一種脂溶性茶多酚的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種脂溶性茶多酚的制備方法，屬于茶多酚改性技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 茶多酚在油脂中的溶解度較小，而在水中卻表現(xiàn)出較高的溶解度，這極大地限制 了其在脂類產(chǎn)品中的應(yīng)用，尤其是作為精煉食用油的抗氧化劑，在油脂中難以達(dá)到有效的 抗氧化濃度，抗氧化性能不能達(dá)到預(yù)期的效果。并且，在生理環(huán)境下，茶多酚的穩(wěn)定性較差、 可有效利用的濃度低，導(dǎo)致其在體內(nèi)生物利用度不高，這些都大大限制了茶多酚作為天然 抗氧化劑在食品、醫(yī)藥行業(yè)的潛的應(yīng)用。
[0003]目前有關(guān)茶多酚改性的研究主要包括物理方法以及利用生物酶或化學(xué)合成的分 子修飾方法。物理方法區(qū)別于分子修飾的本質(zhì)在于物理方法并未改變其分子結(jié)構(gòu)，僅利用 載體物質(zhì)或通過乳化方法來增加茶多酚在油脂中的穩(wěn)定性以及溶解性，以提高其抗氧化性 等生理活性。此種方法改性的脂溶性茶多酚還不是很穩(wěn)定，也會造成植物油的水分和可揮 發(fā)性含量、透明度、黏度等參數(shù)指標(biāo)不合格。分子修飾是改造茶多酚的主要途徑，目前合成 脂溶性茶多酚的主要方法是將油溶性的脂肪烴引入到茶多酚多羥基的氧原子或苯環(huán)的碳 原子上去。此法目前多用脂肪酸酰氯或酸酐作為酰化劑。目前常用的脂肪酰氯一般由脂肪 酸與三氯化磷、氯化亞砜或五氯化磷等試劑反應(yīng)而來，但三氯化磷、五氯化磷以及氯化亞砜 都是劇毒品，特別是三氯化磷，它易燃、易爆，屬劇毒級的試劑，將這些試劑應(yīng)用于酰化劑的 制備，將制得的脂溶性茶多酚應(yīng)用于食品行業(yè)，其對人體的危害尚不清楚。同時一般的酰氯 較易揮發(fā)，容易冒白煙，如何保證工業(yè)生產(chǎn)中的安全性也是一個亟待解決的難題。這是此法 存在的一大弊端。此外，反應(yīng)為強(qiáng)酸性介質(zhì)，并且苯環(huán)上氫原子的取代雖然避免了酚羥基的 破壞，但其使用的試劑如用Friedel-Crafts?；磻?yīng)制備脂溶性茶多酚，最常使用的溶 劑為硝基苯，而硝基苯遇高熱會燃燒甚至爆炸，是制作炸藥的一種原料，也并不適合添加到 食品中。其溶劑殘留問題將阻礙脂溶性茶多酚在食品等行業(yè)中的應(yīng)用。此外，長碳鏈的引 入對周圍酚羥基產(chǎn)生的屏蔽作用使其空間位阻增大，同時長碳鏈還會造成聚集，達(dá)不到增 溶效果。
[0004] 酶法修飾主要發(fā)生在非酯型兒茶素分子的3位羥基上，以及EGCG分子中B環(huán)和D 環(huán)的羥基上。酶反應(yīng)條件溫和，區(qū)域選擇性高，不需基團(tuán)保護(hù)，反應(yīng)步驟少，環(huán)境友好，反應(yīng) 條件簡單可控，產(chǎn)品下游分離操作相對簡單。同時酶法分子修飾具有高度選擇性。所以酶 法分子修飾是制備脂溶性茶多酚最有潛力的方法之一。
[0005] 但是，目前酶法改性仍存在一些缺陷，如酶解效率低、使用的酶成本較高，反應(yīng)時 間過長，長達(dá)8-24h，為提高反應(yīng)效果需使用過量諸如丙酮、氯仿等有機(jī)溶劑，使用量往往超 過原來的500倍以上，且都是劇毒溶劑。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 發(fā)明目的：為了克服現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足，本發(fā)明提供了一種脂溶性茶多酚的 制備方法。
[0007] 技術(shù)方案：為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供一種脂溶性茶多酚的制備方法，包括以下 步驟：
[0008] (1)取茶多酚，加入乙酸乙酯，混合均勻，加入脂肪酶和蛋白酶，最后加入磷酸氫二 鈉-磷酸二氫鈉緩沖液，得反應(yīng)液；
[0009] (2)將上述反應(yīng)液進(jìn)行微波輻射，在溫度為35-45Γ條件下反應(yīng)10-20min ;
[0010] (3)反應(yīng)結(jié)束后，加入水去除水溶性雜質(zhì)，靜置分層，取乙酸乙酯層，減壓蒸餾，真 空冷凍干燥，即得。
[0011] 作為優(yōu)選，所述步驟（1)中，乙酸乙酯為食品級乙酸乙酯，其加入量為每克茶多酚 加入乙酸乙酯300-400ml。
[0012] 作為另一種優(yōu)選，所述步驟（1)中，所述脂肪酶和蛋白酶的總質(zhì)量與茶多酚的質(zhì) 量比為（0.0625-0. 1875) :1，其中脂肪酶質(zhì)量占所述總質(zhì)量的20-50%。
[0013] 作為另一種優(yōu)選，所述步驟（1)中，磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉緩沖液的加入量為每 克茶多酚加入緩沖液〇· 25-1. 25ml，其pH為6. 5-8. 0。
[0014] 作為另一種優(yōu)選，所述步驟（2)中，微波的功率為300W-700W。
[0015] 作為另一種優(yōu)選，所述步驟（3)中，減壓蒸餾的溫度為50°C。
[0016] 本發(fā)明中使用復(fù)合酶法制備脂溶性茶多酚，在茶多酚結(jié)構(gòu)中引入短鏈的乙酰基， 并且產(chǎn)物脂溶性明顯好于使用單一酶。制備過程中，使用過量的食品級乙酸乙酯作為酰 化劑兼做溶劑，利用微波輻射加熱代替?zhèn)鹘y(tǒng)的加熱方式應(yīng)用于酶催化反應(yīng)，即采取微波輻 射一酶耦合催化技術(shù)制備脂溶性茶多酚，無需額外使用有機(jī)溶劑，并且極大的縮短反應(yīng)時 間。
[0017] 有益效果：相對于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明制備方法具有以下優(yōu)勢：
[0018] (1)與傳統(tǒng)的化學(xué)法相比，避免使用了大量有毒有害，不適合用于食品行業(yè)的化學(xué) 試劑，較好的解決了試劑殘留問題。
[0019] (2)采用微波輻射一酶耦合催化技術(shù)制備脂溶性茶多酚，與傳統(tǒng)的酶法制備脂溶 性茶多酚相比，將反應(yīng)時間由8-24小時縮短為10-20分鐘。
[0020] (3)使用脂肪酶-蛋白酶復(fù)合酶配方，產(chǎn)物脂溶性大大提高。
【具體實(shí)施方式】
[0021] 下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明作更進(jìn)一步的說明。
[0022] 實(shí)施例1
[0023] (1)取茶多酚，加入乙酸乙酯，混合均勻，加入脂肪酶和蛋白酶，最后加入磷酸氫二 鈉-磷酸二氫鈉緩沖液，得反應(yīng)液；
[0024] (2)將上述反應(yīng)液進(jìn)行微波輻射，在溫度為35°C條件下反應(yīng)10min ;
[0025] (3)反應(yīng)結(jié)束后，加入水去除水溶性雜質(zhì)，靜置分層，取乙酸乙酯層，減壓蒸餾，真 空冷凍干燥，即得。
[0026] 步驟（1)中，乙酸乙酯為食品級乙酸乙酯，其加入量為每克茶多酚加入乙酸乙酯 300ml〇
[0027] 步驟（1)中，所述脂肪酶和蛋白酶的總質(zhì)量與茶多酚的質(zhì)量比為0.0625 :1，其中 脂肪酶質(zhì)量占所述總質(zhì)量的20%。
[0028] 步驟（1)中，磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉緩沖液的加入量為每克茶多酚加入緩沖液 0· 25ml，其 pH 為 6. 5。
[0029] 步驟（2)中，微波的功率為300W。
[0030] 步驟（3)中，減壓蒸餾的溫度為50 °C。
[0031] 實(shí)施例2
[0032] (1)取茶多酚，加入乙酸乙酯，混合均勻，加入脂肪酶和蛋白酶，最后加入磷酸氫二 鈉-磷酸二氫鈉緩沖液，得反應(yīng)液；
[0033] (2)將上述反應(yīng)液進(jìn)行微波輻射，在溫度為45°C條件下反應(yīng)20min ;
[0034] (3)反應(yīng)結(jié)束后，加入水去除水溶性雜質(zhì)，靜置分層，取乙酸乙酯層，減壓蒸餾，真 空冷凍干燥，即得。
[0035] 步驟（1)中，乙酸乙酯為食品級乙酸乙酯，其加入量為每克茶多酚加入乙酸乙酯 400ml〇
[0036] 步驟⑴中，所述脂肪酶和蛋白酶的總質(zhì)量與茶多酚的質(zhì)量比為0. 1875 :1，其中 脂肪酶質(zhì)量占所述總質(zhì)量的50%。
[0037] 步驟（1)中，磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉緩沖液的加入量為每克茶多酚加入緩沖液 I. 25ml，其 pH 為 8.0。
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