專(zhuān)利名稱(chēng)：：18個(gè)基因座的熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增檢驗(yàn)系統(tǒng)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種18個(gè)基因座的熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增檢驗(yàn)系統(tǒng)，具體是涉及一種同時(shí)分析人基因組DNA18個(gè)基因座的五色熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增系統(tǒng)，該系統(tǒng)可以應(yīng)用于個(gè)體識(shí)別和親子鑒定。
背景技術(shù)：
：短串聯(lián)重復(fù)序列基因座(STR)是目前普遍應(yīng)用的遺傳標(biāo)記。90年代初STR基因座多態(tài)性的發(fā)現(xiàn)，特別是STR基因座具有片段小容易擴(kuò)增，適宜于檢驗(yàn)微量和降解檢材，而且各基因座的擴(kuò)增條件相似而能夠復(fù)合擴(kuò)增，因而具有靈敏、準(zhǔn)確、快速、信息量大等優(yōu)點(diǎn)。尤其是在建立DNA數(shù)據(jù)庫(kù)方面，STR復(fù)合擴(kuò)增技術(shù)具有極大的優(yōu)越性。因此美國(guó)FBI選擇了13個(gè)STR基因座用于建立DNA數(shù)據(jù)庫(kù)——CODIS(CombinedDNAIndexSystem):CSFlPO、D3S1358、D5S818、D7S820、D8S1179、D13S317、D16S539、D18S51、D21S11、FGA、HUMTHOl、TPOX、vWA。這些STR基因座通常被稱(chēng)為13個(gè)核心基因座。正因?yàn)镾TR所具備的優(yōu)點(diǎn)和應(yīng)用前景，法醫(yī)學(xué)界以及一些大的公司均投入大量的資金對(duì)其進(jìn)行了開(kāi)發(fā)性的研究。90年代中后期以美國(guó)ABI公司為代表的研發(fā)商建立起熒光復(fù)合擴(kuò)增體系。目前最具代表性的是ABI(AppliedBiosystems，USA)公司的IdentifilerTM和Promega(USA)公司的PowerPlex-16熒光檢測(cè)試劑盒。這兩個(gè)試劑盒均包括上述13個(gè)核心基因座。長(zhǎng)期的DNA檢驗(yàn)實(shí)踐表明，短串聯(lián)重復(fù)序列基因座的遺傳多態(tài)性在種族間存在一定的差異，各個(gè)基因座間差別也很大。在美國(guó)FBI推薦的13個(gè)核心基因座中，有部分基因座遺傳多態(tài)性不高，或是不同人群間差異較大。由此給DNA檢驗(yàn)技術(shù)的應(yīng)用及其效率帶來(lái)一定的影響。4專(zhuān)利ZL200510096613.6公開(kāi)了一種同時(shí)分析人基因組DNA的多個(gè)基因座的熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增系統(tǒng)，其特征在于所述的15個(gè)基因座為Amelogenin、D2S1338、D3S1358、D5S818、D6S1043、D7S820、D8S1179、D13S317、D16S539、D18S51、D21S11、PentaE、CSFIPO、vWA、FGA。該專(zhuān)利提供了對(duì)15個(gè)基因座的分型結(jié)果，為4色熒光檢測(cè)系統(tǒng)，其基因座分型系統(tǒng)的累積個(gè)體識(shí)別能力為3.49Xl(T18，累積非父排除率為0.999，999，6。我們對(duì)中國(guó)人群的短串聯(lián)重復(fù)序列基因座的遺傳多態(tài)性進(jìn)行了深入的研究，并以此為依據(jù)開(kāi)發(fā)新的短串聯(lián)重復(fù)序列基因座的復(fù)合擴(kuò)增檢驗(yàn)系統(tǒng)，以求在5色熒光檢測(cè)系統(tǒng)中，提供對(duì)包括Amelogenin在內(nèi)的18個(gè)基因座的分型結(jié)果，同時(shí)提高系統(tǒng)的累計(jì)個(gè)體識(shí)別能力和累積非父排除率。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的之一在于提供一種通過(guò)復(fù)合擴(kuò)增18個(gè)基因座來(lái)進(jìn)行個(gè)體識(shí)別和親子鑒定的熒光標(biāo)記STR復(fù)合擴(kuò)增檢驗(yàn)系統(tǒng)。涉及檢測(cè)人基因組中具有多態(tài)性的遺傳標(biāo)記。本發(fā)明特別涉及用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)在一個(gè)體系中同時(shí)擴(kuò)增多個(gè)短串聯(lián)重復(fù)基因座。為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，采用如下技術(shù)方案一種同時(shí)分析人基因組DNA的18個(gè)基因座的熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增系統(tǒng)，復(fù)合擴(kuò)增分析的18個(gè)基因座為Amelogenin、D2S1338、D3S1358、D5S818、D6S1043、D7S820、D8S1179、D13S317、D16S539、D18S51、D19S433、D21S11、PentaE、TPOX、THOl、CSFIPO、vWA、FGA。本發(fā)明是在一個(gè)復(fù)合擴(kuò)增反應(yīng)體系中同時(shí)擴(kuò)增18個(gè)基因座；將18個(gè)基因座分為四組并分別用四種顏色的熒光染料分別進(jìn)行標(biāo)記Amdogenin、D3S1358、D13S317、D7S820、D16S539和PentaE為一組；TPOX、THOl、D2S1338、CSFlPO和D19S433為一組；vWA、D5S818、FGA和D6S1043為一組；D8S1179、D21S11和D18S51為一組。本發(fā)明所采用的18個(gè)基因座被位于該基因座兩側(cè)的一對(duì)引物擴(kuò)增，其中每對(duì)引物中有一個(gè)引物的5，端進(jìn)行熒光染料標(biāo)記；本發(fā)明的系統(tǒng)中包括每個(gè)基因座所對(duì)應(yīng)的等位基因標(biāo)準(zhǔn)物的混合物，以確定DNA樣品中各個(gè)基因座的等位基因；本發(fā)明的系統(tǒng)中包含的用于鑒別DNA樣品性別的基因座是Amelogenin基因座；本發(fā)明的熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增系統(tǒng)擴(kuò)增多個(gè)基因座采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)進(jìn)行，檢測(cè)方法采用多道或單道毛細(xì)管電泳。本發(fā)明還涉及一種采用該熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增檢驗(yàn)系統(tǒng)對(duì)DNA樣品進(jìn)行分析的方法；其中，本發(fā)明適用的DNA樣品來(lái)源于精斑、唾液斑、組織、血痕或血液等。本發(fā)明中17個(gè)短串聯(lián)重復(fù)序列基因座STR基因座構(gòu)成為D3S1358、D13S317、D7S820、D16S539、PentaE、D2S1338、CSFIPO、D19S433、vWA、D5S818、FGA、D6S1043、D8S1179、D21S11、D18S51、TPOX、THOl。本發(fā)明對(duì)上述17個(gè)短串聯(lián)重復(fù)序列基因座及其等位基因遺傳特征進(jìn)行了深入的研究，表明這17個(gè)短串聯(lián)重復(fù)序列基因座在人群中具有高度的遺傳多態(tài)性和良好的等位基因頻率分布。將上述n個(gè)短串聯(lián)重復(fù)序列基因座加上用于鑒別人性別的Amelogenin基因座構(gòu)成本發(fā)明的復(fù)合擴(kuò)增檢驗(yàn)系統(tǒng)。本發(fā)明提供了一種通過(guò)復(fù)合擴(kuò)增18個(gè)基因座來(lái)進(jìn)行個(gè)體識(shí)別和親子鑒定的檢驗(yàn)系統(tǒng)。該基因座構(gòu)成，.突破了現(xiàn)有13個(gè)核心基因座的模式，更加符合法醫(yī)學(xué)DNA檢驗(yàn)的技術(shù)要求與中國(guó)人群的群體遺傳學(xué)特征，并兼顧了國(guó)際數(shù)據(jù)交流與共享的需求。本發(fā)明提供了熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增體系的基因座組合設(shè)計(jì)方案。本發(fā)明分別選用了藍(lán)、綠、黃、紅、橙5色熒光組合方案。這種基因座組合方式使得僅需標(biāo)記四種熒光就可實(shí)現(xiàn)這18個(gè)基因座在同一反應(yīng)中擴(kuò)增，同時(shí)將全部基因座擴(kuò)增產(chǎn)物控制在400bp以?xún)?nèi)而實(shí)現(xiàn)高靈敏度。本發(fā)明提供用于復(fù)合擴(kuò)增18個(gè)基因座的寡核苷酸引物混合物。本發(fā)明提供的檢驗(yàn)系統(tǒng)達(dá)到目前國(guó)際上STR熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增試劑盒的最高水平。一、基因座的確定對(duì)現(xiàn)有的STR基因座進(jìn)行深入分析研究并優(yōu)選新的高鑒別力基因座。對(duì)D8S1179、D21S11、D7S820、CSFIPO、D3S1358、D13S317、D16S539、TPOX、THOl、D5S818、vWA、D18S51、FGA、D2S1338、D19S433、PentaE、PentaD、D19S253、D12S391、D6S1043等24個(gè)STR基因座在中國(guó)人群的遺傳多態(tài)性開(kāi)展調(diào)查研究。對(duì)5000多名個(gè)體進(jìn)行基因型檢測(cè)，根據(jù)各基因座等位基因的分布頻率計(jì)算個(gè)體識(shí)別能力(DP)、雜合度(H)、非父排除率(PE)等數(shù)據(jù)，表明在24個(gè)STR基因座中，除THOl、TPOX基因座外，其余各基因座的DP值均接近0.9，H均大于0.7，PE值大都在0.5以上，這表明它們?cè)诜ㄡt(yī)學(xué)上有較好的應(yīng)用價(jià)值。THOl、TPOX基因座在多態(tài)性方面較差，但也符合法醫(yī)應(yīng)用的要求。多態(tài)信息含量(PIC)也是衡量DNA基因座應(yīng)用價(jià)值大小的指標(biāo)之一。本系統(tǒng)所選STR基因座PIC均大于0.5，故可為生物學(xué)檢材的檢驗(yàn)提供相當(dāng)大的f曰息里o在考慮到與現(xiàn)有數(shù)據(jù)庫(kù)兼容的基礎(chǔ)上，最終確立了STR基因座構(gòu)成，即D3S1358、D13S317、D7S820、D16S539、PentaE、TPOX、THOl、D2S1338、CSF1P0、D19S433、vWA、D5S818、FGA、D6S1043、D8S1179、D21S11、D18S51。該基因座構(gòu)成突破了現(xiàn)有13個(gè)核心基因座的模式，提供了18個(gè)基因座的分型結(jié)果，提高了系統(tǒng)的累計(jì)個(gè)體識(shí)別能力和累積非父排除率，更加符合法醫(yī)學(xué)DNA檢驗(yàn)的技術(shù)要求。二、熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增體系的基因座組合方案設(shè)計(jì)本研究對(duì)熒光染料進(jìn)行了鑒別、遴選，選用了藍(lán)、綠、黃、紅、橙五種熒光標(biāo)記物，構(gòu)建了5色熒光組合方案。在確定5色熒光組合方案的基礎(chǔ)上，通過(guò)大量反復(fù)實(shí)驗(yàn)，在國(guó)內(nèi)首次自行設(shè)計(jì)出基因座組合方式，以下為其中一種產(chǎn)品組合方式Amelogenin、D3S1358、D13S317、D7S820、D16S539和PentaE為一組，采用藍(lán)色熒光染料標(biāo)記，熒光標(biāo)記物為6-FAM;TPOX、THOl、D2S1338、CSFIPO、D19S433為一組，采用綠色熒光染料標(biāo)記，熒光標(biāo)記物為HEX;vWA、D5S818、FGA、D6S1043為一組，采用黃色熒光染料標(biāo)記，熒光標(biāo)記物為T(mén)AMRA;D8S1179、D21S11和D18S51為一組，采用紅色熒光染料標(biāo)記，熒光標(biāo)記物為ROX;。內(nèi)標(biāo)選用橙色熒光標(biāo)記，熒光標(biāo)記物為SIZ。這種獨(dú)創(chuàng)的基因座組合方式使得僅需標(biāo)記四種熒光就可實(shí)現(xiàn)這18個(gè)基因座的同吋檢測(cè)分析。在組合方案的基礎(chǔ)上，根據(jù)18個(gè)基因座所在位置的側(cè)翼序列進(jìn)行引物設(shè)計(jì)，實(shí)現(xiàn)18個(gè)基因座在同一反應(yīng)中的復(fù)合擴(kuò)增，同時(shí)將全部基因座擴(kuò)增產(chǎn)物控制在400bp以?xún)?nèi)而實(shí)現(xiàn)高靈敏度。本發(fā)明在國(guó)內(nèi)首次實(shí)現(xiàn)18個(gè)基因座同時(shí)在單一反應(yīng)中的復(fù)合擴(kuò)增，并以五色熒光標(biāo)記進(jìn)行檢驗(yàn)。三、熒光標(biāo)記STR復(fù)合擴(kuò)增體系的優(yōu)化及建立1、基因座之間平衡度的調(diào)配隨著復(fù)合擴(kuò)增體系中基因座數(shù)目的增加，由于競(jìng)爭(zhēng)的影響，各基因座的相對(duì)平衡控制難度加大，通過(guò)多次反復(fù)實(shí)驗(yàn)，調(diào)節(jié)引物濃度與配比，終達(dá)到平衡。2、復(fù)合擴(kuò)增條件的建立先對(duì)18個(gè)基因座的單一擴(kuò)增條件進(jìn)行優(yōu)化，在成功地建立了單個(gè)基因座擴(kuò)增條件的基礎(chǔ)上，研究18個(gè)基因座復(fù)合擴(kuò)增PCR反應(yīng)條件，通過(guò)大量的反復(fù)實(shí)驗(yàn)確定了復(fù)合擴(kuò)增中的各個(gè)參數(shù)，如，循環(huán)參數(shù)、退火溫度、緩沖液離子強(qiáng)度、酶量、復(fù)合擴(kuò)增反應(yīng)體積的變化以及模板DNA量等，使擴(kuò)增產(chǎn)物達(dá)到平衡、特異的要求，建立起復(fù)合擴(kuò)增體系，同時(shí)擴(kuò)增出18個(gè)基因座。其良好的應(yīng)用效果主要表現(xiàn)在下述幾個(gè)方面1.系統(tǒng)的靈敏度本發(fā)明中18個(gè)基因座的熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增檢驗(yàn)系統(tǒng)在DNA模板量為0.2ng的條件下，可檢出全部18個(gè)基因座。2.遺傳學(xué)調(diào)査用18個(gè)基因座的熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增檢驗(yàn)系統(tǒng)對(duì)中國(guó)漢族群體共5000多個(gè)樣品進(jìn)行遺傳學(xué)調(diào)查的結(jié)果表明該試劑在中國(guó)漢族人群中的總體隨機(jī)匹配概率為8.8xl(T21，其累積非父排除率為0.999999999993。3.實(shí)際應(yīng)用的效果本發(fā)明中18個(gè)基因座的熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增系統(tǒng)已在國(guó)內(nèi)IO個(gè)省市的公安系統(tǒng)中測(cè)試與試用，結(jié)果表明該系統(tǒng)多態(tài)性高，平衡性好，靈敏度高，分型結(jié)果準(zhǔn)確，完全能夠滿(mǎn)足實(shí)際案件檢驗(yàn)、DNA數(shù)據(jù)庫(kù)建設(shè)以及親子鑒定的需要。圖l:對(duì)無(wú)關(guān)個(gè)體DNA樣品的STR分型結(jié)果。圖2:18個(gè)基因座的熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增檢驗(yàn)系統(tǒng)的等位基因分型標(biāo)準(zhǔn)物。圖3:對(duì)實(shí)施例2樣品中的STR分型結(jié)果。具體實(shí)施例方式下面的實(shí)施例用來(lái)進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，但這并不意味著對(duì)本發(fā)明的任何限制。實(shí)施例118個(gè)基因座的熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增檢驗(yàn)系統(tǒng)的復(fù)合擴(kuò)增以及熒光檢測(cè)。1、PCR擴(kuò)增體系la分體積人基因組DNA0.5~2ngReactionMix10.0pLPrimers17+15.0(iL熱啟動(dòng)G-Taq酶(5U/fiL)0.5sdH20補(bǔ)足至25.0^L2、擴(kuò)增熱循S9(1)將PCR擴(kuò)增管置于熱循環(huán)儀上;(2)選擇下面推薦的程序進(jìn)行擴(kuò)增;(3)擴(kuò)增后的樣品應(yīng)避光保存；熱循環(huán)儀的擴(kuò)增程序初始變性熱循環(huán)終延伸保溫IO個(gè)循環(huán)94°C1分鐘，95°C62'C1分鐘，72°C1分鐘60。C4°C11分鐘20個(gè)循環(huán)90°Cl分鐘，60分鐘維持60°C1分鐘，72°C1分鐘3、擴(kuò)增產(chǎn)物在遺傳分析儀上熒光檢測(cè)由去離子甲酰胺與系統(tǒng)中分子量?jī)?nèi)標(biāo)(AGCUMarkerSIZ-500)組成上樣混合物((0.5plAGCUMarkerSIZ-500)X(進(jìn)樣數(shù))+(12^去離子甲酰胺)X(進(jìn)樣數(shù))〕。將上樣混合物與1nl擴(kuò)增產(chǎn)物或系統(tǒng)中等位基因分析標(biāo)準(zhǔn)物(17+1AllelicLadder)混合，避免產(chǎn)生氣泡。95'C變性3分鐘，冰浴3分鐘，并盡快電泳。用遺傳分析儀檢測(cè)分析。4、分型分析用片段分析軟件GeneMapper分析步驟3中遺傳分析儀檢測(cè)收集的數(shù)據(jù)，將樣品分析數(shù)據(jù)和17+1AllelicLadder(見(jiàn)附圖2)比較，得到實(shí)際樣品的分型數(shù)據(jù)，結(jié)果見(jiàn)附圖1。實(shí)施例2應(yīng)用18個(gè)基因座的熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增檢驗(yàn)系統(tǒng)進(jìn)行親子鑒定1、收集親子鑒定案件中的血樣本實(shí)驗(yàn)中樣品由深圳血站提供。2、Chelex-100法提取基因組DNA取0.55pl全血或13mmx25mm的血斑置于滅菌的1.5ml離心管中，加AsdH20lml于管中，振蕩數(shù)秒。置于室溫10分鐘，振蕩數(shù)秒。用12，000rpm離心3分鐘。棄上清液，-保留足夠上清液蓋沒(méi)沉淀，勿攪起沉淀。加入20(Hd5。/。的Chelex-100，振蕩數(shù)秒。于56。C保溫30分鐘，振蕩數(shù)秒。沸水浴10分鐘，振蕩數(shù)秒。用12,000rpm離心5分鐘，上清中為提取得到的人基因組DNA。3、擴(kuò)增檢測(cè)按照實(shí)施例1進(jìn)行PCR擴(kuò)增、遺傳分析儀檢測(cè)并最終獲得分型結(jié)果。4、結(jié)論親子鑒定的基本原理為根據(jù)孟德?tīng)栠z傳定律，親代基因型決定子代基因型。在沒(méi)有基因突變、分型差錯(cuò)的前提下①孩子的一對(duì)等位基因必定是一個(gè)來(lái)自父親，一個(gè)來(lái)自母親；②孩子不可能帶有雙親均沒(méi)有的等位基因。用實(shí)施例1方法檢測(cè)一例父一子一母三聯(lián)體親子關(guān)系，其結(jié)果見(jiàn)附圖3。在附圖3中，各色圖中各行依次為孩子、父親、母親的相應(yīng)檢測(cè)結(jié)果。由附圖3得到本實(shí)驗(yàn)的親子鑒定父一子一母基因分型如下表1:表l:<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>CPI=21063359.1RCP=99.99999%PI為父權(quán)指數(shù)，又稱(chēng)親子關(guān)系指數(shù)，是指假設(shè)父提供生父基因的可能性(x)與隨機(jī)男人提供生父基因的可能性(Y)的比值，表示假設(shè)父為孩子生父比隨機(jī)男子為孩子生父的可能性大多少倍，即PI=X/Y。f表示生母給孩子必需等位基因機(jī)會(huì)；c表示被控父親給孩子必需等位基因機(jī)會(huì)；p表示隨機(jī)男人給孩子必需等位基因機(jī)會(huì)，等于必需等位基因頻率；聯(lián)合父權(quán)指數(shù)CPI，為各個(gè)不連鎖基因座PI的乘積；相對(duì)親權(quán)概率(RCP)=(CPI/(CPI+1))xl00%;根據(jù)上述計(jì)算，本實(shí)驗(yàn)中父一子一母三聯(lián)體親子鑒定RCP值為99.99999%，認(rèn)定親子關(guān)系。1權(quán)利要求1.一種同時(shí)分析人基因組DNA18個(gè)基因座的熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增系統(tǒng)，其特征在于復(fù)合擴(kuò)增分析18個(gè)基因座Amelogenin、D2S1338、D3S1358、D5S818、D6S1043、D7S820、D8S1179、D13S317、D16S539、D18S51、D19S433、D21S11、PentaE、TPOX、TH01、CSF1PO、vWA、FGA。2.如權(quán)利要求1所述的復(fù)合擴(kuò)增系統(tǒng)，其特征在于在一個(gè)復(fù)合擴(kuò)增反應(yīng)體系中同時(shí)擴(kuò)增18個(gè)基因座。3.如權(quán)利要求1所述的復(fù)合擴(kuò)增系統(tǒng)，其特征在于所述的18個(gè)基因座分為四組并分別用四種不同顏色的熒光染料分別進(jìn)行標(biāo)記，分組方式為Amelogenin、D3S1358、D13S317、D7S820、D16S539和PentaE為一組；TPOX、TH01、D2S1338、CSF1PO和D19S433為一組；vWA、D5S818、FGA和D6S1043為一組；D8S1179、D21S11和D18S51為一組。每組分別采用一種熒光染料進(jìn)行標(biāo)記。4.如權(quán)利要求1所述的復(fù)合擴(kuò)增系統(tǒng)，其特征在于所述的18個(gè)基因座被位于該基因座兩側(cè)的一對(duì)引物擴(kuò)增，其中每對(duì)引物中有一個(gè)引物的5'端進(jìn)行熒光染料標(biāo)記。5.如權(quán)利要求1所述的復(fù)合擴(kuò)增系統(tǒng)，其特征在于所述的系統(tǒng)中包括每個(gè)基因座所對(duì)應(yīng)的等位基因標(biāo)準(zhǔn)物的混合物，以確定DNA樣品中各個(gè)基因座的基因型。6.如權(quán)利要求1所述的復(fù)合擴(kuò)增系統(tǒng)，其特征在于:所述的系統(tǒng)中用于鑒別DNA樣品性別的基因座是Amelogenin基因座。7.如權(quán)利要求1所述的復(fù)合擴(kuò)增系統(tǒng)，其特征在于其中多個(gè)基因座的復(fù)合擴(kuò)增采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，其檢測(cè)方法采用多道或單道毛細(xì)管電泳。8.—種同時(shí)分析人基因組DNA的方法，其特征在于應(yīng)用權(quán)利要求1至3任一的復(fù)合擴(kuò)增系統(tǒng)來(lái)進(jìn)行DNA樣品分析。9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中DNA樣品包括精斑、唾液斑、組織、血痕或血液等。全文摘要本發(fā)明涉及一種同時(shí)分析人基因組DNA18個(gè)基因座的五色熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增系統(tǒng)；本發(fā)明將18個(gè)基因座分為4組，共涉及5種顏色的熒光標(biāo)記；本發(fā)明的熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增系統(tǒng)的靈敏度高，在DNA模板量為0.2ng的條件下，可檢出全部18個(gè)基因座；在中國(guó)漢族人群中的總體隨機(jī)匹配概率為8.8×10^-21，累積非父排除率為0.999999999993。文檔編號(hào)G01N21/64GK101440410SQ200810246660公開(kāi)日2009年5月27日申請(qǐng)日期2008年12月29日優(yōu)先權(quán)日2008年12月29日發(fā)明者夏子芳,杜蔚安,熊勇華,鄭衛(wèi)國(guó),陳光輝申請(qǐng)人:無(wú)錫中德美聯(lián)生物技術(shù)有限公司