專利名稱：一種新的免疫活性測定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明主要提供一種關(guān)于末梢血中淋巴球活動的新免疫療法。是關(guān)于新免疫療法中對人體免疫功能的測定方法。該新免疫療法更能詳細(xì)地對CTL活性、NK活性以及NKT活性和末梢血中的淋巴球活動的相關(guān)性進(jìn)行檢定。
背景技術(shù)：
用于有效預(yù)防及治療癌癥(malignant neoplasms)(cancer)的物質(zhì)，人們一直重視對癌細(xì)胞的直接作用。雖然已經(jīng)意識到免疫賦活劑對癌癥治療的作用，但是，作為免疫賦活劑制成的化合物其抗癌效果并不理想，即使通過單獨(dú)的免疫療法或者與化學(xué)療法相結(jié)合實(shí)施治療，也沒有出現(xiàn)非常理想的治療效果。
本發(fā)明人八木田醫(yī)學(xué)博士，首先采用了劃時代的治療癌癥的方法，研究了在活體內(nèi)誘發(fā)白介素12(IL-12)的物質(zhì)功能，發(fā)現(xiàn)香菇菌絲提取物具有以上功能，從而確立了新免疫療法(Novel Immunotherapy forcancer)(NITC)的治療方法。以前，IL-12雖然具有抗癌效果，但由于直接投于活體內(nèi)時，會生成副作用，患者非常痛苦。IL-12本身不能作為抗癌劑使用。但是，在八木田提交的報(bào)告中，含香菇菌絲體提取物的制劑在癌癥治療中取得了加快痊愈、延長患者生命的效果。即，八木田通過投食能在活體內(nèi)誘發(fā)IL-12有效量的香菇菌絲體提取物，達(dá)到了治療癌癥的目的(日本專利公開1996-139670號公報(bào))。
IL-12按TNFα→IFNγ→IL-12→CTL活性的順序，對殺傷性T細(xì)胞的活性化效果及增強(qiáng)效果發(fā)揮作用。即，IL-12的生成增強(qiáng)，就帶動殺傷性T細(xì)胞的活性化及增強(qiáng)效果，結(jié)果是得到了想得到的抗癌功效。
八木田認(rèn)為，除IL-12的生成增強(qiáng)的絲體外，NKT細(xì)胞活性化也有助于抗癌作用。谷口等發(fā)現(xiàn)NKT細(xì)胞中的Vα-24Vβ-11這種特異性T細(xì)胞抗原受體(TCT)能識別特異性糖脂抗原，即KRN7000(α-半乳糖神經(jīng)酰胺)。而且，喂食KRN7000的患癌老鼠，其NKT細(xì)胞活性增強(qiáng)，雖然沒有發(fā)現(xiàn)癌細(xì)胞消失，但可以證明癌細(xì)胞擴(kuò)散得到抑制。
八木田的報(bào)告還提到了NKT細(xì)胞中另一種受體，即NK細(xì)胞抗原受體(NKR-P1；自然殺傷細(xì)胞受體P1)(特集NKT細(xì)胞基礎(chǔ)和臨床最新醫(yī)學(xué)55卷4號2000年818～823頁)。八木田還發(fā)現(xiàn)，NKR-P1也與NKT細(xì)胞的活性化相關(guān)，其活性化的抗癌功效更強(qiáng)。
有的報(bào)告認(rèn)為，NK細(xì)胞與活體的抗癌功效有關(guān)。八木田證實(shí)，之前，NK細(xì)胞的活性和臨床抗癌效果沒有關(guān)系，IL-12的生成誘發(fā)量和NK細(xì)胞的活性具有完全相反的關(guān)系。從而對NK細(xì)胞在病人抗癌作用上的療效生成懷疑。

發(fā)明內(nèi)容
如前所述，本發(fā)明提供一種用于測定CTL活性、NKT活性、NK活性的新方法，使用該方法分析各個測定結(jié)果檢定的意義，來研究CTL活性、NKT活性、NK活性在癌癥治療中的意義，從而發(fā)明一種新免疫療法。
本發(fā)明能夠提供測定CTL活性、NKT活性、NK活性的新方法，使用該方法，分析各個測定結(jié)果的檢定意義，重新研究CTL活性、NKT活性及NK活性在癌癥治療中的意義，從而發(fā)明出新的免疫療法。
即，本發(fā)明由以下部分組成1.在對末梢血中的淋巴球至少進(jìn)行以下一項(xiàng)測定的新免疫療法中，人體免疫功能的測定方法1)CD8(+)穿孔蛋白生成能力2)CD3(-)CD161(+)3)CD3(-)CD161(+)穿孔蛋白生成能力4)CD3(+)CD161(+)5)CD3(+)CD161(+)穿孔蛋白生成能力2.各個測定意義如下的前項(xiàng)1的測定方法
1)CD8(+)穿孔蛋白生成能力測定意味的功能是測定CTL活性，2)CD3(-)CD161(+)測定意味的功能是測定NK細(xì)胞，3)CD3(-)CD161(+)穿孔蛋白生成能力的測定意味的功能是測定NK細(xì)胞的活性化，4)CD3(+)CD161(+)測定意味的功能是測定NKT細(xì)胞，5)CD3(+)CD161(+)穿孔蛋白生成能力測定意味的功能是測定NKT細(xì)胞的活性化。
3.包括測定CD8(+)穿孔蛋白生成能力的CTL活性劑的篩選方法。
4.一種新β-1，3葡聚醣，載有通過前項(xiàng)3篩選方法得到的CTL活性劑力。
5.一種CTL活性劑，包括通過前項(xiàng)3的篩選方法得到的β-1，3葡聚醣。
6.一種NK活性劑的篩選方法，包括CD3(-)CD161(+)穿孔蛋白生成能力測定。
7.一種新α-1，3葡聚醣，載有包括通過前項(xiàng)6篩選方法得到的NK活性劑。
8.一種NK活性劑，包括通過前項(xiàng)6的篩選方法得到的α-1，3葡聚醣。
9.一種NK細(xì)胞和NKT細(xì)胞活動情況的測定方法，其特征在于，同時測定前項(xiàng)1中的CD3(-)CD161(+)、CD3(-)CD161(+)穿孔蛋白生成能力、CD3(+)CD161(+)、CD3(+)CD161(+)穿孔蛋白生成能力。
10.一種NK活性劑或者NKT活性劑分別的篩選方法，包括基于NK細(xì)胞和NKT細(xì)胞活性呈相反關(guān)系的前項(xiàng)9的方法。
11.一種新α-1，3葡聚醣，載有通過前項(xiàng)10的篩選方法得到的NK活性劑或者NKT活性劑。
12.一種NK活性劑和NKT活性劑，包括通過前項(xiàng)10的篩選方法得到的α-1，3葡聚醣。
13.一種通過前項(xiàng)9測定方法、癌癥種類和NK細(xì)胞及NKT細(xì)胞動態(tài)之間關(guān)系的檢定方法。
14.前項(xiàng)13檢定的同時，包含用于治療前列腺癌的α-1，3葡聚醣的NK細(xì)胞活性劑。
15.前項(xiàng)13檢定的同時，包含用于肺癌的α-1，3葡聚醣的NK細(xì)胞活性劑。
16.前項(xiàng)13檢定的同時，包含與抗癌劑、放射線、及類固醇治療之一合用的α-1，3葡聚醣的NK細(xì)胞活性劑或者NKT細(xì)胞的活性劑。
17.將前項(xiàng)1～16中記載的信息載有在利用自然法則的媒介的商業(yè)用媒介。
18.利用前項(xiàng)17商業(yè)媒介的商業(yè)方法。


圖1表示誘發(fā)生成IL-12和CD8(+)穿孔蛋白(+)關(guān)系的全部病例(103例)的圖。
圖2表示誘發(fā)生成IL-12和CD8(+)穿孔蛋白(+)關(guān)系的CR+PR病例(23例)的圖。
圖3表示誘發(fā)生成IL-12和CD8(+)穿孔蛋白(+)關(guān)系的CR+PR+LNC病例(31例)的圖。
圖4表示誘發(fā)生成IL-12和CD8(+)穿孔蛋白(+)關(guān)系的LNC病例(10例)的圖。
圖5表示誘發(fā)生成IL-12和CD8(+)穿孔蛋白(+)關(guān)系的SNC病例(31例)的圖。
圖6表示誘發(fā)生成IL-12和CD8(+)穿孔蛋白(+)關(guān)系的NC病例(41例)的圖。
圖7表示誘發(fā)生成IL-12和CD8(+)穿孔蛋白(+)關(guān)系的PD病例(10例)的圖。
圖8表示誘發(fā)生成IL-12和CD8(+)穿孔蛋白(+)關(guān)系的初診病例(26例)的圖。
圖9表示誘發(fā)生成INFγ和CD8(+)穿孔蛋白(+)關(guān)系的全部病例(103例)的圖。
圖10表示誘發(fā)生成INFγ和CD8(+)穿孔蛋白(+)關(guān)系的CR+PR病例(26例)的圖。
圖11表示誘發(fā)生成INFγ和CD8(+)穿孔蛋白(+)關(guān)系的CR+PR+LNC病例(36例)的圖。
圖12表示誘發(fā)生成INFγ和CD8(+)穿孔蛋白(+)關(guān)系的LNC病例(36例)的圖。
圖13表示誘發(fā)生成INFγ和CD8(+)穿孔蛋白(+)關(guān)系的SNC病例(36例)的圖。
圖14表示誘發(fā)生成INFγ和CD8(+)穿孔蛋白(+)關(guān)系的NC病例(36例)的圖。
圖15表示誘發(fā)生成INFγ和CD8(+)穿孔蛋白(+)關(guān)系的PD病例(36例)的圖。
圖16表示誘發(fā)生成INFγ和CD8(+)穿孔蛋白(+)關(guān)系的初診病例(36例)的圖。
圖17表示基于傳統(tǒng)方法的NK細(xì)胞活性和CD3(-)CD161(+)關(guān)系的全部病例(98例)的圖。
圖18表示基于傳統(tǒng)方法的NK細(xì)胞活性和CD3(-)CD161(+)關(guān)系的CR病例(7例)的圖。
圖19表示基于傳統(tǒng)方法的NK細(xì)胞活性和CD3(-)CD161(+)關(guān)系的PR病例(6例)的圖。
圖20表示基于傳統(tǒng)方法的NK細(xì)胞活性和CD3(-)CD161(+)關(guān)系的CR+PR病例(13例)的圖。
圖21表示基于傳統(tǒng)方法的NK細(xì)胞活性和CD3(-)CD161(+)關(guān)系的LNC病例(15例)的圖。
圖22表示基于傳統(tǒng)方法的NK細(xì)胞活性和CD3(-)CD161(+)關(guān)系的SNC病例(13例)的圖。
圖23表示基于傳統(tǒng)方法的NK細(xì)胞活性和CD3(-)CD161(+)關(guān)系的NC病例(28例)的圖。
圖24表示基于傳統(tǒng)方法的NK細(xì)胞活性和CD3(-)CD161(+)關(guān)系的CR+PR+LNC病例(28例)的圖。
圖25表示基于傳統(tǒng)方法的NK細(xì)胞活性和CD3(-)CD161(+)關(guān)系的PD病例(24例)的圖。
圖26表示基于傳統(tǒng)方法的NK細(xì)胞活性和CD3(-)CD161(+)關(guān)系的初診病例(33例)的圖。
圖27表示基于傳統(tǒng)方法的NK細(xì)胞活性和CD3(-)CD161(+)穿孔蛋白(+)關(guān)系的全部病例(98例)的圖。
圖28表示基于傳統(tǒng)方法的NK細(xì)胞活性和CD3(-)CD161(+)穿孔蛋白(+)關(guān)系的CR+PR病例(13例)的圖。
圖29表示基于傳統(tǒng)方法的NK細(xì)胞活性和CD3(-)CD161(+)穿孔蛋白(+)關(guān)系的CR+PR+LNC病例(28例)的圖。
圖30表示基于傳統(tǒng)方法的NK細(xì)胞活性和CD3(-)CD161(+)穿孔蛋白(+)關(guān)系的NC病例(28例)的圖。
圖31表示基于傳統(tǒng)方法的NK細(xì)胞活性和CD3(-)CD161(+)穿孔蛋白(+)關(guān)系的PD病例(24例)的圖。
圖32表示基于傳統(tǒng)方法的NK細(xì)胞活性和CD3(-)CD161(+)穿孔蛋白(+)關(guān)系的初診病例(33例)的圖。
圖33表示TOG投與病例CD3(-)CD161(+)的變化情況的圖。分別表示全部病例(148例)、CR+PR病例(45例)、PD病例(60例)。
圖34表示CD3(+)CD161(+)和CD3(-)CD161(+)關(guān)系的全部病例(98例)的圖。
圖35表示CD3(+)CD161(+)和CD3(-)CD161(+)關(guān)系的CR+PR病例(13例)的圖。
圖36表示CD3(+)CD161(+)和CD3(-)CD161(+)關(guān)系的CR+PR+LNC病例(28例)的圖。
圖37表示CD3(+)CD161(+)和CD3(-)CD161(+)關(guān)系的NC病例(28例)的圖。
圖38表示CD3(+)CD161(+)和CD3(-)CD161(+)關(guān)系的PD病例(24例)的圖。
圖39表示CD3(+)CD161(+)和CD3(-)CD161(+)關(guān)系的初診病例(33例)的圖。
圖40表示基于傳統(tǒng)方法的NK細(xì)胞活性測定和CD3(+)CD161(+)穿孔蛋白(+)關(guān)系的全部病例(98例)的圖。
圖41表示基于傳統(tǒng)方法的NK細(xì)胞活性測定和CD3(+)CD161(+)穿孔蛋白(+)關(guān)系的CR+PR病例(13例)的圖。
圖42表示基于傳統(tǒng)方法的NK細(xì)胞活性測定和CD3(+)CD161(+)穿孔蛋白(+)關(guān)系的CR+PR+LNC病例(28例)的圖。
圖43表示基于傳統(tǒng)方法的NK細(xì)胞活性測定和CD3(+)CD161(+)穿孔蛋白(+)關(guān)系的NC病例(28例)的圖。
圖44表示基于傳統(tǒng)方法的NK細(xì)胞活性測定和CD3(+)CD161(+)穿孔蛋白(+)關(guān)系的PD病例(24例)的圖。
圖45表示基于傳統(tǒng)方法的NK細(xì)胞活性測定和CD3(+)CD161(+)穿孔蛋白(+)關(guān)系的初診病例(33例)的圖。
圖46表示CD3(+)CD161(+)穿孔蛋白(+)和CD3(-)CD161(+)穿孔蛋白(+)關(guān)系的全部病例(98例)的圖。
圖47表示CD3(+)CD161(+)穿孔蛋白(+)和CD3(-)CD161(+)穿孔蛋白(+)關(guān)系的CR+PR病例(13例)的圖。
圖48表示CD3(+)CD161(+)穿孔蛋白(+)和CD3(-)CD161(+)穿孔蛋白(+)關(guān)系的CR+PR+LNC病例(28例)的圖。
圖49表示CD3(+)CD161(+)穿孔蛋白(+)和CD3(-)CD161(+)穿孔蛋白(+)關(guān)系的NC病例(28例)的圖。
圖50表示CD3(+)CD161(+)穿孔蛋白(+)和CD3(-)CD161(+)穿孔蛋白(+)關(guān)系的PD病例(24例)的圖。
圖51表示CD3(+)CD161(+)穿孔蛋白(+)和CD3(-)CD161(+)穿孔蛋白(+)關(guān)系的初診病例(33例)的圖。
圖52作為抗癌劑、放射線及類固醇治療對免疫功能的影響，表示CD3(+)CD161(+)(23例)的推移圖。
圖53作為抗癌劑、放射線及類固醇治療對免疫功能的影響，表示CD3(-)CD161(+)(23例)的推移圖。
圖54作為抗癌劑、放射線及類固醇治療對免疫功能的影響，表示INFγ(26例)的推移圖。
圖55作為抗癌劑、放射線及類固醇治療對免疫功能的影響，表示IL-12誘發(fā)生成量(26例)的推移圖。
具體實(shí)施例方式
下面，詳細(xì)介紹本發(fā)明。本發(fā)明詳細(xì)說明書中所使用的技術(shù)或者科學(xué)用語，除非做出特殊定義，否則都表示本發(fā)明所屬領(lǐng)域中通常人們所理解的意思。
本發(fā)明主要是通過研討臨床結(jié)果和細(xì)胞因子之間的關(guān)系來實(shí)施。本發(fā)明人作為新免疫療法(NITC)，通過對病情惡化的晚期癌癥患者合用香菇菌絲體提取物和抑制血管新生之物質(zhì)(鯊魚軟骨)，來測定IL-12、IFNγ、其它各種標(biāo)記(物)。而且，在癌癥痊愈或者能保持較長時間不惡化的病例中發(fā)現(xiàn)CD8(+)穿孔蛋白生成與IL-12、IFNγ的生成呈較強(qiáng)的正比例關(guān)系。結(jié)果發(fā)現(xiàn)CD8(+)穿孔蛋白生成測定對于CTL活性根本的價值是具有相當(dāng)意義的。但是，CD8(+)細(xì)胞中包括了CTL(殺傷性T細(xì)胞)和抑制性T細(xì)胞(抑制免疫細(xì)胞)。即，細(xì)胞表示標(biāo)記是CD8的細(xì)胞有以上2種。現(xiàn)在，還不能以細(xì)胞表面標(biāo)記來對其進(jìn)行分類。CD8(+)穿孔蛋白也是一樣。如圖1至圖8所示，在癌癥痊愈或者長期保證不惡化的病例(圖CR+PR+及CP+PR+LNC)中，表示與Th1細(xì)胞因子的IFNγ及IL-12之間的正比關(guān)系；而在癌癥病情惡化的病例及短期內(nèi)不惡化的病例(圖中PD及SNC)中，表示反比關(guān)系。以上事實(shí)表明CR、PR以及LNC患者中的CD8(+)穿孔蛋白細(xì)胞即是CTL。相反，在SNC及PD病例中觀察到的CD8(+)穿孔蛋白細(xì)胞即是抑制性T細(xì)胞。即，Th1細(xì)胞因子發(fā)揮抗腫瘤性時，具體講，在生成10IU/ml以上的IFNγ或者生成7.8pg/ml的IL-12的環(huán)境內(nèi)的CD8(+)或者CD8(+)穿孔蛋白即是CTL；相反，在沒有生成10IU/ml以上的IFNγ或者生成7.8pg/ml的IL-12的環(huán)境內(nèi)的CD8(+)或者CD8(+)穿孔蛋白即是抑制性T細(xì)胞。所以，在研究CTL活性根本時，測定CD8(+)或者CD8(+)穿孔蛋白時，對IFNγ及/或者IL-12合并測定是非常重要的。
在發(fā)現(xiàn)上述現(xiàn)象后，CD8(+)穿孔蛋白生成能力的測定可適用于有用CTL活性劑的篩選方法。還發(fā)現(xiàn)，利用這種篩選方法能夠?qū)d有CTL活性劑力的β-1，3葡聚醣進(jìn)行特別規(guī)定。本發(fā)明確認(rèn)，具有β-1，3葡聚醣結(jié)構(gòu)的香菇絲體組成物制劑(如，ILX、ILY(株)東西醫(yī)藥研究所全部注冊)對CD8(+)穿孔蛋白生成能力的活性化有效，并再次確認(rèn)它們對CTL活性化有效的事實(shí)。另外，具有β-1，3葡聚醣結(jié)構(gòu)的化合物還有好多，如果將這種既知結(jié)構(gòu)和CD8穿孔蛋白生成能力測定結(jié)合起來，同業(yè)者就能很容易地對CTL活性劑進(jìn)行特定。
本發(fā)明從其與NKT細(xì)胞的關(guān)系重新確定了NK細(xì)胞的作用。為此，本發(fā)明人提供了NK細(xì)胞新的測定方法。即，CD3(-)CD161(+)的測定與已知的鉻釋放法得出的結(jié)果進(jìn)行對比，發(fā)現(xiàn)正確的NK細(xì)胞測定。另外，CD3(-)CD161(+)穿孔蛋白生成能力測定意味著NK細(xì)胞的活性化，而且，還發(fā)現(xiàn)這種活性化對前列腺線癌特別有效。而且，包括CD3(-)CD161(+)穿孔蛋白生成能力測定的方法作為NK活性劑的篩選方法非常有用。再者，本發(fā)明還確認(rèn)，具有α-1，3葡聚醣結(jié)構(gòu)的Nigerooligo糖、褐藻多糖硫酸酯等組成物制劑對CD3(-)CD161(+)穿孔蛋白生成能力的活性化有效，再次確認(rèn)了它們對NK細(xì)胞活性化有效。載有篩選方法制造的NK活化能力的新α-1，3葡聚醣作為癌化療藥有用，其它具有α-1，3葡聚醣結(jié)構(gòu)的化合物有很多，只要將這種已知結(jié)構(gòu)和CD3(-)CD161(+)穿孔蛋白生成能力的測定結(jié)合起來，業(yè)內(nèi)人士就能很容易地對NK活性劑進(jìn)行特殊規(guī)定。
還有，在本發(fā)明中，對CD3(-)CD161(+)、CD3(-)CD161(+)穿孔蛋白生成能力、CD3(+)CD161(+)、CD3(+)CD161(+)穿孔蛋白生成能力同時進(jìn)行測定，發(fā)現(xiàn)了進(jìn)行NK細(xì)胞和NKT細(xì)胞的變化情況測定方法的功能。即，本發(fā)明人利用該項(xiàng)測定進(jìn)行分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)NK細(xì)胞和NKT細(xì)胞的活性化都在上述具有α-1，3葡聚醣結(jié)構(gòu)的化合物作用下發(fā)揮功效。NK細(xì)胞和NKT細(xì)胞都具有共同的NKR-P1(CD161(+)表面標(biāo)記、NKR-P1受體。CD161(+)受體在α-1，3葡聚醣的作用下活性化。對于癌癥患者來說，NK細(xì)胞在1～2個月的活性化后，其活性開始下降，NKT細(xì)胞在3～4個月的時間內(nèi)呈活性化。另外，NK細(xì)胞和NKT細(xì)胞的活性化兩者呈反比關(guān)系，即，如果NK細(xì)胞活性化，則NKT細(xì)胞受到抑制；NKT細(xì)胞活性化時，則NK細(xì)胞受到抑制。這樣，兩者呈相互補(bǔ)充的關(guān)系，應(yīng)根據(jù)癌癥的種類、患者適合性，如患者的免疫功能情況、抗化療藥劑的服用時期、以及用于治療的α-1，3葡聚醣結(jié)構(gòu)等，來選擇使用抗化療藥劑。本發(fā)明利用上述測定方法，提供能區(qū)別包括上述測定方法的NK活性劑或者NKT活性劑的篩選方法。本發(fā)明確認(rèn)，具有α-1，3葡聚醣結(jié)構(gòu)的Nigerooligo糖、褐藻多糖硫酸酯、以及/或者紫菜為代表的紫菜等組成物制劑有用。這樣，通過這種篩選方法得到的NK活化能力或者NKT活化能力，載有上述能力的新α-1，3葡聚醣作為抗化療藥劑非常有效。另外，具有其它α-1，3葡聚醣結(jié)構(gòu)的化合物還有很多，只要將這些已知結(jié)構(gòu)和CD3(-)CD161(+)、CD3(-)CD161(+)穿孔蛋白生成能力、CD3(+)CD161(+)、CD3(+)CD161(+)穿孔蛋白生成能力測定結(jié)合起來，業(yè)內(nèi)人士就能很容易地對NK活性劑或者NKT活性劑進(jìn)行特殊規(guī)定。而且，CD161(+)還意味著對NK細(xì)胞及NKT細(xì)胞共同的受體NKR-P1產(chǎn)生作用。
利用本發(fā)明介紹的測定方法，對癌癥種類和NK細(xì)胞及NKT細(xì)胞的變化情況的關(guān)系進(jìn)行檢定，發(fā)現(xiàn)NK細(xì)胞可以有效治愈的癌癥包括前列腺癌和部分肺癌及部分胃癌；NKT細(xì)胞可以有效治愈的癌癥包括大部分肺癌及部分胃癌。另外，證明中間型可分類為乳腺癌、及大腸癌。而且，含有α-1，3葡聚醣的NK細(xì)胞活性劑對前列腺癌及部分肺癌、部分胃癌有特異性功效。另一方面，含有α-1，3葡聚醣的NKT細(xì)胞活性劑對于大部分的肺癌及部分胃癌具有特異性功效。
如上所述，通過單獨(dú)或者組合合作本發(fā)明的測定方法，能夠測定癌癥患者的免疫功能，根據(jù)測定結(jié)果和癌癥種類，來選擇有效的治療方法及治療用藥及醫(yī)藥組成物，能得到比傳統(tǒng)療法更為有效的癌癥治療效果。
另外，通過本發(fā)明測定方法，還能夠測定能識別CTL、NK細(xì)胞、NKT細(xì)胞的各種細(xì)胞特征及各種標(biāo)記等遺傳因子，如CD3、CD8、CD161、穿孔蛋白、IL-12、IFNγ等遺傳因子。也能得到與本發(fā)明測定方法同等的結(jié)果及效果。即，本發(fā)明的范圍包括，測定上述遺傳因子、與本發(fā)明相關(guān)的測定方法、與本發(fā)明相關(guān)的篩選方法及通過該篩選方法得到的物質(zhì)等。
本發(fā)明人還利用本發(fā)明介紹的測定方法對NK細(xì)胞的活性化、NKT細(xì)胞的活性化和抗癌劑、放射線、類固醇治療并用的影響進(jìn)行了觀察。結(jié)果在CTL活性化上有重大的影響，在NK細(xì)胞及NKT細(xì)胞的活性化方面，對抗癌劑、放射線及類固醇治療并用的影響在通常的服用方法、服用量上沒有出現(xiàn)。這說明，使用NK細(xì)胞活性劑及NKT細(xì)胞活性劑治療癌癥時，不僅可將其與抗癌劑、放射線及類固醇治療并用，且并用后還能得到更好的抗癌功效。
抗腫瘤免疫能力與2種免疫系統(tǒng)有關(guān)，其一是，①TNFα-(腫瘤壞死因子)→IFNγ→IL-12→殺傷性T細(xì)胞(CTL)系統(tǒng)(CTL活性化)；其二是，②NKT細(xì)胞活性化系統(tǒng)或者NK細(xì)胞活性化系統(tǒng)。按照傳統(tǒng)的新免疫療法(NITC)，上述兩個系統(tǒng)具有相同的治療功效。即，確認(rèn)有如下病例上述IL-12→殺傷性T細(xì)胞活性→凋亡系統(tǒng)呈活性化的結(jié)果是得到治療功效的病例和上述②NKT細(xì)胞活性化系統(tǒng)或者NK細(xì)胞活性化系統(tǒng)呈活性化的結(jié)果是得到治療功效的病例。
進(jìn)行抗癌劑、放射線或者類固醇并用療法時，新發(fā)現(xiàn)在上述2種免疫系統(tǒng)中，TNFα-(腫瘤壞死因子)→IFNγ→IL-12→殺傷性T細(xì)胞(CTL)系統(tǒng)明顯受到影響；另一方面，NKT細(xì)胞活性化系統(tǒng)或者NK細(xì)胞活性化系統(tǒng)完全沒有受到影響。
根據(jù)這種現(xiàn)象，重新組合成癌癥治療方法，這就是本發(fā)明的另一種實(shí)施方式。即，將抗癌劑、放射線、或者類固醇并用療法用于癌癥治療時，如果上述②的免疫系統(tǒng)強(qiáng)大，那么并用療法就是可以實(shí)施的，治療效果也會很好。但，如果上述②的免疫系統(tǒng)下降，只有上述①的免疫系統(tǒng)變強(qiáng)的話，那么就可以認(rèn)為為并用療法是失敗的。這時，就有必要服用本發(fā)明介紹的NKT細(xì)胞或者NK細(xì)胞的活性化物質(zhì)α-1，3葡聚醣(α-1，3立體結(jié)構(gòu)的糖類物質(zhì))，即并用強(qiáng)化上述①的免疫系統(tǒng)的α-1，3葡聚醣。當(dāng)然，在喂食抗癌劑時，必須符合不影響上述①的免疫系統(tǒng)的喂食法--低濃度化學(xué)療法，即5FU、UFT、嘧福祿、氟鐵龍、CDDP(5ug～10ug)的低濃度及泰索帝或者紫杉醇、阿霉素、絲裂霉素、CPT-11等低濃度抗癌劑的喂食方法等。另外，同樣在放射線療法中，必須符合低容量放射；在類固醇療法中，需選擇低濃度喂食等。
所以，在進(jìn)行抗癌劑、放射線、或者類固醇療法時，必須對接受上述療法的患者的各種免疫能力進(jìn)行測定。根據(jù)測定結(jié)果，上述②的系統(tǒng)免疫能力增強(qiáng)時，就有必要喂食應(yīng)維持這種狀態(tài)的、具有NKT細(xì)胞或者NK細(xì)胞活化能力的物質(zhì)，即具有α-1，3立體結(jié)構(gòu)的糖類物質(zhì)。上述②系統(tǒng)的免疫力下降時，就有必要大量喂食或者直接體內(nèi)投與具有α-1，3立體結(jié)構(gòu)的糖類物質(zhì)，如通過注射投與。另外，只有上述①的系統(tǒng)免疫能力起作用時，就有必要投與不對上述①的免疫能力產(chǎn)生影響的抗癌劑，即通過低濃度投與或者抗癌劑投與來達(dá)到迅速恢復(fù)上述①免疫系統(tǒng)的上述①免疫系統(tǒng)強(qiáng)化，即大量投與IL-12誘發(fā)物質(zhì)。
從癌癥患者中篩選出樣本，測定對每個癌癥種類起作用的相應(yīng)標(biāo)記，然后按不同癌組織及/或者組織類型對所測定的值進(jìn)行分析，來對不同癌組織及/或者組織類型選擇不同處方。以上信息提供了這種特征的癌檢查方法、診斷方法及治療方法。
而且，只要將這些信息負(fù)載到利用自然法則的媒介物上，就成為商業(yè)媒介物。另外，這些商業(yè)媒介物提供有用的商業(yè)方法。
α-1，3立體結(jié)構(gòu)的糖類物質(zhì)可舉出如Nigerooligo糖(STO)、褐藻多糖硫酸酯及硫酸半乳糖寡糖等。
Nigerooligo糖是含有3-O-α--D-吡喃葡萄糖基-D-葡萄糖基構(gòu)成單位的糖類。具有代表性的有，黑曲霉糖、32-O-a-d-glucosyl-d-maltose、Nigerosyltose等。
另外，市場上銷售的Nigerooilgo糖還包括Nigerooilgo糖液糖(銷售商·武田食品工業(yè)株式會社)。其含有的主要Nigerooilgo糖是，①黑曲霉糖α--D-GLcp-(1，3)-D-Glc②32-O-a-d-glucosyl-d-maltoseα--D-Glcp-(1，3)-α--D-Glcp-(1，4)-D-Glc③Nigerosyltoseα--D-Glcp-(1.3)-α--D-Glcp-(1，4)-α--D-Glcp-(1，4)-D-Glc(Glc指葡萄糖，p指吡喃糖)。
褐藻多糖硫酸酯狹義上是指巖藻糖的2至6分子上結(jié)合硫酸1分子形成的含有硫酸巖藻糖多糖類。其中含有木糖或者糖醛酸的褐藻多糖硫酸酯樣多糖體在食品領(lǐng)域稱之為褐藻多糖硫酸酯。褐藻多糖硫酸酯，可通過粉碎海帶，切成碎屑，提取其中的水溶液成分后，通過離心分離將提取殘?jiān)蛛x，通過限外過濾去除碘及氯化納等低分子物質(zhì)，再進(jìn)行凍結(jié)干燥化處理，制成制劑。
褐藻多糖硫酸酯包括褐藻類褐藻多糖硫酸酯，如海菜(一種類似于海帶的海菜)提取的褐藻多糖硫酸酯及Cladosiphon okamuranus提取褐藻多糖硫酸酯等。海菜等褐藻類海帶科提取的褐藻多糖硫酸酯至少有以下3種，褐藻多糖硫酸酯、F-褐藻多糖硫酸酯(α--L-巖藻糖的聚合物)、U-褐藻多糖硫酸酯(β-D--葡萄糖醛酸和α--D-甘露糖為主鍵，側(cè)鍵為α--L-巖藻糖)，所有的褐藻多糖硫酸酯，巖藻糖都經(jīng)過了硫酸鹽化。
硫酸半乳糖寡糖有株式會社白子制的紫菜(Poryphyra Yezaensis)提取物。該提取物主要成分是α-1，3結(jié)合的半乳聚糖硫酸的半乳糖寡糖和α-1，3結(jié)合及β-1，4結(jié)合形成的半乳聚糖硫酸的半乳糖寡糖。
本發(fā)明介紹的CTL活性劑、NK活性劑、NKT活性劑，在使用本發(fā)明介紹的測定方法的同時，選擇各自的適用方法，可有效治療肺癌(肺扁平上皮癌、肺腺癌、小細(xì)胞肺癌)、胸腺瘤、甲狀腺癌、前列腺癌、腎癌、膀胱癌、結(jié)腸癌、直腸癌、食道癌、盲腸癌、尿道癌、乳腺癌、子宮頸瘤、腦腫瘤、舌癌、咽喉癌、鼻腔癌、喉頭癌、胃癌、肝癌、膽管癌、精巢癌、卵巢癌、子宮癌、轉(zhuǎn)移性骨癌、惡性黑色瘤、骨肉瘤、惡性淋巴瘤、漿細(xì)胞瘤、脂肪肉瘤等，但并不局限于以上癌癥。
本發(fā)明介紹的CTL活性劑(IL-12生成誘發(fā)劑、INFγ生成誘發(fā)劑)、NK活性劑、NKT活性劑，用于以本發(fā)明的測定方法所得結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)，誘發(fā)或者增強(qiáng)其活性化，并進(jìn)一步維持其活性化的處方。即，基于以上標(biāo)準(zhǔn)，選擇誘發(fā)或者增強(qiáng)其活性化，再就是能夠維持其活性化的投與量及投與期間。具體來說，投與量的標(biāo)準(zhǔn)是，具有NK活性劑或者NKT活性劑的α-1，3葡聚醣結(jié)構(gòu)的化合物1g～40g/天左右，最好是5g～20g/天左右；具有CTL活性劑(IL-12生成誘發(fā)劑、INFγ生成誘發(fā)劑)的β-1，3葡聚醣結(jié)構(gòu)的化合物1g～10g/天左右，最好是3g～6g/天左右。另外，投與期間一般為10天～24個月，投與頻率為1～3次/天，最好是連續(xù)幾天投與。而且，CTL活性劑、NK活性劑、NKT活性劑最好是口服攝取。當(dāng)然，也可以通過減少投與量，將其制成可以非口服的質(zhì)量，從而實(shí)現(xiàn)非口服攝取(包括靜脈或者肌肉注射等)。
細(xì)胞及各種標(biāo)記的測定方法如下所示。
(NKT細(xì)胞的測定)(NK細(xì)胞的測定)(CD8的測定)具有NKR——P1的NKT細(xì)胞測定可通過測定NKT細(xì)胞的表面存在的特異性細(xì)胞表面抗原(CD3及CD161)來進(jìn)行。具體地講，對末梢血中的淋巴球檢定CD3為陽性而且CD161也呈陽性(CD3+CD161+)的細(xì)胞。即，使用單克隆抗體，利用流式細(xì)胞儀的TWO COLOR檢查對NKT細(xì)胞的表面抗原CD3及CD161進(jìn)行測定。這里所指的NKT細(xì)胞被活性化，是指淋巴球中(CD3+CD161)NKT細(xì)胞的比例在10％以上，最好是在16％以上。所謂NKT細(xì)胞活性化功能表示能使NKT細(xì)胞比例增加10％以上，最好是16％以上的功能，或者NKT細(xì)胞比例比投與物質(zhì)前增加更多的功能。
同樣，所謂(CD3-CD161+)是指CD3呈陰性，而且CD161呈陽性的細(xì)胞檢定。本發(fā)明確認(rèn)，這種方法對NK細(xì)胞測定有效。
所謂CD8+是指檢定CD8呈陽性的細(xì)胞。本發(fā)明確認(rèn)，這種方法對CTL活性測定有效。
在實(shí)施例中，對患者血液中細(xì)胞，將細(xì)胞表面抗原CD3、CD161、CD8區(qū)分為陽性、陰性，通過使用流式細(xì)胞儀的TWO COLOR檢查對各種細(xì)胞的比例進(jìn)行常法測定。這時，針對CD3、CD161、CD8的單克隆抗體分別使用COALTAR公司生產(chǎn)或者BECTON DICKNSON公司生產(chǎn)的產(chǎn)品。
(穿孔蛋白生成細(xì)胞的測定)關(guān)于末梢血中的淋巴球，通過使用流式細(xì)胞儀的THREE COLOR檢查對細(xì)胞表面抗原為CD3、CD8、CD161中兩種和穿孔蛋白進(jìn)行常法測定。具體地講，在提取的血液內(nèi)添加固定液，進(jìn)行固定，添加膜透過液后再加入穿孔蛋白抗體(Pharmingen公司生產(chǎn))，使其發(fā)生反應(yīng)，接著，加入PRE-Cy5標(biāo)識二次抗體(DAKO公司生產(chǎn))，使其發(fā)生反應(yīng)，接著再加入CD3-PE(Coulter 6604627)抗體及抗CD161-FITC(B-D)抗體，使其發(fā)生反應(yīng)，最后，使用流式細(xì)胞儀進(jìn)行測定。該穿孔蛋白生成有意義表示NK細(xì)胞或者NKT細(xì)胞被分別活性化。圖中縮略語表示為PERF。
(現(xiàn)有的NK細(xì)胞活性測定方法)現(xiàn)有的方法是鉻釋放法(在標(biāo)識為51Cr的標(biāo)的細(xì)胞(K-562)內(nèi)加入效應(yīng)細(xì)胞(NK細(xì)胞)進(jìn)行培養(yǎng)，通過測定因標(biāo)識細(xì)胞影響而游離的51Cr，計(jì)算出活性值)(Med Technol 21(7)574～580(1993))。
(調(diào)制用于測定細(xì)胞因子的試劑)首先，從血液中分離調(diào)制出單核細(xì)胞部分。將肝素加末梢血用磷酸緩沖生理鹽水(Phosphate Bufferde Saline)(PBS)稀釋2倍，進(jìn)行混和，然后，復(fù)層到Ficoll-Conray液(比重1.077)上，在400G的作用下，進(jìn)行20分鐘的離心(沉淀)，提取單核細(xì)胞部分。洗凈后，加入RPMI-1640培養(yǎng)基(添加10％的牛胎兒血清(FBS))，將細(xì)胞數(shù)調(diào)制成1×106個。在調(diào)制好的細(xì)胞懸浮液200ul中加入Phytohemagglutinin公司(DIFCO公司制造)的植物血球凝集素，調(diào)配成濃度為20ug/ml。用96孔Microplate在5％CO2、37℃環(huán)境下培養(yǎng)24小時，制成測定該培養(yǎng)好的細(xì)胞溶液中細(xì)胞因子的試料。
(IL-12的測定)IL-12量的測定，可利用臨床、生化檢查?？墒褂肦&DSYSTEMS公司及MBL公司生產(chǎn)的基于酶免疫測定方法(ELISA)的測定試劑盒。這里使用的是R&DSYSTEMS公司生產(chǎn)的測定試劑盒。分別在96孔microplate的各孔內(nèi)注入測定用稀釋液Assay Diluent RD1F 50ul、標(biāo)準(zhǔn)液(standard)或者實(shí)施例1中調(diào)制的試料200ul，之后，在室溫狀態(tài)下靜置2小時，使其發(fā)生反應(yīng)。然后，分別注入200ul的辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)識抗IL-12抗體，室溫狀態(tài)下靜置2小時。清除各孔內(nèi)的反應(yīng)液，沖洗3次，分別注入200ul的顯色基質(zhì)溶液，在室溫狀態(tài)下靜置20分鐘，再分別注入50ul的酶反應(yīng)終止溶液。作為與550nm進(jìn)行對比，用Emax(和光純藥株式會社制造)測定450nm時各孔的吸光度。IL-12量表示為pg/ml。這里所說的IL-12生成誘發(fā)功能是指在刺激作用下，末梢血中單核細(xì)胞部分生成的IL-12的量增強(qiáng)到7.8pg/ml以上的功能或者比投與物質(zhì)前的IL-12生成量增強(qiáng)的功能。
(IFNγ測定)IFNγ測定使用BioSource Europe S.公司的IFNγEASIA試劑盒)，通過酶免疫測定方法(EIA法)測定。即，各別在96孔microplate的各孔內(nèi)注入標(biāo)準(zhǔn)液(STANDARD)或者上述調(diào)制好試料2倍稀釋液50ul，注入50ul的HRP標(biāo)識抗IFN-γ抗體，然后保持振蕩，在室溫狀態(tài)下使其反應(yīng)2個小時。清除各孔的反應(yīng)液，沖洗3次，分別注入200ul的顯色基質(zhì)溶液，保持振蕩，在室溫狀態(tài)下反應(yīng)15分鐘，再分別注入50ul的酶反應(yīng)終止溶液。作為與630nm進(jìn)行對比，用Emax(和光純藥株式會社制造)測定490nm時各孔的吸光度。IFNγ量表示為IU/ml。
實(shí)施例下面，將通過實(shí)施例，具體介紹本發(fā)明。但，本發(fā)明并不僅僅局限于以下所舉的例子。
實(shí)施例1根據(jù)各個推薦處方，向患者投與ILX((株)東西醫(yī)藥研究所)、鯊魚軟骨(seishin企業(yè))及α-1，3結(jié)構(gòu)的糖類(Nigerooligo糖)。圖中的CR、PR、LNC、SNC、NC、PD按癌癥治療中通常的分類實(shí)施。圖1～8表示103病例中IL-12生成誘發(fā)量(pg/ml)(Y軸)和CD8(+)穿孔蛋白(+)的細(xì)胞率(％)(X軸)的關(guān)系。圖1全部、圖5的SNC、圖6的NC、圖7的PD、圖8的初診中，兩者之間的關(guān)系沒有顯現(xiàn)。但在圖2(CR+PR)、圖3(CR+PR+LNC)、圖(LNC)的治療有效例子中，兩者之間的關(guān)系得以確認(rèn)。圖9～16，表示103病例中INFγ生成誘發(fā)量(IU/ml)(Y軸)和CD8(+)穿孔蛋白(+)的細(xì)胞率(％)(X軸)的關(guān)系。圖9全部、圖13的SNC、圖14的NC、圖15的PD、圖16的初診中，沒有發(fā)現(xiàn)兩者之間的關(guān)系，圖10(CR+PR)、圖11(CR+PR+LNC)、圖12(LNC)的治療有效例子中，兩者之間的關(guān)系得以確認(rèn)。結(jié)果是，IL-12誘發(fā)生成及INFγ生成誘發(fā)與CD8(+)穿孔蛋白(+)測定系統(tǒng)相同。即，證明CD8(+)穿孔蛋白(+)測定系統(tǒng)意味著CTL活性化測定。
實(shí)施例2與實(shí)施例1相同的處置患者群(98病例)，研究NK活性測定方法(傳統(tǒng)方法)和本發(fā)明的CD(-)CD161(+)測定的意義。圖17～26表示NK細(xì)胞活性(％)和CD3(-)CD161(+)(％)的關(guān)系；圖27～32表示NK活性(％)和CD3(-)CD161(+)P(+)[P(+)表示穿孔蛋白生成](％)的關(guān)系；結(jié)果是，傳統(tǒng)方法的NK活性測定與CD3(-)CD161(+)及CD3(-)CD161(+)穿孔蛋白(+)的測定系統(tǒng)相同，并證明CD3(-)CD161(+)的測定表示NK活性化測定。
實(shí)施例3選擇與實(shí)施例1相同的處置患者群(148病例)，特別是對于根據(jù)推薦處置投與α-1，3結(jié)構(gòu)化合物Nigerooligo糖(TOG)病例，測定其CD3(-)CD161(+)，對TOG投與開始前后進(jìn)行比較，并將有效例子和無效例子進(jìn)行比較。圖33是CR+PR病例的有效例子，表示CD3(-)CD161(+)顯示為高值的情況。即，發(fā)現(xiàn)α-1，3結(jié)構(gòu)的糖類能有助于NK細(xì)胞的活性化。
實(shí)施例4選擇與實(shí)施例1相同的處置患者群(98病例)，研究NK細(xì)胞活性[傳統(tǒng)方法或者本發(fā)明介紹的CD3(-)CD161(+)測定]和NKT細(xì)胞活性[CD3(+)CD161(+)]的意義。圖34～39表示CD3(-)CD161(+)(X軸NK細(xì)胞活性)(％)和CD3(+)CD161(+)(Y軸NKT細(xì)胞活性)(％)的關(guān)系，都表示相反的關(guān)系。圖40～45表示CD3(-)CD161(+)P(+)[P(+)表示穿孔蛋白生成](X軸活性化NK細(xì)胞)(％)和CD3(+)CD161(+)P(+)(X軸活性化NKT細(xì)胞)(％)的關(guān)系，都表示相反的關(guān)系。
實(shí)施例5選擇與實(shí)施例1相同的處置患者群(148病例)，利用求取基于多變量分析(癌的種類和NKT細(xì)胞或者NK細(xì)胞的有效關(guān)系)的偏回歸系數(shù)方法來分析各細(xì)胞的作用和癌癥種類的關(guān)系。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在前列腺癌中，NKT細(xì)胞(CD3(+)CD161(+))的偏回歸系統(tǒng)傾向于為負(fù)；另一方面，NK細(xì)胞(CD3(-)CD161(+))的偏回歸系統(tǒng)傾向于為正。這表明，在前列腺癌中，NK細(xì)胞的貢獻(xiàn)較大，是以NK細(xì)胞為指針，謀求其活性化的癌癥有效治療方法。同樣，在肺癌中，NK細(xì)胞(CD3(+)CD161(+))的偏回歸系統(tǒng)傾向于為正，是以NKT細(xì)胞為指針，謀求其活性化的癌癥有效治療方法。
實(shí)施例6選擇與實(shí)施例1相同的處置患者群(26病例)，追加類固醇治療(6例)、放射線治療(7例)、抗癌劑治療(13例)后(約1個月后)，測定各指標(biāo)、NK細(xì)胞[CD3(-)CD161(+)]、NKT細(xì)胞[CD3(+)CD161(+)]、INFγ誘發(fā)生成量、IL-12誘發(fā)生成量。結(jié)果發(fā)現(xiàn)在所有的病例中，對NK細(xì)胞[CD3(-)CD161(+)]、NKT細(xì)胞[CD3(+)CD161(+)]沒有影響，對INFγ誘發(fā)生成量、IL-12誘發(fā)生成量產(chǎn)生了有效的抑制效果(圖52～55)。
產(chǎn)業(yè)利用的可能性通過以上實(shí)驗(yàn)及實(shí)施例，可以發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明的NK細(xì)胞活性化測定方法比傳統(tǒng)的鉻釋放法更能得到正確的結(jié)果、提供了CTL活性新的測定方法、NK細(xì)胞在α-1，3葡聚醣作用下能夠活性化、NK細(xì)胞活性化和NKT細(xì)胞活性化呈相反關(guān)系，都具有抗癌系統(tǒng)的意義、癌癥種類和NK細(xì)胞活性化及NKT細(xì)胞活性化中存在特異性、NK細(xì)胞活性化及NKT細(xì)胞活性化不受抗癌劑、放射線、類固醇治療的影響。取得了癌癥治療中劃時代的成績。
權(quán)利要求
1.在對末梢血中的淋巴球至少進(jìn)行以下一項(xiàng)測定的新免疫療法中，人體免疫功能的測定方法1)CD8(+)穿孔蛋白生成能力，2)CD3(-)CD161(+)，3)CD3(-)CD161(+)穿孔蛋白生成能力，4)CD3(+)CD161(+)，5)CD3(+)CD161(+)穿孔蛋白生成能力。
2.各個測定意義如下的權(quán)利要求1的測定方法1)CD8(+)穿孔蛋白生成能力測定意味的功能是測定CTL活性，2)CD3(-)CD161(+)測定意味的功能是測定NK細(xì)胞，3)CD3(-)CD161(+)穿孔蛋白生成能力的測定意味的功能是測定NK細(xì)胞的活性化，4)CD3(+)CD161(+)測定意味的功能是測定NKT細(xì)胞，5)CD3(+)CD161(+)穿孔蛋白生成能力測定意味的功能是測定NKT細(xì)胞的活性化。
3.包括CD8(+)穿孔蛋白生成能力測定的CTL活性劑的篩選方法。
4.一種新β-1，3葡聚醣，載有通過權(quán)利要求3篩選方法得到的CTL活性劑力。
5.一種CTL活性劑，包括通過權(quán)利要求3的篩選方法得到的β-1，3葡聚醣。
6.一種NK活性劑的篩選方法，包括CD3(-)CD161(+)穿孔蛋白生成能力測定。
7.一種新α-1，3葡聚醣，載有包括通過權(quán)利要求6篩選方法得到的NK活性劑。
8.一種NK活性劑，包括通過權(quán)利要求6的篩選方法得到的α-1，3葡聚醣。
9.一種NK細(xì)胞和NKT細(xì)胞活動情況的測定方法，其特征在于，同時測定權(quán)利要求1中的CD3(-)CD161(+)、CD3(-)CD161(+)穿孔蛋白生成能力、CD3(+)CD161(+)、CD3(+)CD161(+)穿孔蛋白生成能力。
10.一種NK活性劑或者NKT活性劑分別的篩選方法，包括基于NK細(xì)胞和NKT細(xì)胞活性呈相反關(guān)系的權(quán)利要求9的方法。
11.一種新α-1，3葡聚醣，載有通過權(quán)利要求10的篩選方法得到的NK活性劑或者NKT活性劑。
12.一種NK活性劑和NKT活性劑，包括通過權(quán)利要求10的篩選方法得到的α-1，3葡聚醣。
13.一種通過權(quán)利要求9測定方法、癌癥種類和NK細(xì)胞及NKT細(xì)胞動態(tài)之間關(guān)系的檢定方法。
14.一種NK細(xì)胞或者NKT細(xì)胞的活性劑，包含在實(shí)施權(quán)利要求13檢定的同時，與抗癌劑、放射線、及類固醇治療之一并用的α-1，3葡聚醣。
15.一種癌癥患者采樣實(shí)施的檢查方法，利用權(quán)利要求1～14之一中記錄信息。
16.一種癌癥患者采樣實(shí)施的診斷方法，利用權(quán)利要求1～14之一中記錄信息的。
17.一種癌癥患者采樣實(shí)施的治療方法，利用權(quán)利要求1～14之一中記錄信息的。
18.一種商業(yè)用媒介物，將權(quán)利要求1～17之一中記錄的信息載荷到利用自然法則的媒介物上形成的。
19.利用權(quán)利要求18的商業(yè)用媒介物的商業(yè)方法。
全文摘要
提供了測定CTL活性、NKT活性及NK活性的新方法。利用該測定方法，來分析各測定結(jié)果檢定的意義，發(fā)現(xiàn)CTL活性、NKT活性及NK活性在癌癥治療中的意義。具體來講，本發(fā)明能提供一種測定CTL活性、NKT活性及NK活性的新方法。利用該測定方法，來分析各測定結(jié)果檢定的意義，新發(fā)現(xiàn)CTL活性、NKT活性及NK活性在癌癥治療中的意義，來得到本發(fā)明介紹的新免疫療法。
文檔編號A61P35/00GK1568426SQ0282007
公開日2005年1月19日 申請日期2002年10月8日 優(yōu)先權(quán)日2001年10月9日
發(fā)明者八木田旭邦 申請人:東方癌癥治療株式會社