(CH，7-C)，64. I (C，8-C)，85. 2 (C，9-C)，37. I (C，10-C)，22. 3 (細(xì)2， 11-C)，33. 8 (邸2,12-C)，46. 3 (C，13-C)，59. 0 (C，14-C)，19. 7 (邸2,15-C)，27. I (邸2,16-C)， 51. 8 (CH，17-C)，13. 3佩，18-C)，15. 9佩，19-C)，34. I (CH，20-C)，17. 8佩，21-C)， 35. 2 (細(xì)2, 22-C)，24. 3 (邸2, 23-C)，124. 3 (CH，24-C)，130. 5 (C，25-C)，17. 2 (細(xì)3, 26-C)， 25. I (邸3, 27-C)，27. 7 (邸3, 28-C)，15. 3 (邸3, 29-C)，176. 8 (C，30-C);碳原子標(biāo)記參見圖I。 IR光譜顯示該化合物含有徑基（3617cm I)，丫內(nèi)醋（1764cm I)和幾基（1727cm I)基團(tuán)。iH NMR譜顯示含有屯個(gè)甲基信號(hào)5冊(cè).91化-18)，0. 95化-19)，1. 49化-26)，1. 59化-27)， 0. 93化3-28)和0. 81化3-29)，W及一個(gè)雙峰信號(hào)5冊(cè).83化3-21，山J = 6. 6Hz)，說明該化 合物為S祗類化合物。"CNMR和DEPT譜顯示30個(gè)碳信號(hào)，包括屯個(gè)甲基，六個(gè)次甲基（兩 個(gè)含氧次甲基W及一個(gè)締控碳），九個(gè)亞甲基W及八個(gè)季碳（一個(gè)內(nèi)醋幾基碳，兩個(gè)含氧碳 ^及一個(gè)締控碳）。此外，側(cè)鏈具有24(25)-雙鍵（5(：130.5，124.3和5擬.96，的，1 = 7. 1，1. 4Hz)信號(hào)。HMBC譜中，&-26 和 &-27 與C-24 和C-25 化-21 與C-17，C-20 和C-22 ; W及H-24與C-22,C-23, &-26和&-27的相關(guān)性驗(yàn)證了上述推論。此外，一個(gè)醋幾基信 號(hào)[5C176.8(C-30)]和兩個(gè)碳信號(hào)[5C85. 2 (C-9)和59. 0 (C-14)]說明該化合物存在一 個(gè)丫內(nèi)醋結(jié)構(gòu)。HMBC譜中，&-18與C-14訊-15與C-30訊-11與C-9 ;H-11a與C-8W 及&-19與C-9的相關(guān)性驗(yàn)證了 30, 9-運(yùn)個(gè)官能團(tuán)的連接關(guān)系。綜合氨譜、碳譜、HMBC譜和 NOESY譜，W及文獻(xiàn)關(guān)于相關(guān)類型核磁數(shù)據(jù)，可基本確定該化合物如圖1所示，立體構(gòu)型進(jìn) 一步通過ECD試驗(yàn)確定，理論值與實(shí)驗(yàn)值基本一致（圖2)。 陽0巧]實(shí)施例2:化合物（I)藥理作用試驗(yàn) [00%] -、材料和儀器
[0027] 腺樣囊性癌細(xì)胞系SACC-M購自上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院口腔頌面外科實(shí)驗(yàn)室。化合 物（I)自制，HPLC歸一化純度大于98%。RPMI-1640培養(yǎng)基、膜蛋白酶購于美國SIGMA公 司。標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清購自邢臺(tái)市匯豐生物技術(shù)研究所。Annexin-V-門TC/PI試劑盒購于北京 寶賽生物技術(shù)有限公司。PBS購于天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所。MT粉購于Amresco公司。 二乙胺四乙酸二鋼巧DTA)購于北京益利精細(xì)化學(xué)品有限公司。青霉素、鏈霉素購于華北制 藥有限公司。二甲基亞諷值MS0)購于天津標(biāo)準(zhǔn)科技有限公司。Giemsa染液購于珠海貝索 技術(shù)有限公司。
[0028] XYJ型醫(yī)療凈化工作臺(tái)（蘇州凈化設(shè)備有限公司），BB5060/BB16二氧化碳培養(yǎng)箱 (上海Heraeus公司），CX21光學(xué)顯微鏡（日本OLYMPUS) ,XD-IO198101倒置顯微鏡（江南 公司），流式細(xì)胞儀度ectionDickinsonFacscaLibur),WeIXscanMK3全自動(dòng)酶標(biāo)儀（芬 蘭UbsystemsDragon) ,BFX5-320型低速離屯、機(jī)（中國上海滬南科學(xué)儀器聯(lián)營廠），GF-300 型電子天平（JapanA&DCompany，Limited)，725 型超低溫冰箱（FormaScientific.Inc),微 量加樣器巧PPEND0RF公司）。
[0029] 二、試驗(yàn)方法
[0030] 1、細(xì)胞培養(yǎng)
[0031] 1.1細(xì)胞復(fù)蘇
[0032] 預(yù)備37°C恒溫水浴箱，將液氮保存的SACC-M細(xì)胞凍存管取出，直接投入水浴箱， 輕輕搖動(dòng)，待其迅速融化后，從水箱中取出凍存管，此步驟宜快，應(yīng)在30-60秒內(nèi)完成。之后 W75%酒精擦拭消毒管口后開啟凍存管，將管內(nèi)細(xì)胞懸液吸出，滴入50mL離屯、管并在離屯、 管中滴加10倍W上含10%血清的RPMI-1640培養(yǎng)液，輕輕吹打，使其成為細(xì)胞懸液，低速離 屯、（1000轉(zhuǎn)/分）5分鐘后，吸去上清液，再用10%的RPMI-1640培養(yǎng)液洗涂一次，并再次離 屯、，吸去上清液后，用含有10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液將細(xì)胞稀釋成細(xì)胞懸液，接種 于50mL培養(yǎng)瓶中，輕輕梓松瓶蓋，然后放入C〇2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，第二日更換一次培養(yǎng)液，之 后在培養(yǎng)液顏色由淡紅變黃后更換培養(yǎng)液，觀察細(xì)胞爬滿瓶底壁的80 %時(shí)，進(jìn)行細(xì)胞傳代。
[0033] 1. 2細(xì)胞傳代
[0034] 首先使用彎頭吸管吸取原培養(yǎng)液后，反復(fù)吹打瓶底，之后去除瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液，向瓶 內(nèi)加入混合消化液化25%膜蛋白酶和0. 04%邸TA1:1)少量（W能夠完全覆蓋培養(yǎng)瓶底 為宜），緩慢搖動(dòng)瓶身使消化液浸濕瓶底，然后吸去大部分消化液，僅留少量進(jìn)行消化。將 培養(yǎng)瓶置于C〇2培養(yǎng)箱內(nèi)（或25°C室溫下）進(jìn)行消化，2~5分鐘后取出培養(yǎng)瓶，放倒置顯 微鏡下觀察，當(dāng)發(fā)現(xiàn)胞質(zhì)回縮、細(xì)胞間隙增大，部分細(xì)胞由多角形變?yōu)閳A形，且已有細(xì)胞開 始懸浮時(shí)，應(yīng)立即停止消化。吸出殘存的消化液，加入適量不含血清的培養(yǎng)液，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)培 養(yǎng)瓶，沖掉殘留的消化液后，將其吸出，再加入新培養(yǎng)液，用彎頭吸管吸取瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)液后反 復(fù)吹打瓶底，使貼。于瓶底的細(xì)胞脫離，形成細(xì)胞懸液，注意吹打時(shí)動(dòng)作要輕柔，W防用力過 猛，使細(xì)胞受損。吸取細(xì)胞懸液置于離屯、管內(nèi)，離屯、后，去上清，收集細(xì)胞，加入適量含10% 胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液，將細(xì)胞吹打成混懸液，計(jì)數(shù)，W1. 0XIOVmL濃度接種在新 的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)。
[0035] 2、MTT比色試驗(yàn)
[0036] (1)接種細(xì)胞：取對(duì)數(shù)生長期細(xì)胞，用含有10%胎牛血清的1640培養(yǎng)液制成濃度 為2Xl〇5/mL的單細(xì)胞懸液，接種于96孔板內(nèi)，每孔100yL。似培養(yǎng)細(xì)胞：將上述96孔 板置于C〇2培養(yǎng)箱，在37°C、5%C02W及飽和濕度條件下，繼續(xù)培養(yǎng)2地。（3)加藥：用藥組 每孔加入稀釋后的化合物（I)藥液100yL使其終濃度為2. 5、5. 0、7. 5、10、12. 5mmol/L; 對(duì)照組每孔加100yL不含血清的1640培養(yǎng)液。用藥組和對(duì)照組每組均設(shè)6個(gè)復(fù)孔，并設(shè) 調(diào)零孔，加藥后繼續(xù)培養(yǎng)。（4)呈色：繼續(xù)培養(yǎng)2地、4化和7化后，用藥組和對(duì)照組每孔加 入濃度為5g/L的MT溶液20yL繼續(xù)培養(yǎng)地后，吸去全部上清液，在各孔中加入200yL 的二甲基亞諷（包括調(diào)零孔），置振蕩器上振蕩搖勻1分鐘，使結(jié)晶充分溶解。（5)比色：將 96孔板置于酶標(biāo)儀上，在波長為490nm處，測(cè)定各孔吸光度值（A)。重復(fù)實(shí)驗(yàn)3次，取其平均 值。（6)計(jì)算并繪圖：細(xì)胞增殖抑制率=(1-用藥組平均A值/對(duì)照組平均A值）X100%。 根據(jù)W上公式計(jì)算各濃度的生長抑制率，然后W時(shí)間為橫軸，抑制率為縱軸，繪制5個(gè)濃度 的抑制率曲線。
[0037] 3、流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè) 陽0測(cè) 3. 1細(xì)胞的處理
[0039] 細(xì)胞接種、培養(yǎng)后，取對(duì)數(shù)生長期細(xì)胞，W2Xl〇5/mL濃度接種于6孔板中，而后加 藥，設(shè)時(shí)間對(duì)比組、濃度對(duì)比組和對(duì)照組（正常調(diào)亡組）：（1)時(shí)間對(duì)比組：將細(xì)胞接種于6 孔板中，培養(yǎng)24小時(shí)，細(xì)胞貼壁后，用吸管沿各孔壁將原培養(yǎng)液徹底吸出，然后于各孔加入 等量的終濃度為12. 5mmol/L含化合物（I)藥液的培養(yǎng)液（用藥組）。加入不含化合物 (I)的培養(yǎng)液作為對(duì)照組，分別繼續(xù)培養(yǎng)2地、4她、72h。（2)濃度對(duì)比組：細(xì)胞接種并貼壁 成功后，用吸管徹底吸凈原培養(yǎng)液，各孔中分別加入終濃度為2. 5、5. 0、7. 5、10、12. 5mmol/L 的含化合物（I)培養(yǎng)液（用藥組）。對(duì)照組加入不含化合物（I)的培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng) 7化。（3)正常調(diào)亡組：接種細(xì)胞并貼壁成功后，去除各孔中原培養(yǎng)液，加入不含化合物（I) 的培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)2地、4她、72h。
[0040] 3. 2樣品的制備
[0041] (1)收集細(xì)胞：分別吸取6孔板各孔上清液，加入離屯、管中，取PBS液2mL漂洗6孔 板各底壁后，倒入同一離屯、管內(nèi)，然后將2mL混合消化液滴入各孔中消化細(xì)胞，緩慢搖動(dòng)培 養(yǎng)板使消化液完全浸濕其底壁，消化2min后將消化液吸入各離屯、管，