專利名稱：治療疼痛的方法和組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及疼痛或感受傷害的治療或預(yù)防。相關(guān)領(lǐng)域疼痛是一種不同于觸、壓、熱或冷的感覺表達(dá)?；颊呓?jīng)常用如銳痛、鈍痛、酸痛、刺痛、切割性疼痛或灼燒痛的此類術(shù)語(yǔ)描述疼痛并且一般認(rèn)為疼痛包括原始的感覺和對(duì)該感覺的反應(yīng)。不同個(gè)體感覺的范圍以及疼痛感受的變化，致使疼痛的準(zhǔn)確定義非常困難，可是許多個(gè)體遭受嚴(yán)重的和持續(xù)的疼痛。
由傷害神經(jīng)結(jié)構(gòu)引起的疼痛經(jīng)常表現(xiàn)為神經(jīng)過敏或痛覺過敏并稱為“神經(jīng)病的”疼痛。也可以通過刺激感受傷害受體“引起”疼痛并在整個(gè)神經(jīng)途徑上傳播，此類疼痛稱為“感受傷害的”疼痛。
使疼痛受到注意的刺激水平稱為“痛閾”。鎮(zhèn)痛劑為通過升高痛閾而不喪失意識(shí)來緩解疼痛的藥物。在給予一種止痛藥后，在經(jīng)歷疼痛前要求更大強(qiáng)度或更長(zhǎng)時(shí)間的刺激。在患痛覺過敏的個(gè)體中，止痛藥可具有抗痛覺敏感的作用。與止痛藥相比，藥物如局部麻醉劑阻斷外圍神經(jīng)束的傳遞，由此阻斷疼痛的感覺。另一方面，普通的麻醉通過引起意識(shí)喪失而減少疼痛的感覺。
已經(jīng)報(bào)道速激肽拮抗劑在動(dòng)物中引起抗感受傷害，相信在人中類似于痛覺缺失(Maggi等，Auton.Pharmacol.(1993)13，23-93)。特別是，非肽NK-1受體拮抗劑產(chǎn)生這樣的痛覺缺失。例如，NK-1受體對(duì)抗劑RP 67,580引起痛覺喪失，其作用可與嗎啡相比(Garret等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA(1993)88，10208-10212)。
類阿片止痛藥是一類明確確定具有嗎啡樣作用的止痛藥。合成的和半合成的類阿片止痛藥是五種化學(xué)類化合物的衍生物菲、苯基庚胺、苯基哌啶、嗎啡烷和苯并嗎啡烷。藥理學(xué)上這些化合物具有不同的活性，因此一些是類阿片受體的強(qiáng)激動(dòng)劑(如嗎啡)，其它一些是適中至溫和的激動(dòng)劑(如可待因)，還有一些呈現(xiàn)混合的激動(dòng)劑-拮抗劑活性(如納布啡)和其它一些為部分激動(dòng)劑(如烯丙嗎啡)。同時(shí)一種類阿片部分激動(dòng)劑如烯丙嗎啡，(嗎啡的N-烷基類似物)將拮抗嗎啡的止痛作用，當(dāng)單獨(dú)給藥時(shí)，它可以以自身的方式為一種有效的止痛藥。
在所有的類阿片鎮(zhèn)痛劑中，嗎啡仍然是最廣泛使用的，但是除了它的治療特性外，它有一些缺點(diǎn)，包括呼吸抑制、胃腸運(yùn)動(dòng)降低(引起便秘)、惡心和嘔吐。耐受性和物理依賴性也限制了類阿片化合物的臨床使用。
在治療中經(jīng)常使用阿司匹林和其它水楊酸化合物中斷類風(fēng)濕癥疾病和關(guān)節(jié)炎中炎癥過程的擴(kuò)大并暫時(shí)性地減輕疼痛。為了這些目的使用的其它藥用化合物包括苯丙酸衍生物如布洛芬和萘普生、舒林酸、苯基丁氮酮、皮質(zhì)類甾醇、抗瘧疾藥如氯喹和羥基氯喹硫酸鹽和fenemates(J.Hosp.Pharm.，36622(1979年5月))?？墒?，這些化合物對(duì)于神經(jīng)病的疼痛是無效的。
目前采用的對(duì)疼痛的治療也有缺點(diǎn)。在患者體驗(yàn)作用之前一些治療劑需要延長(zhǎng)使用。其它現(xiàn)有的藥物在某些患者中有嚴(yán)重的副作用并且為了確保任何副作用不是過度的危險(xiǎn)必須仔細(xì)監(jiān)控患者。大多數(shù)現(xiàn)有藥物僅暫時(shí)減輕疼痛并且必須始持續(xù)地每天或每周服藥。隨著疾病的發(fā)展，減輕疼痛所需的藥量經(jīng)常增加，如此增加了潛在的副作用。
通過結(jié)合N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)定義NMDA受體，包括具有幾種不同的識(shí)別結(jié)合域的受體/離子通道復(fù)合體。NMDA本身在結(jié)構(gòu)上是一個(gè)類似于谷氨酸(Glu)的分子，在谷氨酸結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合并且具有高選擇性，并且有效激活NMDA受體(Watkins(1987)；Olney(1989))。
已知許多化合物在NMDA/Glu結(jié)合點(diǎn)結(jié)合(例如CPP、DCPP-ene、CGP 40116、CGP 37849、CGS 19755、NPC 12626、NPC 17742、D-AP5、D-AP7、CGP 39551、CGP-43487、MDL-100,452、LY-274614、LY-233536和LY233053)。其它化合物，稱為非競(jìng)爭(zhēng)性NMDA拮抗劑，在NMDA受體復(fù)合體的其它位置結(jié)合(實(shí)例如苯環(huán)利定、地佐環(huán)平、氯胺酮、替來他明、CNS 1102、右美沙芬、美金剛、犬尿烯酸、CNQX、DNQX、6，7-DCQX、6，7-DCHQC、R(+)-HA-966、7-氯犬尿烯酸、5，7-DCKA、5-碘-7-氯-犬尿烯酸、MDL-28,469、MDL-100,748、MDL-29,951、L-689,560、L-687,414、ACPC、ACPCM、ACPCE、蚶鹼(arcaine)、二亞乙基三胺、1，10-二氨基癸烷、1，12-二氨基十二烷、艾芬地爾和SL-82.0715)。Rogawski(1992)和Massieu等(1993)以及本文中引用的論文已經(jīng)對(duì)這些化合物進(jìn)行了廣泛地評(píng)論。
除了它的生理功能，谷氨酸(Glu)可以是神經(jīng)毒性的。Glu的神經(jīng)毒性指“興奮毒性(excitotoxicity)”，因?yàn)轭愃朴谒挠幸孀饔?，Glu的毒害神經(jīng)作用受一種興奮過程的調(diào)節(jié)(Olney(1990)；Choi(1992))。通常，當(dāng)Glu在突觸受體釋放時(shí)，它僅僅是短暫地結(jié)合，然后通過運(yùn)送它返回細(xì)胞的過程迅速離開該受體。在某些不正常的情況下，包括中風(fēng)、癲癇癥和CNS損傷，Glu吸收缺乏并且Glu在該受體聚集，產(chǎn)生持久的電化學(xué)作用的刺激，導(dǎo)致具有Glu受體的神經(jīng)元死亡。在CNS中許多神經(jīng)元具有Glu受體，因此興奮毒性可以引起大量的CNS傷害。
作為局部缺血事件、缺氧事件、大腦損傷或脊髓損傷、某些類型的食物中毒，包括興奮性毒物如domoic acid的中毒，和癲癇發(fā)作引起神經(jīng)退化的結(jié)果，可以發(fā)生急性興奮毒性傷害，所述神經(jīng)退化可以由持續(xù)的癲癇發(fā)作行為(癲癇狀態(tài))引起。大量的證據(jù)已經(jīng)暗示NMDA受體作為一個(gè)亞型受體，通過該受體Glu介導(dǎo)大量的CNS損傷，并且確定NMDA拮抗劑在這些急性CNS損傷綜合征中保護(hù)CNS神經(jīng)元抑制興奮毒性的退化是有效的(Choi(1998)；Olney(1990))。
在各種慢性神經(jīng)退化性疾病，包括早老性癡呆、肌萎縮性側(cè)索硬化、AIDS癡呆、帕金森氏病和亨廷頓氏病中，除了由急性損傷引起的神經(jīng)元損傷外，Glu受體的過分激活也可以引起逐步加重的神經(jīng)退化過程，導(dǎo)致細(xì)胞死亡(Olney(1990))。一般認(rèn)為，可以證明NMDA拮抗劑在此類慢性疾病的治療手段中是有用的。
在1980’s發(fā)現(xiàn)PCP(稱為“angel dust”)在NMDA Glu受體的離子通道內(nèi)的“PCP識(shí)別位點(diǎn)”發(fā)揮作用。PCP作為一種阻斷離子流通過NMDA離子通道的非競(jìng)爭(zhēng)性拮抗劑發(fā)揮作用。最近，在PCP位點(diǎn)作為一種非競(jìng)爭(zhēng)性NMDA拮抗劑發(fā)揮作用的藥物很可能具有擬精神病的副作用已經(jīng)變得明顯。另外，現(xiàn)在已經(jīng)認(rèn)識(shí)到某些競(jìng)爭(zhēng)性和非競(jìng)爭(zhēng)性NMDA拮抗劑在大鼠的大腦中可以引起類似的病理形態(tài)學(xué)作用(Olney等，(1991)；Hargreaves等，(1993))。此類化合物在人中也具有擬精神病的作用(Kristensen等，(1992)；Herrling(1994)；Grotta(1994))。
NMDA受體復(fù)合體的甘氨酸結(jié)合位點(diǎn)可以與Glu和PCP結(jié)合位點(diǎn)區(qū)別。最近也發(fā)現(xiàn)NMDA受體出現(xiàn)幾種亞型，它們的特征在于所述受體的甘氨酸結(jié)合位點(diǎn)的不同特性。許多在NMDA受體甘氨酸位點(diǎn)結(jié)合、用于治療中風(fēng)和神經(jīng)退化性疾病的化合物描述于美國(guó)專利5,604,227、5,733,910、5,599,814、5,593,133、5,744,471、5,837,705和6,103,721中。
因此，本發(fā)明提供一種治療疼痛的方法，該方法包括給予改善疼痛有效量的根據(jù)結(jié)構(gòu)式I的任何化合物 其中A為(CH2)n，其中n具有選自0、1、2、3或4的值；D選自5-元或6-元雜芳基基團(tuán)或其苯基衍生物(benz-derivative)，具有1、2或3個(gè)選自氧、氮或硫的環(huán)原子，而R1為鹵代基。
在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，所述方法包括給予改善疼痛有效量的根據(jù)結(jié)構(gòu)式I的化合物，其中D選自吡啶基、喹啉基、吡嗪基、吡二嗪基(pyradizinyl)、呋喃基、苯并[b]呋喃基、咪唑基、噁唑基、噻吩基、苯并[b]噻吩基和噻唑基。
在本發(fā)明的更具體的實(shí)施方案中，所述方法包括給予一種改善疼痛有效量的根據(jù)結(jié)構(gòu)式II的化合物，其中 本發(fā)明的更具體的實(shí)施方案為那樣一些實(shí)施方案，其中所述方法包括用根據(jù)結(jié)構(gòu)式II并且D選自吡啶基、喹啉基、吡嗪基、噠嗪基、呋喃基、苯并[b]呋喃基、咪唑基、噁唑基、噻吩基、苯并[b]噻吩基和噻唑基的化合物治療。
然而本發(fā)明更具體的實(shí)施方案為那些實(shí)施方案，其中所述方法包括用本文特別公開的示例性化合物進(jìn)行治療。
本發(fā)明的其它方面為藥用組合物，它包含根據(jù)結(jié)構(gòu)式I的化合物；根據(jù)結(jié)構(gòu)式I的化合物在制備藥物和藥用組合物中的用途；和包括將本發(fā)明的化合物結(jié)合到溫血?jiǎng)游锶缛祟惖腘MDA受體甘氨酸位點(diǎn)上，以便有益地抑制NMDA受體活性的方法。發(fā)明詳述本發(fā)明化合物是那些在概述范圍內(nèi)的化合物，特別是此后舉例的那些化合物。
本發(fā)明化合物的適宜的藥學(xué)上可接受的鹽包括酸加成鹽如甲磺酸鹽、延胡索酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、檸檬酸鹽、三(羥基甲基)氨基甲烷、順丁烯二酸鹽和與磷酸和硫酸形成的鹽。在其它實(shí)施方案中，適宜的鹽為堿式鹽如堿金屬鹽(如鈉鹽)、堿土金屬鹽如鈣鹽或鎂鹽、有機(jī)胺鹽如三乙胺、嗎啉、N-甲基吡啶、N-乙基吡啶、普魯卡因、二芐基胺、膽堿、N，N-二芐基乙基胺或氨基酸如賴氨酸的鹽本發(fā)明的另一方面為制備本發(fā)明化合物的方法，所述方法包括以下步驟a)按照以下方案所示的程序之一制備Boc保護(hù)的肼 X＝Cl，Br或OMs；R＝H或烷基。
b)按照以下方案的方法偶聯(lián)所述Boc保護(hù)的肼并環(huán)化該產(chǎn)物，形成一種根據(jù)結(jié)構(gòu)式I的化合物 其中CMC為1-環(huán)己基-3-(2-嗎啉代乙基)-N-甲基-碳化二亞胺-對(duì)甲苯磺酸鹽(1-cyclohexyl-3-(2-morpholinoethyl)carbodiimide metho-p-toluene-sulfonate)；“R/H/D”基團(tuán)為結(jié)構(gòu)式I的“-A-D”部分；并且在整個(gè)前述方法中R1如結(jié)構(gòu)式I定義。
使用本發(fā)明的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽的治療方法，可以包括哺乳動(dòng)物疼痛的預(yù)防治療，所述哺乳動(dòng)物可以為人類，可以依照標(biāo)準(zhǔn)的藥物實(shí)踐將所述化合物調(diào)配為一種藥用組合物。
含有本發(fā)明的化合物的適宜藥用組合物可以按照常規(guī)的方式給藥，如口服、局部使用、胃腸外、口腔、鼻腔、陰道或直腸給藥或通過吸入給藥。為這些目的，可通過本領(lǐng)域已知的方法將本發(fā)明的化合物配制為例如片劑、膠囊劑、水溶液劑或油溶液劑、懸浮液、乳劑、乳膏、軟膏、凝膠、鼻噴霧劑、栓劑、細(xì)分散的散劑或吸入氣霧劑，和胃腸外使用(包括靜脈的、肌肉或輸注的)的無菌水溶液或油溶液或懸浮液或無菌乳劑。一種優(yōu)選的給藥途徑為口服片劑或膠囊劑。
除了本發(fā)明的化合物，本發(fā)明的一種藥用組合物也可以含有一種或多種其它藥理上的活性劑，或此類藥用組合物可以同時(shí)或連續(xù)與一種或多種其它藥理上的活性劑共同給藥。
通常，給予本發(fā)明的藥用組合物，以使患者接受改善疼痛的有效日劑量?？梢园凑招枰獙⑷談┝恳詭讉€(gè)分劑量給藥，接受化合物的準(zhǔn)確量和給藥途徑取決于所治療患者的體重、年齡和性別以及按照本領(lǐng)域已知的原則治療的具體疾病狀況。一個(gè)優(yōu)選的劑量方案為每日一次。
本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案提供一種藥用組合物，該組合物含有與藥學(xué)上可接受的添加劑如賦形劑或載體混合的如此中定義的結(jié)構(gòu)式I的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。
本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案提供結(jié)構(gòu)式I的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽在生產(chǎn)用于在溫血?jiǎng)游锇ㄈ祟愔薪Y(jié)合NMDA受體甘氨酸位點(diǎn)的藥物中的用途。
本發(fā)明的又一個(gè)實(shí)施方案提供一種使本發(fā)明的化合物與需要治療疼痛的溫血?jiǎng)游锶缛祟惖腘MDA受體甘氨酸位點(diǎn)結(jié)合的方法，所述方法包括給予所述動(dòng)物有效量的結(jié)構(gòu)式I的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。定義當(dāng)在此使用時(shí)，術(shù)語(yǔ)“烷基”包括直鏈和支鏈烷基基團(tuán)，但是提到單個(gè)的烷基基團(tuán)如“丙基”時(shí)指直鏈部分。
當(dāng)在此使用時(shí)，術(shù)語(yǔ)“鹵代基”指氟代基、氯代基、溴代基和碘代基。
當(dāng)在此使用時(shí)，術(shù)語(yǔ)“芳基”指一個(gè)不飽和的碳環(huán)或其苯基衍生物。詳細(xì)地說，芳基指苯基、萘基或聯(lián)苯基。更詳細(xì)地說芳基指苯基。
當(dāng)在此使用時(shí)，術(shù)語(yǔ)“雜芳基”或“雜芳基環(huán)”，除非另有說明，否則指一個(gè)單環(huán)、雙環(huán)或三環(huán)-5-14元環(huán)，所述環(huán)為不飽和環(huán)或部分不飽和環(huán)，具有最多可達(dá)5個(gè)選自氮、氧和硫的環(huán)雜原子，其中的-CH2-基團(tuán)可以用-C(O)-任選代替，并且環(huán)氮原子可以任選被氧化形成N-氧化物。此類雜芳基的實(shí)例包括噻吩基、呋喃基、吡喃基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、噻唑基、噁唑基、異噁唑基、吡啶基、吡啶基-N-氧化物、氧代吡啶基、氧代喹啉基、嘧啶基、吡嗪基、氧代吡嗪基、噠嗪基、二氫吲哚基、苯并呋喃基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、喹啉基、異喹啉基、喹唑啉基、呫噸基、喹喔啉基、吲唑基、苯并呋喃基和噌啉基。
當(dāng)在此使用時(shí)，術(shù)語(yǔ)“雜環(huán)基”或“雜環(huán)基環(huán)”，除非另有說明，否則指一個(gè)單或雙環(huán)-5-14元環(huán)，所述環(huán)總體上是飽和的，具有最多可達(dá)5個(gè)選自氮、氧和硫的環(huán)雜原子，其中的-CH2-基團(tuán)可以用一個(gè)-C(O)-任選代替。此類雜環(huán)基的實(shí)例包括嗎啉基、吡咯烷基、咪唑烷基、吡唑烷基、哌啶基、哌嗪基、高哌啶基、高哌嗪基和奎寧環(huán)基。
當(dāng)在此使用，其中任選的取代基選自“一個(gè)或多個(gè)”基團(tuán)時(shí)，可以理解它包含所有取代基選自一個(gè)指定基團(tuán)的化合物和所有的取代基選自一個(gè)以上的指定基團(tuán)的化合物。
通常在此中所描述的方法、過程和實(shí)施例中濃縮通過在真空下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)進(jìn)行；操作在環(huán)境溫度，即在18-26℃的范圍內(nèi)和在氮?dú)夥障逻M(jìn)行；柱層析(通過快速的方法)，除非另有說明，否則在Merck Kieselgel硅膠(Art.9385)上進(jìn)行；產(chǎn)量?jī)H僅為了描述給出并不必是可以達(dá)到的最大量；式I的終產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)通常通過NMR和質(zhì)譜技術(shù)確定，除非另有說明，用一個(gè)在300MHz的場(chǎng)強(qiáng)度運(yùn)行的Varian Germini 2000分光計(jì)在DMSO-d6中測(cè)定質(zhì)子磁共振譜；從作為內(nèi)標(biāo)的四甲基硅烷起用百萬(wàn)分之幾低磁場(chǎng)報(bào)告化學(xué)位移(δ標(biāo)度)并且峰的多樣性如此顯示s，單峰；bs，寬單峰；d，雙峰；AB或dd，二個(gè)雙峰；t，三峰；dt，二個(gè)三峰；m，多重峰；bm，寬多重峰；用一個(gè)用電噴射操作的Platform分光計(jì)(Micromass提供)獲得快原子轟擊(FAB)質(zhì)譜數(shù)據(jù)并且適宜時(shí)在這種應(yīng)用中收集陽(yáng)離子數(shù)據(jù)或陰離子數(shù)據(jù)，引用(M+H)+；用一臺(tái)NicoletAvatar 360 FT-IR獲得IR數(shù)據(jù)；通常中間體沒有完全進(jìn)行特征鑒定并且通常用質(zhì)譜(MS)或NMR分析評(píng)估純度。
當(dāng)使用時(shí)以下縮寫和定義具有如下含義CDCl3為氘代氯仿；CMC 為1-環(huán)己基-3-(2-嗎啉代乙基)-N-甲基-碳化二亞胺-對(duì)甲苯磺酸鹽；DCM為二氯甲烷；DCU為二環(huán)己基脲；DHC為1，3-二環(huán)己基碳化二亞胺；DMAP 為4-(二甲基氨基)吡啶；DMF為N，N-二甲基甲酰胺；DMSO 為二甲基亞砜；m/s為質(zhì)譜分析；NMP為N-甲基吡咯烷酮；NMR為核磁共振；p.o. 為口服；THF為四氫呋喃；t.i.d. 為每日三次。
此中所描述的實(shí)施例和試驗(yàn)是打算闡述本發(fā)明而不是限制本發(fā)明。
實(shí)施例實(shí)施例17-氨-4-羥基-2-(4-吡啶基甲基)-1，2，5，10-四氫噠嗪并[4，5-b]喹啉-1，10-二酮甲磺酸鹽(叔丁氧基)-N-[(4-吡啶基甲基)氨基]甲酰胺在氮?dú)庀拢螂禄姿崾宥□?174g，1.36mole)和無水DMF(400ml)的攪拌溶液中加入三乙胺(108ml，0.78mole)，隨后加入4-吡啶甲基氯鹽酸鹽(40.0g，0.243mole)。然后在75℃加熱該反應(yīng)混合物5小時(shí)并讓其冷卻至室溫。用水(2L)稀釋該反應(yīng)混合物并用乙酸乙酯(4×500ml)提取產(chǎn)生的混合物。在減壓下濃縮合并的乙酸乙酯提取物并將殘余物溶解于乙醚(1L)中。用水(3×400ml)和鹽水(400ml)順序洗滌所產(chǎn)生的溶液，然后用Na2SO4干燥。過濾掉Na2SO4并在減壓下濃縮該濾液，得到一種琥珀色的油狀物(130.4g)。通過硅膠快速層析純化該產(chǎn)物，以己烷∶乙酸乙酯(1∶1)洗脫，得到標(biāo)題化合物，為一種固態(tài)的灰白色泡沫(24.46g，45％).1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ1.36(s，9H)；3.90(d，2H，J＝4.0Hz)，5.04(d，1H，J＝4.0Hz)；7.34(d，1H，J＝4.5Hz)，8.48(d，1H，J＝4.5Hz)。
7-氯-4-羥基喹啉-2，3-二羧酸二甲酯在氮?dú)夥障?，回?-氨基-4-氯苯甲酸甲酯(2.50g，13.5mmol)和乙炔二羧酸二甲酯(2.05g，14.4mmol)在叔丁醇(22ml)中的攪拌混合物7小時(shí)。在加入另外的乙炔二羧酸二甲酯(1.16g，8.13mmol)并另外回流2.5小時(shí)后，讓該反應(yīng)混合物冷卻至室溫，一次性加入叔丁醇鉀(1.56g，13.9mmol)。形成沉淀并回流所產(chǎn)生的混合物1.5小時(shí)。將所述混合物冷卻至室溫并過濾以分離固體，用叔丁醇和乙醚洗滌該固體。將所述固體溶解于水中并用1N硫酸酸化，形成一種沉淀。用DCM提取所產(chǎn)生的混合物并用鹽水和水洗滌合并的提取物，用MgSO4干燥，過濾并濃縮，得到一種綠色的固體。使所述物質(zhì)從甲醇中重結(jié)晶，得到標(biāo)題化合物(1.15g，47％)，為灰白色固體，mp 232-233℃；MS(Cl)296(M+H).分析C13H10ClNO5計(jì)算值C，52.81；H，3.41；N，4.74；測(cè)得值C，52.75；H，3.47；N，4.69.
3-甲酯基-7-氯-4-羥基喹啉-2-羧酸向7-氯-4-羥基喹啉-2，3-二羧酸二甲酯(1.0g，3.38mmol)在水(20ml)中的攪拌懸浮液中加入氫氧化鈉(0.27g，6.75mmol)水溶液。加完后，溶解懸浮液。溫?zé)嵩摲磻?yīng)混合物至60℃ 1小時(shí)。此后冷卻該反應(yīng)物至室溫并用濃鹽酸酸化。然后將該產(chǎn)物提取到乙醚和乙酸乙酯中，用MgSO4干燥該有機(jī)提取物，過濾并在真空下濃縮，得到標(biāo)題化合物，為一種固體(900mg)。通過用乙酸乙酯/己烷共溶劑系統(tǒng)重結(jié)晶純化該物質(zhì)，得到標(biāo)題化合物(571mg，60％)，為一種白色固體，mp 296℃(分解)；MS(Cl)238(M+H).
分析C12H8NO5Cl·0.45CH3CO2CH2CH3·0.10H2O計(jì)算值C，51.30；H，3.68；N，4.34；測(cè)得值C，51.28；H，3.62；N，3.97.1H NMR δ 8.22(d，J＝8.7Hz，1H)；7.92(d，J＝1.8Hz，1H)，7.28(dd，J＝8.7，1.8Hz，1H)；3.90(s，3H).
3-甲酯基-2-吡咯烷基脲-7-氯-4-羥基喹啉在室溫、N2下，向3-甲酯基-7-氯-4-羥基喹啉-2-羧酸(2.25g，8.0mmol)的THF(20ml)懸浮液中加入DHC(1.65g，8.0mmol)和吡咯烷(0.596g，8.4mmol)。在室溫?cái)嚢柙摲磻?yīng)物15小時(shí)，然后通過過濾移去副產(chǎn)物脲。通過采用5％甲醇的氯仿的快速柱層析純化所需產(chǎn)物，得到標(biāo)題化合物(2.52g，94.3％)，為一種棕褐色固體，mp＝215℃；MS(CI)335(M+H).300 MHz1H NMR(DMSO-d6)δ8.12(d，J＝8.7Hz，1H)，7.60(d，1H，J＝1.8Hz)，7.47(dd，1H，J＝8.8，2.0Hz)，3.69(s，3H)，3.40-3.49(m，2H)，3.27-3.33(m，2H)，1.80-1.96(m，4H).
7-氯-4-氧代-2-(吡咯烷基羰基)氫喹啉(hydroquinoline)-3-羧酸向3-甲酯基-2-吡咯烷基脲-7-氯-4-羥基喹啉(2.52g，7.5mmol)的去離子水(40ml)懸浮液中滴加氫氧化鉀(882mg，15.75mmol)的水溶液(20ml)。加完后，使該反應(yīng)物溫?zé)嶂?0℃。3小時(shí)后，過濾該反應(yīng)物以除去少量的不溶物。然后酸化濾液到pH＝1，產(chǎn)生一種白色沉淀。通過真空過濾分離該固體，用水洗滌并在30℃真空下干燥16小時(shí)。獲得標(biāo)題化合物(1.5g，64％)，為一種白色固體，mp＝225-8℃；MS(Cl)321(M+H).300 MHz1H NMR(DMSO-d6)δ8.28(d，J＝8.8Hz，1H)；7.77(s，1H)，7.64(d，1H，J＝8.7Hz)，3.52-3.57(m，2H)，3.17-3.19(m，2H)，1.83-1.98(m，4H).
N-[(叔丁氧基)羰基氨基][7-氯-4-氧代-2-(吡咯烷基羰基)(3-氫喹啉基)]-N-(4-吡啶基甲基)甲酰胺在氮?dú)庀?，?-氯-4-氧代-2-(吡咯烷基羰基)氫喹啉-3-羧酸(24.29g，75.73mmol)和無水THF(1175ml)的攪拌混合物中分批加入CMC(50.55g，119.34mmol)(先加入35g，10分鐘后加入15.55g)。在攪拌該反應(yīng)混合物另外20分鐘后，迅速加入(叔丁氧基)-N-[(4-吡啶基甲基)氨基]甲酰胺(22.0g，98.5mmol)和THF(580ml)的溶液并攪拌該混合物過夜。過濾該反應(yīng)混合物，用DCM(300ml)洗滌濾餅。合并濾液和洗液并加入另外的DCM(800ml)。用水(2×500ml)洗滌所產(chǎn)生的溶液，然后用Na2SO4干燥，過濾并在減壓下濃縮，得到28.90g黃色泡沫狀物。用乙醚(800ml)處理該泡沫狀物并攪拌所產(chǎn)生的混合物，然后過濾。在45℃真空下干燥該濾餅。得到所需化合物(24.3g，61％)，為一種黃色粉末。
7-氯-4-羥基-2-(4-吡啶基甲基)-1，2，5，10-四氫噠嗪并[4，5-b]喹啉-1，10-二酮甲磺酸鹽在氮?dú)庀?，向N-[(叔丁氧基)羰基氨基][7-氯-4-氧代-2-(吡咯烷基羰基)(3-氫喹啉基)]-N-(4-吡啶基甲基)甲酰胺(24.0g，45.62mmol)和無水THF(960ml)的攪拌混合物中一次性加入甲磺酸(120ml，177.7g，1.85mole)。攪拌該混合物過夜，然后過濾以便分離固體。用THF(2×100ml)、甲醇(2×50ml)和乙醚(100ml)順序洗滌所收集的固體。然后將該濾餅(13.4g)懸浮在甲醇(250ml)中，然后超聲處理所產(chǎn)生的混合物20分鐘，然后過濾。用甲醇(2×100ml)和乙醚(100ml)洗滌所收集的固體，然后在45℃真空下干燥，獲得標(biāo)題化合物(12.1g，59％)，為黃色粉末。m.p.＞250℃；1H NMR(300 MHz，DMSO-d6)δ2.32(s，3H)，5.36(s，2H)，7.49(dd，1H，J＝8.1Hz，J＝2.1Hz)，7.86(d，1H，J＝6.6Hz)；8.06(d，1H，J＝2.1Hz)，8.12(d，1H，J＝8.1Hz)，8.82(d，1H，J＝6.6Hz)，12.6(br s，1H)，12.84(br s，1H)。C17H11ClN4O3·CH3SO3H·0.8H2O計(jì)算值C，46.47；H，3.60；N，12.04；測(cè)得值C，46.39；H，3.65；N，11.98。實(shí)施例27-氯-4-羥基-2-(3-吡啶基甲基)-1，2，5，10-四氫噠嗪并[4，5-b]喹啉-1，10-二酮甲磺酸鹽(叔丁氧基)-N-[(3-吡啶基甲基)氨基]甲酰胺在氮?dú)庀?，向肼基甲酸叔丁?203.6g，1.54mole)和無水DMF(300ml)的攪拌溶液中加入三乙胺(128ml，0.92mole)，隨后加入3-吡啶甲基氯鹽酸鹽(50.0g，0.30mole)在DMF(300ml)中的漿狀物。然后在75℃加熱該反應(yīng)混合物3小時(shí)，讓其冷卻至室溫并用水(2.4L)稀釋。用乙醚(3×800ml)提取產(chǎn)生的混合物。用鹽飽和該水層并用乙醚(3×800ml)提取。用水(1×1L)和鹽水(1×1L)順序洗滌合并的提取物，然后用Na2SO4干燥。過濾掉Na2SO4并在減壓下濃縮該濾液。通過在硅膠上快速層析純化該產(chǎn)物，用乙醚洗脫，得到標(biāo)題化合物，為一種灰白色固體(23.3g，34％).1H NMR(300 MHz，DMSO-d6)δ1.36(s，9H)；3.88(d，2H，J＝4.0Hz)，4.96(d，1H，J＝4.0Hz)；7.33(dd，1H，J＝7.7Hz，J＝4.8Hz)，7.71(d，1H，J＝7.7Hz)，7.44(d，1H，J＝4.7Hz)，8.49(s，1H)。
N-[(叔丁氧基)羰基氨基][7-氯-4-氫代-2-(吡咯烷基羰基)(3-氫喹啉基)]-N-(3-吡啶基甲基)甲酰胺在氮?dú)庀?，?-氯-4-氧代-2-(吡咯烷基羰基)氫喹啉-3-羧酸(實(shí)施例1，20g，62.4mmol)和THF(800ml)的攪拌混合物中加入CMC(40.0g，94.4mmol)。迅速加入(叔丁氧基)-N-[(3-吡啶基甲基)氨基]甲酰胺(20.9g，93.6mmol)和THF(450ml)的溶液并攪拌該混合物過夜。過濾該反應(yīng)混合物并用THF洗滌該濾餅。用DCM將該濾餅調(diào)成漿并過濾。合并濾液并在減壓下蒸發(fā)。將殘余物溶解于DCM中，用Na2SO4干燥，過濾并在減壓下蒸發(fā)，得到一種泡沫狀物。用乙醚(200ml)攪拌該泡沫狀物并過濾。用乙醚(200ml)超聲處理該濾餅，過濾，用乙醚洗滌并在40℃下真空干燥，獲得標(biāo)題化合物，為灰白色的粉末(32.8g，100％)。
7-氯-4-羥基-2-(3-吡啶基甲基)-1，2，5，10-四氫噠嗪并[4，5-b]喹啉-1，10-二酮甲磺酸鹽在氮?dú)庀?，?0分鐘向N-[(叔丁氧基)羰基氨基][7-氯-4-氧代-2-(吡咯烷基羰基)(3-氫喹啉基)]-N-(3-吡啶基甲基)甲酰胺(32.8g，mol)和THF(1L)的攪拌溶液中加入甲磺酸(150ml，222g，2.31moles)。攪拌該混合物過夜，然后過濾以分離固體。用THF洗滌所收集的固體。將該濾餅懸浮在甲醇中，然后超聲(30分鐘)，然后過濾。將該固體再懸浮在甲醇中，超聲(30分鐘)并過濾。用甲醇洗滌所收集的固體，然后在100℃下真空干燥，獲得標(biāo)題化合物(19.4g，66％)，為一種白色固體。m.p.＞300℃；1H NMR(300 MHz，DMSO-d6)；δ2.33(s，3H)，5.29(s，2H)，7.46(dd，1H，J＝9.0Hz，J＝2.1Hz)，7.94(dd，1H，J＝9.0Hz，J＝5.6Hz)，8.04(d，1H，J＝1.8Hz)，8.16(d，1H，J＝8.7Hz)，8.37(d，1H，J＝8.1Hz)，8.82(d，1H，J＝4.8Hz)，8.89(s，1H)。C17H11ClN4O3·CH3SO3H·H2O計(jì)算值C，46.11；H，3.66；N，11.95；測(cè)得值C，46.34；H，3.61；N，11.94。實(shí)施例37-氯-4-羥基-2-(2-吡啶基甲基)-1，2，5，10-四氫噠嗪并[4，5-b]喹啉-1，10-二酮甲磺酸鹽(叔丁氧基)-N-[(2-吡啶基甲基)氨基]甲酰胺在氮?dú)庀?，向肼基甲酸叔丁?174g，1.53mole)和無水DMF(400ml)的攪拌溶液中加入三乙胺(130ml，0.94mole)，隨后加入2-吡啶甲基氯鹽酸鹽(54.0g，0.33mole)。在室溫下攪拌該反應(yīng)混合物1小時(shí)，然后在70℃加熱3小時(shí)并讓其冷卻至室溫。用乙酸乙酯/乙醚的1∶1混合物稀釋該反應(yīng)混合物并用鹽水洗滌并提取。通過TCL(洗脫劑100％乙醚)監(jiān)測(cè)該水層并用乙酸乙酯(200ml)提取幾次直到觀察不到產(chǎn)物。用鹽水洗滌合并的有機(jī)提取物，用Na2SO4干燥并過濾。在減壓下濃縮該濾液。得到一種可結(jié)晶的琥珀色油狀物(～100g)。用1∶1的乙醚/己烷研磨該物質(zhì)，過濾并在減壓下干燥，得到標(biāo)題化合物，為灰白色固體(33.4g，45％產(chǎn)率).1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ1.38(s，9H)；3.96(d，2H，J＝4.0Hz)，4.98(d，1H，J＝4.0Hz)，7.24(dd，1H，J＝7.8Hz，J＝7.8Hz)，7.48(d，1H)，7.74(dd，1H，J＝7.5Hz，J＝7.8Hz)，8.32(s br，1H)，8.47(d，1H，J＝4.8Hz)。
N-[(叔丁氫基)羰基氨基][7-氯-4-氧代-2-(吡咯烷基羰基)(3-氫喹啉基)]-N-(2-吡啶基甲基)甲酰胺在氮?dú)庀?，?-氯-4-氧代-2-(吡咯烷基羰基)氫喹啉-3-羧酸(實(shí)施例1，17.5g，54.7mmol)和無水THF(900ml)的攪拌混合物中分批加入CMC(35.7g，81.2mmol)(先加入25.0g，10分鐘后加入10.7g)。在攪拌該反應(yīng)混合物另外1小時(shí)后，加入(叔丁氧基)-N-[(2-吡啶基甲基)氨基]甲酰胺(16.5g，73.9mmol)和THF(400ml)的溶液并劇烈攪拌該混合物過夜。用TCL(10％甲醇/DCM)監(jiān)測(cè)該反應(yīng)并確定反應(yīng)完成。為了分離沉淀的固體，過濾該反應(yīng)混合物并用THF洗滌所收集的固體。合并濾液和洗液并在真空下濃縮。將該濾餅懸浮在碳酸氫鹽水溶液和鹽水溶液中并用DCM(3×300ml)提取。濃縮有機(jī)提取物，合并這些提取物并用碳酸氫鹽、鹽水(3x)洗滌，用Na2SO4干燥。過濾掉用Na2SO4并在減壓下濃縮該濾液，獲得一種殘余物，通過在硅膠上快速層析純化該殘余物，用5％異丙醇/氯仿洗脫。在真空下濃縮所需流分后分離到標(biāo)題化合物，為一種淺棕褐色粉末(24.3g，61％)。
7-氯-4-羥基-2-(2-吡啶基甲基)-1，2，5，10-四氫噠嗪并[4，5-b]喹啉-1，10-二酮甲磺酸鹽在氮?dú)庀?，向N-[(叔丁氧基)羰基氨基][7-氯-4-氧代-2-(吡咯烷基羰基)(3-氫喹啉基)]-N-(2-吡啶基甲基)甲酰胺(24.0g，0.045mol)和無水THF(800ml)的攪拌混合物中一次性加入甲磺酸(100ml，148g，1.54moles)。攪拌該混合物過夜，然后過濾以分離固體。用THF(2×100ml)和乙醚(2×100ml)順序洗滌所收集的固體。然后將該濾餅(15.8g)懸浮在甲醇(250ml)中并超聲處理所產(chǎn)生的混合物30分鐘，然后過濾。用甲醇(2×100ml)和乙醚(100ml)洗滌所收集的固體，然后在35℃真空下干燥，獲得標(biāo)題化合物(12.1g，59％)，為一種橙色的粉末。m.p.＞300℃；1H NMR(300 MHz，DMSO-d6)δ2.33(s，3H)，5.35(s，2H)，7.46(d，1H，J＝8.7Hz)，7.64(d，1H，J＝7.8Hz)，7.68(dd，1H，J＝4.8Hz，J＝6.6Hz)，8.02(s，1H)，8.14(d，1H，J＝8.7Hz)，8.19(dd，1H，J＝6.6Hz，J＝7.8Hz)，8.73(d，1H，J＝4.8Hz)，10.06(s，br，1H)，12.84(s，br，1H)。C17H11ClN4O3·CH3SO3H計(jì)算值C，47.95；H，3.35；N，12.43；測(cè)得值C，47.93；H，3.42；N，12.01。實(shí)施例47-氯-4-羥基-2-苯并[d]呋喃-2-基甲基-1，2，5，10-四氫噠嗪并[4，5-b]喹啉-1，10-二酮N-(1-氮雜-2-苯并[d]呋喃-2-基乙烯基)(叔丁氧基)甲酰胺在室溫、攪拌下，向苯并呋喃-2-甲醛(5.0g，34mmol)的THF(200ml)溶液中加入肼基甲酸叔丁酯(4.5g，34mmol)，隨后加入濃鹽酸(10滴)。攪拌反應(yīng)物24小時(shí)，在真空下移去THF并且用己烷研磨所產(chǎn)生的固體，過濾，得到標(biāo)題化合物(9g，100％)，為一種白色固體。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ11.12(br s，1H)，8.02(s，1H)，7.67(d，J＝7.6Hz，1H)，7.62(d，J＝8.5Hz，1H)，7.37(dd，J＝7.6，7.6Hz，1H)，7.27(dd，J＝7.6，7.6Hz，1H)，7.21(s，1H)，1.48(s，9H).
N-[(苯并[d]呋喃-2-基甲基)氨基](叔丁氧基)甲酰胺向N-(1-氮雜-2-苯并[d]呋喃-2-基乙烯基)(叔丁氧基)甲酰胺(4.0g，15mmol)的甲醇(75ml)溶液中加入氰基氫硼化鈉(7.2g，115mmol)和乙酸(10ml)。加熱該混合物到65℃ 4小時(shí)。TLC分析(1∶1的己烷∶乙酸乙酯)顯示有原料殘留，并加入另外的氰基氫硼化鈉(約2g)。2小時(shí)后，沒有原料殘留并將該反應(yīng)物冷卻至室溫，在真空下除去甲醇。將殘余物溶解于乙酸乙酯中并用飽和的NaHCO3水溶液、水和鹽水順序洗滌，然后用Na2SO4干燥。過濾該混合物并濃縮，得到標(biāo)題化合物(3.4g，13mmol，85％)，為一種白色固體，未進(jìn)一步純化用于下一步驟。1H NMR(300 MHz，DMSO-d6)δ8.36(s，1H)，7.57(d，J＝7.0Hz，1H)，7.51(d，J＝7.7Hz，1H)，7.22(m，2H)，6.74(s，1H)，5.01(br s，1H)，4.00(s，2H)，1.37(s，9H).
N-{N-(苯并[d]呋喃-2-基甲基)[7-氯-4-氧代-2-(吡咯烷基羰基)(3-氫喹啉基)]羰基氨基}(叔丁氧基)甲酰胺向7-氯-4-氧代-2-(吡咯烷基羰基)氫喹啉-3-羧酸(實(shí)施例1，4.1g，13mmol)在THF(75ml)中的攪拌漿狀物中加入1-環(huán)己基-3-(2-嗎啉代乙基)-碳化二亞胺N-甲-對(duì)甲苯磺酸鹽(10.8g，26mmol)。攪拌下，向該攪拌的淡黃色-黃色的混合物中加入N-[(苯并[d]呋喃-2-基甲基)氨基](叔丁氧基)甲酰胺(3.3g，13mmol)和N，N-二甲基氨基吡啶(230mg，1.9mmol)的THF(25ml)溶液。在N2下回流該產(chǎn)生的混合物4小時(shí)，然后冷卻并過濾。濃縮濾液，得到一種固態(tài)的黃色泡沫，在硅膠上層析(10％甲醇的CH2Cl2溶液)該黃色泡沫物，得到標(biāo)題化合物，為一種淺黃色的固體。對(duì)該物質(zhì)未進(jìn)行特征化鑒定而用于下一步驟。
7-氯-4-羥基-2-苯并[d]呋喃-2-基甲基-1，2，5，10-四氫噠嗪并[4，5-b]喹啉-1，10-二酮在室溫下，向N-{N-(苯并[d]呋喃-2-基甲基)[7-氯-4-氧代-2-(吡咯烷基羰基)(3-氫喹啉基)]-羰基氨基}(叔丁氧基)甲酰胺(6.2g，11mmol)在THF(150ml)中的混合物中加入甲磺酸(29ml，44mmol)的THF(70ml)溶液。攪拌該溶液過夜，然后加入水(～500ml)使所述產(chǎn)物沉淀。收集乳白色固體并用水和乙醚沖洗。在500mTorr中，于30℃干燥所述物質(zhì)過夜，得到標(biāo)題化合物，為灰白色固體。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ12.74(br s，1H)，11.96(br s，1H)，8.15(d，J＝8.8Hz，1H)，8.04(d，J＝1.6Hz，1H)，7.59(d，J＝7.7Hz，1H)，7.53(d，J＝8.1Hz，1H)，7.44(dd，J＝2.0，8.9Hz，1H)，7.25(m，2H)，6.84(s，1H)，5.27(s，2H).C20H12N3O4Cl-0.1H2O-0.3CH3SO3H計(jì)算值C，57.45；H，3.18；N，9.90；測(cè)得值C，57.61；H，3.20；N，9.91。實(shí)施例57-氯-4-羥基-2-(喹啉-4-基甲基)-1，2，5，10-四氫噠嗪并[4，5-b]喹啉-1，10-二酮采用實(shí)施例4的方法，用喹啉-4-甲醛作為原料合成標(biāo)題化合物。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ12.87(br s，1H)，12.10(br s，1H)，9.16(d，J＝5.4Hz，1H)，8.61(d，J＝8.4Hz，1H)，8.30(d，J＝8.4Hz，1H)，8.19-8.15(m，2H)，8.08(d，J＝1.8Hz，1H)，8.01(dd，J＝7.5，7.8Hz，1H)，7.74(d，J＝5.4Hz，1H)，7.47(dd，J＝1.8，8.7Hz，1H)，5.84(s，1H)。實(shí)施例67-氯-4-羥基-2-(吡嗪-2-基甲基)-1，2，5，10-四氫噠嗪并[4，5-b]喹啉-1，10-二酮甲磺酸鹽2-氯甲基吡嗪用N-氯丁二酰亞胺(4.27g，31.5mmol)和苯甲?；^氧化物(0.26g，1.1mmol)處理在四氯化碳(80ml)中的2-甲基吡嗪(1.0ml，22mmol)。加熱該混合物至回流7小時(shí)，然后冷卻至室溫。通過硅藻土過濾固體并用DCM洗滌。用硫代硫酸鈉水溶液(飽和的，1x)、碳酸氫鈉水溶液(飽和的，1x)、水(1x)和氯化鈉水溶液(飽和的，1x)洗滌該濾液，用Na2SO4干燥含有5-10％a，a-二氯化物的有機(jī)層，過濾，在減壓下濃縮，直接用于下一步反應(yīng)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ4.88(s，2H)，8.65-8.68(m，2H)，8.85(s，1H)。
(叔丁氧基)-N-[(吡嗪-2-基甲基)氨基]甲酰胺在氮?dú)庀?，?-氯甲基吡嗪(1.2g，93mmol)和無水DMF(16ml)的攪拌溶液中加入肼基甲酸叔丁酯(6.3g，48mmol)和三乙胺(2.6ml，19mmol)。然后在75℃加熱該反應(yīng)混合物17小時(shí)并冷卻至室溫。用水稀釋該反應(yīng)混合物并用乙醚(5x)提取。用鹽水洗滌合并的醚提取物并用Na2SO4干燥。過濾掉Na2SO4并在減壓下濃縮該濾液，得到一種棕色的油狀物(1g)。使該油狀物經(jīng)快速層析(硅膠，2-5％甲醇在DCM中的梯度液)，得到標(biāo)題化合物，為一種蠟狀的棕色固體(1.64g，79％)。1HNMR(300MHz，DMSO-d6TFA振搖)δ1.44(s，9H)，4.53(s，2H)，8.71-8.78(m，2H)，8.81(s，1H)。
N-[(叔丁氧基)羰基氨基][7-氯-4-氧代-2-(吡咯烷基羰基)(3-氫喹啉基)]-N-(吡嗪-2-基甲基)甲酰胺在氮?dú)庀?，?-氯-4-氧代-2-(吡咯烷基羰基)氫喹啉-3-羧酸(實(shí)施例1，2.3g，7.2mmol)和無水THF(100ml)的攪拌混合物中加入CMC(4.56g，10.8mmol)。在攪拌20分鐘后，用(叔丁氧基)-N-[(吡嗪-2-基甲基)氨基]甲酰胺(1.6g，7.1mmol)和DMAP(46mg，0.4mmol)的THF(10ml)溶液處理該反應(yīng)混合物。在回流下攪拌該反應(yīng)混合物2天并冷卻至室溫。過濾該反應(yīng)混合物并用THF洗滌該濾餅。濃縮合并的濾液和洗液。得到一種棕色的泡沫狀物(4.9g)。使該泡沫狀物經(jīng)快速層析(硅膠，2％甲醇/DCM)，得到標(biāo)題化合物(3.1g，82％)。
7-氯-4-羥基-2-(吡嗪-2-基甲基)-1，2，5，10-四氫噠嗪并[4，5-b]喹啉-1，10-二酮甲磺酸鹽在氮?dú)庀?，向N-[(叔丁氧基)羰基氨基][7-氯-4-氧代-2-(吡咯烷基羰基)(3-氫喹啉基)]-N-(吡嗪-2-基甲基)甲酰胺(3.1g，5.9mmol)和無水THF(100ml)的攪拌混合物中加入甲磺酸(13.5ml，0.21mol)。攪拌該混合物過夜，過濾，并用THF洗滌收集的固體。用甲醇處理該固體并超聲處理該混合物1小時(shí)。通過過濾再次收集固體，用甲醇洗滌并在真空下于50℃干燥，得到標(biāo)題化合物(2.0g，80％)，為一種白色粉末，m.p.235-245℃；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ 2.38(CH3CO2H，s，3H)，5.27(s，2H)，7.44(dd，1H，J＝1.8，8.7Hz)，8.04(d，1H，J＝1.8Hz)，8.14(d，1H，J＝8.7Hz)，8.58(dd，2H，J＝2.4，7.5Hz)，8.63(s，1H)。C16H10ClN5O3·CH3SO3H·H2O計(jì)算值C，43.46；H，3.43；N，14.90；測(cè)得值C，43.28；H，3.34；N，15.17。實(shí)施例77-氯-4-羥基-2-(5-異噁唑啉基)甲基-1，2，5，10-四氫噠嗪并[4，5-b]喹啉-1，10-二酮N′-異噁唑-5-基甲基-肼羧酸叔丁酯在氮?dú)夥障?，?-溴甲基-異噁唑(1.62g，10mmol)、肼基甲酸叔丁酯(5.29g，40mmol)和碳酸鈉(2.76g，20mmol)在DMF(25ml)中的混合物加熱到80℃ 6小時(shí)。冷卻該混合物并使其在乙酸乙酯(100ml)和水(200ml)之間分配。用鹽水(3×50ml)洗滌該有機(jī)層并用MgSO4干燥。通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑。通過真空蒸餾(50mTorr，80℃)移去殘余的DMF和過量的肼基甲酸叔丁酯。使該殘余物經(jīng)層析(硅膠，1/1乙酸乙酯/己烷)，得到標(biāo)題化合物，為一種白色固體(1.01g，49％).1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ1.38(s，9H)，4.01(s，2H)，5.13(bs，1H)，6.38(s，1H)，8.38(s，1H)，8.48(s，1H)。
N′-[7-氯-4-羥基-2-(吡咯烷基-1-羰基)喹啉基-3-羧基]-N′-異噁唑-5-基甲基-肼羧酸叔丁酯向7-氯-4-氧代-2-(吡咯烷基羰基)氫喹啉-3-羧酸(實(shí)施例1，1.51g，4.7mmol)在THF(50ml)中的攪拌漿狀物中加入CMC(4.24g，10mmol)并攪拌該反應(yīng)物5分鐘。向該混合物中加入N′-異噁唑-5-基甲基-肼羧酸叔丁酯(1.0g，4.7mmol)和DMAP(0.06g，0.5mmol)的THF(10ml)溶液。加熱所述混合物至回流1.5小時(shí)，然后在室溫下放置16小時(shí)。過濾掉所述固體并用DCM(2×50ml)洗滌。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器蒸發(fā)合并的濾液至干。使該殘余的固體進(jìn)行層析(硅膠，1/9甲醇/DCM)，得到標(biāo)題化合物，為灰白色固體(2.09g，86％)，MS(Cl)m/z514/516。
7-氯-4-羥基-2-(5-異噁唑啉基)甲基-1，2，5，10-四氫噠嗪并[4，5-b]喹啉-1，10-二酮向N′-[7-氯-4-羥基-2-(吡咯烷-1-羰基)-喹啉-3-羧基]-N′-異噁唑-5-基甲基-肼羧酸叔丁酯(1.0g，1.94mmol)的THF(50ml)溶液中加入甲磺酸(5.2ml)。在18小時(shí)后通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑并通過加入水(100ml)使所述產(chǎn)物沉淀。通過真空過濾收集所述固體并用水(2×50ml)洗滌，然后在真空(50mTorr，30℃)下干燥16小時(shí)。將所述固體懸浮在乙醚(45ml)和甲醇(5ml)中并超聲10分鐘。通過真空過濾收集固體，用乙醚(2×30ml)洗滌，并在真空(500mTorr，30℃)下干燥18小時(shí)。得到標(biāo)題化合物，為一種黃色的固體(0.54g，81％)。1H NMR(300 MHz，DMSO-d6)δ5.27(s，2H)，6.44(s，1H)，7.45(dd，1H，Jo＝8.7Hz，Jm＝1.8Hz)，8.03(d，1H，Jm＝1.8Hz)，8.15(d，1H，Jo＝8.7Hz)，8.53(s，1H，Jm＝1.8Hz)，11.99(s，1H)，12.82(s，1H)。C15H9ClN4O4·0.4H2O計(jì)算值C，51.20；H，2.81；N，15.92；測(cè)得值C，51.48-51.33；H，2.79-2.77；N，15.60-15.57。實(shí)施例87-氯-4-羥基-2-(嘧啶-2-基甲基)-1，2，5，10-四氫噠嗪并[4，5-b]喹啉-1，10-二酮用按照Barnes，J.H.，等，Eur.J.Med.Chem.Chim.Ther.1988，23，211-216所述制備的4-氯甲基嘧啶作為原料，通過實(shí)施例7的方法合成標(biāo)題化合物。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ12.77(br s，1H)，9.12(d，J＝1.2Hz，1H)，8.74(d，J＝5.4Hz，1H)，8.15(d，J＝8.4Hz，1H)，8.05(d，J＝1.8Hz，1H)，7.45(dd，J＝2.1，8.7Hz，1H)，7.40(d，J＝5.1Hz，1H)，5.20(s，2H)。
實(shí)施例97-氯-4-羥基-2-(呋喃-2-基甲基)-1，2，5，10-四氫噠嗪并[4，5-b]喹啉-1，10-二酮N-1-氮雜-2-(2-呋喃基)乙烯基)(叔丁氧基)甲酰胺向肼基甲酸叔丁酯(131.5g，0.99mol)在己烷(1000ml)中的攪拌漿中加入2-糠醛(91.9g，0.95mol)?；亓魉鰸{狀物2.5小時(shí)，然后冷卻至室溫。過濾所產(chǎn)生的棕色固體，干燥，無須進(jìn)一步純化而用于下一步反應(yīng)(200g，99％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ1.52(s，9H)，6.45(dd，1H，J＝3.3，1.2Hz)，6.71(d，1H，J＝3.3Hz)，7.47(d，1H，J＝1.2Hz)，7.91(s，1H)。
(叔丁氧基)-N-[(2-呋喃基甲基)氨基]甲酰胺在一個(gè)一升、三頸圓底燒瓶上裝配一個(gè)附加漏斗、氮?dú)馊肟诤鸵粋€(gè)頂部機(jī)械攪拌器。在真空下干燥該設(shè)備并用穩(wěn)定的氮?dú)饬鳑_洗。將氫化鋰鋁(7.75g，0.20mol)和THF(30ml)裝入該燒瓶中。將N-1-氮雜-2-(2-呋喃基)乙烯基)(叔丁氧基)甲酰胺(20g，0.095mol)溶解于THF(250ml)，然后用30分鐘緩慢地將其加入到攪拌的氫化鋰鋁懸浮液中。通過用THF(2×30ml)沖洗將在附加漏斗中的任何殘余的物質(zhì)洗入該燒瓶中。攪拌該反應(yīng)物過夜，用冰浴冷卻，然后用飽和的Na2SO4水溶液小心地猝滅。過濾產(chǎn)生的混合物并用THF洗滌所收集的固體。濃縮合并的濾液和洗液至一種油狀物，用己烷(約600ml)攪拌該油狀物18小時(shí)。過濾產(chǎn)生的混合物并濃縮濾液，得到所需物質(zhì)，為一種黃色的油狀物(10.0g，50％).1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ1.46(s，9H)，3.99(d，2H，J＝4.9Hz)，4.21(br s，1H)，6.17(br s，1H)，6.24(d，1H，J＝3.0Hz)，6.32(dd，1H，J＝3.0，1.2Hz)，7.38(d，1H，J＝1.2Hz)。
(+/-)-N-[(叔丁氧基)羰基氨基][7-氯-4-氧代-2-(吡咯烷基羰基)(3-氫喹啉基)]-N-(2-呋喃基甲基)甲酰胺向7-氯-4-氧代-2-(吡咯烷基羰基)氫喹啉-3-羧酸(實(shí)施例1，26.99g，84.3mmol)在THF(1300ml)中的攪拌漿狀物中加入二異丙基碳化二亞胺(13.94g，110mmol)并攪拌該反應(yīng)物10分鐘。向該混合物中滴加(叔丁氧基)-N-[(2-呋喃基甲基)氨基]甲酰胺(22.9g，103mmol)的THF(200ml)溶液。在攪拌該反應(yīng)物18小時(shí)后，在真空下濃縮為一種棕色的焦油，用氯仿研磨該焦油，過濾所產(chǎn)生的混合物，用氯仿洗滌并干燥。所述物質(zhì)未經(jīng)純化用于下一步反應(yīng)(質(zhì)量約30g)。
7-氯-4-羥基-2-(2-呋喃基甲基)-1，2，5，10-四氫噠嗪并[4，5-b]喹啉-1，10-二酮向(+/-)-N-[(叔丁氧基)羰基氨基][7-氯-4-氧代-2-(吡咯烷基羰基)(3-氫喹啉基)]-N-(2-呋喃基甲基)甲酰胺(29.00g，56.3mmol)的THF(1000ml)攪拌溶液中加入甲磺酸(118ml)并在室溫下攪拌該反應(yīng)物18小時(shí)。將該反應(yīng)混合物傾入到3升冰水上并過濾所產(chǎn)生的混合物，得到一種灰白色固體。將該物質(zhì)溶解于熱THF(約1升)中，然后濃縮到原體積的一半。將產(chǎn)生的漿狀物傾入到冰水(2升)上，20分鐘后過濾該混合物。干燥所收集的物質(zhì)，得到標(biāo)題化合物，為一種白色固體(14.4g，74％，m.p.＞265℃).1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ5.08(s，2H)，6.37(d，1H，J＝3.0Hz)，6.42(dd，1H，J＝3.0，1.5Hz)，7.43(d，1H，J＝7.8Hz)，7.54(s，1H)，8.00(d，1H，J＝1.5Hz)，8.14(d，1H，J＝8.7Hz)。C16H10ClN3O4計(jì)算值C，55.91；H，2.93；N，12.23；測(cè)得值C，56.10；H，2.98；N，12.03。實(shí)施例107-氯-4-羥基-2-(呋喃-3-基甲基)-1，2，5，10-四氫噠嗪并[4，5-b]喹啉-1，10-二酮N-1-氮雜-2-(3-呋喃基)乙烯基)(叔丁氧基)甲酰胺向呋喃-3-甲醛(2.0g，21mmol)的THF(100ml)溶液中加入肼基甲酸叔丁酯(2.8g，21mmol)和濃HCl(5滴)。攪拌該溶液6小時(shí)并濃縮。用己烷研磨所產(chǎn)生的固體，得到標(biāo)題化合物(4.2g，20mmol，97％)，為一種桃色固體。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ10.77(br s，1H)，8.02(s，1H)，7.94(s，1H)，7.71(dd，J＝1.5，1.5Hz，1H)，6.77(d，J＝1.5Hz，1H)，1.45(s，9H).
(叔丁氧基)-N-[(3-呋喃基甲基)氨基]甲酰胺向N-1-氮雜-2-(3-呋喃基乙烯基)(叔丁氧基)甲酰胺(2.0g，9.5mmol)的甲醇(50ml)溶液中加入氰基氫硼化鈉(3.0g，48mmol)和乙酸(6ml)。加熱該溶液到65℃ 1小時(shí)，然后冷卻該混合物到室溫，用水猝滅并在真空下除去甲醇。用乙酸乙酯吸收該殘余物并用飽和的碳酸氫鈉、水和鹽水沖洗，然后用Na2SO4干燥。過濾并濃縮，用硅膠層析(4∶1己烷∶乙酸乙酯)純化該殘余物，得到標(biāo)題化合物(930mg，4.4mmol，46％)，為一種澄清的油狀物。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.26(br s，1H)，7.58(dd，J＝1.5，1.5Hz，1H)，7.53(s，1H)，6.42(d，J＝1.2Hz，1H)，4.64(brs，1H)，3.69(s，2H)，1.39(s，9H).
(叔丁氧基)-N-[[7-氯-4-氧代-2-(吡咯烷基羰基)(3-氫喹啉基)]-N-3-(呋喃基甲基)羰基氨基}甲酰胺向7-氯-4-氧代-2-(吡咯烷基羰基)氫喹啉-3-羧酸(實(shí)施例1，1.4g，4.4mmol)在THF(25ml)中的攪拌漿狀物中加入CMC(3.7g，8.8mmol)。攪拌下，向該攪拌的淡黃色混合物中加入(叔丁氧基)-N-[(3-呋喃基甲基)氨基]甲酰胺(930mg，4.4mmol)和N，N-二甲基氨基吡啶(80mg，660μmol)的THF(20ml)溶液。在N2下回流所產(chǎn)生的混合物3小時(shí)，然后冷卻并過濾。濃縮濾液，得到一種固態(tài)的黃色泡沫，在硅膠上層析(10％甲醇-CH2Cl2)該黃色泡沫，得到標(biāo)題化合物(2.1g，4.1mmol，93％)，為一種淺黃色固體。將該物質(zhì)直接用于下一步驟。
7-氯-4-羥基-2-(呋喃-3-基甲基)-1，2，5，10-四氫噠嗪并[4，5-b]喹啉-1，10-二酮在室溫下，向(叔丁氧基)-N-{[7-氯-4-氧代-2-(吡咯烷基羰基)(3-氫喹啉基)]-N-3-(呋喃基甲基)羰基氨基}甲酰胺(1.4g，2.8mmol)在THF(30ml)中的混合物中加入甲磺酸(7.2ml，110mmol)的THF(25ml)溶液。攪拌該溶液過夜，此時(shí)加入水使所述產(chǎn)物沉淀。收集該固體，用水和乙醚沖洗并在50ml 10％甲醇的乙醚溶液中超聲15分鐘。收集所產(chǎn)生的黃色固體，用乙醚沖洗并在30℃和50mTorr中干燥3小時(shí)，得到標(biāo)題化合物(750mg，2.1mmol，75％)，為一種淺黃色的固體。1H NMR(300 MHz，DMSO-d6)δ12.63(br s，1H)，11.91(s，1H)，8.13(d，J＝8.7Hz，1H)，8.02(d，J＝1.5Hz，1H)，7.65(s，1H)，7.61(d，J＝1.5Hz，1H)，7.43(dd，J＝1.8，8.7Hz，1H)，6.46(s，1H)，4.92(s，2H).C16H10N3O4Cl·0.1H2O計(jì)算值C，55.62；H，2.98；N，12.16；測(cè)得值C，55.67；H，3.15；N，11.77。實(shí)施例117-氯-4-羥基-2-(噻吩-2-基甲基)-1，2，5，10-四氫噠嗪并[4，5-b]喹啉-1，10-二酮用噻吩-2-甲醛作為原料，通過實(shí)施例4的方法合成標(biāo)題化合物。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ12.71(bs，1H)，11.91(s，1H)，8.14(d，J＝8.7Hz，1H)，8.02(s，1H)，7.42-7.45(m，2H)，7.10(d，J＝3.0Hz，1H)，6.98(dd，J＝3.6，5.1Hz，1H)，5.23(s，2H)。實(shí)施例127-氯-4-羥基-2-(噻吩-3-基甲基)-1，2，5，10-四氫噠嗪并[4，5-b]喹啉-1，10-二酮用噻吩-3-甲醛作為原料，通過實(shí)施例4的方法合成標(biāo)題化合物。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ12.64(br s，1H)，11.92(br s，1H)，8.14(d，J＝8.7，1H)，8.02(d，J＝1.5Hz，1H)，7.48-7.54(m，1H)，7.43(dd，J＝1.2，8.7，1H)，7.37(s，1H)，7.08(d，J＝4.5Hz，1H)，5.08(s，2H)。實(shí)施例137-氯-4-羥基-2-(苯并[b]噻吩-2-基甲基)-1，2，5，10-四氫噠嗪并[4，5-b]喹啉-1，10-二酮苯并[b]噻吩-2-甲醛在-78℃，向苯并[b]噻吩(10g，74.5mmol)的無水THF(12ml)溶液中加入65ml 1.6M在己烷中的正丁基鋰。10分鐘后，加入DMF(23ml，298mmol)。將該反應(yīng)物溫?zé)嶂潦覝?，然后回?小時(shí)。蒸發(fā)THF并將殘余物傾入1N HCl和冰中。用乙醚(2x)提取該酸性溶液。用1N HCl(3x)、飽和的NaHCO3(1x)、鹽水(1x)洗滌合并的乙醚提取物，然后用MgSO4干燥。過濾掉MgSO4并濃縮濾液至油狀物，用NaHSO3處理該油狀物。收集形成的固體，用NaHCO3水溶液處理，然后用DCM提取。用MgSO4干燥該DCM溶液并蒸發(fā)，得到標(biāo)題化合物，為一種黃色的油狀物(3.2g，26％產(chǎn)率)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.44(dd，1H，J＝6.9，7.2Hz)，7.51(dd，1H，J＝6.9，8.1Hz)，7.91(d，1H，J＝8.1Hz)，7.95(d，1H，J＝7.8Hz)，8.04(s，1H)，10.12(s，1H).
(叔丁氧基)-N-(1-氮雜-2-苯并[b]噻吩-2-基乙烯基)甲酰胺向苯并[b]噻吩-2-甲醛(3.2g，19.7mmol)和肼基甲酸叔丁酯(2.6g，19.7mmol)的乙醇(20ml)攪拌溶液中加入3滴濃HCl。在30分鐘后過濾該混合物，用乙醚洗滌該固體并在真空下干燥，得到標(biāo)題化合物(3.8g，70％產(chǎn)率)。1H NMR(300 MHz，CDCl3)δ1.54(s，9H)，7.30-7.36(m，2H)，7.40(s，1H)，7.71-7.74(m，1H)，7.78-7.81(m，1H)，7.89(s，1H)，8.31(br s，1H).
(叔丁氧基)-N-[(苯并[b]噻吩-2-基甲基)氨基]甲酰胺向(叔丁氧基)-N-(1-氮雜-2-苯并[b]噻吩-2-基乙烯基)甲酰胺(1.8g，6.5mmol)在THF(6ml)中的漿狀物中加入氰基氫硼化鈉(0.75g，11.9mmol)。滴加對(duì)甲苯磺酸(1.86g，9.8mmol)的THF(6ml)溶液。在攪拌過夜后，用乙酸乙酯稀釋該反應(yīng)物并用飽和的NaHCO3(1x)和飽和的NaCl(1x)洗滌。用K2CO3干燥該乙酸乙酯溶液。過濾掉K2CO3并在減壓下濃縮濾液。用飽和的NaHCO3處理該產(chǎn)生的固體過夜并用DCM提取。用Na2SO4干燥該DCM溶液。過濾掉Na2SO4并濃縮濾液，得到標(biāo)題化合物，為一種白色固體(1.7g，76％產(chǎn)率)。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ1.44(s，9H)，4.68(s，2H)，7.36-7.45(m，2H)，7.45(s，1H)，7.78-7.86(m，2H).
N′-苯并[b]噻吩-2-基甲基-N′-[7-氯-4-氧代-2-(吡咯烷-1-羰基)-1，4-二氫喹啉-3-羰基]肼羧酸叔丁酯在氮?dú)庀?，?-氯-4-氧代-2-(吡咯烷基羰基)氫喹啉-3-羧酸(實(shí)施例1，1.59g，5.0mmol)和無水THF(60ml)的攪拌混合物中加入CMC(3.19g，7.0mmol)。隨后加入(叔丁氧基)-N-[(苯并[b]噻吩-2-基甲基)氨基]甲酰胺(1.37g，5.0mmol)和二甲基氨基吡啶(27.8mg，0.21mmol)的THF(15ml)溶液。在回流下加熱該反應(yīng)物過夜并過濾該混合物。用層析(MeOH/CH2Cl2，5/95，v/v)純化濃縮的濾液，得到標(biāo)題化合物，為一種黃色的固體(771mg，24％產(chǎn)率)。
7-氯-4-羥基-2-(苯并[b]噻吩-2-基甲基)-1，2，5，10-四氫噠嗪并[4，5-b]喹啉-1，10-二酮在0℃、氮下，向N′-苯并[b]噻吩-2-基甲基-N′-[7-氯-4-氧代-2-(吡咯烷-1-羰基)-1，4-二氫喹啉-3-羰基]肼羧酸叔丁酯(760mg，1.3mmol)和無水THF(16ml)的攪拌混合物中加入甲磺酸(3.0ml，4.44g，46.2mmol)。在攪拌過夜后，蒸發(fā)THF并在冰浴中冷卻殘余物。加入水并收集產(chǎn)生的沉淀，用甲醇超聲處理并在真空下干燥，得到標(biāo)題化合物，為灰白色固體(470mg，88％產(chǎn)率)，m.p.＞300℃；1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ5.38(s，2h)，7.30-7.38(m，2H)，7.40(s，1H)，7.44(d，1H，J＝8.7Hz)，7.90(d，1H，J＝7.2Hz)，7.82(d，1H，7.2Hz)，8.06(s，1H)，8.15(d，1H，J＝8.7Hz)。C20H12ClN3O3S計(jì)算值C，58.61；H，2.95；N，10.25；測(cè)得值C，58.42；H，3.19；N，10.20。
實(shí)施例147-氯-4-羥基-2-(1，3-噻唑-2-基甲基)-1，2，5，10-四氫噠嗪并[4，5-b]喹啉-1，10-二酮(叔丁氧基)-N-[(1，3-噻唑-2-基甲基)氨基]甲酰胺向噻唑-2-甲醛(0.95g，8.42mmol)和肼基甲酸叔丁酯(1.17g，8.87mmol)的乙醇(15ml)攪拌溶液中加入1.10ml冰乙酸，隨后加入氰基氫硼化鈉(2.18g，34.7mmol)。在50℃加熱該反應(yīng)混合物并攪拌72小時(shí)。用2N NaOH(30ml)猝滅該反應(yīng)并用乙酸乙酯(3×30ml)提取該產(chǎn)生的溶液。用鹽水(40ml)洗滌合并的有機(jī)層，然后用Na2SO4干燥。過濾掉Na2SO4并通過硅膠層析(乙酸乙酯DCM，25∶75，v∶v)純化該濾液，得到標(biāo)題化合物(0.62g，32％產(chǎn)率)，為一種白色固體。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ1.38(s，9H)，4.15(d，2H，J＝3.9Hz)，5.34(d，1H，J＝3.9Hz)，7.63(d，1H，J＝3.3Hz)，7.70(d，1H，J＝3.3Hz)，8.42(br s，1H).
N-[(叔丁氧基)羰基氨基][7-氯-4-氧代-2-(吡咯烷基羰基)(3-氫喹啉基)]-N-(1，3-噻唑-2-基甲基)甲酰胺在氮?dú)庀拢?-氯-4-氧代-2-(吡咯烷基羰基)氫喹啉-3-羧酸(實(shí)施例1，0.90g，2.80mmol)和無水THF(60ml)的攪拌混合物中加入CMC(1.45g，3.42mmol)。隨后加入(叔丁氧基)-N-[(1，3-噻唑-2-基甲基)氨基]甲酰胺(0.5g，2.20mmol)和二甲基氨基吡啶(79.1mg，0.65mmol)的THF(15ml)溶液。在回流下加熱該反應(yīng)物過夜，在冷卻后，過濾該反應(yīng)混合物。用硅膠層析(MeOH∶CH2Cl2，5∶95，v∶v)純化該濃縮的濾液，得到標(biāo)題化合物，為一種黃色固體(0.97g，83％產(chǎn)率)。
7-氯-4-羥基-2-(1，3-噻唑-2-基甲基)-1，2，5，10-四氫噠嗪并[4，5-b]喹啉-1，10-二酮在0℃、氮?dú)庀?，向N-[(叔丁氧基)羰基氨基][7-氯-4-氧代-2-(吡咯烷基羰基)(3-氫喹啉基)]-N-(1，3-噻唑-2-基甲基)甲酰胺(760mg，1.3mmol)和無水THF(40ml)的攪拌混合物中加入甲磺酸(5.4ml，7.99g，83.2mmol)。在攪拌過夜后，蒸發(fā)THF并在冰浴中冷卻殘余物。加入水并收集產(chǎn)生的沉淀，用甲醇超聲處理。通過抽濾收集固體并在真空下干燥，得到標(biāo)題化合物，為一種白色固體(648mg，78％產(chǎn)率)，mp＞300℃。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ5.38(s，2H)，7.45(d，1H，J＝8.7Hz)，7.70(d，1H，J＝3.3)，7.76(d，1H，J＝3.3Hz)，8.04(s，1H)，8.15(d，1H，8.7Hz)。C15H10ClN4O3S·H2O·H3CSO3H計(jì)算值C，40.38；H，3.39；N，11.77；測(cè)得值C，40.63；H，2.98；N，11.39。實(shí)施例157-氯-4-羥基-2-(咪唑-2-基甲基)-1，2，5，10-四氫噠嗪并[4，5-b]喹啉-1，10-二酮N-(1-氮雜-2-咪唑-2-基乙烯基)(叔丁氧基)甲酰胺將2-咪唑甲醛(10.2g，106mmol)溶解于THF中。向該溶液中加入肼基甲酸叔丁酯，隨后滴入2滴濃鹽酸。攪拌該反應(yīng)物過夜，濃縮并用己烷研磨，得到標(biāo)題化合物，為一種白色固體(22g，99％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ1.47(s，9H)，7.08(s，2H)，7.92(s，1H)，10.93(brs，1H)，12.58(br s，1H).
(叔丁氧基)-N-[(咪唑-2-基甲基)氨基]甲酰胺在室溫下，將10％披鈀碳(0.50g)和N-(1-氮雜-2-咪唑-2-基乙烯基)(叔丁氧基)甲酰胺(3.0g，14.0mmol)在甲醇(40ml)和濃鹽酸(1.15ml，14.0mmol)中的混合物氫化(40psi)18小時(shí)。通過硅藻土過濾該反應(yīng)物并在減壓下蒸發(fā)濾液，得到一種油狀物。加入氫氧化鈉(5N，2.8ml)中和該油狀物，然后用乙酸乙酯(80ml)稀釋。用水(1×20ml)和氯化鈉(飽和水溶液，1×20ml)洗滌乙酸乙酯層，然后用Na2SO4干燥。移去乙酸乙酯，得到標(biāo)題化合物，為一種油狀物(2.42g，80％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ1.36(s，9H)，3.84(d，2H，J＝4.2Hz)，4.82(br s，1H)，6.91(s，2H)，8.25(br s，1H)，11.84(br s，1H).
N-[(叔丁氧基)羰基氨基][7-氯-4-氧代-2-(吡咯烷基羰基)(3-氫喹啉基)]-N-(咪唑-2-基甲基)甲酰胺將7-氯-4-氧代-2-(吡咯烷基羰基)氫喹啉-3-羧酸(實(shí)施例1，2.42g，7.54mmol)、(叔丁氧基)-N-[(咪唑-2-基甲基)氨基]甲酰胺(2.0g，9.43mmol)和CMC(4.14g，9.80mmol)在THF(50ml，無水)中的混合物回流18小時(shí)。過濾該反應(yīng)物并收集固體。用水，然后用乙醚洗滌該固體。在真空下干燥該物質(zhì)，得到標(biāo)題化合物，為一種白色固體(1.0g，25％)。
7-氯-4-羥基-2-(咪唑-2-基甲基)-1，2，5，10-四氫噠嗪并[4，5-b]喹啉-1，10-二酮向N-[(叔丁氧基)羰基氨基][7-氯-4-氧代-2-(吡咯烷基羰基)(3-氫喹啉基)]-N-(咪唑-2-基甲基)甲酰胺(1.0g，1.94mmol)的THF(30ml)攪拌溶液中加入甲磺酸(5ml)并攪拌該反應(yīng)物過夜。在真空下除去揮發(fā)物并向該殘余的油狀物中加入乙醚(200ml)。攪拌該混合物10分鐘，然后使其分為兩層，醚層和棕色的油層。傾出乙醚并向該棕色油中加入水(5ml)。短時(shí)間后，形成沉淀并通過真空過濾收集。用乙醚(3×20ml)洗滌該沉淀，然后在20ml 10/1的乙醚/甲醇中超聲15分鐘。過濾該物質(zhì)，用乙醚洗滌并在真空下干燥，得到標(biāo)題化合物(0.24g，25％)。1HNMR(300MHz，DMSO-d6)δ2.31(CH3SO3H)，5.41(s，2H)，7.42(d，1H，J＝8.7Hz)，7.67(s，2H)，7.99(s，1H)，8.15(d，1H，J＝8.7Hz)，12.7(br s，1H)，11.98(br s)，12.93(br s，1H)，14.28(br s，1H)。C15H10ClN4O3·1.6CH3SO3H計(jì)算值C，40.08；H，3.32；N，14.08；測(cè)得值C，40.37；H，3.12；N，14.34。生物功能試驗(yàn)試驗(yàn)A抑制[3H]-MDL105,519的結(jié)合化合物對(duì)NMDA受體甘氨酸點(diǎn)的結(jié)合可以通過測(cè)量受試化合物抑制氚化MDL105,519對(duì)帶有所述受體腦膜的結(jié)合的能力進(jìn)行評(píng)估。
大鼠腦膜在本試驗(yàn)中使用的大鼠腦膜從Analytical BiologicalServices Inc.獲得，或基本依照B.M.Baron等，J.Pharmacol.Exp.Ther.250，162(1989)的方法制備。簡(jiǎn)要地說，在0.32M蔗糖中均化來自雄性Sprague Dawley大鼠的包括腦皮層和海馬的新鮮腦組織并低速離心以使細(xì)胞膜和其它的細(xì)胞成分分離。然后用去離子水洗滌所述膜3次，隨后用0.04％Triton X-100處理。最后在50mM Tris檸檬酸鹽緩沖液、pH 7.4中洗滌該膜6次并在-80℃冷凍直到使用。MDL105,519(72Ci/mmol)購(gòu)自Amersham。冷的MDL105,519購(gòu)自Sigma/RBI?；疽勒誃.M.Baron等，J.Pharmacol.Exp.Ther.279，62(1996)所述如下進(jìn)行結(jié)合試驗(yàn)。在試驗(yàn)的當(dāng)天，在室溫下解凍腦膜并將其懸浮在50mM Tris檸檬酸鹽緩沖液、pH 7.4(“TAB”)中。為競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合，每毫升蛋白質(zhì)(用BioRad染料)采用75微克。本試驗(yàn)使用96孔平皿進(jìn)行。在室溫下，在250μl的總體積中用20μl各種濃度的化合物和1.2nM[3H]MDL105,519孵育膜30分鐘。用100μM的未標(biāo)記的MDL105,519測(cè)定非特異性結(jié)合。將未標(biāo)記的MDL105,519和化合物溶解于DMSO中作為12.5mM儲(chǔ)備溶液。在每個(gè)孔中最終的DMSO濃度保持在1％以下，發(fā)現(xiàn)該濃度不會(huì)改變結(jié)合的結(jié)果。在孵育后，通過用一個(gè)Packard收集器在GF/B Unifilter板上過濾移去未結(jié)合的[3H]MDL105,519。用冰冷的TAB(總體積1.2ml緩沖液)洗滌濾器四次。在室溫下干燥該板過夜并且在每孔中加入45μl MICROSCINT O后，在一個(gè)Packard TopCount上測(cè)量結(jié)合的放射活性。
人腦膜從Analytical Biological Services Inc.獲得人腦膜并按照對(duì)鼠膜的描述進(jìn)行試驗(yàn)。
數(shù)據(jù)分析用Microsoft Excel電子制表軟件和GraphPad Prizm軟件分析數(shù)據(jù)，化合物的效力表示為Ki(nM)。
試驗(yàn)B福爾馬林試驗(yàn)福爾馬林試驗(yàn)為評(píng)估化合物在大鼠中抑制福爾馬林誘導(dǎo)的感受傷害行為的能力的測(cè)試方法(D.Dubuisson，等，Pain 4，161-174(1977)；H.Wheeler-Aceto等，Psychopharmacology 104，35-44(1991)；T.J.Coderre，等，Pain 54，43-50(1993))。在該試驗(yàn)中，觀察福爾馬林誘導(dǎo)的行為的兩個(gè)不同的階段。第一階段反應(yīng)發(fā)生于0-5分鐘之間，由對(duì)注射進(jìn)入爪中的有害化學(xué)物質(zhì)(福爾馬林)的急性感受傷害引起。隨后是注射后5到15分鐘的靜息期。在靜息期后第二階段的反應(yīng)發(fā)生在15分鐘后并持續(xù)最長(zhǎng)可達(dá)60分鐘，由在灰質(zhì)后角的中樞神經(jīng)元的致敏作用引起。脊柱中的中樞神經(jīng)元的致敏作用增加有害物質(zhì)的傳入量并引起更強(qiáng)的疼痛干擾(barrage)傳輸?shù)酱竽X。因此，抑制第二階段反應(yīng)的抑制預(yù)示藥物作用的中樞機(jī)制。
福爾馬林試驗(yàn)的步驟如下將雄性大鼠放置在有機(jī)玻璃箱中并觀察30到45分鐘，以觀察它們的基礎(chǔ)活性。用媒介物或用不同劑量的試驗(yàn)化合物預(yù)處理動(dòng)物。給予動(dòng)物媒介物或試驗(yàn)化合物，3小時(shí)后在后爪的背側(cè)皮膚下注射0.05ml無菌的1％福爾馬林。對(duì)在第一階段期間(0-5分鐘)和第二階段期間(20-35分鐘)爪子退縮的次數(shù)(反應(yīng))打分并記錄。退縮反應(yīng)與鹽水對(duì)照組的平均評(píng)分比較并計(jì)算抑制百分率。ED50為在第一和第二階段反應(yīng)中化合物對(duì)感受傷害反應(yīng)產(chǎn)生50％抑制的劑量。第一階段反應(yīng)可以由作用于外圍的化合物和作用與中樞的化合物所抑制。第二階段反應(yīng)由中樞活性化合物所抑制。 Student’s t檢驗(yàn)用于統(tǒng)計(jì)分析以便確定化合物作用的顯著性。以產(chǎn)生反應(yīng)抑制％的劑量報(bào)告數(shù)據(jù)。試驗(yàn)C神經(jīng)痛模型(慢性壓縮傷害)用慢性壓縮傷害(“CCT”)模型測(cè)試化合物抗痛覺過敏的性質(zhì)。本試驗(yàn)為一個(gè)與神經(jīng)傷害有關(guān)的神經(jīng)病疼痛，所述神經(jīng)傷害可以由創(chuàng)傷和壓迫直接引起，或由各種疾病如感染、癌癥、代謝性疾病、毒素、營(yíng)養(yǎng)缺乏、免疫機(jī)能障礙和肌與骨骼的改變間接引起。在該模型中通過神經(jīng)結(jié)扎引起大鼠單側(cè)外周痛覺過敏(G.J.Bennett等，Pain 33，87-107(1988))。
程序上，用戊巴比妥鈉麻醉Sprague-Dawley大鼠(250-350g)并用鈍器解剖法通過股二頭肌在大腿中部水平暴露坐骨神經(jīng)。使一段鄰近坐骨三叉分支(trifucation)的神經(jīng)(大約7mm)游離組織并用鉻的腸縫線在四個(gè)位置結(jié)扎。在各結(jié)扎之間大約相隔1mm處使該縫合線打節(jié)。按層(in layer)縫合切口并讓動(dòng)物復(fù)原。用爪子退縮試驗(yàn)(K.Hargreaves等，Pain 32，77-88(1988))測(cè)量熱痛覺過敏。為了進(jìn)行該試驗(yàn)，使動(dòng)物習(xí)慣于在一個(gè)升高的玻璃地板上。對(duì)著后爪腳底中部(坐骨神經(jīng)區(qū)域)通過玻璃板安裝一個(gè)輻射的熱源，該熱源具有一個(gè)20秒斷流器(cut-off)以防損傷皮膚。記錄在兩個(gè)后爪中退縮反射反應(yīng)的延遲時(shí)間。
具有結(jié)扎神經(jīng)的受傷爪子與未受傷的或偽裝手術(shù)的爪子相比顯示更短的爪子退縮反應(yīng)的延遲時(shí)間。在口服給藥后的不同時(shí)間評(píng)估對(duì)試驗(yàn)化合物的反應(yīng)，以便測(cè)定化合物作用的開始和持續(xù)時(shí)間。當(dāng)進(jìn)行該試驗(yàn)時(shí)，CCI大鼠組每天3次口服接受媒介物或試驗(yàn)化合物共5天。每天在第一個(gè)日劑量給藥前10分鐘和服藥后2或3小時(shí)測(cè)量爪子退縮反應(yīng)時(shí)間。化合物的效力表示為相對(duì)于媒介物處理組動(dòng)物痛覺過敏減輕的平均百分率，如下計(jì)算 用多方式比較檢驗(yàn)(multiple means comparison test)(Dunnett’s test)進(jìn)行數(shù)據(jù)分析并且表示結(jié)果，化合物的效力表示為MED(最小有效劑量)，以mg/Kg/天表示，產(chǎn)生的痛覺過敏減輕百分率(％)在統(tǒng)計(jì)學(xué)上具有顯著意義。
表1顯示本發(fā)明的某些化合物的試驗(yàn)A、B和C的結(jié)果。在該表中未提供數(shù)據(jù)的地方，表示未進(jìn)行該試驗(yàn)。
表權(quán)利要求
1.一種治療感受疼痛的患者的方法，該方法包括給予改善疼痛有效量的根據(jù)結(jié)構(gòu)式I的任何化合物 其中A為(CH2)n，其中n具有選自0、1、2、3或4的值；D選自具有1、2或3個(gè)選自氧、氮或硫的環(huán)原子的5-元或6-元雜芳基基團(tuán)或其苯基衍生物，和R1為鹵代基。
2.一種根據(jù)權(quán)利要求1的方法，該方法包括給予改善疼痛有效量的根據(jù)結(jié)構(gòu)式I的化合物，其中D選自吡啶基、喹啉基、吡嗪基、吡二嗪基、呋喃基、苯并[b]呋喃基、咪唑基、噁唑基、噻吩基、苯并[b]噻吩基和噻唑基。
3.一種根據(jù)權(quán)利要求1的方法，該方法包括給予改善疼痛有效量的根據(jù)結(jié)構(gòu)式II的化合物，其中
4.一種根據(jù)權(quán)利要求3的方法，該方法包括給予改善疼痛有效量的根據(jù)結(jié)構(gòu)式II的化合物，其中D選自吡啶基、喹啉基、吡嗪基、吡二嗪基、呋喃基、苯并[b]呋喃基、咪唑基、噁唑基、噻吩基、苯并[b]噻吩基和噻唑基。
5.一種根據(jù)權(quán)利要求3的方法，該方法包括給予改善疼痛有效量的選自以下的化合物7-氯-4-羥基-2-(4-吡啶基甲基)-1，2，5，10-四氫噠嗪并[4，5-b]喹啉-1，10-二酮；7-氯-4-羥基-2-(3-吡啶基甲基)-1，2，5，10-四氫噠嗪并[4，5-b]喹啉-1，10-二酮；7-氯-4-羥基-2-(2-吡啶基甲基)-1，2，5，10-四氫噠嗪并[4，5-b]喹啉-1，10-二酮；7-氯-4-羥基-2-苯并[d]呋喃-2-基甲基-1，2，5，10-四氫噠嗪并[4，5-b]喹啉-1，10-二酮7-氯-4-羥基-2-(喹啉-4-基甲基)-1，2，5，10-四氫噠嗪并[4，5-b]喹啉-1，10-二酮7-氯-4-二甲基氨基甲酰基-2-吡啶-4-基甲基-1，2，5，10-四氫噠嗪并[4，5-b]喹啉-1，10-二酮7-氯-4-羥基-2-(吡嗪-2-基甲基)-1，2，5，10-四氫噠嗪并[4，5-b]喹啉-1，10-二酮7-氯-4-羥基-2-(5-異噁唑啉基)甲基-1，2，5，10-四氫噠嗪并[4，5-b]喹啉-1，10-二酮7-氯-4-羥基-2-(嘧啶-2-基甲基)-1，2，5，10-四氫噠嗪并[4，5-b]喹啉-1，10-二酮7-氯-4-羥基-2-(呋喃-2-基甲基)-1，2，5，10-四氫噠嗪并[4，5-b]喹啉-1，10-二酮7-氯-4-羥基-2-(3-呋喃基甲基)-1，2，5，10-四氫噠嗪并[4，5-b]喹啉-1，10-二酮7-氯-4-羥基-2-(噻吩-2-基甲基)-1，2，5，10-四氫噠嗪并[4，5-b]喹啉-1，10-二酮7-氯-4-羥基-2-(噻吩-3-基甲基)-1，2，5，10-四氫噠嗪并[4，5-b]喹啉-1，10-二酮7-氯-4-羥基-2-(苯并[b]噻吩-2-基甲基)-1，2，5，10-四氫噠嗪并[4，5-b]喹啉-1，10-二酮7-氯-4-羥基-2-(1，3-噻唑-2-基甲基)-1，2，5，10-四氫噠嗪并[4，5-b]喹啉-1，10-二酮7-氯-4-羥基-2-(咪唑-2-基甲基)-1，2，5，10-四氫噠嗪并[4，5-b]喹啉-1，10-二酮。
6.一種藥用組合物，該組合物包含改善疼痛有效量的根據(jù)結(jié)構(gòu)式I的化合物和藥學(xué)上可接受的賦形劑或稀釋劑 其中A為(CH2)n，其中n具有選自0、1、2、3或4的值；D選自具有1、2或3個(gè)選自氧、氮或硫的環(huán)原子的5-元或6-元雜芳基基團(tuán)或其苯基衍生物，和R1為鹵代基。
全文摘要
公開一種治療疼痛的方法，該方法包括給予改善疼痛有效量的按照結(jié)構(gòu)圖(I)的任意化合物，其中A、D和R
文檔編號(hào)A61K31/422GK1434714SQ00819119
公開日2003年8月6日 申請(qǐng)日期2000年12月19日 優(yōu)先權(quán)日1999年12月23日
發(fā)明者V·奧福德, T·M·巴雷, D·G·布朗, F·M·麥克拉倫, M·墨菲, R·A·烏爾巴尼克, 肖文華 申請(qǐng)人:阿斯特拉曾尼卡有限公司