注射用益氣復(fù)脈凍干粉針劑指紋圖譜檢測方法和制劑的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于中藥現(xiàn)代化領(lǐng)域,設(shè)及一種注射用益氣復(fù)脈凍干粉針劑指紋圖譜檢測 方法和制劑。
【背景技術(shù)】
[0002] 注射用益氣復(fù)脈凍干粉針劑,是W紅參、麥冬和五味子為原料制成的注射用粉針 劑,具有益氣復(fù)脈,養(yǎng)陰生津之功效,臨床用于冠屯、病勞累型屯、絞痛氣陰兩虛證,癥見胸搏 屯、痛,屯、惇氣短、倦怠懶言、頭暈?zāi)垦?、面色少華、舌淡、少苔或剝苔,脈細弱或結(jié)代;冠屯、病 所致慢性左屯、功能不全n、m級氣陰兩虛證,癥見屯、惇、氣短甚則氣急喘促,胸悶隱痛,時作 時止,倦怠乏力,面色蒼白,動則汗出,舌淡、少苔或剝苔,脈細弱或結(jié)代。
[0003] 現(xiàn)有的注射用益氣復(fù)脈凍干粉針劑存在諸多需要改進、提高的地方,例如質(zhì)量控 制檢測諒方法、產(chǎn)品制備方法等。因此提供用于該產(chǎn)品質(zhì)量控制的新方法、W及制備該產(chǎn)品 的方法是有益的,也是本領(lǐng)域技術(shù)人員一直在努力的。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0004] 本發(fā)明的目的在于提供一種用于注射用益氣復(fù)脈凍干粉針劑質(zhì)量控制的新方法、 W及制備該產(chǎn)品的方法。
[0005] 本發(fā)明是照如下方式實現(xiàn)的:
[0006] 在本發(fā)明第一方面,提供的是一種冷凍干燥粉針劑(其亦可稱為注射用益氣復(fù)脈 或注射用益氣復(fù)脈(凍干)或注射用益氣復(fù)脈凍干粉針劑或注射用益氣復(fù)脈冷凍干燥粉針 劑)的質(zhì)量控制方法,所述冷凍干燥粉針劑每1000瓶由藥材紅參500g、麥冬1500g、五味子 750g制備得到,該質(zhì)量控制方法包括對所述制劑進行指紋圖譜測定。
[0007] 根據(jù)本發(fā)明第一方面的質(zhì)量控制方法,所述指紋圖譜測定包括如下操作:
[000引(1)照《中華人民共和國藥典》2010年版一部附錄36頁"附錄VID高效液相色譜法" 所載方法測定,或者照《中華人民共和國藥典》2015年版四部第59頁"0512高效液相色譜法" 所載方法測定,W十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑(例如,使用WatersS>mmclr>RC18柱,柱 長為25cm,內(nèi)徑為4.6mm,粒徑為扣m); W乙臘為流動相A,WO . 05 %憐酸溶液為流動相B,按 下表中的規(guī)定進行梯度洗脫;柱溫為30°C;檢測波長為203nm;理論板數(shù)按人參皂巧Rgl峰計 算應(yīng)不低于20000;
[0010] (2)參照物溶液的制備:取人參皂巧肺I對照品、五味子醇甲對照品適量,精密稱 定,分別加甲醇制成每1ml含0.5mg人參皂巧Rbl和0.03mg五味子醇甲的溶液,即得;
[0011] (3)對照提取物溶液的制備:取注射用益氣復(fù)脈凍干粉針隨行對照提取物1.3g,精 密稱定,加30%甲醇溶液IOml使溶解,通過ProElut?化S SPE柱(500mg/6ml,預(yù)先依次用 0.5mol/L氨氧化鋼溶液、O.lmol/L鹽酸溶液各IOml洗脫,然后用水洗至洗脫液呈中性,再依 次用甲醇、30%甲醇各IOml洗脫,備用),流速約每分鐘1ml,棄去流出液,再依次用含 0.5mol/L的氨氧化鋼的30%甲醇溶液2ml、30 %甲醇溶液5ml洗脫,棄去流出液,最后用甲醇 洗脫,收集甲醇洗脫液至5ml量瓶中至近刻度,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,濾過,取續(xù)濾液,即 得;
[0012] (4)供試品溶液的制備:取待測定的冷凍干燥粉針劑的內(nèi)容物1.3g,精密稱定,按 對照提取物溶液的制備方法同法操作,即得;
[0013] (5)測定法:分別精密吸取參照物溶液lOiil、對照提取物溶液及供試品溶液各20y 1,注入液相色譜儀,測定,記錄8~70分鐘W內(nèi)的色譜圖,即得;
[0014] (6)采用中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng),先由2份對照提取物溶液生成對照指 紋圖譜,供試品指紋圖譜與對照指紋圖譜經(jīng)中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)計算其相似 度。一般地講,本發(fā)明冷凍干燥粉針劑與對照指紋圖譜的相似度大于0.88。
[0015] 根據(jù)本發(fā)明第一方面的質(zhì)量控制方法,所述注射用益氣復(fù)脈凍干粉針隨行對照提 取物可W從市售取得,亦可由如下方法制備:
[0016] (a)紅參500g用乙醇回流提取S次,第一、二次分別為3小時,第S次2小時,合并提 取液,減壓回收乙醇至無醇味,加水至約500ml,冷置,分離除去上層油,水層濾過,濾液減壓 濃縮后,70°C W下減壓干燥,得紅參提取物;
[0017] (b)麥冬1500g、五味子750g分別加水煎煮立次,第一次1小時,第二次45分鐘,第立 次30分鐘,合并各自提取液,分別減壓濃縮至相對密度為1.15~1.20 (50°C)(麥冬)、1.16~ 1.21(50°C)(五味子),各加乙醇至含醇量為75%,放置,濾過,濾液分別減壓濃縮至相對密 度為1.25~1.30 (50°C)(麥冬)、1.18~1.23 (50°C)(五味子),分別再加乙醇至含醇量為 85 %,放置,濾過,加氨氧化鋼溶液調(diào)節(jié)pH值分別為9(麥冬)、7(五味子),放置,濾過,麥冬濾 液加稀鹽酸調(diào)pH值為6.5~7.0,濾液分別減壓回收乙醇后,70°CW下減壓干燥,得麥冬、五 味子提取物;
[001引(C)紅參提取物加注射用水500ml溶解,濾過,濾液加適量活性炭,加熱煮沸5分鐘, 濾過,濾液加氨氧化鋼溶液調(diào)pH值為6.5~7.0;
[0019] (d)麥冬、五味子提取物分別加注射用水750ml、500ml溶解,濾過,濾液用氨氧化鋼 溶液調(diào)節(jié)抑值為6.5~7.0;
[0020] (e)合并上述(C)和(d)的S種溶液,加入葡甲胺適量,于100°C加熱1小時,冷置,濾 過,濾液加甘露醇適量,攬拌,溶解,加注射用水至總體積,調(diào)抑值為6.0~7.0, W微孔濾膜 (0.22皿)濾過,灌裝,冷凍干燥,制成1000 瓶,即得。
[0021] 根據(jù)本發(fā)明第一方面的質(zhì)量控制方法,所述冷凍干燥粉針劑是由如下方法制備得 到的:
[0022] (a)紅參500g用乙醇回流提取S次,第一、二次分別為3小時,第S次2小時,合并提 取液,減壓回收乙醇至無醇味,加水至約500ml,冷置,分離除去上層油,水層濾過,濾液減壓 濃縮后,70°C W下減壓干燥,得紅參提取物;
[0023] (b)麥冬1500g、五味子750g分別加水煎煮S次,第一次1小時,第二次45分鐘,第S 次30分鐘,合并各自提取液,分別減壓濃縮至相對密度為1.15~1.20 (50°C)(麥冬)、1.16~ 1.21(50°C)(五味子),各加乙醇至含醇量為75%,放置,濾過,濾液分別減壓濃縮至相對密 度為1.25~1.30 (50°C)(麥冬)、1.18~1.23 (50°C)(五味子),分別再加乙醇至含醇量為 85 %,放置,濾過,加氨氧化鋼溶液調(diào)節(jié)pH值分別為9(麥冬)、7(五味子),放置,濾過,麥冬濾 液加稀鹽酸調(diào)pH值為6.5~7.0,濾液分別減壓回收乙醇后,70°CW下減壓干燥,得麥冬、五 味子提取物;
[0024] (C)紅參提取物加注射用水500ml溶解,濾過,濾液加適量活性炭,加熱煮沸5分鐘, 濾過,濾液加氨氧化鋼溶液調(diào)pH值為6.5~7.0;
[0025] (d)麥冬、五味子提取物分別加注射用水750ml、500ml溶解,濾過,濾液用氨氧化鋼 溶液調(diào)節(jié)抑值為6.5~7.0;
[00%] (e)合并上述(C)和(d)的S種溶液,加入葡甲胺適量,于100°C加熱1小時,冷置,濾 過,濾液加甘露醇適量,攬拌,溶解,加注射用水至總體積,調(diào)抑值為6.0~7.0, W微孔濾膜 (0.22皿)濾過,灌裝,冷凍干燥,制成1000瓶,即得。
[0027] 根據(jù)本發(fā)明第一方面的質(zhì)量控制方法,其還包括對所述冷凍干燥粉針劑進行多糖 的含量測定。
[0028] 根據(jù)本發(fā)明第一方面的質(zhì)量控制方法,所述多糖的含量測定包括如下步驟:
[0029] (1)對照品溶液的制備:取無水葡萄糖對照品適量,精密稱定,加水制成每1ml含 0.1 mg的溶液,搖勻,即得;
[0030] (2)標準曲線的制備:精密量取對照品溶液0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml,分 別置IOml具塞試管中,依次加水使成I .Oml,各加5%苯酪溶液I .Oml,混勻,沿管壁緩慢加高 純硫酸5.Oml,迅速搖勻,置沸水浴中,加熱10分鐘,立即置冰浴中冷卻10分鐘,取出,室溫放 置10分鐘,W相應(yīng)的試劑為空白,照紫外-可見分光光度法(例如,可照中國藥典2010年版一 部附錄VA所載方法;或者可照照《中華人民共和國藥典》2015年版四部"0401紫外-可見分 光光度法"所載方法)試驗,在490nm波長處測定吸光度,W吸光度為縱坐標,濃度為橫坐標 繪制標準曲線;
[0031] (3)測定法:取冷凍干燥粉針劑內(nèi)容物約1.3g,精密稱定,加0 . Imol/L硫酸溶液 IOml使溶解,通過預(yù)先處理好的AB-8型大孔吸附樹脂柱(80~100目,內(nèi)徑8mm,柱高為5cm, 用0.1mol/L硫酸溶液處理),收集流出液置100mL量瓶中,用0.1mol/L硫酸溶液50ml洗脫(樹 脂柱備用),洗脫液置同一量瓶中,加水至刻度,搖勻;精密量取5ml,置100mL量瓶中,加水至 刻度,搖勻;精密量取0.4ml,置IOml具塞試管中,照標準曲線的制備項下的方法,自"加水使 成1.Omr起,依法測定吸光度,從標準曲線上讀出供試品溶液中相當于無水葡萄糖的量,計 算,即得;
[0032] 通常而言,本發(fā)明冷凍干燥粉針劑每瓶含多糖W無水葡萄糖(C6H1206)計多于 0.1 Ogo
[0033] 根據(jù)本發(fā)明第一方面的質(zhì)量控制方法,其還包括對所述冷凍干燥粉針劑進行紅參 的含量測定。
[0034] 根據(jù)本發(fā)明第一方面的質(zhì)量控制方法,所述紅參的含量測定包括如下步驟:
[0035] (1)照《中華人民共和國藥典》2010年版一部附錄36頁"附錄VID高效液相色譜法" 所載方法測定,或者照《中華人民共和國藥典》2015年版四部第59頁"0512高效液相色譜法" 所載方法測定,W十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;W乙臘為流動相A,0.05 %憐酸為流動 相B,按下表中的方法進行梯度洗脫;柱溫30°C;檢測波長為203nm;理論板數(shù)W人參皂巧Rgl 色譜峰計算應(yīng)不低于30000,所測成分與其他成分色譜峰的分離度應(yīng)符合規(guī)定;
[0038] (2)對照品溶液的制備:取人參皂巧Rgl、人參皂巧Re和人參皂巧Rbl對照品適量, 精密稱定,加甲醇制成每1ml含0.2mg人參皂巧Rgl、0.2mg人參皂巧Re和0.5mg人參皂巧Rbl 的混合溶液,即得;
[0039] (3)供試品溶液的制備:取所述冷凍干燥粉針劑內(nèi)容物約1.3g,精密稱定,加30 % 甲醇IOml使溶解,通過預(yù)先處理好的ProElut?PLS S陽柱巧00mg/6ml,預(yù)先依次用0.5mol/L 氨氧化鋼溶液、O.lmol/L鹽酸溶液各IOml洗脫,然后用水洗至洗脫液呈中性,再依次用甲 醇、30%甲醇各IOml洗脫,備用),流速約每分鐘Iml,棄去流出液,再依次用含0.5mol/L的氨 氧化鋼的30%甲醇溶液2ml、30%甲醇5ml洗脫,棄去洗脫液,最后用甲醇洗脫,收集甲醇洗 脫液至5ml量瓶中至近刻度,加甲醇稀釋至刻度,搖勻,濾過,取續(xù)濾液,即得;
[0040] (4)測定法:分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20iU,注入液相色譜儀,測 定,即得。
[0041] 通常而言,本發(fā)明冷凍干燥粉針劑每瓶含紅參W人參皂巧Rgl (C42H72014)和人參 皂巧Re(C4細82018)的總量計,不少于0.3mg;