抗炎化合物的副作用，所以TRPA1 抑制劑可以在不出現(xiàn)可利用的止痛藥的副作用的情況下減輕疼痛。
實(shí)施例10: TRPA1拮抗劑在疼痛熱損傷模型的測試 熱損傷模型用于評價(jià)典型TRPA1抑制劑在治療傷害性疼痛中的有 效性。
簡言之，可以使用下列方案。使用Hargreaves型儀器測試雄性 Holtzman大鼠(約300克)的熱逃逸。在輕度麻醉下，將熱損傷(52t: 下45秒)施加于一個(gè)足后部。在損傷前和損傷后30， 60， 80和120 分鐘測試動(dòng)物的受損和未受損爪的熱逃逸潛伏期。在基線測量后和熱 損傷前約15-20分鐘給予藥物(TRPA1抑制劑)或載體(O. 5%甲基纖維
素)。除逃逸潛伏期測定外，在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中進(jìn)行行為觀察。
實(shí)施例11: TRPA1拮抗劑在神經(jīng)性疼痛的Chung模型的測試 簡言之，通過連接L4/5神經(jīng)根準(zhǔn)備雄性SpragueDawley大鼠(約 175克)。5-8天后，使用VonFrey毛測試動(dòng)物異常性疼痛。使用"上-下"(up-down)法評估閾值。給予藥物或載體并且在接下來的4小時(shí) 內(nèi)定期測試動(dòng)物。
實(shí)施例12:本發(fā)明化合物的合成
2-(1， 3-二甲基-2， 6-二氧代-l， 2, 3， 6-四氫嘌呤-7-基)-N-(4-異 丙基苯基)乙酰胺(200)
在0'C下向茶堿-7-乙酸(IOI, 32. 5 g， 0. 136mol)在無水DMF(400 mL)中的混懸液中加入DIPEA(54 mL， 0. 31 mol)。加入純凈苯胺(102， 20. 4mL， 0. 143mol),隨后添加DMAP (19. 2 g, 0. 16 mol)和EDCI (30. 1 g, 0.16mol)。將該反應(yīng)混合物在18小時(shí)內(nèi)溫至室溫，然后在40-43 。C下攪拌1.5天。用CH2Cl2(1.8L)稀釋該反應(yīng)混合物，用&0(0. 7L)， 10%檸檬酸(0.5 L)， NaHC03(飽和，0. 6 L)，鹽水洗滌，用Na2S04干燥 鹽并且在真空中濃縮且從乙酸乙酯/己烷中重結(jié)晶而得到化合物 200 (41%， 19.8 g): MS(APCI) m/z: 356.2 [M+H]+。對C18H21N503的計(jì) 算值C, 60.83; H， 5.96; N， 19.71;測定值C， 60.53; H， 5.97; N， 19.76。
通過使用EDCI的偶聯(lián)制備酰胺類的一般操作A
向茶堿-7-乙酸(2 mmol) ， DMAP(2腿o1),取代的苯乙胺(2 mmol) 和DIPEA(4 mmol)在DMF(20 mL)中的混合物中加入EDCI (2 mmol)。將 該反應(yīng)混合物加熱至401C并且攪拌過夜。在真空中濃縮該溶液并且將
殘余物溶于EtOAc(lOO mL),用H20，檸檬酸(10%), NaHC03(飽和)和 鹽水洗滌，用Na2S0,干燥并且在真空中濃縮。通過硅膠快速色鐠法純 化粗產(chǎn)物，用MeOH/EtOAc (1~8%)洗脫。
N-[2-(4-氯苯基)-乙基]-2-(1， 3-二甲基-2， 6-二氧代-1， 2, 3， 6-四氫-嘌呤-7-基)-乙酰胺(268):<formula>formula see original document page 122</formula>
通過一般操作A由101 (500 mg，2. 1 mmol)和103 (292 pL，2. 1 mmol) 制備化合物268 (107 mg, 14%)。 MS(APCI): m/z 376 [M+H]+。
2-(1， 3-二曱基-2， 6-二氧代-l， 2， 3， 6-四氫-嘌呤-7-基)-N-(2-對 - 曱苯基-乙基) - 乙酰胺(400):
101 104 柳
通過一般操作A由101 (503 mg，2. 1 mmol)和104 (308 jiL，2. 1 mmol) 制備化合物400 (99 mg， 13%)。 MS(APCI): m/z 356 [M+H]+。
通過?；戎苽漉０奉愐话悴僮鰾
在冰-水浴中冷卻茶堿-7-乙酸(2 ramol)在CHC13(15 mL)和 MeCN(15 mL)中的混懸液。然后滴加草酰氯(2. 2 mmol)。然后加入催化 的DMF(~25 ^L)。將該混合物在室溫下攪拌過夜。然后用水-水浴冷 卻該溶液且一次加入DMAP(2. 5 mmol)。滴加取4戈的苯乙胺并且將該反 應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜。在用CHCl3(50mL)稀釋后，混合物用H20， 檸檬酸(在1120中10%), NaHC03(飽和)洗滌，用Na2S04干燥并且在真
中濃縮。通過硅膠快速色i普法純化粗產(chǎn)物，用MeOH/EtOAc (1~8%)洗脫<
N- [2- (3， 4- 二氯苯基) - 乙基]-2- (1， 3- 二甲基-2， 6- 二氧代 1， 2， 3， 6-四氫-嘌呤-7-基)_乙酰胺(396):
<formula>formula see original document page 123</formula>
通過一般操作B由101 (506 mg，2. 1 mmol)和106 (320 |uL，2. 1 mmol) 制備化合物396 (490 mg， 56%)。 MS (APCI): m/z 410 [M+H]+。
N-[2-(4-二曱氨基苯基)-乙基]-2-(l， 3-二曱基-2， 6-二氧代 -l， 2， 3， 6-四氫嘌呤-7-基)-乙酰胺(397):
通過一般操作B由101 (507 mg， 2. 1 mmol)和107 (350 pL， ~2. 2 mmol)制備化合物397 (610 mg， 75%)。 MS(APCI): m/z 385 [M+H]+。
2-(1， 3- 二甲基-2， 6- 二氧代-1， 2， 3， 6-四氫嘌呤-7-基)-N- [2- (4-甲氧基-苯基)-乙基]-乙酰胺(261)<formula>formula see original document page 124</formula>
通過一般操作B由101 (1. 01 g,4. 2 mmol)和108 (630 pL,4. 3 mmol) 制備化合物261 (820 mg， 52%)。 MS(APCI): m/z 372 [M+H]+。
2-(l， 3- 二甲基-2， 6- 二氧代-1， 2， 3， 6-四氫噤呤-7-基)-N- [ 3- (4-甲氧基-苯基)-丙基]-乙酰胺(4 01):
<formula>formula see original document page 124</formula>
通過一般操作B由101 (506 mg, 2. 1 mmol)和109 (360 pL， ~2. 1 mmol)制備化合物401 (495 mg, 60%)。 MS(APCI): m/z 386 [M+H]+。 對(:19}123&04的計(jì)算值:C， 59.21; H， 6.01; N， 18.17;測定值C， 59. 37; H， 6. 06; N， 18. 18。
2-(l, 3- 二甲基-2， 6- 二氧代-1， 2， 3， 6-四氫嘌呤-7-基)-N- [2- (3-曱基-苯基)-乙基]-乙酰胺(407):
OH
CHCI^CH3CN O
DMAP
407
通過一般操作B由101 (508 mg, 2. 1 ramol)和110 (290 pL, 2. 1. mmol)制備化合物407 (494 mg， 65%)。 MS(APCI): m/z 356 [M+H]+。 對d8HnN力3的計(jì)算值:C, 60. 83; H, 5. 96; N， 19. 71;測定值C， 61. 09: H， 6. 03; N， 19. 76。
2- (1， 3- 二甲基-2， 6- 二氧代-1， 2， 3， 6-四氫嘌呤-7-基)-N- [2- (3-曱氧基-苯基) -乙基]乙酰胺(408):
通過一般操作B由101 (502 g， 2. 1 mmol)和111 (310 |uL, 2. 1隱l) 制備化合物4Q8 (462 mg, 59%) 。 MS (APCI): m/z 372 [M+H]+。對C18H21N504 的計(jì)算值C， 58.21; H, 5.70; N， 18.86;測定值C, 57.95; H, 5. 78; N， 18. 61。
N-[2-(4-氰基苯基)- 乙基]-2-(l，3-二曱基-2，6-二氧代 2,3， 6-四氫-嘌呤-7-基)-乙酰胺(409) <formula>formula see original document page 126</formula>2-(4-溴苯基)乙基氨基甲酸叔丁酯(113)
向預(yù)冷卻的112(2.0 g， 10 mmol)在THF(IO mL)中的0。C溶液中 滴加(Boc)20(2. 2 g, 10 mmol)。將該反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜。 將其在真空中濃縮而得到113(3 g， 100°/。)，為白色固體，將其不經(jīng)進(jìn) 一步純化用于下一步。
2-(4-氰基苯基)乙基氨基曱酸叔丁酯(114)
在&環(huán)境中將化合物113 (530 mg, 1. 8 mmol)溶于干,(17 mL)。 加入Zn(CN)2(416 mg, 3.6 mmol)和Pd (PPh3) 4 (200 mg， 0.18 mmol)。 攪拌該反應(yīng)混合物并且在樣"皮儀器(CEM Discover )中在150。C下加熱 20分鐘且然后在真空中濃縮該反應(yīng)混合物。通過硅膠快速色鐠法純化 殘余物，用EtOAc/己烷(20-80%)洗脫而得到114 (540 mg， 31%),為 白色固體。MS(APCI,負(fù))m/z 245 [M-H]+。
4-氰基苯乙胺(115)
將化合物114 (308 mg， 1.25 mmol)溶于DCM(4 mL)并且在冰-水 浴中冷卻該溶液。然后加入TFA(3. 5 mL)并且將該混合物在室溫下攪 拌15分鐘。在真空中濃縮該反應(yīng)混合物并且將殘余物溶于EtOAc(50 mL)。用LC03(飽和，3x)，鹽水洗滌該溶液，干燥并且濃縮而得到 115(175 mg， 95%),為淡黃色油狀物。MS(APCI): m/z 147 [M+H]+。
N-[2-(4-氰基苯基) - 乙基]-2-(1，3-二曱基-2，6-二氧代 -l, 2， 3， 6-四氫-嘌呤-7-基)乙酰胺(409)
按照一般操作B由101 (300 mg，l. 3 mmol)和115(175 mg，l. 2 mmol) 制備化合物409 (93 mg， 21%)。 MS(APCI): m/z 367 [M+H] +。對 C18H18N6O3.0. 04EtOAc.0. 1H20的計(jì)算值C， 58.68; H， 5.02; N， 22.61; 測定值C， 58.75; H， 5.01; N， 22.46。
N- (2-甲氧基苯乙基)-2- (1， 3-二甲基-2， 6-二氧代-l， 2， 3， 6-四 氫噤呤-7-基)乙酰胺(403):
<formula>formula see original document page 127</formula>
在&環(huán)境中將化合物101 (600 mg， 2.5 mmol)與HATU(1.14 g， 3.0 mmol)在20 mL DMF中混合并且在室溫下攪拌20分鐘。然后加入 化合物116 (0. 36 mL， 2. 5 mmol)。將所得混合物攪拌過夜且然后加入 乙酸乙酯(100 mL)。用水(3 x 80 mL)和鹽水(80 mL)洗滌所得溶液并 且用Na2S0,干燥。在干燥過程中形成一定固體沉淀，加入甲醇(10mL) 以便溶解該沉淀且然后過濾該溶液。在真空中濃縮濾液并且通過40 g 硅膠快速色i普法純化固體殘余物，用EtOAc/己烷作為洗脫劑。將純化 的產(chǎn)物與乙醚(25mL)—起研磨并且過濾而得到403，為白色固體(224 mg， 24%)。 MS(APCI): m/z 372 [M+H]+。對C18H21N504的計(jì)算值:C， 58.21; H， 5.70; N， 18.86;測定值C， 58.26; H， 5. 73; N， 18.74。
N-(2-氟苯乙基)-2-(1， 3-二甲基-2， 6-二氧代-l， 2， 3， 6-四氫噪
呤-7-基)乙酰胺(404)<formula>formula see original document page 127</formula>在&環(huán)境中將化合物101 (600 mg, 2.5 mmol)與HATU(1.14 g， 3. 0 mmol)在20 mL DMF中混合并且在室溫下攪拌20分鐘。加入化合
物117 (Q. 33 mL， 2. 5 mmol)。將所得混合物攪拌過夜。加入EtOAc (100 mL)并且用水(3 x 80 mL)和鹽水(80 mL)洗滌所得溶液，用Na2S04干燥 并且過濾。在真空中濃縮濾液并且通過40 g硅膠快速色鐠法純化固體 殘余物，用EtOAc/己烷洗脫。將純化的產(chǎn)物與乙醚(30 mL)—起研磨 并且過濾而得到404，為白色固體(281mg， 31°/。)。 MS(APCI): m/z 360 [M+H]+。對C17H18FN504 .0. 3H20的計(jì)算值C， 55. 98; H, 5. 14; N， 19. 20; 測定值C, 55.87; H, 5.07; N， 19.13。
N-(2-氯苯乙基)-2-(1， 3-二甲基-2， 6-二氧代-l， 2， 3， 6-四氫噤 呤-7-基)乙酰胺(405)
<formula>formula see original document page 128</formula>
在&環(huán)境中將化合物101 (600 mg， 2.5 mmol)與HATU(1.14 g， 3.0 mmol)在20 mL DMF中混合并且在室溫下攪拌20分鐘。加入化合 物118 (Q. 35 mL， 2， 5 mmol)。將所得混合物攪拌過夜。加入Et0Ac (100 mL)并且用水(3 x 80 mL)和鹽水(80 mL)洗滌所得溶液，用Na2S(^干燥 并且過濾。在真空中濃縮濾液并且通過40 g硅膠快速色語法純化固體 殘余物，用EtOAc/己烷洗脫。將純化的產(chǎn)物與MeOH(15 mL)—起研磨 并且過濾而得到405，為白色固體(270 mg， 28%)。 MS(APCI): m/z 376 [M+H]+。對(:171118(:1&03的計(jì)算值C， 54.33; H， 4.83; N， 18.64; Cl, 9.43;測定值C， 54.57; H, 4.80; N3 18.66; Cl， 9.52。
N- (2-甲基苯乙基)-2- (1， 3-二甲基-2， 6-二氧代-l， 2， 3， 6-嘌呤-7-基)乙酰胺(406):
四氫
<formula>formula see original document page 128</formula>
在N2環(huán)境中將化合物101 (600 mg, 2.5 mmol)與HATU(1.14 g， 3. 0 mmol)在20 mL DMF中混合并且在室溫下攪拌20分鐘。加入化合 物119 (338 mg， 2.5 mmol)。將所得混合物攪拌過夜。加入乙酸乙酯 (100 mL)并且用水(3 x 80 mL)和鹽水(80 mL)洗滌所得溶液，用Na2S04 干燥并且過濾。在真空中濃縮濾液并且通過40 g硅膠快速色鐠法純化 固體殘余物，用EtOAc/己烷洗脫。將純化的產(chǎn)物與乙醚(3t) mL)—起 研磨并且過濾而得到406，為白色固體(290 mg， 32%)。 MS (APCI): m/z 356 [M+H]+。對(:1811211^03的計(jì)算值C， 60.83; H， 5.96; N， 19.71; 測定值C， 60. 85; H， 6.01; N， 19.74。
N- (4-異丙基苯基)-2- (l-曱基-2, 6-二氧代-1， 2， 3， 6-四氫嘌呤 -7-基)乙酰胺(391)
(l-甲基-2， 6-二氧代-l， 2， 3， 6-四氫-嘌呤-7-基)-乙酸乙酯 (121)
向1-曱基黃嘌呤(120, lg， 6. 01 mmol)在DMF中的溶液加入碳酸 鉀(O. 91 g， 6.6 mmol)并且將該反應(yīng)混合物加熱至90 。C且攪拌1小 時(shí)。然后在45分鐘內(nèi)向反應(yīng)中滴加ClCH2COOEt(0. 36 g, 3.0 mmol) 在DMF中的溶液。在攪拌另外的15分鐘后，將該反應(yīng)體系冷卻至室溫 并且傾入水冷的1N HC1(50 ml)。然后用氯仿(50 x 2 ml)萃取該反應(yīng) 體系。用水(IOO mL)洗滌合并的有機(jī)層，用Na2SO^干燥并且在真空中 濃縮。向所得固體中加入在己烷中的30 %二氯甲烷(400 mL)并且將所 得混合物攪拌15分鐘且過濾而得到化合物121,為黃色固體(0.6 g，40%)。 MS(APCI): m/z 253.32 [M+H]+。
(l-甲基-2， 6-二氧代-1， 2， 3， 6-四氫-嘌呤-7-基-乙酸(122) 將酯121(0.6 g， 2.4 mmol)溶于2N HC1 (25 mL)并且回流2小時(shí)。 將該反應(yīng)混合物冷卻至O'C且然后溫至rt。過濾沉淀，用乙醚'冼，滌并 且干燥而得到白色固體122 (0. 23， 45 %)。MS(APCI):m/z 224. 2 [M+H]+。
N-(4-異丙基苯基)-2-(l-曱基-2， 6-二氧代-l， 2， 3， 6-四氫嘌呤 -7-基)乙酰胺(391)
向0 。C的酸122(0.2 g， 0.89 mmol)在氯仿(35 mL)中的溶液中 加入草酰氯(O. 67 g， 5.3 mmol)和催化量的DMF。將該反應(yīng)體系在室 溫下攪拌2小時(shí)且然后在真空中濃縮。將所得物質(zhì)溶于CHCl3(30mL)， 冷卻至(TC并且加入4-異丙基苯胺并且將該反應(yīng)體系攪^半過夜，同時(shí) 溫至rt。用CHC13(50 mL)稀釋該反應(yīng)混合物并且用1 N HC1 (50 mL) 洗滌。用水(75mL)洗滌合并的有機(jī)層，用Na2S(h干燥，在真空中濃縮 并且通過珪膠快速色i普法純化粗產(chǎn)物，用EtOAc/己烷和EtOAc/MeOH 洗脫而得到391 (0. 089g， 33%)，為白色固體。MS(APCI): m/z 342.3 [M+H]+。對C17H19N5Or0. 28 H20的計(jì)算值C， 58.94; H， 5.69; N， 20.22; 測定值C, 58.94; H， 5.67; N， 19.78。
2- (1， 3-二曱基-2， 6-二氧代-1， 2， 3， 6-四氫嘌呤-7-基)一N- (4-異 丙基苯基)-2-甲基丙酰胺(387):
<formula>formula see original document page 130</formula>2-(1， 3-二甲基-2， 6-二氧代-l， 2， 3, 6-四氫嘌呤-7-基)-2-甲基 丙酸乙酯(123)
向茶堿(101， 2g， 11. 10mmol)在DMF中的溶液中加入碳酸鉀(1. 84 g， 13.32 mmol)并且將該反應(yīng)體系加熱至90 "C且攪拌1小時(shí)。然后 在10分鐘內(nèi)滴加在DMF中的2-溴異丁酸乙酯(2. 59 g， 13. 32 mmol)。 將所得反應(yīng)混合物在90。C下攪拌16小時(shí)。將該反應(yīng)體現(xiàn)冷卻至rt, 傾入水冷的IN HC1 (50 ml)并且用氯仿(100 x 2 ml)萃取。用水(100 mL) 洗滌合并的有機(jī)層，用Na2S0,干燥并且在真空中濃縮。獲得粗的123, 為淡黃色固體(l.l g， 34%)。 MS(APCI): m/z 295.5 [M+H]+，并且不 進(jìn)一步純化下一步。
2-(1， 3-二甲基-2， 6-二氧代-l， 2， 3， 6-四氫-嘌呤-7-基)-2-甲基 丙酸(124)
將酯123(1 g， 3.39 minol)溶于2N HC1 (25 mL)并且將該反應(yīng)體 系回流30小時(shí)。將該反應(yīng)體系冷卻至O TC且然后溫至rt。過濾所得 沉淀，用乙醚洗滌且干燥至得到124，為白色固體(O. 55, 55.5 %)。 MS(APCI): m/z 267.4 [M+H〗+。
2-(1, 3-二甲基-2， 6-二氧代-l， 2, 3， 6-四氫-嘌呤-7-基)N-(4-異 丙基-苯基)-異丁酰胺(387)
在0 "C下向酸124(0. 2 g， 0.75 mmol)在CHC13 (30 mL)中的溶液 中加入草酰氯(O. 57 g, 4.5 mmol)和催化量的DMF。將所得溶液在室 溫下攪拌2小時(shí)并且在真空中濃縮且然后再溶于CHC1"將該混合物冷 卻至0'C且然后加入4-異丙基苯胺并且將該反應(yīng)混合物攪拌過夜，同 時(shí)溫至rt。用CHC13(30 mL)稀釋該反應(yīng)混合物并且用1 N HC1(50 mL) 洗滌。用水(75mL)洗滌合并的有機(jī)層，用Na2S04干燥并且在真空中濃 縮且通過硅膠快速色i瞽法純化津且產(chǎn)物，用EtOAc/己烷和EtOAc / MeOH 洗脫而得到387，為白色固體(O. 19g， 58.8%)。 MS(APCI): m/z 384. 3 [M+H]+。對0;2。112^03的計(jì)算值C， 62.65; H， 6.57; N， 18.26;測定
值C， 62. 40; H, 6. 51; N， 18. 15。
N-(4-異丙基苯基)-2-(3-曱基-2， 6-二氧代-l， 2， 3， 6-四氫嘌呤 -7-基)乙酰胺(388):
<formula>formula see original document page 132</formula>
在0 。C下向酸125(0. 5 g, 2. 23 mmol)在CHCh(50 mL)中的溶液 中加入草酰氯(l. 69 g， 13. 3mmol)和催化量的DMF。將所得溶液在rt 下攪拌2小時(shí)，在真空中濃縮且再溶于CHC13。將該溶液冷卻至(TC且 然后加入4-異丙基苯胺并且將該反應(yīng)混合物攪拌過夜，同時(shí)溫至rt。 用CHC13(30 mL)稀釋該反應(yīng)混合物并且用1 N HC1(50 raL)洗滌。用水 (75 iriL)洗滌合并的有機(jī)層，用Na2S04干燥并且在真空中濃縮且通過硅 膠快速色鐠法純化粗產(chǎn)物，用EtOAc/己烷和EtOAc / MeOH洗脫而得 到388,為白色固體(0.23g, 31 %)。 MS(APCI): m/z 342.2 [M+H〗+。 對C17H19N3O3.0. 4 H20的計(jì)算值:C， 58.58; H， 5.73; N， 20.09;測定 值C, 58. 72; H， 5. 63; N, 19. 80。
N-(4-環(huán)戊基苯基)-2-(3-曱基-2，6-二氧代-1，2， 3，6-四氫嘌呤 -7-基)乙酰胺(394) ， N- (4-環(huán)戊基苯基)-2- (1， 3-二曱基-2， 6-二氧代 -1，2，3，6-四氫嘌呤-7-基)乙酰胺(395)和N-(2-環(huán)戊基苯 基)-2- (1， 3- 二曱基-2， 6-二氧代-l， 2， 3， 6-四氫嘌呤-7-基)乙酰胺 (398):<formula>formula see original document page 132</formula>
1- 環(huán)戊基-2-硝基苯(127a)和l-環(huán)戊基-4-硝基苯(127b) 向在IO 。C下攪拌的環(huán)戊基苯126(5g, 34. 2)在乙酐(50 mL)中的
溶液中滴加70%硝酸(2. 99 g， 34. 2mmo1)。將該黃色均勻混合物在IO 。C下攪拌l小時(shí)。然后將該反應(yīng)體系傾入水，用冷的濃NaOH中和并且 用乙醚萃取幾次。將乙醚層合并并且用過量的碳酸鉀水溶液(IOO mL) 洗滌，用Na2S(h千燥并且在真空中濃縮而得到化合物127a和127b的 混合物(6. 4 g)。將該混合物不經(jīng)進(jìn)一步純化用于隨后的步驟。
2- 環(huán)戊基苯胺(128a)和4-環(huán)戊基苯胺(128b)
向粗產(chǎn)物127a和127b(2. 5g)在EtOH(100mL)中的溶液中加入10 % Pd/C(0. 9 g， 3.5 mol %)并且將該反應(yīng)體系在氫氣嚢下攪拌3小時(shí)。 然后通過C鹽過濾該反應(yīng)體系，在真空中濃縮并且通過硅膠快速色i普 法純化粗產(chǎn)物，用EtOAc/己烷洗脫而得到鄰位-化合物128a(0. 5 g， 23.8%)。 MS(APCI): m/z 162. 3 ([M+H]+)和對位-化合128b (1 g， 47.6 %)。 MS(APCI): m/z 162.3 [M+H]+。
N-(4-環(huán)戊基苯基)-2-(3-甲基-2， 6-二氧代-l， 2， 3， 6-四氳嘌呤 -7-基)乙酰胺(394)
在0 。C下向酸129(2.1 mmol)在CHC13(10 mL)和CH3CN(10 mL)中 的溶液中加入草酰氯(12. 6 mmol)和催化量的DMF。將所得溶液在rt 下攪拌2小時(shí)，在真空中濃縮。奸殘余物再溶于CHCl3并且冷卻至0 。C。向該溶液中加入環(huán)戊胺128a并且將該反應(yīng)體系在rt下攪拌過夜。 然后用CHC13(30 mL)稀釋該反應(yīng)體系并且用1 N HC1 (50 mL)洗滌。用 水(75mL)洗滌合并的有機(jī)層，用Na2S0,干燥并且在真空中濃縮。通過 硅膠快速色語法純化產(chǎn)物，用EtOAc/己烷和EtOAc/MeOH洗脫而得到 394，為淡黃色固體(22 %)。 mp: 295-300 。C 。 MS(APCI): m/z 368.2 [M+H]+。對C19H21N5O3.0. 45 H20的計(jì)算值C， 60, 77; H， 5. 88; N， 18. 65; 測定值C， 61. 07; H， 5. 85; N， 18. 23。
N-(4-環(huán)戊基苯基)-2-(1， 3-二甲基-2， 6-二氧代-l， 2， 3， 6-四氬 嘌呤-7-基)乙酰胺(395)和N-(2-環(huán)戊基苯基)-2-(1， 3-二甲基-2，6-二氧代-1， 2， 3， 6-四氫嘌呤-7-基)乙酰胺(398)
在0 'C下向酸130(2. 1 mmol)在CHC13(10 mL)和CH3CN(10 mL)中 的溶液中加入草酰氟(12.6 mmol)和催化量的DMF。將所得溶液在rt 下攪拌2小時(shí)并且在真空中濃縮。將殘余物再溶于CHCh并且冷卻至0 。C。向該溶液中加入環(huán)戊胺128b并且將該反應(yīng)體系在rt下攪拌過夜。 然后用CHC13(30 mL)稀釋該反應(yīng)體系并且用1 N HC1 (50 mL)洗滌。用 水(75 mL)洗滌合并的有機(jī)層，用Na2S04干燥并且在真空中濃縮。通過 硅膠快速色語法純化產(chǎn)物，用EtOAc/己烷和EtOAc/MeOH洗脫而得到 395(31 %)，為淡紅色固體，Mp: 260—262 'C 。 MS (APCI): m/z 382.2 [M+H]+，對C2QH23N5O3.0. 1H20+0. 15 EtOAc的計(jì)算值C， 62. 41; H， 6. 20; N， 17.67;測定值C， 62.47; H， 6.20; N， 17.38;和398 (63%)，為 淡棕色固體，Mp: 201-202 °C ， MS(APCI): m/z 382.2 [M+H]+，對的 計(jì)算值C2QH23N503: C， 62.98; H, 6,08; N， 18.36;測定值C， 62.94; H， 6. 10; N, 18. 33。
N-(4-異丙基苯基)-N-甲基-2-(1-甲基-2， 6-二氧代-1， 2， 3， 6-四 氫嘌呤-7-基)乙酰胺(392):
O八N, N 120(COCl)a, CHCIa CHaCN H DMF
在O'C下向酸120 (0. 25 g， 1. 11畫l)在CHCl3(20mL)和CH3CN(20 mL)中的溶液中加入草酰氯(O. 84 g, 6.69 mmol)和催化量的DMF。將 所得溶液在rt下攪拌2小時(shí)并且在真空中濃縮。將殘余物再溶解于 CHCh并將所得溶液冷卻到(TC。向該混合物中加入N-甲基-4-異丙基 苯胺(O. 29g， 2 mmol)并且將該反應(yīng)體現(xiàn)攪拌過夜，同時(shí)溫至rt。然 后用CHCh(30 mL)稀釋該反應(yīng)體系并且用1 N HC1(50 mL)洗滌。用水 (75mL)洗滌合并的有機(jī)層，用Na2S04干燥并且在真空中濃縮。通過硅
膠快速色謙法純化產(chǎn)物，用EtOAc/己烷和EtOAc/MeOH洗脫而得到 392 (0. 2g， 51 °/。)，為淡棕色固體，mp: 271-273 T. MS(APCI): m/z 356.2 [M+H]+,對C18H21N5O3.0. 35H20的計(jì)算值:C， 59.77; H， 6.05; N, 19.36;測定值C， 59.77; H， 6.07; N， 19.29。
2- (1， 3-二甲基-2, 6-二氧代-l， 2， 3， 6-四氫嘌呤-7-基)-N- (4-異 丙基苯基)-N-曱基乙酰胺(393):
在0 。C下向酸101 (0. 5 g， 2, 1 inmol)在CHC13(30 niL)和CH3CN(30 mL)中的溶液中加入草酰氯(l. 59 g， 12.6 mmol)和催化量的DMF。將 所得溶液在rt下攪拌2小時(shí)并且在真空中濃縮。將所得殘余物再溶于 CHCl3并且冷卻至0'C。向該混合物中加入N-甲基-4-異丙基苯胺(O. 78 g， 5.2 mmol)并且將該反應(yīng)體系攪拌過夜，同時(shí)溫至rt。然后用 CHCl3(30mL)稀釋該反應(yīng)體系并且用1 N HC1 (50 mL)洗滌。用水(75mL) 洗滌合并的有機(jī)層，用Na2S04干燥并且在真空中濃縮。通過硅膠快速 色鐠法純化產(chǎn)物，用EtOAc/己烷和Et0Ac/Me0H洗脫而得到393,為淡 黃色固體(0. 65g， 84.4%), mp: 231-233 。C. MS(APCI): m/z 370.2 [M+H]+，對C19H23N5O3.0. 1H20的計(jì)算值C， 61.47; H， 6.30; N， 18.87; 測定值C， 61.28; H， 6.19; N， 18.57。
2-(2， 6-二氧代-1， 2, 3， 6-四氫嘌呤-7-基)-N-(4-異丙基苯基)乙 酰胺(399 ):<formula>formula see original document page 136</formula>
(2， 6-二氧代-1， 2， 3， 6-四氫-嘌呤-7-基)-乙酸(131)
將黃嘌呤(4. 8 g， 31.5 mmol)懸浮于水和2 M氫氧化鈉(50 mL) 中并且將所得混懸液攪拌30分鐘。然后加入氯乙酸(3g， 31.5mmo1)。 將所得溶液回流5小時(shí)，冷卻至室溫并且攪拌過夜。過濾沉淀且然后 用12 M HCl酸化該水溶液(pH 3)。過濾所得沉淀且然后用熱EtOH洗 滌，且隨后用熱己烷洗滌而得到131和132粗產(chǎn)物的混合物。向這些 粗產(chǎn)物中加入水(65 mL)并且將所得混合物回流30分鐘。將該溶液進(jìn) 行熱濾并且收集沉淀。然后用熱乙醇和己烷洗滌沉淀而得到131，為 白色固體(O. 9g， 13. 4 %)。
2-(2， 6-二氧代-1， 2， 3， 6-四氫-嘌呤-7-基)-N- (4-異丙基-苯 基)-乙酰胺(399)
向O'C的酸131(0.05 g， 0.23 mmol)在DMF/DMS0(1: 1 ， 10 mL) 中的溶液中加入HATU(O. 13g, 0.35 mmol)。將該反應(yīng)混合物溫至rt 并且攪拌另外的15分鐘。然后將該反應(yīng)體系冷卻回G"C并且加入4-異丙基苯胺(0.042 g， 0.31 mmol)。然后將該反應(yīng)體系在室溫下攪拌 過夜。蒸發(fā)DMF并且加入水。用乙酸乙酯洗滌獲得的沉淀且然后溶于 乙醇并且回流20分鐘。熱濾該溶液并且在真空中濃縮而得到399，為 白色固體(O. 025 g， 32.4%)。 mp: 320-325 。C 。 MS (APCI): m/z 326. 1 [M-H]+，對d6H"Ns0r0. 41120的計(jì)算值C， 57.44; H， 5.36; N， 20. 93; 測定值C， 57.43; H， 5.40; N， 20. 68。
2- (1， 3- 二曱基-2， 6- 二氧代-1， 2， 3， 6-四氫嘌呤-7-基)-N-(4-(2-羥基丙-2-基)苯基)乙酰胺(402):
(E) -1- ((4-溴苯基)二氮烯基)吡咯烷(134) 向O'C的4-溴苯胺(133, 10 g， 58.1 mmol)在濃HC1(11.7 mL) 中的溶液中滴加NaN02(4 g， 57.9 mmol)在H20(5 mL)中的溶液。然后 在添加后在O'C下將該反應(yīng)體系攪拌另外的IO分鐘。向吡咯烷(4.54 g, 63. 9 mmol)在1M KOH(50 mL)中的溶液中一次加入所得重氮鹽。將 反應(yīng)體系在0-10。C攪拌30min。然后過濾所得沉淀并且從無水乙醇(50 mL)中重結(jié)晶而得到化合物134(6. 8g， 46.2%),為淡黃色晶體。
2- (4-氨基苯基)丙-2-醇(135)
向-78。C的化合物134(lg， 3. 95 mmol)在乙醚(20 mL)中的溶液中 加入仲-BjiLi(在己烷中，1.4M, 0.62g， 9.67 mmol)。將所得溶液在 -78 。C下攪拌30分鐘，隨后在-78"C下滴加丙酮(0.91 g， 15. 81 mmol)。 將該反應(yīng)混合物溫至室溫下過夜。使該反應(yīng)混合物在水與乙醚之間分 配，并且將各層分開。用乙醚再萃取水層。合并醚層并且在真空中濃 縮而得到粗的135 (0.33 s， 55.9 %)，將其不經(jīng)進(jìn)一步純化用于下一 步。
2-(1， 3- 二甲基-2， 6- 二氧代-1， 2， 3， 6-四氫-嘌呤-7-基)-N- [4- (1-羥基-l-曱基-乙基)-苯基]-乙酰胺(402)
向O'C的酸101(0.32 g， 1.34 mmol)在DMF/DMS0 (1: 1 ， 20 mL) 中的溶液中加入HATU(O. 0. 76g， 2. Olmmol)。然后將該反應(yīng)體系在室 溫下攪拌另外的15分鐘。將該溶液冷卻至0。C并且加入胺135 (0. 30 g， 2. Olramol)。然后將該反應(yīng)體現(xiàn)在rt下攪拌過夜。在真空中濃縮DMF 并且將水加入到該反應(yīng)體系中。用EtOAc萃取水層。然后再用水洗滌 乙酸乙酯層并且在真空中濃縮有機(jī)層。通過硅膠快速色諉法純化產(chǎn)物， 用EtOAc/己烷和EtOAc/MeOH洗脫而得到402，為純的淡棕色半固體 (0. 086 g， 17. 5%) 。MS(APCI): m/z 372. 2 [M-H]+，對C18H21N5O4.0. 35EtOAc 的計(jì)算值C， 57.93; H， 5.96; N, 17.41;測定值C， 58.36; H， 6.14; N， 16.96。
參考文獻(xiàn)的引入
將本文提及的所有公開文獻(xiàn)和專利完整地引入本文作為參考，就 如同將公開文獻(xiàn)或?qū)＠髯蕴貏e和分別引入本文作為參考相同。
等效方案
本領(lǐng)域技術(shù)人員公認(rèn)或能夠不使用超過常規(guī)的實(shí)驗(yàn)確定許多與本 文所述本發(fā)明的具體實(shí)施方案等效的方案。指定這類等效方案包括在 下列權(quán)利要求中。
權(quán)利要求
1. 調(diào)節(jié)細(xì)胞中的TRPA1功能的方法，包括對該細(xì)胞給予有效量的小分子，該小分子以低于10微摩爾的IC50抑制TRPA1介導(dǎo)的電流，由此調(diào)節(jié)細(xì)胞中的TRPA1功能。
2. 預(yù)防、治療或緩解與TRPA1功能相關(guān)或降低的TRPA1活性能減 輕嚴(yán)重性的疾病或病癥的癥狀的方法，包括對有此需要的受試者給予 以低于IO微摩爾的ICs。抑制TRPA1功能的治療有效量的小分子。
3. 權(quán)利要求2所迷的方法，其中所述的TRPA1功能為內(nèi)向TRPA1-介導(dǎo)的電流，并且其中所述的小分子以低于IO微摩爾的IC5。抑制所述 的內(nèi)向TRPA1-介導(dǎo)的電流。
4. 權(quán)利要求2所述的方法，其中所述的TRPA1功能為外向TRPA1-介導(dǎo)的電流，并且其中所述的小分子以低于IO微摩爾的IC5。抑制所述 的外向TRPAl-介導(dǎo)的電流。
5. 權(quán)利要求2所述的方法，其中所述的TRPA1功能為TRPA1-介 導(dǎo)的電流，并且其中所述的小分子以低于IO微摩爾的ICs。抑制所述的 TRPA1-介導(dǎo)的電流。
6. 權(quán)利要求2所述的方法，其中所述的TRPA1功能為TRPA1-介 導(dǎo)的離子流，并且其中所述的小分子以低于IO微摩爾的ICs。抑制所述 的TRPAl-介導(dǎo)的離子流。
7. 權(quán)利要求5所述的方法，其中所述的小分子以低于5微摩爾的 ICs。抑制所述的TRPAl-介導(dǎo)的電流。
8. 權(quán)利要求5所述的方法，其中所述的小分子以低于l微摩爾的 ICs。抑制所述的TRPAl-介導(dǎo)的電流。
9. 權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述的小分子對 TRPA1功能的抑制至少IO倍強(qiáng)于對線粒體單向轉(zhuǎn)運(yùn)體功能的抑制。
10. 權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述的小分子對 TRPA1功能的抑制至少10倍強(qiáng)于對NaV 1.2功能的抑制。
11. 權(quán)利要求1-10中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述的小分子對 TRPA1功能的抑制至少10倍強(qiáng)于對TRPV3功能的抑制。
12. 權(quán)利要求1-11中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述的小分子以大 于IO微摩爾的ICs。抑制HERG介導(dǎo)的電流。
13. 權(quán)利要求1-12中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述的小分子以大 于IO微摩爾的IC5。抑制TRPV3介導(dǎo)的電流。
14. 權(quán)利要求1-13中任一項(xiàng)所述的方法，其中在以10微摩爾濃 度給藥時(shí)，所述的小分子基本上不會(huì)抑制TRPV1介導(dǎo)的電流。
15. 權(quán)利要求1-14中任一項(xiàng)所述的方法，其中在以10微摩爾濃 度給藥時(shí)，所述的小分子基本上不會(huì)抑制HERG介導(dǎo)的電流。
16. 權(quán)利要求1-15中任一項(xiàng)所述的方法，其中在以10微摩爾濃 度給藥時(shí)，所述的小分子基本上不會(huì)抑制TRPV3介導(dǎo)的電流。
17. 權(quán)利要求1-16中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述的小分子以低 于其抑制TRPV5功能，TRPV6功能，TRPC6功能，線粒體單向轉(zhuǎn)運(yùn)體功 能，NaV1.2， CaV1.2功能，CaV3. 1功能和HERG功能中的一種或多種 的ICs。至少一個(gè)數(shù)量級的ICs。抑制TRPA1功能。
18. 權(quán)利要求1-17中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述的小分子以該 小分子抑制TRPV1， TRPV2， TRPV3, TRPV4或TRPM8中的至少一種或多 種的ICs。的至少一半的ICs。抑制TRPA1功能。
19. 權(quán)利要求1-18中任一項(xiàng)所述的方法，其中所迷的小分子以該 小分子抑制TRPV5功能，TRPV6功能，TRPC6功能，線粒體單向轉(zhuǎn)運(yùn)體 功能，CaV 1.2功能，CaV 3. 1功能，NaV 1. 2和HERG功能中的至少 一種或多種的ICs。的至少一半的ICs。抑制TRPA1功能。
20. 權(quán)利要求1-19中任一項(xiàng)所述的方法，其中所迷的小分子結(jié)合 TRPA1。
21. 權(quán)利要求1-20中任一項(xiàng)所述的方法，其中將所述的小分子提 供給細(xì)胞并且所述的細(xì)胞為感覺神經(jīng)元。
22. 權(quán)利要求21所述的方法，其中所迷的感覺神經(jīng)元存在于背根 神經(jīng)節(jié)，三叉神經(jīng)節(jié)或結(jié)節(jié)神經(jīng)節(jié)中。
23. 權(quán)利要求2-22中任一項(xiàng)所述的方法，用于預(yù)防，治療或緩解 疼痛或?qū)τ|摸敏感癥狀。
24. 權(quán)利要求23所述的方法，其中所述的疼痛為口腔痛。
25. 權(quán)利要求2-23中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述的小分子具有 抑制TRPA1的IC5。，并且以該濃度給藥時(shí)，所述的小分子不會(huì)在患者 中產(chǎn)生QT間隔延長。
26. 權(quán)利要求23所述的方法，其中所述的疼痛為術(shù)后痛，癌性痛， 神經(jīng)性疼痛或顳下頜痛。
27. 權(quán)利要求2-23中任一項(xiàng)所述的方法，用于預(yù)防、治療或緩解 炎癥癥狀。
28. 權(quán)利要求2-23中任一項(xiàng)所述的方法，用于預(yù)防、治療或緩解 膀胱炎或腸易激綜合征癥狀。
29. 權(quán)利要求2-23中任一項(xiàng)所述的方法，用于預(yù)防、治療或緩解 選自糖尿病性神經(jīng)病，銀屑病，濕滲，皮炎，皰滲后神經(jīng)痛(帶狀皰滲)， 偏頭痛，失禁，發(fā)熱，熱潮紅，骨關(guān)節(jié)炎，胰腺炎，慢性區(qū)域性疼痛 綜合征，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和咳嗽的病癥或疾患的癥狀。
30. 權(quán)利要求2-23中任一項(xiàng)所述的方法，用于預(yù)防、治療或緩解 失禁癥狀。
31. 權(quán)利要求30所述的方法，其中所述的失禁完全或部分因妊 娠，前列腺擴(kuò)大或前列腺增生所致。
32. 權(quán)利要求1-31中任一項(xiàng)所述的方法，其中將所迷的小分子與 抗炎藥，抗痤疳藥，抗皺紋藥，抗瘢痕形成藥，抗牛皮痺藥，抗增殖 藥，抗真菌藥，抗病毒藥，殺菌劑，抗偏頭痛藥，角質(zhì)層分離劑或毛 發(fā)生長抑制劑中的一種或多種共同給藥。
33. 權(quán)利要求1-32中任一項(xiàng)所述的方法，其中將所述的小分子與 TRPV1抑制劑，TRPV3抑制劑，TRPV4抑制劑或TRPM8抑制劑中的一種 或多種共同給藥。
34. 權(quán)利要求1-33中任一項(xiàng)所述的方法，其中通過全身或局部給 予所述的小分子。
35. 權(quán)利要求1-33中任一項(xiàng)所述的方法，其中通過口服給予所述 的小分子。
36. 權(quán)利要求1-35中任一項(xiàng)所述的方法，其中TRPA1功能為 TRPAl-介導(dǎo)的電流。
37. 權(quán)利要求1-35中任一項(xiàng)所述的方法，其中TRPA1功能為 TRPAl-介導(dǎo)的離子流。
38. 治療或預(yù)防涉及TRPA1活化或降低的TRPA1活性能減輕嚴(yán)重 性的疾患的方法，包括給予有效量的式I的化合物或其鹽，或該化合 物或其鹽的溶劑合物、水合物、氧化代謝物或前體藥物其中W表示0或S,優(yōu)選S;R每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地表示H或低級烷基，優(yōu)選H; IT表示取代或未被取代的烷基、或取代或未被取代的芳基； E表示羧酸(C02H)，酯或酰胺；且 Ar表示取代或未被取代的芳基環(huán)；且其中所述的化合物以低于10微摩爾的ICs。抑制TRPA1介導(dǎo)的電
39.治療或預(yù)防涉及TRPA1活化或降低的TRPA1活性能減輕嚴(yán)重 性的疾患的方法，包括給予有效量的式II的化合物或其鹽，或該化合 物或其鹽的溶劑合物，水合物，氧化代謝物或前體藥物 其中n為l-3的整數(shù)；且 R2表示取代基；且其中所述的化合物以低于1Q微摩爾的ICs。抑制TRPA1介導(dǎo)的電
40. 權(quán)利要求39所述的方法，其中R2表示任選取代的烷基，任 選取代的芳基，任選取代的雜芳基，任選取代的芳烷基，任選取代的 環(huán)烷基，任選取代的雜環(huán)基或任選取代的雜芳烷基。
41. 治療或預(yù)防涉及TRPA1活化或降低的TRPA1活性能減輕嚴(yán)重 性的疾患的方法，包括給予有效量的式III的化合物或其鹽，或該化 合物或其鹽的溶劑合物、水合物、氧化代謝物或前體藥物其中n為l-3的整數(shù)；且 l表示取代基；且其中所述的化合物以低于IO;微摩爾的ICs。抑制TRPA1介導(dǎo)的電
42.治療或預(yù)防涉及TRPA1活化或降低的TRPA1活性能減輕嚴(yán)重 性的疾患的方法，包括給予有效量的式IV的化合物或其鹽，或該化合 物或其鹽的溶劑合物、水合物、氧化代謝物或前體藥物其中Id每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地表示H或低級烷基; R2的一次出現(xiàn)不存在且R2的一次出現(xiàn)為MmR3; R3表示取代或未被取代的芳基；M每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地表示取代或未被取代的亞曱基，NR,， 0， S， S(0)或S(02)，優(yōu)選進(jìn)行選擇，以便沒有兩個(gè)雜原子是彼此連接的；且 m為0-10的整數(shù)；且其中所述的化合物以低于10微摩爾的ICs。抑制TRPA1介導(dǎo)的電流。
43. 權(quán)利要求38-42中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述的TRPA1介 導(dǎo)的電流為內(nèi)向TRPAl介導(dǎo)的電流，且其中所述的化合物以低于10 微摩爾的ICs。抑制所述的內(nèi)向TRPAl介導(dǎo)的電流。
44. 權(quán)利要求38-42中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述的TRPAl-介 導(dǎo)的電流為外向TRPAl介導(dǎo)的電流，且其中所述的化合物以低于10 微摩爾的ICs。抑制所述的外向TRPAl-介導(dǎo)的電流。
45. 權(quán)利要求38-42中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述的化合物還 以低于IO微摩爾的ICs。抑制TRPAl-介導(dǎo)的離子流。
46. 權(quán)利要求38-42中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述的化合物以 低于5微摩爾的ICs。抑制所述的TRPAl-介導(dǎo)的電流。
47. 權(quán)利要求46所述的方法，其中所述的化合物以低于l微摩爾 的ICs。抑制所述的TRPA1-介導(dǎo)的電流。
48. 權(quán)利要求38-47中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述的化合物對 所述的TRPA1介導(dǎo)的電流的抑制至少IO倍強(qiáng)于對線粒體單向轉(zhuǎn)運(yùn)體功 能的抑制。
49. 權(quán)利要求38-48中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述的化合物對 所述的TRPA1介導(dǎo)的電流的抑制至少10倍強(qiáng)于對NaV 1. 2功能的抑制。
50. 權(quán)利要求38-49中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述的化合物對 所述的TRPA1介導(dǎo)的電流的抑制至少IO倍強(qiáng)于對TRPVI功能的抑制。
51. 權(quán)利要求38-50中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述的化合物對 所述的TRPA1介導(dǎo)的電流的抑制至少10倍強(qiáng)于對HBRG功能的抑制。
52. 權(quán)利要求38-51中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述的化合物以 大于IO微摩爾的ICs。抑制HERG介導(dǎo)的電流。
53. 權(quán)利要求38-52中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述的化合物以 大于IO微摩爾的ICw抑制所述的TRPV3介導(dǎo)的電流。
54. 權(quán)利要求38-53中任一項(xiàng)所述的方法，其中化合物在以10 微摩爾濃度給藥時(shí)基本上不會(huì)抑制HERG介導(dǎo)的電流。
55. 權(quán)利要求38-54中任一項(xiàng)所述的方法，其中所迷的化合物在 以IO微摩爾濃度給藥時(shí)基本上不會(huì)抑制TRPV3介導(dǎo)的電流。
56. 權(quán)利要求38-55中任一項(xiàng)所述的方法，其中所迷的化合物以 低于其抑制TRPV5功能，TRPV6功能，TRPC6功能，線粒體單向轉(zhuǎn)運(yùn)體 功能，NaV1.2， CaV1.2功能，CaV3. 1功能和HERG功能中的一種或多 種的ICs。至少一個(gè)數(shù)量級的IC5。抑制TRPA1介導(dǎo)的電流。
57. 權(quán)利要求38-56中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述的化合物以 該化合物抑制TRPV1介導(dǎo)的電流，TRPV2介導(dǎo)的電流，TRPV3介導(dǎo)的電 流，TRPV4介導(dǎo)的電流或TRPM8介導(dǎo)的電流中的一種或多種的ICs。的 至少一半的ICs。抑制TRPA1介導(dǎo)的電流。
58. 權(quán)利要求38-57中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述的化合物以 該化合物抑制TRPV5功能，TRPV6功能，TRPC6功能，線粒體單向轉(zhuǎn)運(yùn) 體功能，CaV1.2功能，CaV 3. l功能，NaVl. 2和HERG功能中的一種 或多種的ICs。的至少一半的ICs。抑制TRPA1介導(dǎo)的電流。
59. 權(quán)利要求38-58中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述的化合物結(jié) 合TRPA1。
60. 權(quán)利要求38-59中任一項(xiàng)所述的方法，用于預(yù)防、治療或緩 解疼痛或觸摸敏感癥狀。
61. 權(quán)利要求60所述的方法，其中所述的疼痛為口腔痛。
62. 權(quán)利要求38-61中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述的化合物具 有抑制TRPA1介導(dǎo)的電流的IC5Q，并且當(dāng)以該濃度給藥時(shí)，所述的化 合物不會(huì)在患者中產(chǎn)生QT間隔延長。
63. 權(quán)利要求60所述的方法，其中所迷的疼痛為術(shù)后痛，癌性痛， 神經(jīng)性疼痛或顳下頜痛。
64. 權(quán)利要求38-62中任一項(xiàng)所述的方法，用于預(yù)防、治療或緩 解炎癥癥狀。
65. 權(quán)利要求38-62中任一項(xiàng)所述的方法，用于預(yù)防、治療或緩 解膀胱炎或腸易激綜合征癥狀。
66. 權(quán)利要求38-62中任一項(xiàng)所述的方法，用于預(yù)防、治療或緩 解選自糖尿病性神經(jīng)病，銀屑病，濕滲，皮炎，皰滲后神經(jīng)痛(帶狀皰 瘆)，偏頭痛，失禁，發(fā)熱，熱潮紅，骨關(guān)節(jié)炎，胰腺炎，慢性區(qū)域性 疼痛綜合征，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和咳嗽的病癥或疾患的癥狀。
67. 權(quán)利要求38-62中任一項(xiàng)所述的方法，用于預(yù)防、治療或緩 解失禁癥狀。
68. 權(quán)利要求67所述的方法，其中所述的失禁完全或部分因妊 娠，前列腺擴(kuò)大或前列腺增生所致。
69. 治療疼痛的方法，包括向有此需要的患者給予有效量的式I 的化合物或其鹽，或該化合物或其鹽的溶劑合物、水合物、氧化代謝 物或前體藥物其中W表示0或S，優(yōu)選S;R每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地表示H或低級烷基，優(yōu)選H; R'表示取代或未被取代的烷基，或取代或未被取代的芳基； E表示羧酸(C02H),酯或酰胺；且 Ar表示取代或未被取代的芳基環(huán)；且其中所述的化合物以低于IO微摩爾的IC5o抑制TRPA1介導(dǎo)的電
70.治療疼痛的方法，包括向有此需要的患者給予有效量的式II 的化合物或其鹽，或該化合物或其鹽的溶劑合物、水合物、氧化代謝 物或前體藥物:其中n為l-3的整數(shù)；且 R2表示取代基；且其中所述的化合物以低于10微摩爾的ICs。抑制TRPA1介導(dǎo)的電流。
71. 權(quán)利要求70所述的方法，其中R2表示任選取代的烷基，任 選取代的芳基，任選取代的雜芳基，任選取代的芳烷基，任選取代的 環(huán)烷基，任選取代的雜環(huán)基或任選取代的雜芳烷基。
72. 治療疼痛的方法，包括給予所需要的受試者有效量的式III 的化合物或其鹽，或該化合物或其鹽的溶劑合物、水合物、氧化代謝 物或前體藥物其中n為1 - 3的整數(shù)；且 R2表示取代基；且其中所述的化合物以低于10微摩爾的ICs。抑制TRPA1介導(dǎo)的電流。
73.治療疼痛的方法，包括給予所需要的受試者有效量的式IV 的化合物或其鹽；或該化合物或其鹽的溶劑合物、水合物、氧化代謝 物或前體藥物:其中R:每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地表示H或低級烷基； R2的一次出現(xiàn)不存在且Rz的一次出現(xiàn)為MraR3; R3表示取代或未被取代的芳基；M每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地表示取代或未被取代的亞甲基，NR" 0， S， S(0)或S(02)，優(yōu)選進(jìn)行選擇，以便沒有兩個(gè)雜原子是彼此連接的；且 m為0-10的整數(shù)；且其中所述的化合物以低于1Q微摩爾的IC5。抑制TRPA1介導(dǎo)的電
74.治療失禁的方法，包括給予所需要的受試者有效量的式I的 化合物或其鹽，或該化合物或其鹽的溶劑合物、水合物、氧化代謝物 或前體藥物其中W表示0或S,優(yōu)選S;R每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地表示.H或低級烷基，優(yōu)選H;R'表示取代或未被取代的烷基或取代或未被取代的芳基； E表示羧酸(C02H)，酯或酰胺；且 Ar表示取代或未被取代的芳基環(huán)；且其中所述的化合物以低于10微摩爾的ICs。抑制TRPA1介導(dǎo)的電
75.治療失禁的方法，包括給予所需要的受試者有效量的式II 的化合物或其鹽，或該化合物或其鹽的溶劑合物、水合物、氧化代謝物或前體藥物其中n為1 - 3的整數(shù)；且 l表示取代基；且其中所述的化合物以低于10微摩爾的ICs。抑制TRPA1介導(dǎo)的電
76. 權(quán)利要求75所述的方法，其中R2表示任選取代的烷基，任 選取代的芳基，任選取代的雜芳基，任選取代的芳烷基，任選取代的 環(huán)烷基，任選取代的雜環(huán)基或任選取代的雜芳烷基。
77. 治療失禁的方法，包括給予所需要的受試者有效量的式III 的化合物或其鹽，或該化合物或其鹽的溶劑合物、水合物、氧化代謝 物或前體藥物其中n為1-3的整數(shù)；且 R2表示取代基；且其中所述的化合物以低于IO微摩爾的ICs。抑制TRPA1介導(dǎo)的電
78.治療失禁的方法，包括給予所需要的受試者有效量的式IV 的化合物或其鹽，或該化合物或其鹽的溶劑合物、水合物、氧化代謝物或前體藥物其中Ri每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地表示H或低級烷基； R2的一次出現(xiàn)不存在且R2的一次出現(xiàn)為MR3; R3表示取代或未被取代的芳基；M每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地表示取代或未被取代的亞曱基，NR!， 0， S， S(0)或S(02)，優(yōu)選進(jìn)行選擇，以便沒有兩個(gè)雜原子是彼此連接的；且 m為0-10的整數(shù)；且其中所述的化合物以低于10微摩爾的ICs。抑制TRPA1介導(dǎo)的電
79.適用于人類患者或獸類應(yīng)用的藥物組合物，用于治療或預(yù)防 涉及TRPA1活化或降低的TRPA1活性能減輕嚴(yán)重性的疾患，該藥物組 合物包含有效量的式I的化合物或其鹽，或該化合物或其鹽的溶劑合 物、水合物、氧化代謝物或前體藥物其中W表示0或S，優(yōu)選S;R每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地表示H或低級烷基，優(yōu)選H; R'表示取代或未被取代的烷基或取代或未被取代的芳基; E表示羧酸(C02H)，酯或酰胺；且 Ar表示取代或未被取代的芳基環(huán)；且 其中所述的化合物以低于10微摩爾的ICs。抑制TRPA1介導(dǎo)的電流。
80.適用于人類患者或獸類應(yīng)用的藥物組合物，用于治療或預(yù)防 涉及TRPA1活化或降低的TRPA1活性能減輕嚴(yán)重性的疾患，該藥物組 合物包含有效量的式II的化合物或其鹽，或該化合物或其鹽的溶劑合 物、水合物、氧化代謝物或前體藥物其中n為l-3的整數(shù)；且 R2表示取代基；且其中所述的化合物以低于10微摩爾的ICs。抑制TRPA1介導(dǎo)的電流。
81.適用于人類患者或獸類應(yīng)用的藥物組合物，用于治療或預(yù)防 涉及TRPA1活化或降低的TRPA1活性能減輕嚴(yán)重性的疾患，該藥物組 合物包含有效量的式III的化合物或其鹽，或該化合物或其鹽的溶劑 合物、水合物、氧化代謝物或前體藥物O其中n為l-3的整數(shù)；且 Rs表示取代基；且其中所述的化合物以低于10微摩爾的ICs。抑制TRPA1介導(dǎo)的電
82.適用于人類患者或獸類應(yīng)用的藥物組合物，用于治療或預(yù)防 涉及TRPA1活化或降低的TRPA1活性能減輕嚴(yán)重性的疾患，該藥物組 合物包含有效量的式IV的化合物或其鹽或該化合物，或其鹽的溶劑合 物、水合物、氧化代謝物或前體藥物Ri每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地表示H或低級烷基； R2的一次出現(xiàn)不存在且R2的一次出現(xiàn)為MmR3; R3表示取代或未被取代的芳基；M每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地表示取代或未被取代的亞甲基，NRi， 0， S， S(O)或S(O》，優(yōu)選進(jìn)行選擇，以便沒有兩個(gè)雜原子是彼此連接的；且 m為0-10的整數(shù)；且其中所述的化合物以低于IO微摩爾的ICs。抑制TRPA1介導(dǎo)的電
83. TRPA1抑制劑在制備用于治療或預(yù)防涉及TRPA1活化或降低 的TRPA1活性能減輕嚴(yán)重性的疾患的藥劑中的應(yīng)用，其中所述的TRPA1 抑制劑以式II或其鹽，或該化合物或其鹽的溶劑合物、水合物、氧化 代謝物或前體藥物表示其中其中 n為13的整數(shù)；且 l表示取代基；且其中所述的化合物以低于10微摩爾的ICs。抑制TRPA1介導(dǎo)的電流o
84. 權(quán)利要求83所述的應(yīng)用，其中R2表示任選取代的烷基，任 選取代的芳基，任選取代的雜芳基，任選取代的芳烷基，任選取代的 環(huán)烷基，任選取代的雜環(huán)基或任選取代的雜芳烷基。
85. 藥物制劑，包含以低于IO微摩爾的ICs。抑制TRPA1介導(dǎo)的 電流的小分子；和藥學(xué)上可接受的賦形劑或溶劑，其中以提供有效預(yù) 防、治療或緩解在某些部分上依賴于患者TRPA1活性的疾病、病癥或 疾患癥狀的用量的劑型提供活性劑，但該活性劑不會(huì)導(dǎo)致QT間隔延 長。
86. 以低于10微摩爾的IC5。抑制TRPA1介導(dǎo)的電流的小分子活性 劑在制備用于預(yù)防、治療或緩解在某些部分上依賴于患者TRPA1活性 的疾病、病癥或疾患癥狀的藥劑中的應(yīng)用。
87. 小分子活性劑在制備用于預(yù)防、治療或緩解在某些部分上依賴 于患者TRPA1活性的疾病、病癥或疾患癥狀的藥劑中的應(yīng)用，所述的 小分子活性劑以低于抑制TRPV5功能、TRPV6功能、線粒體單向轉(zhuǎn)運(yùn) 體功能、Cav2. l功能、CaV3. l功能、NaVl. 2功能和HERG功能中的一 種或多種的ICs。的至少一個(gè)數(shù)量級的ICs。抑制TRPA1介導(dǎo)的電流。
88. 小分子活性劑在制備用于預(yù)防、治療或緩解在某些部分上依賴 于患者TRPA1活性的疾病、病癥或疾患癥狀的藥劑中的應(yīng)用，所述的 小分子活性劑以IO微摩爾或IO微摩爾以下的ICs。抑制芥子油誘導(dǎo)的 TRPA1介導(dǎo)的電流。
89. 權(quán)利要求83-84或86-88中任一項(xiàng)的應(yīng)用，用于制備預(yù)防、 治療或緩解疼痛，觸摸敏感性，炎癥，失禁，發(fā)熱，熱潮紅，膀胱炎, 腸易激綜合征和/或咳嗽癥狀的藥劑。
90. 權(quán)利要求89所述的應(yīng)用，其中所述的疼痛為癌性痛。
91. 權(quán)利要求83-84或86-88中任一項(xiàng)的應(yīng)用，用于制備抑制增 殖，由此預(yù)防、治療或緩解癌癥癥狀的藥劑。
92. 權(quán)利要求91所述的應(yīng)用，其中所述的癌癥為脂肪肉瘤。
93. 權(quán)利要求83-84或86-92中任一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其中所述的 活性劑結(jié)合TRPA1。
94. 權(quán)利要求83-84或86-88中任一項(xiàng)的應(yīng)用，用于制備預(yù)防、 治療或緩解失禁癥狀的藥劑。
95. 用于口服給藥的鎮(zhèn)咳組合物，包含以低于10微摩爾的IC5。 抑制TRPA1介導(dǎo)的電流的活性劑和基于水的液體或在口腔中可溶解的 固體形式的口服可接受的藥用載體，該組合物選自糖漿劑，酏劑，混 懸液，噴霧劑，錠劑，咀嚼錠劑，粉末和咀嚼片。
96. 權(quán)利要求95所述的鎮(zhèn)咳組合物，其中除所述的活性劑外，該 組合物還包括一種或多種用于治療咳嗽、過敏反應(yīng)或哞喘癥狀的另外 活性劑，這些活性劑選自抗組胺藥，5-脂氧合酶抑制劑，白細(xì)胞三 烯抑制劑，H3抑制劑，p-腎上腺素能受體激動(dòng)劑，黃嘌呤衍生物，oc-腎上腺素能受體激動(dòng)劑，肥大細(xì)胞穩(wěn)定劑，祛痰藥，NK1， NK2和NK3 速激肽受體拮抗劑和GABAB激動(dòng)劑。
97. 可計(jì)量劑量的氣溶膠配藥器，包括用于肺部或鼻部遞送的氣 溶膠藥物組合物，該組合物包含以低于IO微摩爾的ICs。抑制TRPA1介 導(dǎo)的電流的活性劑。
98. 權(quán)利要求95所述的組合物，其包含在可計(jì)量劑量的吸入器、 千粉吸入器或空氣噴射噴霧器中。
99. TRPA1抑制劑在制備用于治療或預(yù)防疼痛的藥劑中的應(yīng)用， 其中所述的TRPA1抑制劑為以式I表示的化合物或其鹽，或該化合物 或其鹽的溶劑合物、水合物、氧化代謝物或前體藥物其中W表示0或S，優(yōu)選S; R每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地表示H或低級烷基，優(yōu)選H;r表示取代或未被取代的烷基或取代或未被取代的芳基；E表示羧酸(C02H)，酯或酰胺；且 Ar表示取代或未被取代的芳基環(huán)；且其中所述的化合物以低于10微摩爾的I C5。抑制TRPA1介導(dǎo)的電流 或TRPA1介導(dǎo)的離子流。
100. TRP A1抑制劑在制備用于治療或預(yù)防疼痛的藥劑中的應(yīng)用， 其中所述的TRPAl抑制劑為以式II表示的化合物或其鹽，或該化合物 或其鹽的溶劑合物、水合物、氧化代謝物或前體藥物其中n為1-3的整數(shù)；且 R2表示取代基；且其中所述的化合物以低于IO微摩爾的IC5。抑制TRPAl介導(dǎo)的電流 或TRPA1介導(dǎo)的離子流。
101. 權(quán)利要求100所述的應(yīng)用，其中R2表示任選取代的烷基， 任選取代的芳基，任選取代的雜芳基，任選取代的芳烷基，任選取代 的環(huán)烷基，任選取代的雜環(huán)基或任選取代的雜芳烷基。
102. TRP A1抑制劑在制備用于治療或預(yù)防疼痛的藥劑中的應(yīng)用， 其中所述的TRPA1抑制劑為以式III表示的化合物或其鹽，或該化合 物或其鹽的溶劑合物、水合物、氧化代謝物或前體藥物 其中n為l-3的整數(shù)；且 R2表示取代基；且其中所述的化合物以低于10微摩爾的IC5Q抑制TRPA1介導(dǎo)的電流 或TRPA1介導(dǎo)的離子流。
103. TRPA1抑制劑在制備用于治療或預(yù)防疼痛的藥劑中的應(yīng)用， 其中所述的TRPAl抑制劑為以式IV表示的化合物或其鹽，或該化合物 或其鹽的溶劑合物、水合物、氧化代謝物或前體藥物其中K每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地表示H或低級烷基；R2的一次出現(xiàn)不存在且R2的一次出現(xiàn)為MmR3;R3表示取代或未被取代的芳基；M每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地表示取代或未被取代的亞曱基，NK， 0, S， S(O)或S(O》，優(yōu)選進(jìn)行選擇，以便沒有兩個(gè)雜原子是彼此連接的；且 m為0-10的整數(shù)；且其中所述的化合物以低于10微摩爾的I C5o抑制TRPA1介導(dǎo)的電流 或TRPAl介導(dǎo)的離子流。
104. T R P A1抑制劑在制備用于治療或預(yù)防失禁的藥劑中的應(yīng)用， 其中所述的TRPAl抑制劑為以式I表示的化合物或其鹽，或該化合物 或其鹽的溶劑合物、水合物、氧化代謝物或前體藥物 其中W表示0或S，優(yōu)選S;R每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地表示H或低級烷基，優(yōu)選H;IT表示取代或未被取代的烷基或取代或未被取代的芳基；E表示羧酸(C02H)，酯或酰胺；且Ar表示取代或未被取代的芳基環(huán)；且其中所述的化合物以低于IO微摩爾的ICs。抑制TRPA1介導(dǎo)的電流 或TRPA1介導(dǎo)的離子流。
105. T R P A1抑制劑在制備用于治療或預(yù)防失禁的藥劑中的應(yīng)用， 其中所述的TRPA1抑制劑為以式II表示的化合物或其鹽，或該化合物 或其鹽的溶劑合物、水合物、氧化代謝物或前體藥物(")其中n為1-3的整數(shù)；且 l表示取代基；且其中所述的化合物以低于10微摩爾的ICs。抑制TRPA1介導(dǎo)的電流 或TRPA1介導(dǎo)的離子流。
106. 權(quán)利要求105所述的應(yīng)用，其中R2表示任選取代的烷基， 任選取代的芳基，任選取代的雜芳基，任選取代的芳烷基，任選取代 的環(huán)烷基，任選取代的雜環(huán)基或任選取代的雜芳烷基。
107. TRPA1抑制劑在制備用于治療或預(yù)防失禁的藥劑中的應(yīng)用， 其中所述的TRPA1抑制劑為以式III表示的化合物或其鹽，或該化合 物或其鹽的溶劑合物、水合物、氧化代謝物或前體藥物其中n為1-3的整數(shù)；且 l表示取代基；且其中所述的化合物以低于10微摩爾的I C5o抑制TRPA1介導(dǎo)的電流 或TRPA1介導(dǎo)的離子流。
108. TRPAl抑制劑在制備用于治療或預(yù)防失禁的藥劑中的應(yīng)用， 其中所述的TRPAl抑制劑為以式IV表示的化合物或其鹽或該化合物， 或其鹽的溶劑合物、水合物、氧化代謝物或前體藥物Ri每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地表示H或低級烷基；R2的一次出現(xiàn)不存在且R2的一次出現(xiàn)為MmR3;R3表示取代或未被取代的芳基；M每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地表示取代或未被取代的亞甲基，NRi， 0， S， S(O)或S(O》，優(yōu)選進(jìn)行選擇，以便沒有兩個(gè)雜原子是彼此連接的；且 m為0-10的整數(shù)；且其中所述的化合物以低于10微摩爾的I C5。抑制TRP A1介導(dǎo)的電流 或TRPAl介導(dǎo)的離子流。
109. 分離的多肽，包含SEQ ID NO: l中所示的氨基酸序列。
110. 由包含SEQIDNO: 2中所示核苷酸序列的核酸序列編碼的其中 分離的多肽。
111. 包含SEQIDNO: 2中所示核苷酸序列的分離的核酸。
112. 包含核普酸序列的分離的核酸，所述的核苷酸序列編碼包含 SEQ ID NO: 1中所示氨基酸序列的多肽。
113. 表達(dá)載體，其在原核細(xì)胞或真核細(xì)胞中的至少一種中復(fù)制， 該載體包含權(quán)利要求111或112所述的核酸。
114. 細(xì)胞，包含權(quán)利要求113所述的表達(dá)載體并且表達(dá)所述的多肽。
115. 生產(chǎn)多肽的方法，包括在細(xì)胞培養(yǎng)基中培養(yǎng)權(quán)利要求114所 述的細(xì)胞以便表達(dá)所述的多肽。
全文摘要
本申請涉及用于治療疼痛，失禁和其它病癥的化合物和方法。
文檔編號C07K14/705GK101384261SQ200680053268
公開日2009年3月11日 申請日期2006年12月22日 優(yōu)先權(quán)日2005年12月22日
發(fā)明者C·范戈, C·麥克納馬拉, J·A·崇, J·曼德爾-布瑞姆, M·M·莫蘭, 甄曉光 申請人:海德拉生物科學(xué)公司