一株淡紫擬青霉菌及其在普洱茶生產(chǎn)中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及普洱茶生產(chǎn)領(lǐng)域，具體涉及一株淡紫擬青霉菌及其在普洱茶生產(chǎn)中的 應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 隨著食品科學(xué)與技術(shù)的進(jìn)步，以及微生物資源的挖掘與利用，微生物優(yōu)良菌株的 選育和應(yīng)用研究越來越廣泛。
[0003] 淡紫擬青霉真菌能夠產(chǎn)生豐富的幾丁質(zhì)酶、葡聚糖酶與蛋白酶等功能酶，在普洱 茶發(fā)酵過程中能夠促進(jìn)物質(zhì)變化，對(duì)普洱茶品質(zhì)的形成具有很好的促進(jìn)作用。同時(shí)，該真菌 具有一定程度的農(nóng)藥降解作用，Somaseknar研究發(fā)現(xiàn)，淡紫擬青霉真菌能夠促進(jìn)難溶磷酸 鹽的溶解。實(shí)驗(yàn)室研究結(jié)果證實(shí)，淡紫擬青霉真菌的增溶效果達(dá)到30%，其它線蟲拮抗菌達(dá) 到20%~40%。同類研究還表明，淡紫擬青霉真菌還能夠促進(jìn)許多化學(xué)聚合物（如農(nóng)藥， 制革廢水等）的分解，具有一定的環(huán)保效應(yīng)。因此，半個(gè)多世紀(jì)以來，國(guó)內(nèi)外許多專家學(xué)者 對(duì)該真菌進(jìn)行了廣泛而深入的研究，在生物學(xué)、生態(tài)學(xué)、大量培養(yǎng)、控害效能與田間應(yīng)用等 方面均取得了一系列的研究成果。
[0004] 然而，在普洱茶發(fā)酵研究領(lǐng)域中，前期偏重于進(jìn)行基礎(chǔ)性研究，而缺乏在具體應(yīng)用 方面的深度跟蹤。隨著對(duì)普洱茶發(fā)酵技術(shù)的突破，從傳統(tǒng)渥堆發(fā)酵樣品中獲得具有潛在應(yīng) 用價(jià)值的微生物菌株，并應(yīng)用于普洱茶的發(fā)酵生產(chǎn)中已經(jīng)成為普洱茶生產(chǎn)的必然趨勢(shì)，具 有重要的意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 為了解決以上問題，本發(fā)明從微生物的專業(yè)角度出發(fā)，對(duì)普洱茶的生產(chǎn)，尤其是普 洱茶的渥堆過程進(jìn)行了研究，提供了一株在普洱茶發(fā)酵生產(chǎn)中，能夠提高普洱茶品質(zhì)的潛 在菌株，并將其應(yīng)用于普洱茶的生產(chǎn)中，為發(fā)酵普洱茶品質(zhì)的穩(wěn)定和提高發(fā)揮了重要作用。
[0006] 因此，本發(fā)明一方面提供了一株淡紫擬青霉菌株，該菌株為淡紫擬青霉 (Paecilomyces lilacinus)TMCC 70004菌株，其已于2014年01月06日保藏于中國(guó)微生 物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心（簡(jiǎn)稱CGMCC)，該菌株的登記入冊(cè)編號(hào)為CGMCC No.8680〇
[0007] 本發(fā)明所述的淡紫擬青霉（Paecilomyces lilacinus)TMCC 70004菌株，分離自動(dòng) 海茶業(yè)有限責(zé)任公司（勐海茶廠）的傳統(tǒng)渥堆普洱茶發(fā)酵樣品中，利用常規(guī)培養(yǎng)基，通過傳 統(tǒng)的初篩、復(fù)篩、純化培養(yǎng)獲得的。
[0008] 本發(fā)明的淡紫擬青霉（Paecilomyces lilacinus)TMCC 70004菌株劃線接種在察 氏培養(yǎng)基上，培養(yǎng)24小時(shí)后開始生長(zhǎng)，4天后菌落直徑約為50mm，菌落形狀呈規(guī)則圓形，菌 落外圈顏色為白色，中間呈淡紫色，7天以后菌落變成暗紅色。孟加拉紅、PDA和察氏培養(yǎng)基 菌絲量增長(zhǎng)最為顯著，PDB、PCA培養(yǎng)基菌絲量增加較為緩慢。發(fā)達(dá)菌絲上分生出大量孢子， 在察氏和燕麥培養(yǎng)基上產(chǎn)孢量最大。
[0009] 本發(fā)明另一方面提供了本發(fā)明的淡紫擬青霉（Paecilomyces lilacinus)TMCC 70004菌株在普洱茶生產(chǎn)中的應(yīng)用。
[0010] 其中，在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，該菌株與已潮水的普洱毛茶的接種比例為 1:20 (體積/重量）。
[0011] 本發(fā)明的淡紫擬青霉真菌（Paecilomyces lilacinus)TMCC 70004菌株從普海茶 渥堆樣品中分離得到，將制備好的該菌株的種子液按特定比例應(yīng)用于普洱茶發(fā)酵生產(chǎn)中， 可以得到紅濃、且口感溫潤(rùn)的普洱茶茶湯，同時(shí)該菌株還可以降解普洱茶原料中殘存的農(nóng) 藥，提高普洱茶的農(nóng)藥殘存指標(biāo)。
[0012] 本發(fā)明的淡紫擬青霉真菌（Paecilomyces lilacinus)TMCC 70004菌株的生物材 料信息如下：
[0013] 分類命名：淡紫擬青霉真菌（Paecilomyces lilacinus);
[0014] 菌株編號(hào)：TMCC 70004 ;
[0015] 保藏機(jī)構(gòu)：中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心；
[0016] 保藏機(jī)構(gòu)簡(jiǎn)稱：CGMCC ;
[0017] 保藏機(jī)構(gòu)地址：北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)；
[0018] 保藏日期：2014年01月06日；
[0019] 保藏中心登記入冊(cè)編號(hào)：CGMCC No. 8680。
【具體實(shí)施方式】
[0020] 下面通過實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說明，旨在用于說明本發(fā)明而非限定本 發(fā)明。應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以對(duì)本發(fā) 明進(jìn)行若干改進(jìn)和修飾，這些改進(jìn)和修飾也同樣落入本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
[0021 ] 下述實(shí)施例中所使用的實(shí)驗(yàn)方法如無(wú)特殊說明，均為常規(guī)方法。
[0022] 下述實(shí)施例中所使用的材料、試劑等，如無(wú)特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。
[0023] 實(shí)施例1淡紫擬青霉（Paecilomyces lilacinus)TMCC 70004菌株的篩選
[0024] 從普洱茶渥堆中采集新鮮的發(fā)酵茶樣，通過常規(guī)的培養(yǎng)基分離得到淡紫擬青霉 (Paecilomyces lilacinus)TMCC 70004 菌株。
[0025] 純化培養(yǎng)基為：硝酸鈉3g、磷酸氫二鉀lg、硫酸鎂0. 5g、氯化鉀0. 5g、硫酸亞鐵 0· 01g、鹿糖 30g、瓊脂 15g、蒸餾水 1000mL，121°C滅菌 30min。
[0026] 分離純化方法如下：
[0027] 1、培養(yǎng)基準(zhǔn)備：將配制好的培養(yǎng)于121°C滅菌30min，冷卻至45°C左右，倒入無(wú)菌 培養(yǎng)皿中，每皿約20ml，冷卻凝固后備用；
[0028] 2、樣品處理：取待分離的普洱茶樣，研磨粉碎，取10g，在超凈工作臺(tái)中加入到裝 有90ml無(wú)菌水的三角燒瓶中，振蕩制成菌懸液，濃度記為10 S
[0029] 3、稀釋：按十倍稀釋法逐步稀釋，稀釋5次為止。十倍稀釋法是指下一管的菌懸液 濃度是上一管的十分之一；
[0030] 4、接種：將標(biāo)記有10 2、10 3、10 4、10 5、10 6濃度的菌懸液分別取200 μ 1注入到已 配制好的培養(yǎng)皿中，每個(gè)稀釋度三次重復(fù)，并用涂布棒均勻涂布。完成后放置于10°c、20°C、 30°C、4(TC四個(gè)溫度梯度下培養(yǎng)，每隔24小時(shí)觀察一次；
[0031] 5、純化：培養(yǎng)4~8天，挑取單菌落轉(zhuǎn)接到察氏培養(yǎng)基中培養(yǎng)，多次劃線純化直至 得到純化菌株；
[0032] 6、種子液的制備：將純化得到的TMCC 70004菌株接種于馬鈴薯一葡萄糖液體培 養(yǎng)基中，然后放置于搖床（150rpm/min、30°C )培養(yǎng)5天后，用于接種發(fā)酵。
[0033] 實(shí)施例2淡紫擬青霉（Paecilomyces lilacinus)TMCC 70004菌株的形態(tài)鑒定
[0034] 將本發(fā)明的淡紫擬青霉（Paecilomyces lilacinus)TMCC 70004菌株劃線接種在 察氏培養(yǎng)基上，培養(yǎng)24小時(shí)后開始生長(zhǎng)，4天后菌落直徑約為50mm，菌落形狀呈規(guī)則圓形， 菌落外圈顏色為白色，中間呈淡紫色，7天以后菌落變成暗紅色。孟加拉紅、PDA和察氏培養(yǎng) 基菌絲量增長(zhǎng)最為顯著，H)B、PCA培養(yǎng)基菌絲量增加較為緩慢。發(fā)達(dá)菌絲上分生出大量孢 子，在察氏和燕麥培養(yǎng)基上產(chǎn)孢量最大。
[0035] 實(shí)施例3淡紫擬青霉（Paecilomyces lilacinus)TMCC 70004菌株的生產(chǎn)應(yīng)用
[0036] 將大葉種曬青毛茶加水至含水量達(dá)到20% - 45%左右，121°C滅菌30min，隨后在 滅菌的毛茶中，按照1:20的接種量接種TMCC 70004種子液，放置到30°C - 45°C培養(yǎng)數(shù)周。
[0037] 以周為單位補(bǔ)水并翻堆，在第一周內(nèi)TMCC 70004開始大量繁殖，菌株數(shù)量呈幾何 倍數(shù)增加，其生物活性物質(zhì)、酶等分泌物增加。促進(jìn)普洱茶紅濃、且口感溫潤(rùn)的普洱茶茶湯 的形成，而且可以降解普洱茶原料中殘存的農(nóng)藥，提高普洱茶農(nóng)藥殘存指標(biāo)。
[0038] 具體的比較結(jié)果參見表1中的數(shù)據(jù)。
[0039] 表1采用淡紫擬青霉（Paecilomyces lilacinus)TMCC 70004在不同條件下發(fā)酵 普洱茶后，其內(nèi)含物質(zhì)與大益2012年7572普洱熟茶的比較表
[0040]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一株淡紫擬青霉菌株，其特征在于，該菌株為淡紫擬青霉（Paecilomyces lilacinus)TMCC 70004菌株，其在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心的登記 入冊(cè)編號(hào)為CGMCC No. 8680。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的淡紫擬青霉菌株，其是從普洱茶渥堆樣品中，利用常規(guī)培養(yǎng) 基，通過傳統(tǒng)的初篩、復(fù)篩、純化培養(yǎng)獲得的。3. 權(quán)利要求1或2所述的淡紫擬青霉菌株在普洱茶生產(chǎn)中的應(yīng)用。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其中該菌株與已潮水的普洱毛茶的接種比例為 1:20 (體積/重量）。
【專利摘要】本發(fā)明屬于普洱茶生產(chǎn)領(lǐng)域，具體公開了一株淡紫擬青霉菌株及其在普洱茶生產(chǎn)中的應(yīng)用。本發(fā)明所提供的淡紫擬青霉菌株為淡紫擬青霉(Paecilomyces？lilacinus)TMCC？70004菌株，其在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心的登記入冊(cè)編號(hào)為CGMCC？No.8680。將本發(fā)明的淡紫擬青霉菌株應(yīng)用于普洱茶的渥堆過程中，可以得到紅濃、且口感溫潤(rùn)的普洱茶茶湯，同時(shí)該菌株還可以降解普洱茶原料中殘存的農(nóng)藥，提高普洱茶的農(nóng)藥殘存指標(biāo)。CGMCC No. 868020140106
【IPC分類】C12N1/14, A23F3/10, C12R1/79
【公開號(hào)】CN105602854
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201410680966
【發(fā)明人】唐蜀昆, 高林瑞, 田飛, 盧開陽(yáng), 任萬(wàn)增, 童一峰, 黃華偉, 劉韜, 鄒小林, 盧曉慧
【申請(qǐng)人】勐海茶業(yè)有限責(zé)任公司
【公開日】2016年5月25日
【申請(qǐng)日】2014年11月24日