一種荔枝中難溶結(jié)合態(tài)多酚的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種荔枝中難溶結(jié)合態(tài)多酚的制備方法，該方法通過改進(jìn)傳統(tǒng)的酸水解工藝，將提取游離態(tài)多酚之后的荔枝果肉殘?jiān)尤胨崴庖褐?，磁力攪拌下水解后，繼續(xù)超聲處理，得提取液，調(diào)節(jié)提取液pH，離心，收集上清液，向上清液中加入乙酸乙酯進(jìn)行萃取，合并有機(jī)相，并旋蒸至干，即制備得荔枝中溶劑難溶結(jié)合態(tài)多酚。該方法步驟簡單，耗時(shí)短，水解溫度低，荔枝難溶結(jié)合態(tài)多酚得率高。
【專利說明】一種荔枝中難溶結(jié)合態(tài)多酚的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于荔枝多酚【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種荔枝中難溶結(jié)合態(tài)多酚的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]近來的大量流行病學(xué)調(diào)查結(jié)果提示增加新鮮蔬菜水果的攝入量對(duì)于降低癌癥等多種慢性疾病的發(fā)病率有重要意義。研究同時(shí)指出新鮮蔬菜水果中富含的多酚類物質(zhì)是發(fā)揮這些健康促進(jìn)作用的重要的活性成分。多酚是廣泛存在于植物的根、莖、葉、花、果實(shí)和種子等部位的一大類植物次生代謝產(chǎn)物。植物多酚以游離態(tài)和結(jié)合態(tài)兩種形式存在。游離態(tài)多酚是指采用常規(guī)的溶劑浸提方法可以提取得到的，沒有與植物細(xì)胞內(nèi)其它大分子物質(zhì)相結(jié)合的多酚類物質(zhì)。通常研究中所涉及的也主要是這一類多酚。此外，植物體內(nèi)還有一部分多酚類物質(zhì)通過酯鍵與植物細(xì)胞壁上的多糖、纖維素等大分子物質(zhì)共價(jià)結(jié)合，被稱為結(jié)合態(tài)多酚。這些酚類物質(zhì)不能通過常規(guī)的溶劑浸提方法被提取出來，因此，在研究中這部分酚類物質(zhì)往往被忽略。然而，隨著人們對(duì)酚類物質(zhì)的健康保護(hù)作用認(rèn)識(shí)的不斷深入，近年來，研究人員發(fā)現(xiàn)結(jié)合態(tài)多酚的健康保護(hù)作用有其自身的優(yōu)勢。由于這種結(jié)合態(tài)多酚受所結(jié)合的大分子成分保護(hù)，在上消化道內(nèi)不會(huì)被人體吸收和破壞而進(jìn)入到大腸，在細(xì)菌的分解作用下緩慢釋放后經(jīng)粘膜吸收入血，從而成為人體內(nèi)持續(xù)的多酚供應(yīng)來源。因此，深入研究不同植物結(jié)合態(tài)多酚的組成及含量對(duì)全面了解不同來源植物多酚的生物活性具有重要意義。
[0003]植物結(jié)合態(tài)多酚有多種提取方法，常用的有酸水解提取和堿水解提取。目前關(guān)于結(jié)合態(tài)多酚研究比較多的是玉米、水稻等谷物，研究者多用堿水解提取方法制備其結(jié)合酚。而對(duì)于水果、蔬菜中的結(jié)合酚的提取方法研究較少，研究者多沿用谷物的堿水解提取方法，并沒有對(duì)堿水解提取方法對(duì)果蔬結(jié)合酚的提取效果進(jìn)行評(píng)價(jià)。由于谷物與果蔬中的酚類物質(zhì)的構(gòu)成種類有較 大的差別，前者以酚酸為主，而后者含有較多的黃酮類化合物。由于這種酚類物質(zhì)構(gòu)成上的差異，使得堿水解方法并不一定適合果蔬結(jié)合態(tài)酚類物質(zhì)的提取。因此，針對(duì)不同的材料，需要優(yōu)化確立其適合的結(jié)合酚制備方法。此外，目前使用的堿或者酸催化水解制備結(jié)合態(tài)多酚的方法都存在操作步驟煩瑣，溫度高，耗時(shí)過長等缺點(diǎn)。因此，急需對(duì)現(xiàn)有的方法進(jìn)行改進(jìn)。
[0004]荔枝是一種重要的亞熱帶特色水果，深受國內(nèi)外消費(fèi)者的喜愛。研究發(fā)現(xiàn)荔枝果肉中酚類物質(zhì)含量較高，并具有較強(qiáng)的抗氧化活性，為其重要的活性成分。同時(shí)研究還發(fā)現(xiàn)荔枝果肉中的結(jié)合態(tài)酚類物質(zhì)含量較高，在某些品種中占總酚含量的近30%。然而上述研究結(jié)果也是在直接應(yīng)用堿水解制備結(jié)合態(tài)多酚的基礎(chǔ)上得到的，并沒有對(duì)結(jié)合酚的制備方法進(jìn)行比較和優(yōu)化。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的在于提供一種荔枝中難溶結(jié)合態(tài)多酚的制備方法，該方法步驟簡單，耗時(shí)短，水解溫度低，荔枝結(jié)合態(tài)多酚得率高。[0006]本發(fā)明的上述目的是通過如下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的:一種荔枝中難溶結(jié)合態(tài)多酚的制備方法，含以下步驟:
(1)制備酸水解液，取濃鹽酸，維生素C水溶液和甲醇，配制成酸水解液；
(2)取提取游離態(tài)多酚之后的荔枝果肉殘?jiān)?，加入步驟(1)制備的酸水解液中，磁力攪拌下調(diào)節(jié)溫度為55飛5°C水解I h，然后繼續(xù)超聲處理2(T40 min，并重復(fù)磁力攪拌水解和超聲處理1-2次，得提取液；
(3)調(diào)節(jié)提取液pH至2-3，離心后，收集上清液；
(4)向上清液中加入乙酸乙酯進(jìn)行萃取，合并有機(jī)相，并旋蒸至干，即制備得荔枝中難溶結(jié)合態(tài)多酚。
[0007]本發(fā)明主要是對(duì)傳統(tǒng)的酸水解方法進(jìn)行了改進(jìn)，主要包括降低酸水解液中的鹽酸的濃度，在水解液中添加維生素C作為抗氧化劑防止提取過程中結(jié)合態(tài)多酚的氧化分解；同時(shí)降低水解時(shí)間以減少熱處理造成的結(jié)合態(tài)多酚的分解；另外，還將加熱提取和超聲提取相結(jié)合，從而縮短提取時(shí)間，經(jīng)過上述多方面的改進(jìn)，可以提高結(jié)合態(tài)多酚的提取物得率以及提高結(jié)合態(tài)多酚的細(xì)胞抗氧化活性。
[0008]本發(fā)明步驟(1)中濃鹽酸的體積百分含量為20-35%(此時(shí)濃鹽酸的濃度為2.4^4.2mol/L),甲醇的體積百分含量為40飛0%，余量為維生素C水溶液。
[0009]本發(fā)明維生素C水溶液中維生素C的質(zhì)量百分含量為0.8^1.2%。
[0010]本發(fā)明步驟(2)中提取游離態(tài)多酚之后的荔枝果肉殘?jiān)奶崛∵^程優(yōu)選如下:將新鮮的荔枝果肉與冰凍的丙酮水溶液混合打漿，攪拌提取后，勻漿處理，將勻漿液離心，取沉淀物采用冰凍的丙酮水溶液再次提取，經(jīng)兩次提取之后所剩余的沉淀，經(jīng)干燥處理，即得提取游離態(tài)多酚之后的荔枝果肉殘?jiān)?br> [0011]采用這種方法提取游離態(tài)多酚，游離態(tài)多酚的提取程度高，可提取出來新鮮荔枝果肉中的絕大部分游離態(tài)多酚，從而為下一步結(jié)合態(tài)多酚提取效率的獲取提供依據(jù)。
[0012]本發(fā)明所述的冰凍的丙酮水溶液中丙酮的體積百分含量優(yōu)選為70-80%，新鮮的荔枝果肉與冰凍的丙酮水溶液的質(zhì)量體積比優(yōu)選為1:2~3 (單位:g/mL)，攪拌提取時(shí)間優(yōu)選為5~10 min，離心時(shí)使用冷凍離心機(jī)，離心速度優(yōu)選為3000~5000 rpm，溫度優(yōu)選為4°C，離心時(shí)間優(yōu)選為1(T15 min。
[0013]本發(fā)明所述的冰凍的丙酮水溶液中丙酮的體積百分含量最佳為80%，新鮮的荔枝果肉與冰凍的丙酮水溶液的質(zhì)量體積比最佳為1:2 (單位:g/mL)，攪拌提取時(shí)間最佳為5min，離心時(shí)使用冷凍離心機(jī)，離心速度最佳為3000 rpm，溫度為4°C，離心時(shí)間為lOmin。
[0014]本發(fā)明步驟(2)中荔枝果肉殘?jiān)c酸水解液的質(zhì)量體積比優(yōu)選為1:5~15 (單位:
g/mL)ο
[0015]本發(fā)明步驟(2)中取提取游離態(tài)多酚之后的荔枝果肉殘?jiān)尤氩襟E(1)制備的酸水解液中，優(yōu)選磁力攪拌下調(diào)節(jié)溫度為60°C水解lh，然后繼續(xù)超聲處理30min，并重復(fù)磁力攪拌水解和超聲處理1-2次，得提取液；超聲處理時(shí)超聲設(shè)備的功率為45(T750W。
[0016]本發(fā)明步驟(3)中離心時(shí)離心設(shè)備的轉(zhuǎn)速優(yōu)選為300(T5000 rpm ;離心時(shí)間優(yōu)選為 10~15min。
[0017]本發(fā)明步驟(4)中向上清液中加入等體積乙酸乙酯進(jìn)行萃取，共萃取4飛次，合并有機(jī)相，并在40°C以下旋蒸至干，即制備得荔枝難溶結(jié)合態(tài)多酚。[0018]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn):
(1)傳統(tǒng)的酸水解方法煩瑣、耗時(shí)，提取時(shí)間達(dá)18h之久，而本發(fā)明方法簡單，耗時(shí)短，可以將提取時(shí)間縮短到4.5h以內(nèi)；
(2)傳統(tǒng)的酸水解方法需要在較高溫度下(80°C)進(jìn)行提??；提取溫度相對(duì)較低，可以將提取溫度降低至60°C以下，從而可以減少熱處理造成的結(jié)合態(tài)多酚的分解；
(3 )傳統(tǒng)的酸水解方法中酸水解液中鹽酸的濃度高，而本發(fā)明方法降低了酸水解液中鹽酸的濃度，可降低至2.4 mo I/L ；
(4)本發(fā)明方法將加熱提取和超聲提取相結(jié)合，可以大大縮短提取時(shí)間；
(5)采用本發(fā)明方法提取結(jié)合態(tài)多酚，結(jié)合態(tài)多酚得率相對(duì)傳統(tǒng)酸水解方法具有顯著提高，細(xì)胞抗氧化活性也有顯著提高。
【具體實(shí)施方式】
[0019]由于荔枝果肉中游離態(tài)多酚的提取效率會(huì)影響到果肉殘?jiān)薪Y(jié)合態(tài)多酚的提取效果的評(píng)價(jià)，為了盡量完全的提取游離態(tài)多酚，本發(fā)明對(duì)以下幾種不同溶劑對(duì)荔枝果肉中游離態(tài)多酚的提取效果進(jìn)行了比較。
[0020]取新鮮荔枝果肉150 g，分別選用體積百分含量為80%的冰凍的甲醇、乙醇、丙酮和乙酸乙酯作為提取溶劑各300 mL與荔枝果肉攪拌破碎5 min，破碎后的荔枝果肉混合物用勻漿機(jī)4 °C勻漿5 min，所得勻漿液用低溫冷凍離心機(jī)3000 rpm離心10 min，分離上清，沉淀用300 mL上述提取溶劑重懸,4 °C下再次勻衆(zhòng)5 min,低溫冷凍離心機(jī)3000 rpm離心
·10min后合并兩次離心的上清液，45 °C旋蒸至干。將提取物用提交百分含量為85%的甲醇水溶液定容至50 mL，用于福林酚法總酚含量的測定(測定方法如上所述)，具體結(jié)果如表I，從表1中可以看出，四種提取溶劑中，80 %丙酮提取得到的游離態(tài)多酚是最多的，即80 %丙酮可以較完全的提取出荔枝果肉中的游離態(tài)多酚，因此在本發(fā)明以下實(shí)施例中所用的荔枝果肉殘?jiān)鶠橛?0%丙酮提取游離態(tài)多酚之后所得。
[0021]表1不同提取溶劑提取到的荔枝果肉中總酚含量(mg沒食子酸當(dāng)量/100g新鮮果肉)
溶劑類型P [ 總酚含量- ~I
SO % 甲醇P190.69±3,69bv I
I—I
80% 乙醇P171Jl±3,42c^ '

80 % 丙 Ifw210.67±9J5a^
_I__—I
TOM 乙駿乙藤 P [ 151.79±5.7Qd^ [
實(shí)施例1
(1)酸水解液的制備:濃鹽酸:0.8 %維生素C水溶液:甲醇=3:2:5 (v:v:v);其中濃鹽酸為市售產(chǎn)品，一般指濃度為12 mo I/L的濃鹽酸；
(2)荔枝果肉殘?jiān)墨@取:為提取新鮮荔枝果肉中的游離態(tài)多酚之后的荔枝果肉殘?jiān)@取的具體過程為:將新鮮的荔枝果肉與冰凍的80% (體積百分含量)丙酮水溶液按1:2(w/v, g/mL)混合打衆(zhòng),攪拌提取5 min后,在將混合物用勻衆(zhòng)機(jī)在4°C下勻衆(zhòng)5 min,所得的勻漿液經(jīng)3000 rpm離心10 min，沉淀用冰凍的80%丙酮(體積百分含量)水溶液再次提取，經(jīng)兩次提取之后所剩的沉淀揮干水分后即為荔枝果肉殘?jiān)?br> (3)稱取提取游離態(tài)多酚之后的荔枝果肉殘?jiān)?0 g加入平底燒瓶中，加入100 mL酸水解液，磁力攪拌下60°C水解I h，之后將燒瓶放入超聲波粉碎機(jī)中450 w超聲處理0.5 h，重復(fù)上述循環(huán)2次(指磁力攪拌水解以及超聲波超聲處理過程)；
(3)向提取液混合物中加入濃度為10mol/L的NaOH中和至pH 2 ；
(4)將中和后的提取液混合物3000rpm離心10 min,收集上清液；
(5 )向上清液中加入等體積的乙酸乙酯進(jìn)行萃取，共萃取6次，合并有機(jī)相，得乙酸乙酯萃取液；
(6)將乙酸乙酯萃取液在40°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，得荔枝結(jié)合態(tài)多酚提取物148 mg;多酚提取物得率(％ )=多酚提取物干粉重量/步驟三中稱取的果渣重量；
(7)將蒸干后的萃取物用磷酸鹽緩沖液溶解定容至25mL，得荔枝果肉結(jié)合態(tài)酚類物質(zhì)提取液，-80 °C保存，待測。
[0022](8)提取物多酚含量測定:多酚含量參照文獻(xiàn)報(bào)道(Dewanto V, Wu XZ, AdomKKj Liu RH: Thermal Processing Enhances the Nutritional Value of Tomatoes byIncreasing Total Antioxidant Activity.J Agric Food Chem 2002，50:3010-3014)米用福林酚法測定，具體如下:在5 mL試管中加入0.5 mL蒸餾水，再加入125 μ L上述提取液或者125 μ L不同濃度的沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)品溶液，最后向各管中加入125 μ L福林酚試劑。6 min后再向試管中加入1.25 mL質(zhì)量百分濃度為7%的Na2CO3溶液和I mL蒸餾水，混合均勻后室溫下避光反應(yīng)90 min，用紫外可見分光光度計(jì)760nm波長下測定吸光度值，多酚含量以沒食子酸當(dāng)量計(jì)。
[0023](9)細(xì)胞抗氧化活性測定:參照文獻(xiàn)方法進(jìn)行(Wolfe KL, Kang X，He X，Dong Μ,Zhang Qj Liu RH: Cellular Antioxidant Activity of Common Fruits.J Agric FoodChem 2008，56:8418-8426)。將處于對(duì)數(shù)生長期的HepG2細(xì)胞接種到黑色底部透明的96孔板中，細(xì)胞密度為5 X IO4/孔，CO2培養(yǎng)箱中37 °C培養(yǎng)24 h后，吸除培養(yǎng)基，向各孔中加入含有不同濃度槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品或待測的上述荔枝果肉殘?jiān)Y(jié)合態(tài)多酚提取物的無血清培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中同時(shí)添加終濃度為25 μ M的DCFH-DA繼續(xù)在CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)I h，對(duì)照孔和空白孔更換的無血清培養(yǎng)基中只加入DCFH-DA。取出培養(yǎng)板，吸棄各孔中培養(yǎng)基，立即加Λ 200 μ L含有600 μ M AAPH的平衡鹽液(HBSS)，空白孔中加入不含AAPH的HBSS。立即將培養(yǎng)板置入提前預(yù)熱至37°C的多功能酶標(biāo)儀中進(jìn)行測定熒光強(qiáng)度。吸收波長538nm，發(fā)射波長485nm，每隔5 min測定一次，共測定I h。每個(gè)相同的處理設(shè)定三個(gè)復(fù)孔。根據(jù)各孔不同時(shí)間點(diǎn)熒光強(qiáng)度(Y)與各時(shí)間點(diǎn)(X)做圖，計(jì)算熒光曲線下面積。根據(jù)曲線下面積變化，以槲皮素為參照，計(jì)算樣品的CAA值。為了方便比較，樣品的CAA值以ymol槲皮素當(dāng)量/100 g果渣計(jì)。
[0024]實(shí)施例2
(1)酸水解液的制備:濃鹽酸:1%維生素C水溶液:甲醇=2.5:3:4.5 (v:v:v);其中濃鹽酸為市售產(chǎn)品，一般指濃度為12mol/L的濃鹽酸；
(2)稱取提取游離態(tài)多酚之后的荔枝果肉殘?jiān)?0g加入平底燒瓶中，加入100 mL酸水解液，磁力攪拌下60°C水解I h，之后將燒瓶放入超聲波粉碎機(jī)中750 w超聲處理0.5 h，重復(fù)上述循環(huán)I次(指磁力攪拌水解以及超聲波超聲處理過程);
(3)向提取液混合物中加入濃度為10mo I/L的NaOH中和至pH 3 ；
(4)將中和后的提取液混合物3000rpm離心15 min,收集上清液；
(5)向上清液中加入等體積的乙酸乙酯進(jìn)行萃取，共萃取5次，合并有機(jī)相，得乙酸乙酯萃取液；
(6)將乙酸乙酯萃取液在40°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，得荔枝結(jié)合態(tài)多酚提取物140 mg。
[0025]實(shí)施例3
(1)酸水解液的制備:濃鹽酸:1.2 %維生素C水溶液:甲醇=3:1:6 (V: V: V);其中濃鹽酸為市售產(chǎn)品，一般指濃度為12mol/L的濃鹽酸；
(2)稱取提取游離態(tài)多酚之后的荔枝果肉殘?jiān)?g加入平底燒瓶中，加入75 mL酸水解液，磁力攪拌下60°C水解I h，之后將燒瓶放入超聲波粉碎機(jī)中600 w超聲處理0.5 h，重復(fù)上述循環(huán)2次(指磁力攪拌水解以及超聲波超聲處理過程)；
(3)向提取液混合物中加入濃度為10mo I/L NaOH中和至pH 2 ；
(4)將中和后的提取液混合物4000rpm離心10 min,收集上清液；
(5 )向上清液中加入等體積的乙酸乙酯進(jìn)行萃取，共萃取4次，合并有機(jī)相，得乙酸乙酯萃取液；
(6)將乙酸乙酯萃取液在40 °C旋轉(zhuǎn)`蒸發(fā)至干，得荔枝結(jié)合態(tài)多酚提取物99.5 mg。
[0026]為全面評(píng)價(jià)荔枝酚類物質(zhì)的生物活性提供方法學(xué)基礎(chǔ)，由于堿水解方法是目前較普遍使用的結(jié)合酚提取方法，本發(fā)明提取得到的荔枝果肉結(jié)合態(tài)多酚與采用堿水解方法得到的結(jié)合態(tài)多酚從總酚含量以及抗氧化活性等方面進(jìn)行了比較。
[0027]對(duì)照實(shí)施例1 傳統(tǒng)堿水解方法提取
具體步驟如下:收集提取游離態(tài)多酚之后的荔枝果肉殘?jiān)?，按重量體積比1:10(g/mL)加入2 mol/L的NaOH，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，室溫下攪拌水解18 h，混合物用濃鹽酸中和至pH 2，3000 rpm離心15 min，收集上清液，用等體積乙酸乙酯萃取6次，合并有機(jī)相，35 °C旋蒸至干，用PBS溶解提取物干粉，-80 °C凍存待測。
[0028]對(duì)照實(shí)施例2 傳統(tǒng)酸水解方法提取
具體步驟如下:收集提取游離態(tài)多酚之后的荔枝果肉殘?jiān)?，按重量體積比1:10(g/mL)加入6 mol/L的HC1，置于密閉的容器中，混合物在80°C磁力攪拌下水解18 h，用10mol/L的NaOH中和至pH 2,3000 rpm離心15 min，收集上清液，用等體積乙酸乙酯萃取6次，合并有機(jī)相，35 1:旋蒸至干，用PBS溶解提取物干粉，-80 °C凍存待測。
[0029]為了解該方法對(duì)荔枝果肉結(jié)合態(tài)多酚的提取效果，將實(shí)施例1方法提取得到的結(jié)合態(tài)多酚與傳統(tǒng)堿水解方法(對(duì)照實(shí)施例1)和酸水解方法(對(duì)照實(shí)施例2)提取的荔枝果肉結(jié)合態(tài)多酚從總酚含量、細(xì)胞抗氧化活性進(jìn)行了對(duì)比。
[0030]將上述三種不同方法(實(shí)施例1、對(duì)照實(shí)施例1和對(duì)照實(shí)施例2)提取得到的荔枝果肉結(jié)合態(tài)酚類物質(zhì)提取液采用福林酚法測定總酚含量，采用CAA法測定細(xì)胞抗氧化活性，測定結(jié)果如下表2所示。[0031]表2不同方法提取荔枝果渣中結(jié)合酚含量及其抗氧化活性
【權(quán)利要求】
1.一種荔枝中難溶結(jié)合態(tài)多酚的制備方法，其特征是含以下步驟: (1)制備酸水解液，取濃鹽酸，維生素C水溶液和甲醇，配制成酸水解液； (2)取提取游離態(tài)多酚之后的荔枝果肉殘?jiān)?，加入步驟(1)制備的酸水解液中，磁力攪拌下調(diào)節(jié)溫度為55飛5°C水解lh，然后繼續(xù)超聲處理2(T40min，并重復(fù)磁力攪拌水解和超聲處理1-2次，得提取液； (3 )調(diào)節(jié)提取液pH至2-3，離心后，收集上清液； (4)向上清液中加入乙酸乙酯進(jìn)行萃取，合并有機(jī)相，并旋蒸至干，即制備得荔枝中難溶結(jié)合態(tài)多酚。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的荔枝中難溶結(jié)合態(tài)多酚的制備方法，其特征是:步驟(1)中濃鹽酸的體積百分含量為20~35%，甲醇的體積百分含量為40~60%，余量為維生素C水溶液。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的荔枝中難溶結(jié)合態(tài)多酚的制備方法，其特征是:維生素C水溶液中維生素C的質(zhì)量百分含量為0.8^1.2%。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的荔枝中難溶結(jié)合態(tài)多酚的制備方法，其特征是:步驟(2)中提取游離態(tài)多酚之后的荔 枝果肉殘?jiān)奶崛∵^程如下:將新鮮的荔枝果肉與冰凍的丙酮水溶液混合打漿，攪拌提取后，勻漿處理，將勻漿液離心，取沉淀物采用冰凍的丙酮水溶液再次提取，經(jīng)兩次提取之后所剩余的沉淀，經(jīng)干燥處理，即得提取游離態(tài)多酚之后的荔枝果肉殘?jiān)?br> 5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的荔枝中難溶結(jié)合態(tài)多酚的制備方法，其特征是:所述的冰凍的丙酮水溶液中丙酮的體積百分含量為70-80%，新鮮的荔枝果肉與冰凍的丙酮水溶液的質(zhì)量體積比為1:2~3，攪拌提取時(shí)間為5-~10 min，離心時(shí)使用冷凍離心機(jī)，離心機(jī)轉(zhuǎn)速為3000-~5000 rpm，溫度為4°C，離心時(shí)間為10-~15 min。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的荔枝中難溶結(jié)合態(tài)多酚的制備方法，其特征是:所述的冰凍的丙酮水溶液中丙酮的體積百分含量為80%，新鮮的荔枝果肉與冰凍的丙酮水溶液的質(zhì)量體積比為1:2，攪拌提取時(shí)間為5min,離心時(shí)使用冷凍離心機(jī),離心機(jī)轉(zhuǎn)速為3000 rpm,溫度為4°C，離心時(shí)間為10 min。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的荔枝中難溶結(jié)合態(tài)多酚的制備方法，其特征是:步驟(2)中荔枝果肉殘?jiān)c酸水解液的質(zhì)量體積比為1:5~15。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的荔枝中難溶結(jié)合態(tài)多酚的制備方法，其特征是:步驟(2)中取提取游離態(tài)多酚之后的荔枝果肉殘?jiān)?，加入步驟(1)制備的酸水解液中，磁力攪拌下調(diào)節(jié)溫度為60°C水解lh，然后繼續(xù)超聲處理30min，并重復(fù)磁力攪拌水解和超聲處理1_2次，得提取液；超聲處理時(shí)超聲設(shè)備的功率為45(T750W。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的荔枝中難溶結(jié)合態(tài)多酚的制備方法，其特征是:步驟(3)中離心時(shí)離心設(shè)備的轉(zhuǎn)速為3000~5000rpm,離心時(shí)間為10~15min。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的荔枝中難溶結(jié)合態(tài)多酚的制備方法，其特征是:步驟(4)中向上清液中加入等體積乙酸乙酯進(jìn)行萃取，共萃取4飛次，合并有機(jī)相，并在40°C以下旋蒸至干，即制備得荔枝難溶結(jié)合態(tài)多酚。
【文檔編號(hào)】A61K36/77GK103705620SQ201310696508
【公開日】2014年4月9日 申請(qǐng)日期:2013年12月18日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月18日
【發(fā)明者】張瑞芬, 張名位, 張雁, 魏振承, 鄧媛元, 郭錦欣, 遆慧慧, 唐小俊, 劉磊, 馬永軒 申請(qǐng)人:廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院蠶業(yè)與農(nóng)產(chǎn)品加工研究所, 廣東寶桑園健康食品有限公司