專利名稱：：用作蛋白激酶抑制劑的氨基嘧啶類的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及用作蛋白激酶抑制劑的化合物。本發(fā)明還提供了包含那些化合物的藥學(xué)上可接受的組合物和使用所述化合物和組合物治療各種病癥的方法。本發(fā)明還提供了制備本發(fā)明化合物的方法。發(fā)明背景糖原合酶激酶-3(GSK-3)為由各自被不同基因編碼的a和P亞型組成的絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶[Coghlan等，Chemistry&Biology2000,7，793-803;和Kim和Kimmel，Curr.OpinionGeneticsDev.,200010,508-514]。蛋白激酶，特別是GSK-3涉及各種疾病，病癥和疾患，包括糖尿病，阿爾茨海默病，亨廷頓病，肌萎縮性側(cè)索硬化，帕金森病，雙相型情感障礙，精神分裂癥，腦中風(fēng)和心臟肥大[PCT申請WO99/65897和WO00/38675;Haq等，J.CellBiol.2000，151，117-130;Hirotani等，CirculationResearch101，2007，pp.1164-1174]。抑制GSK-3為治療這些疾病，病癥和疾患的理想手段。在心臟肥大中，活性GSK-3對抑制肥大而言可能是重要的。然而，阻斷GSK-3表現(xiàn)為對防止肥大化心肌細(xì)胞而言是重要的[Haq等，J.CellBiol.2000，151,117-130;Hirotani等，CirculationResearch101，2007，pp.1164-1174]。GSK-3調(diào)節(jié)與各種信號傳導(dǎo)途徑相關(guān)的多種下游效應(yīng)物。這些蛋白包括為糖原合成所必需的限速酶的糖原合酶，微管相關(guān)蛋白Tau，p-連環(huán)蛋白的基因轉(zhuǎn)錄因子，轉(zhuǎn)錄起始因子elF2B和ATP檸檬酸裂解酶，軸蛋白，熱激因子-1，c-Jun，c-myc，c-myb，CREB和CEPBa。這些不同蛋白耙標(biāo)涉及細(xì)胞代謝，增殖，分化和發(fā)育中的許多方6在GSK-3介導(dǎo)的涉及治療II型糖尿病的途徑中，胰島素-誘導(dǎo)的信號傳導(dǎo)導(dǎo)致細(xì)胞葡萄糖攝取和糖原合成。沿該途徑，GSK-3為胰島素-誘導(dǎo)的信號的負(fù)調(diào)節(jié)物。一般而言，胰島素的存在導(dǎo)致GSK-3介導(dǎo)的磷酸化抑制和糖原合酶失活。抑制GSK-3導(dǎo)致糖原合成和葡萄糖攝取增加[Klein等，PNAS1996，93，8455-8459;Cross等,Biochem.J.1994,303,21-26);Cohen,Biochem.Soc.Trans.1993，21，555-567;和Massillon等，BiochemJ.1994,299，123-128]。然而，在胰島素反應(yīng)受損的糖尿病患者中，盡管存在相對高的胰島素血中濃度，但是糖原合成和葡萄糖攝取仍然難以增加。這導(dǎo)致最終可能導(dǎo)致心血管疾病，腎衰竭和失明的急性和長期作用的異常高葡萄糖血中濃度。在這類患者中，正常胰島素-誘導(dǎo)的GSK-3抑制難以出現(xiàn)。還報導(dǎo)在具有II型糖尿病的患者中，GSK-3得到超表達(dá)[參見PCT申請W000/38675]。GSK-3的治療抑制劑由此能夠用于治療患有對胰島素反應(yīng)受損的糖尿病患者。GSK-3活性與阿爾茨海默病相關(guān)。該病的標(biāo)志為聚集的P-淀粉樣蛋白肽類形成的胞外斑塊和tau蛋白形成胞內(nèi)神經(jīng)原纖維纏結(jié)。還證實GSK-3抑制減少了阿爾茨海默病動物模型中的淀粉樣蛋白-p肽類。參見435，438頁，Phiel等，Nature423，435-439(2003)。在3周期限內(nèi)使用鋰(GSK-3a抑制劑)治療的超表達(dá)淀粉樣前蛋白(APP)的小鼠顯示淀粉樣蛋白-p肽組織水平下降50%以上。神經(jīng)原纖維纏結(jié)包含超磷酸化Tau蛋白，其中Tau在異常位點上磷酸化。已知GSK-3使細(xì)胞和動物模型中的這些異常位點磷酸化。超表達(dá)GSK-3的條件轉(zhuǎn)基因小鼠發(fā)生的AD的狀況，包括tau高度磷酸化，神經(jīng)元細(xì)胞凋亡和空間學(xué)習(xí)能力缺失。在這些小鼠中截斷GSK-3恢復(fù)了正常行為，減少了Tau高度磷酸化和神經(jīng)元細(xì)胞凋亡(EngelT等，JNeuroSci，2006，26，5083-5090和Lucas等，EMBO7J，2001，20,27-39)。還證實GSK-3抑制劑防止細(xì)胞中Tau高度磷酸化[Lovestone等，CurrentBiology1994，4,1077-86;和Brownlees等，Neuroreport1997,8，3251-55]。在文獻(xiàn)中還報導(dǎo)了分別作為精神病和情感障礙，諸如精神分裂癥和雙極疾病的靶標(biāo)的GSK-3。在與GSK-3活性增加相關(guān)的一組精神分裂癥患者中鑒定了AKT單元型缺陷。GSK-3P的單一等位基因敲除導(dǎo)致作為躁狂行為模型中對苯丙胺反應(yīng)的活動過度減弱。已經(jīng)證實用于治療精神分裂癥和雙極疾病的幾種抗精神病藥和情緒穩(wěn)定劑抑制GSK-3(Eraamian等，NatGenet，2004，36，131-137;Obrien等，JNeurosci，2004，24，6791-6798;Beaulieu等，PNAS，2004，101，5099-5104;Li等，IntJNeuropsychopharmacol，2006,pp1-13;GouldTD，ExpertOpinTherTargets,2006，10，377-392)。此外，近期的專利US2004/0039007中描述了在相關(guān)小鼠行為模型中表現(xiàn)出抗精神分裂癥和抗焦慮作用的GSK-3抑制劑。GSK-3活性與中風(fēng)相關(guān)。Wang等證實已知的GSK-3抑制劑IGF-1(胰島素生長因子-l)減小了大鼠中風(fēng)模型暫時性中腦動脈閉塞(MCAO)后大鼠腦中的梗塞面積[Wang等，BrainRes2000，859，381-5;Sasaki等，NeurolRes2001,23，588-92;Hashimoto等，J.Biol.Chem2002，277，32985-32991]。US2004/0039007中描述了GSK-3抑制劑在大鼠中風(fēng)模型MCAO中的作用。這些GSK-3抑制劑在大鼠中顯著減輕了紋狀體缺血性腦傷并且減少了水腫形成。另外，大鼠"在實驗時間期限內(nèi)表現(xiàn)出神經(jīng)系統(tǒng)功能的顯著改善"。因所有上述原因，所以對研發(fā)用作蛋白激酶抑制劑的化合物存在需求。特別需要研發(fā)用作特別是指定目前用于涉及其活化的大部分病癥的不適當(dāng)治療的GSK-3抑制劑的化合物。發(fā)明概述本發(fā)明提供了用作GSK-3蛋白激酶抑制劑的化合物及其藥學(xué)上可接受的組合物。這些化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽由式I表示:其中變量如本文中所定義。這些化合物在阻斷GSK-3酶的酪氨酸自磷酸化形式方面具有超過絲氨酸/蘇氨酸激酶形式的令人意外的選擇性。這些化合物還令人意外地有效增加神經(jīng)元細(xì)胞中的軸突和樹突分枝，用于治療神經(jīng)變性疾患，諸如中風(fēng)，阿爾茨海默病，帕金森病，亨廷頓病，肌萎縮性側(cè)索硬化(ALS)多發(fā)性硬化(MS)，脊髓損傷，外傷性腦損傷，沙-馬-圖病，白細(xì)胞減少，糖尿病，糖尿病神經(jīng)病變和骨質(zhì)疏松癥。這些化合物還有效地作為修復(fù)，再生和細(xì)胞分化的化學(xué)調(diào)節(jié)劑。本發(fā)明還提供了用于制備這些化合物，組合物，藥物組合物的方法和使用這類化合物和組合物抑制蛋白激酶的方法。這些化合物特別用作GSK-3抑制劑。這些化合物及其藥學(xué)上可接受的組合物還用于治療或預(yù)防各種疾病，病癥或疾患，包括，但不限于自身免疫性，炎癥性，增殖性或過度增殖性疾病或神經(jīng)變性疾病或免疫介導(dǎo)的疾病。本發(fā)明提供的化合物用于抑制體外，體內(nèi)和離體的激酶。這些化合物還用于研究生物和病理現(xiàn)象中的激酶；研究這類激酶介導(dǎo)的胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑；和對新激酶抑制劑進(jìn)行對比評價。發(fā)明詳述本發(fā)明提供了式I的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽9其中W為Cw烷基；且f為d—3烷基。在某些實施方案中，RX為甲基或乙基。在某些實施方案中，Rx為曱基。在某些實施方案中，RY為曱基。在某些實施方案中，f和RY均為曱基。在某些實施方案中，RX為乙基且RY為曱基?！獋€實施方案提供了如下表1中所示的化合物。表1<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>本發(fā)明的化合物包括一般上文所述的那些并且進(jìn)一步由本文披露的類別，亞類和種類例證。除非另作陳述，否則應(yīng)使用本文所用的下列定義。就本發(fā)明的目的而言，按照元素周期表，CAS版，HandbookofChemistryandPhysics,75thEd鑒定化學(xué)元素。另夕卜，有機(jī)化學(xué)的一般原理描述在"OrganicChemistry"，ThomasSorrel1,UniversityScienceBooks,Sausalito:1999和"March'sAdvancedOrganicChemistry"，5thEd.，Ed.:Smith,M.B.和March,J.，JohnWiley&Sons,NewYork:2001中，將這些文獻(xiàn)的全部內(nèi)容引入本文作為參考o(jì)本文所述的具體的原子數(shù)量范圍包括其中任意的整數(shù)。例如，具有1-4個原子的基團(tuán)可以具有1，2，3或4個原子。本文所用的本發(fā)明化合物可以任選被一個或多個取代基取代，諸如一般如上文所述的那些或以本發(fā)明的具體類別，亞類和種類為典型?？梢岳斫庑g(shù)語"任選取代的"可以與術(shù)語"取代或未取代的"互換使用。一般而言，本文所用的術(shù)語"取代的"之前無論是否存在本文所用的術(shù)語"任選"，都意旨在指定結(jié)構(gòu)上的氫基被指定的取代基取代。除非另作陳述，否則任選取代的基團(tuán)可以在該基團(tuán)的每一可取代的位置上帶有取代基，并且在任意指定的結(jié)構(gòu)上的一個以上位置可以被一個以上選自指定基團(tuán)的取代基取代時，該取代基在每一位置上可以相同或不同。本發(fā)明關(guān)注的取代基組合優(yōu)選為導(dǎo)致形成穩(wěn)定或化學(xué)上適宜的化合物的那些。本文所用的術(shù)語"穩(wěn)定的，，意旨在為本文披露的一個或多個目的接觸對其進(jìn)行生產(chǎn)，檢測，回收，純化和應(yīng)用的條件時基本上不改變的化合物。在某些實施方案中，穩(wěn)定或化學(xué)上適宜的化合物為在沒有濕度或其它化學(xué)反應(yīng)條件存在下保存在"。C或40。C以下溫度下時基本上至少1周不改變的化合物。本文所用的術(shù)語"脂族化合物"或"脂族基團(tuán)"意旨直鏈(即非支鏈)，支鏈或非支鏈的取代或未取代的烴鏈，其為完全飽和的或包含一個或多個不飽和單元并具有與分子剩余部分的單一連接點。除非另作陳述，否則，脂族基團(tuán)包含l-20個脂族碳原子。在某些實施方案中，脂族基團(tuán)包含i-io個脂族碳原子。在其它實施方案中，脂族基團(tuán)包含1-8個脂族碳原子。在其它實施方案中，脂族基團(tuán)包含1-6個脂族碳原子，且在其它實施方案中，脂族基團(tuán)包含1-4個脂族碳原ii子。合適的脂族基團(tuán)包括，但不限于直鏈或支鏈的取代或未取代的烷基，烯基或炔基。具體實例包括，但不限于甲基，乙基，異丙基，正-丙基，仲-丁基，乙烯基，正-丁烯基，乙炔基和叔-丁基。本文所用的術(shù)語"烷基"意旨直鏈(即非支鏈)，支鏈或非支鏈的取代或未取代的烴鏈，其為完全飽和的并具有與分子剩余部分的單一連接點。除非另作陳述，否則，烷基包含1-6個烷基碳原子。在某些實施方案中，烷基包含l-4個烷基碳原子。在其它實施方案中，烷基包含1-3個烷基碳原子。實例包括，但不限于曱基，乙基，異丙基，正-丙基，仲-丁基，正-丁基和正-戊基。本文所用的術(shù)語"脂環(huán)族化合物，，(或"碳環(huán)"或"碳環(huán)基"或"環(huán)烷基")意旨單環(huán)C廣C8烴或雙環(huán)Cs-C!2烴，其為完全飽和的或包含一個或多個不飽和單元，但并非芳族的，并具有與分子剩余部分的單一連接點，其中在所述雙環(huán)環(huán)系中的任意單環(huán)均具有3-7個成員。合適的脂環(huán)族基團(tuán)包括，但不限于環(huán)烷基和環(huán)烯基。具體實例包括，但不限于環(huán)己基，環(huán)丙烯基和環(huán)丁基。本文所用的術(shù)語"雜環(huán)"，"雜環(huán)基"或"雜環(huán)的"意旨非-芳族的單環(huán)，雙環(huán)或三環(huán)環(huán)系，其中一個或多個環(huán)成員為獨立選擇的雜原子。在某些實施方案中，"雜環(huán)"，"雜環(huán)基"或"雜環(huán)的"基團(tuán)具有3-14個環(huán)成員，其中一個或多個環(huán)成員為獨立地選自氧，硫，氮或磷的雜原子并且所述系統(tǒng)上的每個環(huán)均包含3-7個環(huán)成員。合適的雜環(huán)包括，但不限于3-1H-苯并咪唑-2-酮，3-(l-烷基)-苯并咪唑-2-酮，2-四氫呋喃基，3-四氫呋喃基，2-四氫噻吩基，3-四氫噻吩基，2-嗎啉代，3-嗎啉代，4-嗎啉代，2-硫代嗎啉代，3-硫代嗎啉代，4-硫代嗎啉代，l-吡咯烷基，2-吡咯烷基，3-吡咯烷基，1-四氬哌噪基，2-四氬哌喚基，3-四氬p底溱基，l-哌啶基，2-哌啶基，3-哌啶基，l-吡唑烷基，3-吡唑烷基，4-吡唑烷基，5-吡唑烷基，1-哌啶基，2-哌啶基，3-哌啶基，4-哌啶基，2-噻唑烷基，3-噻唑烷基，4-噻唑烷基，l-咪唑烷基，2-咪唑烷基，4-咪唑烷基，5-咪唑烷基，二氫吲哚基，四氬全啉基，四氫異會啉基，苯并硫戊環(huán)(benzothiolane)，苯并二噻烷和1，3-二氫-咪唑-2-酮。環(huán)狀基團(tuán)(例如脂環(huán)族基團(tuán)和雜環(huán))可以為線性稠合，橋連或螺環(huán)的。本文所用的術(shù)語"雜原子"意旨氧，硫，氮或磷中的一個或多個(包括氮，硫或砩的任意氧化形式；任意堿性氮的季銨化形式；或雜環(huán)的可取代的氮，例如N(作為在3，4-二氫-2H-吡唑基中)，NH(作為在吡咯烷基中)或NR+(作為在N-取代的吡咯烷基中))。本文所用的術(shù)語"不飽和的"意旨帶有一個或多個不飽和單元的結(jié)構(gòu)部分。本文所用的術(shù)語"烷氧基"或"烷硫基"意旨如上述定義的通過氧("烷氧基，，)或硫("烷硫基")原子與主碳鏈連接的烷基。術(shù)語"卣代烷基"，"離代烯基"，"卣代脂族基團(tuán)"和"卣代烷氧基，，意旨烷基，烯基或烷氧基，就此而言，可以被一個或多個鹵原子取代。術(shù)語"鹵素"，"鹵代"和"hal"意旨F,Cl,Br或I。術(shù)語"芳基"單獨使用或作為"芳烷基，，，"芳烷氧基"或"芳氧基烷基"的較大結(jié)構(gòu)部分的組成部分意旨總計帶有5-14個環(huán)成員的單環(huán)，雙環(huán)和三環(huán)環(huán)系，其中所述系統(tǒng)中的至少一個環(huán)為芳族的且其中所述系統(tǒng)中的每個環(huán)包含3-7個環(huán)成員。本文所用的術(shù)語"芳基"可以與本文所用的術(shù)語"芳基環(huán)"互換使用。本文所用的術(shù)語"芳基，，還意旨如下文定義的芳基環(huán)系。本文所用的術(shù)語"雜芳基"單獨使用或作為"雜芳烷基"或"雜芳基烷氧基"的較大結(jié)構(gòu)部分的組成部分意旨總計帶有5-14個環(huán)成員的單環(huán)，雙環(huán)和三環(huán)環(huán)系，其中所述系統(tǒng)中的至少一個環(huán)為芳族的，所述系統(tǒng)中至少一個環(huán)包含一個或多個雜原子且其中所述系統(tǒng)中的每個環(huán)包含3-7個環(huán)成員。本文所用的術(shù)語"雜芳基"可以與本文所用的術(shù)語"雜芳基環(huán)"或本文所用的術(shù)語"雜芳族化合物"互換使用。合適的雜芳基環(huán)包括，但不限于2-呋喃基，3-呋喃基，N-咪唑基，2-咪唑基，4-咪唑基，5-咪唑基，苯并咪唑基，3-異喁唑基，4-異p惡唑基，5-異喁唑基，2-p惡唑基，4-喁唑基，5-嚙唑基，N-吡咯基，2-p比咯基，3-p比咯基，2-p比咬基，3-p比咬基，4-p比咬基，2-嘧啶基，4-嘧啶基，5-嘧啶基，噠溱基(例如3-噠溱基)，2-瘞唑基，4-蓬唑基，5-蓉喳基，四唑基(例如5-四唑基)，三唑基(例如2-三唑基和5-三唑基)，2-瘞吩基，3-瘞吩基，苯并吹喃基，苯并瘞吩基，巧l哚基(例如2-吲哚基)，吡唑基(例如2-吡唑基)，異噻唑基，1，2，3-噁二唑基，1，2，5-嗜,二唑基，1，2，4-噁二唑基，1，2，3-三唑基，1，2，3-噻二唑基，1，3，4-噻二唑基，1，2，5-噻二唑基，嘌呤基，吡嗪基，1，3，5-三溱基，喹啉基(例如2-喹啉基，3-喹啉基，4-喹啉基)和異喹啉基(例如1-異喹啉基，3-異喹啉基或4-異喹啉基)。本文所用的術(shù)語"保護(hù)基，，和"保護(hù)基團(tuán)，，可以互換使用并且意旨用于暫時打斷多官能化合物上的一個或多個所需反應(yīng)位點的試劑。在某些實施方案中，保護(hù)基具有下列特征中的一個或多個，或優(yōu)選其全部a)選擇性加入到官能基上以良好產(chǎn)率得到被保護(hù)的底物；b)其對其它反應(yīng)位點中的一個或多個上發(fā)生的反應(yīng)穩(wěn)定；和c)用不攻擊再生的脫保護(hù)的官能基的反應(yīng)劑以良好產(chǎn)率選擇性除去。典型的保護(hù)基詳細(xì)描述在Greene,T.W.,Wuts,P.G的"ProtectiveGroupsinOrganicSynthesis"，ThirdEdition,JohnWiley&Sons,NewYork:1999(和該書的其它版本)中，將這些文獻(xiàn)的全部內(nèi)容引入本文作為參考。本文所用的術(shù)語"氮保護(hù)基"意旨用于暫時打斷多官能化合物上的一個或多個所需的氮反應(yīng)位點的試劑。優(yōu)選的氮保護(hù)基還具有上述典型特征，并且某些典型的氮保護(hù)基也詳細(xì)描述在Greene,T.W.，Wuts，P.G的"ProtectiveGroupsinOrganicSynthesis",第3版，JohnWiley&Sons,NewYork:1999中的第7章中，將這些的全部內(nèi)容引入本文作為參考。在某些實施方案中，烷基或脂族鏈可以任選被另一個原子或基團(tuán)取代。這類原子或基團(tuán)的實例可以包括，但不限于-NR-，-O-，-S-，-C02-，-OC(O)-，-C(O)CO-，-C(O)-，-C(O)NR-，-C(-N-CN)，-NRC0-，-NRC(O)O-，-S02NR-，-NRS02-，-NRC(O)NR-，-OC(O)NR-，14-NRS02NR-，-S0-或-S02-，其中R如本文定義。除非另作陳述，否貝'J，任選的取代形成化學(xué)上穩(wěn)定的化合物。任選的取代可以發(fā)生在鏈內(nèi)和鏈末端上；即在連接點和/或也在末端上。兩個任選的取代也可以在鏈內(nèi)彼此相鄰，以便產(chǎn)生化學(xué)上穩(wěn)定的化合物。任選的取代還可以完全取代鏈上的所有碳原子。例如，C3脂族基團(tuán)可以任選被-NR-,-C(O)-和-NR-打斷或取代而形成-NRC(0)NR-(脲)。除非另作陳述，否則，如果取代發(fā)生在末端上，那么取代原子與末端上的H結(jié)合。例如，如果-CH2CH2CH3任選被-0-取代，那么所得化合物可以為-OCH2CH3，-(^20(:113或-CH2CH2OH。除非另作陳述，否則，本文所示的結(jié)構(gòu)還意旨包括該結(jié)構(gòu)的所有異構(gòu)體(例如對映異構(gòu)體，非對映異構(gòu)體和幾何(或構(gòu)象))形式；例如，不對稱中心(Z)和(E)雙鍵異構(gòu)體和(Z)和(E)構(gòu)象異構(gòu)體各自的R和S構(gòu)型。因此，本發(fā)明化合物的單一立體化學(xué)異構(gòu)體和對映異構(gòu)體，非對映異構(gòu)體和幾何(或構(gòu)象)混合物屬于本發(fā)明的范圍。除非另作陳迷，否則本發(fā)明的所有互變體形式屬于本發(fā)明的范圍。除非另作陳述，否則取代基可以圍繞任意可旋轉(zhuǎn)的鍵自由旋轉(zhuǎn)。例如，繪制為、乂的取代基也表示^。另外，除非另作陳述，否則本文所示的結(jié)構(gòu)還意旨包括僅在有一個或多個富含同位素的原子存在下不同的化合物。例如，具有本發(fā)明結(jié)構(gòu)，但用氘或氚取代氫或用富含"C-或14C的碳取代碳的化合物屬于本發(fā)明的范圍。例如，這類化合物用作生物試驗中的分析工具或探針。還可以理解本發(fā)明的化合物可以以游離形式存在以便用于治療，或如果合適，作為藥學(xué)上可接受的鹽，多種鹽或其混合物的形式存在。本文所用的術(shù)語"藥學(xué)上可接受的鹽"意旨在合理醫(yī)學(xué)判斷范圍內(nèi)適用于接觸人體組織和低等動物，但無過度毒性，刺激，過15敏反應(yīng)并且與合理的有益/風(fēng)險比相當(dāng)?shù)幕衔锏柠}。藥學(xué)上可接受的鹽為本領(lǐng)域眾所周知的。例如，S.M.Berge等在J.PharmaceuticalSciences,1977,66，1-19中詳細(xì)描述了藥學(xué)上可接受的鹽，將該文獻(xiàn)引入本文作為參考。本發(fā)明化合物的藥學(xué)上可接受的鹽包括衍生自合適的無機(jī)和有機(jī)酸和堿的那些?？梢栽诨衔锏淖罱K分離和純化過程中在原位制備這些鹽?？梢酝ㄟ^下列步驟制備酸加成的鹽l)使游離堿形式的純化的化合物與合適的有才幾或無機(jī)酸反應(yīng)和2)分離由此形成的鹽。藥學(xué)上可接受的無毒性酸加成的鹽的實例為使用無機(jī)酸或有機(jī)酸或通過使用本領(lǐng)域中使用的方法，諸如離子交換形成的氨基的鹽。其它藥學(xué)上可接受的鹽包括己二酸鹽，藻酸鹽，抗壞血酸鹽，天冬氨酸鹽，苯磺酸鹽，苯甲酸鹽，硫酸氫鹽，硼酸鹽，丁酸鹽，樟腦酸鹽，樟腦磺酸鹽，檸檬酸鹽，環(huán)戊烷丙酸鹽，二葡糖酸鹽，十二烷基硫酸鹽，乙磺酸鹽，曱酸鹽，富馬酸鹽，葡庚糖酸鹽，甘油磷酸鹽，乙醇酸鹽，葡糖酸鹽，半硫酸鹽，庚酸鹽，己酸鹽，氫碘酸鹽，2-羥基-乙磺酸鹽，乳糖酸鹽，乳酸鹽，月桂酸鹽，十二烷基硫酸鹽，蘋果酸鹽，馬來酸鹽，丙二酸鹽，曱磺酸鹽，2-萘磺酸鹽，煙酸鹽，硝酸鹽，油酸鹽，草酸鹽，棕櫚酸鹽，樸酸鹽，果膠酸鹽，過硫酸鹽，3-苯基丙酸鹽，磷酸鹽，苦味酸鹽，新戊酸鹽，丙酸鹽，水楊酸鹽，硬脂酸鹽，琥珀酸鹽，硫酸鹽，酒石酸鹽，硫氰酸鹽，對-甲苯磺酸鹽，十一酸鹽，戊酸鹽等。衍生自合適的堿的鹽包括堿金屬，堿土金屬，銨和N+(Cw烷基)4的鹽。本發(fā)明還關(guān)注本文披露的任意含堿性氮的化合物基團(tuán)的季銨化。可以通過這類季銨化獲得水或油-溶性或可分散的產(chǎn)物?？梢酝ㄟ^下列步驟制備堿加成的鹽l)使酸式純化化合物與合適的有機(jī)或無機(jī)堿反應(yīng)和2)分離由此形成的鹽。堿加成的鹽包括堿金屬或堿土金屬鹽。有代表性的堿金屬或堿土金屬鹽包括鈉，鋰，鉀，鈣，鎂等。如果合適，額外的藥學(xué)上可接受的鹽包括使用抗衡離子，諸如卣化物，氬氧化物，羧化物，硫酸鹽，磷酸鹽，硝酸鹽，低16級烷基磺酸鹽和芳基磺酸鹽形成的無毒性的銨，季銨和胺陽離子。盡管自身并非藥學(xué)上可接受的，但是其它酸和堿可以用于制備用作獲得本發(fā)明化合物及其藥學(xué)上可接受的酸或堿加成的鹽的中間體。使用下列縮寫DCM二氯甲烷EtOAc乙酸乙酯DMS0二甲亞砜ATP腺苷三磷酸DTT二石危蘇糖醇腿核磁共振HPLC高效液相色譜法LCMS液相色譜法-質(zhì)鐠法TLC薄層色鐠法Rt保留時間HEPES4-(2-羥乙基)-l-哌溱乙磺酸FBS胎牛血清PVDF聚偏氟乙烯PBST含Tween20的磷酸鹽緩沖鹽溶液TCF/LEFT細(xì)胞因子/淋巴樣強(qiáng)化因子DIPEA二異丙基乙胺本發(fā)明提供了用作蛋白激酶抑制劑的化合物和組合物。在某些實施方案中，所述的蛋白激酶為GSK-3激酶。作為蛋白激酶抑制劑，本發(fā)明的化合物和組合物特別用于治療或減輕疾病，疾患或病癥的嚴(yán)重性，其中所述的疾病，疾患或病癥牽涉到蛋白激酶。本發(fā)明在一個方面中提供了治療或減輕疾病，疾患或病癥的嚴(yán)重性的方法，其中所述的疾病狀態(tài)牽涉到蛋白激酶。本發(fā)明在另一個方面中提供了治療或減輕疾病，疾患或病癥的嚴(yán)重性，其中治療所述的疾病牽涉到抑制酶活性。本發(fā)明在另一個方面中提供了使用通過結(jié)合蛋白激酶抑制酶活性的化合物治療或減輕疾病，疾患或病癥的嚴(yán)重性的方法。另一個方面提供了通過使用蛋白激酶抑制劑抑制酶活性治療或減輕疾病，疾患或病癥的嚴(yán)重性的方法。在某些實施方案中，所述的蛋白激酶抑制劑為GSK-3抑制劑。作為蛋白激酶抑制劑，本發(fā)明的化合物和組合物還用于生物樣品。本發(fā)明的一個方面涉及抑制生物樣品中蛋白激酶活性，該方法包括使所述的生物樣品接觸式I的化合物或包含該化合物的組合物。本文所用的術(shù)語"生物樣品"意旨體外或離體樣品，包括，但不限于細(xì)胞培養(yǎng)物或其提取物；獲自哺乳動物的活檢材料或其提取物；和血液，唾液，尿，糞便，精液，淚液或其它體液或其提取物。本文所用的術(shù)語"生物樣品"不意旨體內(nèi)樣品。抑制生物樣品中的蛋白激酶活性用于本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的各種目的。這類目的的實例包括，但不限于輸血，器官移植和生物樣本儲存。本發(fā)明的另一個方面涉及生物學(xué)和病理學(xué)現(xiàn)象中的蛋白激酶研究；這類蛋白激酶介導(dǎo)的胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的研究；和新蛋白激酶抑制劑的對比評價。這類應(yīng)用的實例包括，但不限于生物測定，諸如酶的測定和基于細(xì)胞的測定?？梢栽赹h，體內(nèi)或細(xì)胞系中測定化合物作為蛋白激酶抑制劑的活性。體外測定法包括測定激酶活性或活化的激酶的ATPase活性抑制的測定法?？蛇x擇的體外測定法對抑制劑結(jié)合蛋白激酶的能力進(jìn)行了定量，并且可以通過在結(jié)合前放射性標(biāo)記抑制劑，分離抑制劑/激酶復(fù)合物并且測定結(jié)合的放射性標(biāo)記的量或通過進(jìn)行竟?fàn)幮詫嶒炦M(jìn)行測定，在竟?fàn)幮詫嶒炛校瑢⑿碌囊种苿┡c結(jié)合已知放射性配體的激酶一起孵育。抑制GSK-3活性與干細(xì)胞增殖，分化和神經(jīng)元可塑性和血管發(fā)生相關(guān)。這些不同的功能涉及修復(fù)和再生。已經(jīng)證實GSK-3抑制劑支持胚胎干細(xì)胞自我更新，促進(jìn)神經(jīng)元P-細(xì)胞，骨髓和成骨細(xì)胞分18化(Sato等，NatureMedicine10,55-63，2004;Ding等，PNAS100，7632-37,2003;Branco等,JCellScience117，5731-37，2004;Trowbridge等，NatureMedicine12，89-98，2006;Mussmann等，JBC(Epubaheadofprint)2007;Kulkarni等，JournalofBoneandMineralRes.21，910-920，2006)。由于神經(jīng)元可塑性，已經(jīng)證實GSK-3對調(diào)節(jié)極性，長時程增強(qiáng)效應(yīng)(LTP)和神經(jīng)突/軸突生長而言是重要的(Hooper等，EuropeanJofNeuroscience25，81-86，2007;Kim等，Neuron52,981-996，2006;Jiang等，Cell120，123—135，2005)。還證實抑制GSK-3誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞中的血管發(fā)生(Skurk等，CirculationResearch96，308-318,2005)。因此，本發(fā)朋的一個方面提供了用于細(xì)胞修復(fù)和再生的化合物。在某些實施方案中，所述的化合物用于促進(jìn)細(xì)胞增殖，細(xì)胞分化，神經(jīng)元可塑性或血管發(fā)生。在某些實施方案中，所述的化合物為細(xì)胞分化的化學(xué)調(diào)節(jié)劑。在其它實施方案中，所述的化合物為修復(fù)和再生的化學(xué)調(diào)節(jié)劑。在某些實施方案中，所述的化合物用于增加神經(jīng)元細(xì)胞中的軸突和樹突分枝。在某些實施方案中，所述的化合物用于促進(jìn)神經(jīng)可塑性。在其它實施方案中，所述的化合物用于促進(jìn)血管發(fā)生。在其它實施方案中，所述的化合物用于促進(jìn)神經(jīng)發(fā)生。在其它實施方案中，所述的化合物用于治療神經(jīng)精神病，諸如躁狂和抑郁癥。另一個實施方案提供了用于通過促進(jìn)P細(xì)胞再生治療糖尿病的化合物。另一個實施方案提供了用于通過骨胚細(xì)胞樣轉(zhuǎn)化治療骨質(zhì)疏爭>癥的化合物。GSK-3作為與DYRK激酶家族類似的酪氨酸和絲氨酸/蘇氨酸激酶起作用。類似于DYRK激酶家族，GSK-3使其激酶結(jié)構(gòu)域上的關(guān)鍵酪氨酸殘基(GSK-3a，Tyr279和GSK-3b，Tyr216)自磷酸化。已經(jīng)證實這種酪氨酸磷酸化對正面調(diào)節(jié)激酶活性而言是重要的。Locheed等證實這種自磷酸化發(fā)生在成熟前的轉(zhuǎn)錄后中間步驟時的分子內(nèi)，并且為蛋白伴侶依賴性的(Lochhead等，MolecularCell24,(2006)，pp.627-633)。在成熟后，GSK-3失去了其酪氨酸激酶活性并且唯一地作為針對外源性底物的絲氨酸和蘇氨酸激酶起作用。P-連環(huán)蛋白為GSK-3磷酸化的外源性絲氨酸/蘇氨酸底物之一。抑制p-連環(huán)蛋白磷?；瘜?dǎo)致b-連環(huán)蛋白水平增加，由此易位至核并且轉(zhuǎn)錄控制許多涉及細(xì)胞應(yīng)答和功能的基因。一種對GSK-3抑制劑潛在安全性的關(guān)注在于使用這些抑制劑可能通過P-連環(huán)蛋白誘導(dǎo)導(dǎo)致增殖過度。因為絲氨酸/蘇氨酸激酶GSK-3主要對許多信號傳導(dǎo)途徑是關(guān)鍵的，這些途徑控制多種細(xì)胞活性，諸如增殖，分化和代謝。因此，本發(fā)明的一個方面提供了可以部分地減弱GSK-3活性而不會完全阻斷酶和影響多種底物，諸如P-連環(huán)蛋白的化合物。一個實施方案提供了選擇性抑制酶的酪氨酸自磷酸化形式而超過了對絲氨酸/蘇氨酸激酶形式的化合物。在某些實施方案中，所述的酶為GSK-3oc;在其它實施方案中，所述的酶為GSK-3P。在某些實施方案中，所述的化合物具有的至少25倍且至多100倍的P-連環(huán)蛋白GSK-3P窗。在某些實施方案中，所述的化合物具有的至少30倍的P-連環(huán)蛋白GSK-3P窗。在其它實施方案中，所述的化合物具有的至少400倍且至多500倍的P-連環(huán)蛋白GSK-3oc窗。令人意外的是，相對于絲氨酸/蘇氨酸激酶形式而言選擇性抑制GSK-3酶的酪氨酸形式自磷酸化的化合物諸如通過增加神經(jīng)元細(xì)胞中的軸突和樹突分枝促進(jìn)神經(jīng)元生長和樹突形成。增加神經(jīng)元生長和樹突形成為有利的并且在治療許多類型的變性疾患時提供了令人意外和改善的治療功效，諸如中風(fēng)，中風(fēng)后，脊髓損傷，外傷性腦損傷，阿爾茨海默病，帕金森病，亨廷頓病，多發(fā)性硬化，肌萎縮性側(cè)索硬化，糖尿病神經(jīng)病變，沙-馬-圖病，白細(xì)胞減少，糖尿病和骨質(zhì)疏松癥。相對于絲氨酸/蘇氨酸激酶形式而言選擇性抑制GSK-3酶20的酪氨酸形式自磷酸化的化合物還促進(jìn)血管發(fā)生，這是有利的并且在治療許多類型的變性疾患，諸如本文所列的那些時提供了令人意外和改善的治療功效。本發(fā)明的另一個方面提供了用于治療疾病，病癥和疾患的化合物，所述疾病，病癥和疾患包括，但不限于自身免疫疾病，炎性疾病，增殖和過度增殖性疾病，免疫介導(dǎo)的疾病，免疫缺陷病癥，免疫調(diào)節(jié)或免疫抑制病癥，骨疾病，代謝性疾病，神經(jīng)和神經(jīng)變性疾病，神經(jīng)營養(yǎng)因子，心血管疾病，激素相關(guān)疾病，糖尿病，過敏反應(yīng)，哞喘和阿爾茨海默病。本發(fā)明的另一個方面提供了為蛋白激酶抑制劑且由此用于治療疾病，病癥和疾患與本文所述的其它應(yīng)用的化合物。另一個方面提供了包含本文所述的任意化合物且任選包舍藥學(xué)上可接受的載體，佐劑或媒介物的藥學(xué)上可接受的組合物。在某些實施方案中，這些組合物任選進(jìn)一步包含一種或多種額外的治療劑。本發(fā)明的一個方面提供了用于治療或減輕疾病，病癥或疾患的嚴(yán)重性的方法，所述的疾病，病癥或疾患選自自身免疫疾病，炎性疾病，增殖和過度增殖性疾病，諸如癌癥，免疫介導(dǎo)的疾病，免疫缺陷病癥，骨疾病，代謝性疾病，神經(jīng)和神經(jīng)變性疾病，心血管疾病，過敏反應(yīng)，哞喘，阿爾茨海默病或激素相關(guān)疾病，該方法包括對有此需要的受試者給予有效量的化合物或包含化合物的藥學(xué)上可接受的組合物。本文所用的術(shù)語"癌癥"包括，但不限于下列癌癥表皮樣瘤，口腔:口腔，唇，舌，口，咽；心臟:肉瘤(血管肉瘤，纖維肉瘤，橫紋肌肉瘤，脂肪肉瘤)，粘液瘤，橫紋肌瘤，纖維瘤，脂肪瘤和畸胎瘤；迎支氣管原癌(鱗狀細(xì)胞或表皮樣，分化不良型小細(xì)胞，分化不良型大細(xì)胞，腺癌)，肺泡(細(xì)支氣管)癌，支氣管腺瘤，肉瘤，淋巴瘤，軟骨錯構(gòu)瘤，間皮瘤；胃腸:食道(鱗狀細(xì)胞癌，喉，腺癌，平滑肌肉瘤，淋巴瘤)，胃(癌，淋巴瘤，平滑肌肉瘤)，胰腺(導(dǎo)管導(dǎo)管，胰島素瘤，胰高血糖素瘤，胃泌素瘤，類癌瘤，胰腺瘤)，小腸(small21bowel)或小腸(smallintestines)(腺癌,'淋巴瘤，類癌瘤，卡波西肉瘤，平滑肌瘤，血管瘤，脂肪瘤，神經(jīng)纖維瘤，纖維瘤)，大腸(largebowel)或大腸(largeintestines)(腺癌，管狀腺瘤，絨毛狀腺瘤，錯構(gòu)瘤，平滑肌瘤)，結(jié)腸，結(jié)腸-直腸，結(jié)腸直腸；直腸，泌尿生殖道:腎(腺癌，維爾姆斯瘤[腎母細(xì)胞瘤]，淋巴瘤，白血病)，膀胱和尿道(鱗狀細(xì)胞癌，過渡細(xì)胞癌，腺癌)，前列腺(腺癌，肉瘤)，睪丸(精原細(xì)胞瘤，畸胎瘤，胚胎性癌，畸胎癌，絨毛膜癌，肉瘤，間質(zhì)細(xì)胞癌，纖維瘤，纖維腺瘤，腺瘤樣瘤，脂肪瘤)；近肝細(xì)胞瘤(肝細(xì)胞癌)，膽管上皮癌，肝胚細(xì)胞瘤，血管肉瘤，肝細(xì)胞性腺瘤，血管瘤，膽道；成骨性肉瘤(骨肉瘤)，纖維肉瘤，惡化纖維組織細(xì)胞瘤，軟骨肉瘤，尤因肉瘤，惡性淋巴瘤(網(wǎng)狀細(xì)胞肉瘤)，多發(fā)性骨髓瘤，惡性巨細(xì)胞瘤脊索瘤，osteochronfroma(骨軟骨夕卜生骨祝)，良性軟骨瘤，軟骨母細(xì)胞瘤，軟骨粘液纖維瘤，骨樣骨瘤和巨細(xì)胞瘤；神經(jīng)系統(tǒng):頭蓋骨(骨瘤，血管瘤，肉芽腫,黃瘤，變形性骨炎)，腦膜(腦膜瘤，腦膜肉瘤，神經(jīng)膠質(zhì)瘤病)，腦(星形細(xì)胞瘤，髓母細(xì)胞瘤，神經(jīng)膠質(zhì)瘤，室管膜瘤，生殖細(xì)胞瘤[松果體瘤]，多形性成膠質(zhì)細(xì)胞瘤，少突神經(jīng)膠質(zhì)瘤，許旺細(xì)胞瘤，視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤，先天性腫瘤)，脊髓神經(jīng)纖維瘤，腦膜瘤，神經(jīng)膠質(zhì)瘤，肉瘤)；Mt:子宮(子宮內(nèi)膜癌)，宮頸(宮頸癌，腫瘤前期宮頸發(fā)育不良)，卵巢(卵巢癌[漿液嚢腺癌，粘液嚢腺癌，無類別癌]，粒膜細(xì)胞瘤，塞爾托利-萊迪希細(xì)胞瘤，無性細(xì)胞瘤，無性細(xì)胞瘤)，外陰(鱗狀細(xì)胞癌，上皮內(nèi)癌，腺癌，纖維肉瘤，黑素瘤)，陰道(透明細(xì)胞癌，鱗狀細(xì)胞癌，葡萄形肉瘤(胚胎型橫紋肌肉瘤)，輸卵管(癌)，乳腺；血(髓樣白血病[急性和慢性]，急性成淋巴細(xì)胞性白血病，慢性淋巴細(xì)胞性白血病，骨髓增生性疾病，多發(fā)性骨髓瘤，骨髓增生異常綜合征)，何杰金病，非何杰金淋巴瘤[惡性淋巴瘤]毛細(xì)胞；淋巴樣病癥；皮膚:惡性黑素瘤，基底細(xì)胞癌，鱗狀細(xì)胞癌，卡波西肉瘤，角化棘皮瘤，發(fā)育異常痣，脂肪瘤，血管瘤，皮膚纖維瘤，疤痕疙瘩，銀屑病，甲狀腺:乳頭狀甲狀腺癌，濾泡性甲狀腺癌；甲狀腺髓樣癌，分化不良型曱狀腺癌，2A型多內(nèi)分泌性腺瘤形22成，2B型多內(nèi)分泌性腺瘤形成，家族性甲狀腺髓樣癌，嗜鉻細(xì)胞瘤，副神經(jīng)節(jié)瘤；和腎上腺:神經(jīng)細(xì)胞瘤。因此，本文提供的術(shù)語"癌細(xì)胞"包括患有上述鑒定的疾患中任意一種的細(xì)胞。在某些實施方案中，所述的癌癥選自結(jié)腸直腸，甲狀腺或乳腺癌。在某些實施方案中，化合物或藥學(xué)上可接受的組合物的"有效量，，為有效治療所述疾病的用量?？梢允褂糜行е委熁驕p輕所述疾病嚴(yán)重性的任意用量和任意給藥途徑給予本發(fā)明方法的化合物和組合物。在某些實施方案中，所述的疾病選自過敏性或I型超敏反應(yīng)，哮喘，糖尿病，阿爾茨海默病，亨廷頓病，帕金森病，AIDS-相關(guān)癡呆，雙相型情感障礙，肌萎縮性側(cè)索硬化(ALS，LouGehrig病)，多發(fā)性硬化(MS)，精神分裂癥，白細(xì)胞減少，心肌細(xì)胞肥大，再灌注/局部缺血，中風(fēng)，脫發(fā)，移植物抗宿主病，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和實體惡性腫瘤和惡性血液病。在某些實施方案中，所述的疾病選自糖尿病，雙相型情感障礙，精神分裂癥，中風(fēng)，亨廷頓病，白細(xì)胞減少和心肌細(xì)胞肥大。在本發(fā)明的某些實施方案中，所述的疾病為蛋白-激酶介導(dǎo)的疾患。在某些實施方案中，所述的蛋白激酶為GSK-3。本文所用的術(shù)語"蛋白-激酶介導(dǎo)的疾患"意旨任意的其中蛋白激酶起作用疾病或其它有害疾患。這類疾患包括，但不限于自身免疫疾病，炎性疾病，增殖和過度增殖性疾病，免疫介導(dǎo)的疾病，免疫缺陷病癥，免疫調(diào)節(jié)或免疫抑制病癥，骨疾病，代謝性疾病，神經(jīng)和神經(jīng)變性疾病，心血管疾病，激素相關(guān)疾病，糖尿病，過敏反應(yīng)，哮喘和阿爾茨海默病。本文所用的術(shù)語"GSK-3-介導(dǎo)的疾患"意旨任意的其中GSK-3起作用的疾病或其它有害疾患。這類疾患包括，但不限于糖尿病，糖尿病神經(jīng)病變，骨質(zhì)疏松癥，阿爾茨海默病，亨廷頓病，帕金森病，AIDS-相關(guān)癡呆，雙相型情感障礙，肌萎縮性側(cè)索硬化(ALS，LouGehrig病)，多發(fā)性硬化(MS)，精神分裂癥，白細(xì)胞減少，心肌細(xì)胞肥大，中風(fēng)，脊髓損傷，外傷性腦損傷，沙-馬-圖病和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。在某些實施方案中，所述的疾病為變性疾患。在某些實施方案中，所述的變性疾患選自中風(fēng)，中風(fēng)后恢復(fù)，阿爾茨海默病，帕金森病，亨廷頓病，肌萎縮性側(cè)索硬化(ALS),多發(fā)性硬化(MS),脊髓損傷，外傷性腦損傷，沙-馬-圖病，白細(xì)胞減少，糖尿病，糖尿病神經(jīng)病變和骨質(zhì)疏松癥。在某些實施方案中，在某些實施方案中，所述的疾病為神經(jīng)變性疾患。在另一個實施方案中，所述的神經(jīng)變性疾患選自中風(fēng)，中風(fēng)后恢復(fù)，阿爾茨海默病，帕金森病，亨廷頓病，肌萎縮性側(cè)索硬化(ALS)，多發(fā)性硬化(MS),脊髓損傷，外傷性腦損傷和沙-馬-圖病?！獋€實施方案提供了增加神經(jīng)元細(xì)胞中軸突和樹突分枝的方法，所述的方法包括使所述的細(xì)胞接觸本文所述的化合物的步驟。另一個實施方案提供了促進(jìn)神經(jīng)可塑性的方法，所述的方法包括使所述的細(xì)胞接觸本文所述的化合物的步驟。另一個實施方案提供了促進(jìn)血管發(fā)生的方法，所述的方法包括使所述的細(xì)胞接觸本文所述的化合物的步驟。另一個實施方案提供了治療神經(jīng)精神病，諸如躁狂和抑郁癥的方法，所述的方法包括對患者給予本文所述的化合物。按照本發(fā)明的一個方面，所述的神經(jīng)變性疾病為中風(fēng)。在某些實施方案中，所述的化合物用于在中風(fēng)恢復(fù)過程中治療中風(fēng)患者。在某些情況中，所述的化合物用于中風(fēng)后給藥。治療期限可以在l個月-l年。在某些實施方案中，在中風(fēng)發(fā)生后給予所述的化合物。在某些實施方案中，所述的給藥在局部缺血后即刻進(jìn)行。在其它實施方案中，所述的給藥在局部缺血后48小時到局部缺血后6個月進(jìn)行。在某些實施方案中，將所述的化合物與其它形式的中風(fēng)恢復(fù)治療，諸如物理療法聯(lián)用。另一個實施方案提供了治療糖尿病的方法，所述的方法包括使P細(xì)胞接觸本文所述的化合物的步驟。在某些實施方案中，所述的化合物促進(jìn)卩細(xì)胞再生。另一個實施方案提供了治療骨質(zhì)疏松癥的方法，所述的方法包括使骨細(xì)胞接觸本文所述的化合物的步驟。在某些實施方案中，所述的化合物促進(jìn)細(xì)胞中成骨細(xì)胞生成(osteoblastogenesis)。還可以理解本發(fā)明化合物中的某些可以以游離形式存在以便用于治療，或如果合適，作為其藥學(xué)上可接受的鹽或藥學(xué)上可接受的衍生物存在。應(yīng)理解本發(fā)明包括不同藥學(xué)上可接受的鹽的混合物/組合，并且還包括游離形式和藥學(xué)上可接受的鹽形式的化合物的混合物/組合。如本文所述，本發(fā)明藥學(xué)上可接受的組合物還包含藥學(xué)上可接受的載體，佐劑或媒介物，正如本文使用的，它們包括任意和所有的溶劑，稀釋劑或其它液體媒介物，分散或懸浮助劑，表面活性劑，等滲劑，增稠劑或乳化劑，防腐劑。固體粘合劑，潤滑劑等，以便適合于期望的具體齊寸型。Remington'sPharmaceuticalSciences,SixteenthEdition,E.W.Martin(MackPublishingCo.,Easton,Pa.，1980)中披露了用于配制藥學(xué)上可接受的組合物的各種載體和用于其制備的公知技術(shù)。除任何常用的與本發(fā)明化合物不相容的載體介質(zhì)外，諸如通過它們產(chǎn)生任何不需要的生物作用，否則就是以有害方式與藥學(xué)上可接受的組合物中的其它成分發(fā)生相互作用，在本發(fā)明范圍內(nèi)關(guān)注其應(yīng)用?？梢杂米魉帉W(xué)上可接受的載體的物質(zhì)的某些實例包括，但不限于離子交換劑，氧化鋁，硬脂酸鋁，卵磷脂，血清蛋白，諸如人血清清蛋白，緩沖物質(zhì)，諸如磷酸鹽，甘氨酸，山梨酸或山梨酸鉀，飽和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物，水，鹽或電解質(zhì)，諸如硫酸魚精蛋白，磷酸氫二鈉，磷酸氫鉀，氯化鈉，鋅鹽，膠態(tài)二氧化硅，三硅酸鎂，聚乙烯吡咯烷酮，聚丙烯酸酯類，蠟，聚乙烯-聚氧丙烯-嵌段聚合物，羊毛脂，糖類，諸如乳糖，葡萄糖和蔗糖；淀粉，諸如玉米淀粉和馬鈴薯淀粉；纖維素及其衍生物，諸如羧曱基纖維素鈉，乙基纖維素和乙酸纖維素；西黃蓍膠粉；麥芽；明膠；滑石粉；賦形劑，諸如可可脂和栓劑蠟；油，諸如花生油，棉籽油；紅花油；芝麻油；橄欖油；玉米油和大豆油；乙二醇類；諸如丙二醇或聚乙二醇；酯類，25諸如油酸乙酯和月桂酸乙酯；瓊脂；緩沖劑，諸如氫氧化鎂和氫氧化鋁；藻酸；無熱原水；等滲鹽水；林格液；乙醇和磷酸鹽緩沖溶液，和其它無毒性相容性潤滑劑，諸如十二烷基硫酸鈉和硬脂酸鎂，且根據(jù)配制者的判斷，著色劑，釋放劑，包衣衣料，甜味劑，矯味劑和香味劑，防腐劑和抗氧化劑也可以存在于組合物中。可以將蛋白激酶抑制劑或其藥學(xué)上可接受的鹽配制成用于對動物或人體給藥的藥物組合物。包含有效治療或預(yù)防蛋白激酶-介導(dǎo)的疾患的用量的蛋白抑制劑和藥學(xué)上可接受的載體的這些藥物組合物為本發(fā)明的另一個實施方案。在某些實施方案中，所述的蛋白激酶-介導(dǎo)的疾患為GSK-3-介導(dǎo)的疾患。在某些實施方案中，為GSK-3-介導(dǎo)的疾患。治療所需化合物的確切量在受試者與受試者之間可變，這取決于受試者的種類，年齡和一般狀況，感染的嚴(yán)重性，具體的活性劑，其給藥方式等。優(yōu)選將本發(fā)明的化合物配制成易于給藥和劑量均勻的單位劑型。本文所用的表達(dá)方式"單位劑型，，意旨適合于治療患者的活性劑的物理分散單位。然而，可以理解本發(fā)明化合物和組合物的總每日應(yīng)用由主治醫(yī)師在合理醫(yī)學(xué)判斷范圍內(nèi)決定。任何具體患者或生物體的具體有效劑量水平取決于各種因素，包括所治療的病癥和病癥的嚴(yán)重性；所用具體化合物的活性；所用的具體組合物；患者的年齡，體重，一般健康狀況，性別和膳食；給藥時間，給藥途徑和所用具體化合物的排泄速率；治療期限；聯(lián)合用藥中或與所用具體化合物同時使用的藥物等醫(yī)學(xué)領(lǐng)域眾所周知的因素。本文所用的術(shù)語"患者"意旨動物，優(yōu)選哺乳動物且最優(yōu)選人。可以將本發(fā)明藥學(xué)上可接受的組合物通過口服，直腸，非腸道，腦池內(nèi)，陰道內(nèi)，腹膜內(nèi)，局部(如通過粉末，軟骨劑或滴劑)，口含，作為口腔或鼻部噴霧劑等對人體和其它動物給藥，這取決于所治療感染的嚴(yán)重性。在某些實施方案中，可以通過口服或非腸道以約0.01mg/kg-約50mg/kg且優(yōu)選約1mg/kg-約5mg/kg受試者體重/天的劑量水平給予本發(fā)明的化合物，每日一次或多次，以便獲得期望的治療作用。用于口服給藥的液體劑型包括，但不限于藥學(xué)上可接受的乳劑，微乳，溶液，糖漿劑和酏劑。除活性化合物外，液體劑型還可以包含本領(lǐng)域中常用的惰性稀釋劑，諸如，例如水或其它溶劑，包括增溶劑和乳化劑，諸如乙醇，異丙醇，碳酸乙酯，乙酸乙酯，節(jié)醇，苯甲酸爺酯，丙二醇，1，3-丁二醇，二曱基甲酰胺，油(特別是棉籽油，花生油，玉米油，胚油，橄欖油，蓖麻油和芝麻油)，甘油，四氫糠醇，聚乙二醇類和失水山梨糖醇的脂肪酸酯類及其混合物。除惰性稀釋劑外，口服組合物還可以包括佐劑，諸如濕潤劑，乳化劑和懸浮劑，甜味劑，矯味劑和香味劑?？梢园凑毡绢I(lǐng)域公知的方式，使用合適的分散劑或濕潤劑和懸浮劑配制可注射制劑，例如無菌可注射水或油混懸液。無菌可注射制劑還可以為在無毒性非腸道可接受稀釋劑或溶劑中的無菌可注射溶液，混懸液或乳劑，例如，作為在1，3-丁二醇中的溶液。在可以使用的可接受的媒介物和溶劑中有水，林格液U.S.P.和等滲氯化鈉溶液。此外，無菌固定油常用作溶劑或懸浮介質(zhì)。為了該目的，可以使用任意溫和的固定油，包括合成的單酸甘油酯類或甘油二酯類。此外，脂肪酸，諸如油酸用于制備注射劑。例如，可以通過經(jīng)截留細(xì)菌的濾膜過濾或通過摻入無菌固體組合物形式的滅菌劑給可注射制劑滅菌，可以在使用前將其溶于或分散于水或其它可注射介質(zhì)中。為了延長本發(fā)明化合物的作用，通常需要延緩化合物從皮下或肌內(nèi)注射中吸收。可以通過使用具有極低水溶性的結(jié)晶或非晶形物質(zhì)的液體混懸液實現(xiàn)這一目的?；衔锏奈账俾孰S即取決于其溶出速率，由此可以取決于晶體粒度和晶型。可選擇地，延緩非腸道給藥的化合物吸收通過將化合物溶于或懸浮于油媒介物中進(jìn)行。通過形成化合物在生物可降解聚合物，諸如聚丙交酯-聚乙交酯中的微嚢基質(zhì)制備可注射長效劑型。根據(jù)化合物與聚合物的比例和具體使用的聚合物的性質(zhì)的不同，可以控制化合物的釋放速率。其它生物可降解的聚合物的實例包括聚(原酸酉旨)和聚(酸酐)。還通過將化合物截留在與身體組織相容的脂質(zhì)體或微乳內(nèi)制備長效可注射制劑。直腸或陰道給藥的組合物優(yōu)選為栓劑，可以通過將本發(fā)明的化合物與合適的無刺激性賦形劑或載體，諸如可可脂，聚乙二醇或栓劑蠟混合制備它們，所述的栓劑蠟在環(huán)境溫度下為固體，而在體溫下為液體，且由此在直腸或陰道內(nèi)熔化并且釋放活性化合物。用于口服給藥的固體劑型包括膠嚢，片劑，丸劑，粉劑和顆粒。在這類固體劑型中，將活性化合物與至少一種惰性藥學(xué)上可接受的賦形劑或載體混合，諸如檸檬酸鈉或磷酸二鈣和/或a)填充劑或增充劑，諸如淀粉，乳糖，蔗糖，葡萄糖，甘露糖醇和硅酸，b)粘合劑，諸如，例如，羧甲基纖維素，藻酸鹽，明膠，聚乙烯吡咯烷酮，蔗糖和阿拉伯樹，c)保濕劑，諸如甘油，d)崩解劑，諸如瓊脂，碳酸鈣，馬鈴薯或木薯淀粉，藻酸，某些硅酸鹽和碳酸鈉，e)溶解阻滯劑，諸如石蠟，f)吸收促進(jìn)劑，諸如季銨化合物，g)濕潤劑，諸如，例如鯨蠟醇和單硬脂酸甘油酯，h)吸收劑，諸如高嶺土和皂粘土和i)潤滑劑，諸如滑石粉，硬脂酸鈣，硬脂酸鎂，固體聚乙二醇類，十二烷基硫酸鈉及其混合物。就膠嚢，片劑和丸劑而言，劑型還可以包含緩沖劑。相似類型的固體組合物也可以用作使用諸如乳糖(lactose)或乳糖(milksugar)和高分子量聚乙二醇類等這類賦形劑的軟和硬膠嚢中的填充劑?？梢允褂冒乱铝虾蜌?，諸如腸溶衣和其它制藥領(lǐng)域眾所周知的包衣衣料制備片劑，錠劑，膠嚢，丸劑和顆粒形式的固體劑型。它們可以任選包含遮光劑并且還可以具有它們僅或優(yōu)先以延緩方式在胃腸道中的某些部位釋放活性組分的組合物?？梢允褂玫陌窠M合物的實例包括聚合物和蠟。相似類型的固體組合物也可以用作使用諸如乳糖(lactose)或乳糖(milksugar)和高分子量聚乙二醇類等這類賦形劑的軟和硬膠嚢中的填充劑。活性化合物可以使用一種或多種如上所述的賦形劑的微嚢形式中?？梢允褂冒乱铝虾蜌ぃT如腸溶衣，控釋衣料和其它制28藥領(lǐng)域眾所周知的包衣衣料制備片劑，錠劑，膠嚢，丸劑和顆粒形式的固體劑型。在這類固體劑型中，可以將活性化合物與至少一種惰性稀釋劑，諸如蔗糖，乳糖或淀粉混合。這類劑型在一般實施時還可以包含非惰性稀釋劑的額外的物質(zhì)，例如壓片潤滑劑和其它壓片助劑，諸如硬脂酸鎂和微晶纖維素。就膠嚢，片劑和丸劑而言，劑型還可以包含緩沖劑。它們可以任選包含遮光劑并且還可以具有它們僅或優(yōu)先以延緩方式在胃腸道中的某些部位釋放活性組分的組合物?？梢允褂玫陌窠M合物的實例包括聚合物和蠟。本發(fā)明局部或透皮給藥用劑型包括軟膏劑，糊劑，霜劑，洗劑，凝膠，粉劑，溶液，噴霧劑，吸入劑或貼劑。在無菌條件下將活性成分與藥學(xué)上可接受的載體并且在需要時與任意需要的防腐劑或緩沖劑混合。關(guān)注眼科制劑，滴耳劑和滴眼劑屬于本發(fā)明范圍內(nèi)。另外，本發(fā)明關(guān)注透皮貼劑的應(yīng)用，它們具有提供化合物對身體受控遞送的附加優(yōu)點。可以通過將化合物溶于或分散于適當(dāng)介質(zhì)中制備這類劑型。吸收促進(jìn)劑也可以用于增加化合物通過皮膚的流量。可以通過二、，》《、、5、'、'土b'、、、除本發(fā)明的化合物外，本發(fā)明化合物的藥學(xué)上可接受的衍生物或前體藥物也可以用于組合物中以便治療或預(yù)防上述確定的病癥。"藥學(xué)上可接受的衍生物或前體藥物"意旨本發(fā)明化合物的任意藥學(xué)上可接受的酯，酯的鹽或其它衍生物，在對接受者給藥時，它們能夠直接或間接提供本發(fā)明的化合物或其抑制活性代謝物或殘留物。特別有利的衍生物或前體藥物為在將這類化合物對患者給藥時增加本發(fā)明化合物生物利用度(例如通過口服給予化合物以便更易于吸收入血液)或相對于母體種類而言促進(jìn)母體化合物遞送至生物隔室(例如腦或淋巴系統(tǒng))的那些。本發(fā)明化合物的藥學(xué)上可接受的衍生物或前體藥物包括，但不限于酯類，氨基酸酯類，磷酸酯類，金屬鹽和磺酸酯類。29可以在這些藥物組合物中使用的藥學(xué)上可接受的載體包括，但不限于離子交換劑，氧化鋁，硬脂酸鋁，卵磷脂，血清蛋白，諸如人血清清蛋白，緩沖物質(zhì)，諸如磷酸鹽，甘氨酸，山梨酸或山梨酸鉀，飽和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物，水，鹽或電解質(zhì)，諸如硫酸魚精蛋白，磷酸氫二鈉，磷酸氫鉀，氯化鈉，鋅鹽，膠態(tài)二氧化硅，三硅酸鎂，聚乙烯吡咯烷酮，基于纖維素的物質(zhì)，聚乙二醇，羧曱基纖維素鈉，聚丙烯酸酯類，蠟，聚乙烯-聚氧丙烯-嵌段聚合物，聚乙二醇和羊毛脂?？梢酝ㄟ^口服，非腸道，吸入噴霧劑，局部，直腸，鼻部，口含，陰道或通過植入的儲器給予本發(fā)明的組合物。本文所用的術(shù)語"非腸道"包括，但不限于皮下，靜脈內(nèi)，肌內(nèi)，關(guān)節(jié)內(nèi)，滑液內(nèi)，胸骨內(nèi)，鞘內(nèi)，肝內(nèi)，病損部位內(nèi)(intralesional)和顱內(nèi)注射或輸注技術(shù)。優(yōu)選通過口服，腹膜內(nèi)或靜脈內(nèi)給予所述的組合物。本發(fā)明組合物的可注射形式可以為水或油混懸液?？梢园凑毡绢I(lǐng)域公知的技術(shù)，使用合適的分散或濕潤劑和懸浮劑配制這些混懸液。無菌可注射制劑還可以為在無毒性非腸道可接受的稀釋劑或溶劑中的溶液或混懸液，例如作為在1，3-丁二醇中的溶液。在可以使用的可接受的媒介物和溶劑中有水，林格液和等滲氯化鈉溶液。此外，無菌固定油常用作溶劑或懸浮介質(zhì)。為了該目的，可以使用任意溫和的固定油，包括合成的單酸甘油酯類或甘油二酯類。此外，脂肪酸，諸如油酸及其甘油酯衍生物用于制備注射劑，因為它們?yōu)樘烊凰帉W(xué)上可接受的油，諸如橄欖油或蓖麻油，尤其是以其聚氧乙基化形式。這些油溶液或混懸液還可以包含長鏈醇稀釋劑或分散劑，諸如羧甲基纖維素或常用于藥學(xué)上可接受的劑型，包括乳劑和混懸液配制的類似分散劑。常用于制備藥學(xué)上可接受的固體，液體或其它劑型的其它常用的表面活性劑，諸如Tweens,Spans和其它乳化劑或生物利用度促進(jìn)劑也可以用于配制目的?？梢酝ㄟ^口服以任何口服可接受的劑型給予本發(fā)明的藥物組合物，包括，但不限于膠嚢，片劑，水混懸液或溶液。就用于口30服應(yīng)用的片劑而言，常用的載體包括，但不限于乳糖和玉米淀粉。一般還加入潤滑劑，諸如硬脂酸鎂。就膠嚢形式的口服給藥而言，有用的稀釋劑包括乳糖和干玉米淀粉。當(dāng)口服應(yīng)用需要水混懸液時，將活性組分與乳化劑和懸浮劑合并。如果需要，還可以加入一定的甜味劑，矯味劑或著色劑?？蛇x擇地，可以以用于直腸給藥的栓劑形式給予本發(fā)明的藥物組合物?？梢酝ㄟ^將活性劑與合適的無刺激性賦形劑混合制備它們，其在室溫下為固體，而在直腸溫度下為液體且由此在直腸中熔化以便釋放藥物。這類物質(zhì)包括，但不限于可可脂，蜂蠟和聚乙二醇類。還可以通過局部，尤其是在治療靼標(biāo)包括易于通過局部施用進(jìn)入的區(qū)域或器官，包括眼，皮膚或下腸道疾病時給予本發(fā)明的藥物組合物。易于制備用于這些區(qū)域或器官的合適的局部用制劑。可以以直腸用栓劑(參見上文)或合適的灌腸劑進(jìn)行對下腸道的局部施用。還可以使用局部透皮貼劑。就局部施用而言，可以將藥物組合物配制成包含懸浮于或溶于一種或多種載體的活性成分的合適的軟膏劑。用于本發(fā)明化合物局部給藥的載體包括，但不限于礦物油，液體石蠟，白凡士林，丙二醇，聚氧乙烯，聚氧丙烯化合物，乳化蠟和水?？蛇x擇地，可以將藥物組合物配制成包含懸浮于或溶于一種或多種藥學(xué)上可接受的載體的活性成分的合適的洗劑或霜劑。合適的載體包括，但不限于礦物油，硬脂山梨坦，聚山梨醇酯60，鯨蠟酯蠟，鯨蠟硬脂醇，2-辛基十二烷醇，節(jié)酸和水。就眼科應(yīng)用而言，可以將藥物組合物配制成在等滲的pH調(diào)節(jié)的無菌鹽水中的微粉化混懸液，或優(yōu)選在等滲的pH調(diào)節(jié)的含有或不含防腐劑，諸如苯扎氯銨的無菌鹽水中的溶液。可選擇地，就眼科應(yīng)用而言，可以將藥物組合物配制成軟膏劑，諸如凡士林。還可以通過鼻部噴霧劑或吸入法給予本發(fā)明的藥物組合物。按照藥物制劑領(lǐng)域眾所周知的技術(shù)制備這類組合物并且可以將它們制備成在使用爺醇或其它合適的防腐劑，提高生物利用度的吸收促進(jìn)劑和/或其它常用的增溶劑或分散劑的鹽水中的溶液?？梢耘c載體物質(zhì)合并產(chǎn)生單一劑型的蛋白激酶抑制劑的量根據(jù)所治療宿主，具體給藥方式的不同而改變。優(yōu)選應(yīng)將組合物配制成可以將0.01-100mg/kg體重/天的抑制劑的劑量給予接受這些組合物的患者。還應(yīng)理解用于任何具體患者的具體劑量和治療方案均取決于各種因素，包括所用具體化合物的活性，年齡，體重，一般健康狀況，性別，膳食，給藥時間，排泄速率，藥物組合物和治療醫(yī)生的判斷和所治療具體疾病的嚴(yán)重性。抑制劑的量還取決于組合物中的具體化合物。本發(fā)明的另一個實施方案提供了治療或預(yù)防蛋白激酶-介導(dǎo)的疾患(在某些實施方案中為GSK-3-介導(dǎo)的疾患)的方法，所述的方法包括對患者給予上述藥物組合物之一的步驟。本文所用的術(shù)語"患者，，意旨動物，優(yōu)選人。優(yōu)選該方法用于治療或預(yù)防疾患，其選自癌癥，諸如乳腺，結(jié)腸，前列腺，皮膚，胰腺，腦，生殖泌尿道，淋巴系統(tǒng)，胃，喉和肺的癌癥，包括肺腺癌和小細(xì)胞肺癌；中風(fēng)，糖尿病，骨髓瘤，肝腫大，心臟擴(kuò)大，阿爾茨海默病，帕金森病，亨廷頓病，肌萎縮性側(cè)索硬化(ALS)，多發(fā)性硬化(MS)，脊髓損傷，外傷性腦損傷，沙-馬-圖病，白細(xì)胞減少，糖尿病神經(jīng)病變，骨質(zhì)疏松癥，嚢性纖維化和病毒病或上述任意具體的疾病。本發(fā)明的另一個方面涉及抑制患者的蛋白激酶活性，該方法包括對所述的患者給予式I的化合物或包含該化合物的組合物。根據(jù)所治療或預(yù)防的蛋白激酶-介導(dǎo)的疾患的不同，可以將一般給予治療或預(yù)防該疾患的額外的藥物與本發(fā)明的抑制劑共同給予。例如，可以將化療劑或其它抗增殖劑與本發(fā)明的蛋白激酶抑制劑聯(lián)合用于治療增殖性疾病?？梢耘c含蛋白激酶抑制劑的化合物或組合物彼此單獨給予那些額外的活性劑，或?qū)⑺鼈冏鳛槎喾N劑量芳胺的組成部分給予?？蛇x擇地，那些活性劑為單一劑型的組成部分，將其與蛋白激酶抑制劑共同混合在單一組合物中。在某些實施方案中，所述的蛋白激酶抑制劑為GSK-3激酶抑制劑。本發(fā)明還用于不涉及對患者給藥的方法中?？梢酝ㄟ^本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的方法制備本發(fā)明的化合物?？梢酝ㄟ^公知方法分析那些化合物，包括，但不限于LCMS(液相色鐠法質(zhì)鐠法)和NMR(核磁共振)。還可以按照這些實例測試本發(fā)明的化合物。應(yīng)理解如下所示的具體條件僅為實例并且并不意味著限制可以用于制備，分析或測試本發(fā)明化合物的本發(fā)明的范圍。而本發(fā)明還包括本領(lǐng)域技術(shù)人員公知用于制備，分析和測試本發(fā)明化合物的條件。實施例本文所用的術(shù)語"Rt(min)"意旨涉及化合物的以分鐘計的HPLC或LCMS保留時間。除非另作陳述，否則用于獲得報導(dǎo)的保留時間的HPLC方法3。下柱ACEC8柱，4.6x150mm梯度0-100%乙腈+曱醇60:40(20mMTris磷酸鹽)流速1.5mL/分鐘檢測225nm。使用以具有電噴霧離子化的單一MS模式操作的MicroMassQuattroMicro質(zhì)鐠儀分析LCMS(液相色鐠質(zhì)鐠法)樣品。使用色譜將樣品導(dǎo)入質(zhì)譜儀。所有質(zhì)譜分析的流動相均由含有0.2%甲酸或0.1%TFA作為修飾劑的乙腈-水混合物組成。柱梯度條件為3min梯度時間5min運轉(zhuǎn)時間內(nèi)10%-90%乙腈，其中使用WatersYMCPro-C184.6x50mm柱。流速為1.5ml/min。使用BrukerDPX400儀在400MHz記錄^-NMR光i瞽。33制備下列式I的化合物并且如下分析。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage34</formula>2-氯苯甲脒(2-chlorobenzimidamide)在25min內(nèi)分6部分將2-氯爺腈(26.84g，195mmol)加入到在氮氣環(huán)境中用冰浴冷卻的攪拌的LHMDS(在THF中1M，400mL，400mmol)在乙醚(400mL)中的攪拌溶液中。5min后，除去冷卻浴并且持續(xù)攪拌過夜。在顯示反應(yīng)完成后(通過LCMS監(jiān)測)，在冰浴冷卻下小心地加入HC1水溶液(3M，400mL)，隨后加入乙醚(600mL)和水(600mL)。然后進(jìn)行萃取。用HC1水溶液(400mL)再萃取有機(jī)層。用固體NaOH將合并的水層小心地堿化至pH14且然后用DCM(x3)萃取。然后干燥有機(jī)層(K2CO》，過濾并且在真空中濃縮而得到脒，為白色固體(26.93g，89.3%)。力腿(DMSO)6.34(3H，s),7.32-7.40(3H，m)，7.46(1H，dd)。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage34</formula>2-(2-氯苯基)-5，6-二甲基嘧啶-4-醇向在乙醇(750mL)中的2-氯苯甲脒(34.07g,220mmo1)和三乙胺(44.50g，440mmol)中加入2-甲基-3-氧代丁酸乙酯(38.13g，264麵o1)。將該反應(yīng)體系在90t:下加熱4h。再加入部分(6.36g)酯并且將該反應(yīng)體系攪拌3h。濃縮該反應(yīng)體系至約500mL并且放置過夜。所需嘧啶醇發(fā)生沉淀(22.7g)。濃縮母液并且加入DCM和1MHC1。用DCM將水層萃取7次而在濃縮時又得到批量所需產(chǎn)物(總計28.9g,56%),為白色固體。力NMR(DMSO)1.97(3H，s)，2.26(3H，s)，7.44-7.47(1H，m)，7.51-7.59(3H，m)，12.70(1H，brs)。中間體3<formula>formulaseeoriginaldocumentpage35</formula>4-氯-2-(2-氯苯基)-5，6-二甲基嘧啶將下列反應(yīng)分成兩部分并且在兩個相同的反應(yīng)容器中同時進(jìn)行將POC13(50mL)小心地加入到嘧咬醇(14.45g，61.6mmol)中，將該反應(yīng)體系攪拌5min。然后再加入部分P0C13(100mL)并且將該反應(yīng)體系加熱至105°C。在該溫度下1h后，濃縮該反應(yīng)體系。加入冰并且將按照一式兩份進(jìn)行的反應(yīng)體系借助于DCM合并。用鹽水和水洗滌有機(jī)層，干燥(MgS04),過濾并且在真空中濃縮而得到氯嘧咬(31.14g，99.8%),為無色油狀物。力腿(CDC13)2.45(3H，s)，2.65(3H，s)，7.36-7.39(2H，m)，7.49—7.51(1H，m)，7.71-7.73(1H，m)。中間體4<formula>formulaseeoriginaldocumentpage35</formula>合成5-氟-lH-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-胺5的總體合成方案如下所示。試劑和條件:i.Pd(0Ac)2，PPh3，Et3N，H2C02;ii.1)(C0C1)2，CH2C12,催化劑DMF;2)冊3(g),二嚙烷，iii.TFAA，Et3N，CH2C12，0°C;iv.H2NNH2.H20，正-丁醇，回流2-氯-5-氟煙酸(6)向在N2氣環(huán)境中的圓底燒瓶中加入脫氣的DMF(27GmL),Pd(OAc)2(0.05eq，2.7g，11.9mmol)，PPh3(0.1eq，6.2g，23.8mmol)和脫氣的Et3N(6eq，200mL，1428.6mmol)。將該混合物攪拌20分鐘，然后加入HCOOH(3eq，28mL，714.3mmol)。5分鐘后，加入2，6-二氯-5-氟煙酸(50g，238.1mmo1)。在50匸下攪拌該混合物。在反應(yīng)后分析后處理的等分部分CHNMR)。當(dāng)全部原料物質(zhì)消耗(24h)時，將該混合物冷卻至0'C并且加入水(500mL)。20分鐘后，將該混合物通過C鹽墊過濾，用水沖洗。用30。/。NaOH水溶液將該混合物堿化至pH9并且用EtOAc(2x)洗滌。緩慢加入HC1(12N)至pH1并且用NaCl飽和該溶液。用EtOAc(3x)萃取該混合物。用鹽水洗滌合并的有機(jī)萃取物，干燥(Na2S0j并且在減壓下濃縮至得到37g(88。/。)淺褐色固體，將其不經(jīng)進(jìn)一步純化用于下一步。力NMR(DMSO-d6，300MHz):58.16(dd，1H);8.58(d,1H)。2-氯-5-氟煙酰胺(3)向在0。C下的2-氯-5-氟煙酸6(50g，285mmol)和DMF(2mL,28mmol)在DCM(400mL)中的溶液中滴加草酰氯(64mL，741mmol)。將該反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜并在真空中濃縮。將所得黃色液體36溶于1，4-二噁烷(600mL)，在0X:下冷卻并使NH3(g)通過該溶液發(fā)泡30分鐘。將該化合物在室溫下攪拌過夜。過濾所得混合物并濃縮濾液而得到化合物3(44g，89%)，為淺褐色固體。^NMR(DMSO-d6，300MHz):57.84(s，1H)，7.96(dd，1H)，8.09(s，1H)，8.49(d，1H)。2-氯-5-氟煙腈(4)將粗化合物3(65g，372.4mmol)和Et3N(114mL，819.2mmol)在DCM(700mL)中的混懸液冷卻至0。C并且滴加TFAA(57mL，409.6mmol)。將所得黃色溶液在G。C下攪拌90分鐘，用DCM稀釋，用飽和NaHC03水溶液和鹽水洗滌并且干燥(Na2S04)。過濾該混合物并且濃縮。對殘余物進(jìn)行KugelRohr蒸餾(~70°C/1mbar)而得到50g(86%)化合物4，為淺褐色固體。還通過柱色譜法純化化合物4(Si02，8:1庚烷EtOAc)。^NMR(CDC1"300MHz):57.78(dd，1H);8.49(d，1H)。5-氟-lH-吡唑并[3，4-b]吡咬-3-胺(5)向化合物4(50g，321.7mmol)在l-丁醇(lL)中的溶液中加入肼一水合物(150mL，3.2mol)并且將該混合物回流4h。將該混合物冷卻至室溫并且濃縮。依次用水(2x)和Et20(2x)洗滌沉淀并且在真空中干燥而得到化合物5(44g，88%),為黃色固體。^NMR(DMSO-d6,300MHz):55.53(s，2H);7.94(dd，1H);8.35(dd,1H);12.02(s,1H)。實施例l(I-l)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage37</formula>N-(2-(2-氯苯基)-5，6-二甲基嘧啶-4-基)-5-氟-lH-吡唑并[3，4-b]吡咬-3-胺將4-氯-2-(2-氯苯基)-5，6-二甲基嘧啶(31.14g,123mmol)和5-氟-111-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-胺(19.65g,129mmol)在NMP(200mL)中的混合物在135。C下加熱3h30min。然后在真空中濃縮該混合物至約100mL。然后加入飽和NaHC03水溶液，水和EtOAc,而沉淀出現(xiàn)在有機(jī)層。將其過濾出該整個混合物并且用飽和水溶液NaHC03，水和EtOAc和乙醚洗滌殘余物。在攪拌下向殘余物中加入沸騰的乙醇并且過濾純的目標(biāo)化合物。濃縮液體并且將這一研磨操作重復(fù)4次而得到目標(biāo)化合物(25g,55%)，為白色固體。^NMR(DMS0)2.28(3H，s)，2.43(3H，s)，7.28-7.37(2H，m)，7.40-7.46(2H,m)，7.93(1H，dd)，8.49(1H，s)，9.28(1H，brs)，13，39(1H，brs)。按照與制備化合物1-1所述的方法類似的方式制備化合物1-2。下表2描迷了與表1中所示化合物相關(guān)的分析數(shù)據(jù)。表2齡物#M+l(obs)LCMSRt(min)NMRI-l369.31.8DMSOd6:2.28(3H,s)，2.43(3H,s)，7.28-7.37(2H，m),7.40-7.46(2H,m),7.93(1H，dd),8.49(1H,s)，9.28(1H,brs),13.39(1H,brs)1-2383.11.83DMS0d6:1.23(t,3H),2.53(s,3H),2.85(q，2H),7.40(dd，1H)，7.45(dd，1H)，7.48(dd,1H),7.56(d，1H),7.96(dd,1H)，8.51(s，1H)實施例2:GSK-3抑制試驗使用標(biāo)準(zhǔn)偶聯(lián)酶系統(tǒng)篩選本發(fā)明的化合物抑制GSK-3p(AA1-420)活性的能力(Fox等，ProteinSci.1998，7，2249)。在包含100mMHEPES(pH7.5)，lOmMMgCh,25mMNaCl，300^MNADH,381mMDTT和1.5。/。DMS0的溶液中進(jìn)行反應(yīng)。本試驗中的底物終濃度為20jaMATP(SigmaChemicals,StLouis,MO)和300jaM肽(AmericanPeptide,Sunnyvale,CA)。反應(yīng)在30。C和20nMGSK-3p下進(jìn)行。偶聯(lián)酶系統(tǒng)中成分的終濃度為2.5mM磷酸烯醇丙酮酸，300jliMNADH,30mg/ml丙酮酸激酶和lOjag/ral乳酸脫氫酶。制備包含上述所有試劑，但不含ATP和本發(fā)明測試化合物的試驗儲備緩沖溶液。在30'C下和96孔平板中將該試驗儲備緩沖溶液(175jul)與終濃度在0.0Q2iuM-30pM的1本發(fā)明測試化合物一起孵育10min。一般而言，通過在子平板中用本發(fā)明化合物的DMS0制備順序稀釋液(來自10mM化合物儲備溶液)進(jìn)行12-點滴定。通過添加20m1ATP(終濃度20jaM)啟動反應(yīng)。在30。C下和10min內(nèi)使用MolecularDevicesSpectramax平板讀出器(Sunnyvale,CA)獲得反應(yīng)速率。根據(jù)作為抑制劑濃度函數(shù)的速率數(shù)據(jù)測定Ki值。經(jīng)測定本發(fā)明的化合物抑制GSK-3。經(jīng)測定化合物I-1和1-2抑制GSK-3，Ki值<5nM。實施例3:GSK-3a和GSK3&p-TYR抑制試驗通過^f吏用給予了所述化合物的Jurkat細(xì)胞的蛋白質(zhì)印跡篩選化合物抑制酪氨酸磷(TYR)酸化的能力。測試的具體TYR殘基的磷酸化為GSK3aTYR279和GSK3pTYR216。細(xì)胞和裂解物的制備以2xl()S個細(xì)胞/孔的密度將Jurkat細(xì)胞接種在12孔平皿中的饑餓培養(yǎng)基(RPMI+1%FBS+P/S)中。在饑餓16小時后，將化合物以0.3%的DMSO終濃度給藥入各孔中并且在37'C5%(:02下孵育o/n。第二天，以1500rpm旋轉(zhuǎn)沉降細(xì)胞，用PBS洗滌并且在含有P-巰基乙醇的和100uLLaemli樣品緩沖液中裂解。蛋白質(zhì)印跡方案將15微升(uL)細(xì)胞裂解物上10%tris-甘氨酸凝膠并且在120v下運行2小時或直到染色的前部運行出凝膠。然后在100v下39將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)至PVDF膜上60min。然后制成PBST(PBS包含0.l%Tween20，諸如lmlTween/1LPBS)并且用于全部洗滌和抗體孵育。在5%去脂乳PBST中封閉印跡1小時。然后在4。C和適度振搖下在5。/。-去脂乳PBST中加入初級抗體(按照1:1000稀釋的GSK-3cx/PpTYR279/216，Upstatecat^5-413)過夜。然后用PBST洗涂印跡5min。然后將該步驟重復(fù)4次。在5%乳PBST中加入二次抗-小鼠-HRP綴合抗體(l:5000稀釋)60min。然后用PBST洗滌印跡5min。也將該步驟重復(fù)4次。制備3.0mL顯影溶液(ECL+來自Amersham/GEcat#RPN2132的蛋白質(zhì)印跡檢測系統(tǒng))且然后加入。將該溶液在印跡上渦旋~30秒。然后使用CL-Xposure澄清藍(lán)X-射線膠片使印跡顯影。將GAPDH表達(dá)水平按照1:10000稀釋用作負(fù)荷對照(GAPDH抗體:santacruz25-778)。為了測定GSK-3a和GSK-3PpTYRIC50，將具體化合物濃度下各蛋白質(zhì)相應(yīng)的帶密度與每次曝光時存在的無化合物DMSO處理的對照組細(xì)胞樣品比較。將IC50數(shù)值定義為GSK-3a或GSK-3&帶密度為無化合物的對照組的50%時的化合物濃度。實施例4:0-連環(huán)蛋白穩(wěn)定方案13-連環(huán)蛋白的GSK-3磷酸化使其靶向至蛋白體以便降解。抑制GSK-3導(dǎo)致P-連環(huán)蛋白在細(xì)胞的胞質(zhì)溶膠中蓄積，其通過與轉(zhuǎn)錄因子TCF/LEF的相互作用易位至核并且驅(qū)動Wnt-依賴性基因轉(zhuǎn)錄。設(shè)計本試驗是為了通過在使用給予化合物的Jurkat細(xì)胞中的P-內(nèi)酰胺酶報道分子試驗以定量方式測定P-連環(huán)蛋白依賴性TCF/LEF轉(zhuǎn)錄活性水平。通過用在實施例4中獲得的p-連環(huán)蛋白IC50值除以在實施例3中荻得的GSK-3ct或GSK3Pp-TYRIC50值計算P-連環(huán)蛋白GSK-3窗。經(jīng)測定化合物1-1和1-2均具有400-500倍的P-連環(huán)蛋白GSK-3oc窗。經(jīng)測定化合物1-1具有75-100倍的0-連環(huán)蛋白GSK-3P窗并且經(jīng)測定化合物2具有25-50倍的^-連環(huán)蛋白GSK-3P窗。表3表示了表1選擇的化合物的GSK-3apTYR，GSK-3ppTYR和p-連環(huán)蛋白IC50數(shù)據(jù)。表3化合物序號GSK3apTYR279:IC50:(uM)GSK3bpTYR216:IC50:(uM)P連環(huán)蛋白IC50:(uM)I-l<0.00050.0030.23I-20.0020.030.94實施例5:從組織中釆集胞質(zhì)級分低滲裂解緩沖液由lOmMHEPES,lOmMKCL,l.5mMMgCl2，1.0mMEDTA，1.0mMDTT，lxRoche蛋白酶抑制劑混合物和1.0mMAEBSFCalbiochem蛋白酶抑制劑混合物(cati^539134)組成。所有濃度均為終濃度并且用水稀釋。首先，將低滲裂解緩沖液加入到5x重量的組織中。然后使用注射器柱塞端在冰上破碎組織。接下來將樣品解凍5次。然后將裂解物轉(zhuǎn)至超速離心管并且在4。C下以100，000g旋轉(zhuǎn)35min。然后收集上清液并且取等分部分以便使用PierceBCA蛋白質(zhì)測定試劑盒(cat#23225)，應(yīng)用BSA標(biāo)準(zhǔn)曲線測定蛋白質(zhì)。用包含P-巰基乙醇的41laemmli樣品緩沖液按照1:1稀釋剩余的蛋白質(zhì)裂解物。然后校準(zhǔn)蛋白質(zhì)濃度。使樣品在95。C下沸騰5min，隨后以14，000rpm在小型-離心機(jī)中旋轉(zhuǎn)lmin。然后用干冰驟冷樣品并且儲存在-20'C下。Western方案首先使樣品上10。/。Tris-甘氨酸膠凝(10uL/孔)。然后使凝膠在120V下運行，直到染料標(biāo)記脫離凝膠。切下PVDF膜并且在使用前浸入曱醇5min。然后將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)至在100V下的PVDF膜上75niin(將轉(zhuǎn)移器具保持在水上)。然后在RT(室溫)下用溶于PBS0.1%Tween20的5%脫脂奶粉封閉該膜1h。用封閉緩沖液按照l:2000稀釋加入的初級抗體(SC-7199，SantaCruz家兔多克隆抗-人P-連環(huán)蛋白)。任選可以在相同印跡上以1:2000運行P微管蛋白負(fù)荷對照品(SC-9104)。然后將其在4'C下孵育過夜。用PBS0.l%Tween各自將膜每次5分鐘洗滌4次。然后加入抗-家兔二次HRP-綴合抗體(用封閉緩沖液按照1:5000稀釋)。用PBS0.1。/。Tween各自將膜洗滌4次，5min。接下來加入ECL試劑(Pierce)。最終暴露薄膜。通過比較獲自化合物治療的動物的樣品中蛋白質(zhì)帶的密度與媒介物治療的動物的樣品中蛋白質(zhì)帶的密度確定P-連環(huán)蛋白的誘導(dǎo)。實施例6:來自用于pTYR蛋白質(zhì)印跡的組織的蛋白質(zhì)分離RIPA由0.5ml10%SDS，2.5ml10%脫氧膽酸鈉，0.5mlNP40和46.5mlPBS組成。裂解緩沖液由8.3mlRIPA，1.0mlP-甘油磷酸(500mM)，0.1ralNaF(500iriM)，0.1ml正釩酸鈉(200mM)，0.4ml蛋白酶抑制劑(Roche蛋白酶抑制劑混合物片將1片溶于2ml水而得到25x儲備溶液cat并11873580001)和0.1mlPBS組成。將10mL裂解緩沖液(改進(jìn)的RIPA)加入到組織中(lml/1/2腦)并且在水上勻化。然后在4'C下以10000rpm將裂解物離心10min。然后將上清液轉(zhuǎn)至新管內(nèi)并且保持在冰上。在4'C下以10000rpm再旋轉(zhuǎn)上清液樣品10min。然后將上清液轉(zhuǎn)至新管內(nèi)并且保持在42冰上。取上清液的等分部分并且使用PierceBCA蛋白質(zhì)測定試劑盒(cat并23225)，應(yīng)用BSA標(biāo)準(zhǔn)曲線(用PBS按照1:25稀釋)測定蛋白質(zhì)。用加入了p-巰基乙醇的BioradLaemmli樣品緩沖液(cat"61-0737)將剩余的上清液稀釋至lug/ul。使樣品在95。C下沸騰5min并且在微量離心機(jī)中旋轉(zhuǎn)1分鐘。然后用干冰驟冷樣品并且儲存在-20C下。然后上10ug蛋白質(zhì)/泳道(10uL)并且按照實施例3進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡。通過比較獲自化合物治療的動物的樣品中蛋白質(zhì)帶的密度與媒介物治療的動物的樣品中蛋白質(zhì)帶的密度確定GSK-3cc/ppTYR的抑制。實施例7:軸突分枝試驗測試化合物促進(jìn)E16大鼠海馬或皮質(zhì)神經(jīng)元中軸突分枝的能力。第1天細(xì)胞板的制備用DI水將1mg/mlPDL儲備溶液稀釋成100|ig/ml。在進(jìn)行剝離前37。C下給玻璃蓋玻片涂片至少1小時。抽吸PDL并且用PBS沖洗平板并且在通風(fēng)根中風(fēng)干。E-16大鼠皮質(zhì)細(xì)胞的剝離將皮質(zhì)或海馬葉與9mL基礎(chǔ)培養(yǎng)基(Neurobasal+青霉素/鏈霉素)合并并且放在水上。加入lmLIOX胰蛋白酶溶液并且緩慢蝸旋該混合物。然后通過在37。C水浴中孵育20分鐘消化組織。20分鐘后，加入10ial/mlDNase(100iaLDNase)并且將該混合物再孵育5分鐘。將細(xì)胞以1000rpm旋轉(zhuǎn)1分鐘。然后除去酶溶液，但不除去任何位于底部的腦碎片。用洗滌培養(yǎng)基(Neurobasal+10%和青霉素/鏈霉素)將固體洗滌3次。第3次洗滌后，將細(xì)胞重新-懸浮于5ml培養(yǎng)基(Neurobasal+B27,L-谷氨酰胺和青霉素/鏈霉素)中。通過經(jīng)火焰-狹窄的玻璃吸量管輕度吸移幾次進(jìn)行機(jī)械剖離，小心不要起泡。然后通過7Qjam細(xì)胞濾過器過濾細(xì)胞。用血細(xì)胞計數(shù)器計數(shù)細(xì)胞并且用涂敷了PDL的玻璃蓋玻片插入物以5000-10000細(xì)胞/孔接種的24孔平板上。在37n0/n下孵育細(xì)胞。第2天細(xì)胞維持第二天，用包含視黃酸(RA)的新鮮培養(yǎng)基改變一半培養(yǎng)基。加入化合物至0.3。/。DMS0終濃度的所需濃度。改變一半培養(yǎng)基并且每隔3天加入一次新制的化合物。在培養(yǎng)物中將細(xì)胞與化合物一起孵育6天。第7天固定和染色材料:1.磷酸緩沖鹽溶液(PBS)-Gibco14190-1442.洗滌緩沖液=PBS-T:■PBS■0."/oTween-20(BioRad,170-6531)3.封閉緩沖液=PBS-T+5%正常驢血清或HBSS-T+5。/。正常驢血清■10mlPBS■0.l%Tween-20(BioRad，170-6531)■0.5ml正常驢血清(JacksonImmuno#017-000-121)4.GelMountCUi-Fluortra(TedPellaAF-1)5.神經(jīng)絲抗體1:250Abeam,MAP2抗體1:250Abeam6.用于抗-家兔Alexa488(神經(jīng)絲)和抗-小鼠Alexa568(MAP2)的二次抗體1:500方法如果培養(yǎng)基包含血清，那么用PBS將細(xì)胞洗滌兩次。如果細(xì)胞在不含血清的培養(yǎng)基中生長，那么無需洗滌。固定首先除去培養(yǎng)基或PBS。然后加入500uLHistoChoice以覆蓋細(xì)胞。將細(xì)胞在室溫下孵育10分鐘。然后用PBS將它們洗滌244次，其中在每次洗滌后孵育5分鐘。用量如下所示■96孔格中100ulPBS/孔■48孔格中200ulPBS/孔■24孔格中400ulPBS/孔將細(xì)胞與封閉緩沖液在室溫下孵育30分鐘。然后將組織與封閉緩沖液在室溫下孵育1小時。用PBS+0.l%Tween+5%驢血清稀釋1°抗體。取出封閉緩沖液并且加入足夠體積的在封閉緩沖液中的1?？贵w以便覆蓋。將l?？贵w在4。C下孵育過夜。第二天取出1°抗體并且用PBS-T將蓋玻片洗滌兩次，在每次洗滌之間有5分鐘孵育。取出PBS-T并且加入封閉緩沖液。將細(xì)胞孵育30分鐘。用PBS+0.l%Tween+5%驢血清稀釋2?？贵w。將該混合物在室溫下孵育30min。用PBS-T將載玻片洗滌三次并且用PBS洗滌一次。加入封固平培養(yǎng)基以便減少熒光染料猝滅。取出玻璃蓋玻片并且放置在栽玻片上以便顯現(xiàn)。分析在直立顯微鏡上以lQx和2Qx俘獲影象并且通過對每個細(xì)胞中的神經(jīng)絲Alexa488閾值熒光下的面積進(jìn)行定量來確定軸突分枝。通過對每個細(xì)胞中的MAP2Alexa568的閾值熒光下的面積進(jìn)行定量來確定樹突分枝?？蛇x擇地，可以通過對每個細(xì)胞中的分枝點進(jìn)行手工計數(shù)確定分枝。在同時時間點通過比較化合物處理的培養(yǎng)物中閾值熒光下的面積與DMSO對照組的閾值熒光下的面積評價化合物的作用。用10nM化合物1-1將E16海馬神經(jīng)元處理7天導(dǎo)致軸突和樹突分枝增加。當(dāng)在已經(jīng)證實誘導(dǎo)P-連環(huán)蛋白的濃度下處理E16海馬神經(jīng)元時，軸突生長得到抑制，進(jìn)一步支持了GSK-3a/PpTYR與p-連環(huán)蛋白之間的窗的治療作用。實施例8:CRMP2磷酸化試驗GSK-3磷酸化調(diào)節(jié)涉及控制軸突過度生長和分枝的C匿2(Yoshimura等，2005Cell,Kim等，2006Neuron)。GSK-3使45CRMP2磷酸化減少了CRMP2與微管結(jié)合且由此減少了軸突延伸和分枝。相反，抑制GSK-3，尤其是在選擇性影響TYR殘基自磷酸化的水平上強(qiáng)化了這些表型。在E16大鼠海馬或皮質(zhì)神經(jīng)元中測試化合物以便測定增加周體分枝水平的能力。第1天細(xì)胞板的制備用DI水將lmg/mlPDL儲備溶液稀釋成100yg/ml。在進(jìn)行剝離前37'C下給玻璃蓋玻片涂片至少1小時。抽吸PDL并且用PBS沖洗平板并且在通風(fēng)拒中風(fēng)干。E-16大鼠皮質(zhì)細(xì)胞的剝離將皮質(zhì)或海馬葉與9raL基礎(chǔ)培養(yǎng)基(Neurobasal+青霉素/鏈霉素)合并并且放在冰上。加入lmLIOX胰蛋白酶溶液并且緩慢蝸旋該混合物。然后通過在37'C水浴中孵育20分鐘消化組織。20分鐘后，加入10jal/mlDNase(100MLDNase)并且將該混合物再孵育5分鐘。將細(xì)胞以1000rpm旋轉(zhuǎn)1分鐘。然后除去酶溶液，但不除去任何位于底部的腦碎片。用洗滌培養(yǎng)基(Neurobasal+10%和青霉素/鏈霉素)將固體洗滌3次。第3次洗滌后，將細(xì)胞重新-懸浮于5ml培養(yǎng)基(Neurobasal+B27,L-谷氨酰胺和青霉素/鏈霉素)中。通過經(jīng)火焰-狹窄的玻璃吸量管輕度吸移幾次進(jìn)行機(jī)械剖離，小心不要起泡。然后通過70jum細(xì)胞濾過器過濾細(xì)胞。細(xì)胞用血細(xì)胞計數(shù)器計數(shù)并且以50，000細(xì)胞/孔接種在12孔平板上。在37X:o/n下孵育細(xì)胞。第2天細(xì)胞維持第二天，用包含視黃酸(RA)的新鮮培養(yǎng)基改變一半培養(yǎng)基。加入化合物至0.3%DMS0終濃度的所需濃度。改變一半培養(yǎng)基并且每隔3天加入一次新制的化合物。在培養(yǎng)物中將細(xì)胞與化合物一起孵育6天。第7天采集裂解物和蛋白質(zhì)印跡用PBS洗滌培養(yǎng)物并且在100uL添加了p-巰基乙醇的46Laemli樣品緩沖液中直接裂解。蛋白質(zhì)印跡方案首先使7微升(uL)細(xì)胞裂解物上10。/。Tris-甘氨酸凝膠并且在120V下運行2小時，或直到染料向前脫離凝膠。然后將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)至在100V下的PVDF膜上60min。然后制成PBST(包含0.l%Tween20，諸如lmlTween/1LPBS的PBS)并且用于所有的洗滌和抗體孵育。用5。/。去脂乳PBST將印跡封閉1小時。然后在4"C和適度振搖下在5o/。-去脂乳PBST中加入初級抗體(l:10，000CRMP2家兔多克隆Abeam#ab36201)過夜。然后用PBST洗滌印跡5min。將該步驟也重復(fù)4次。在5%乳PBST中加入二次抗-小鼠-HRP綴合抗體(1:5000稀釋)60min。然后用PBST洗滌印跡5min。也將該步驟重復(fù)4次。制備3.0mL顯影溶液(BCL+來自Amersham/GEcat#RPN2132的蛋白質(zhì)印跡檢測系統(tǒng))且然后加入。將該溶液在印跡上渦旋~30秒。然后使用CL-Xposure澄清藍(lán)X-射線膠片使印跡顯影。將GAPDH表達(dá)水平按照1:10000稀釋用作負(fù)荷對照(GAPDH抗體santacruz25-778)。CRMP2抗體檢測CRMP2的未磷酸化形式和為GSK-3磷酸化的殘基的CRMP2的磷酸化形式(T514)(Kim等，2006Neuron)。將化合物對pCRMP2的IC50定義為過度移動的pCRMP2帶密度為無化合物的對照組的50%的化合物濃度。結(jié)果抑制底物CRMP-2的GSK-3磷酸化與用化合物1-1處理7天的E16海馬神經(jīng)元中GSK-3pTYR抑制相關(guān)。在生長的軸突中富含CRMP-2并且未磷酸化的CRMP-2結(jié)合微管并且促進(jìn)軸突分枝。實施例9:使用HUVEC和皮膚成纖維細(xì)胞的血管發(fā)生體外模型篩選化合物促進(jìn)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)中血管發(fā)生的能力。采用來自Nakatsu等，Microvas.Res.2003的該方法描述了一種方案，其概括了用于新血管生長萌發(fā)，細(xì)胞遷移，細(xì)胞增殖，腔形成，分枝和吻合所必需的主要事件。方案使用P3與P4之間的HUVEC。在lmlEGM-2(2%FBS)培養(yǎng)基(Clonetics)中將HUVEC與400HUVEC/珠濃度的葡聚糖包被的cytodex3微載體(AmershamPharmacia)混合。然后在37。C和5%C02下每隔20min將含有細(xì)胞的珠適度振搖4h。在孵育后，將含有細(xì)胞的珠轉(zhuǎn)至T-25組織培養(yǎng)燒瓶并且在37X:5%002下和5mlEGM-2中保持12-16h。第二天，用EGM-2將含有細(xì)胞的珠洗滌三次并且以200細(xì)胞-包被的珠/ral重新懸浮于含有0.15U/ml抑肽酶(Sigma)的pH7.4的2.5mg/ml血纖蛋白原(Sigma)中。然后將500ul血纖蛋白原/珠的溶液加入到24孔組織培養(yǎng)平板的一個孔中的0.625U凝血中。使血纖蛋白原/珠的溶液在室溫下凝塊5min且然后在37°C5%0)2下凝塊20min。然后向各孔中加入含有0.15U/ml抑肽酶的1mlEGM-2并且在37。C和5%0)2下使用血纖蛋白凝塊平衡30min。接下來從各孔中取出培養(yǎng)基并且用1ml新鮮培養(yǎng)基替代。將20，000個皮膚成纖維細(xì)胞(SFATCCDetroit551)在凝塊上部鋪板并且每隔一天改變一次培養(yǎng)基。為了進(jìn)行化合物抑制研究，實施6點劑量響應(yīng)(1uM終濃度的1:3稀釋液)，其中在平衡后向凝塊中加入化合物。通過對以10x和20x放大倍數(shù)在倒置顯微鏡上俘獲的影像進(jìn)行定量對血管發(fā)生的血管長度，血管數(shù)量和分枝/珠使用NIHImageJ軟件評分。任選在測定前，可以使用在組成型最低活性TK啟動子控制下表達(dá)黃色熒光蛋白(YFP)的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體旋轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)導(dǎo)HUVEC,并且對YFP表達(dá)進(jìn)行分選以〗更促進(jìn)顯影。然后如上所述培養(yǎng)YFP陽性HUVEC并且通過使用NIHImageJ軟件計算閾值熒光下的面積確定血管形成的量化。在兩種情況中，通過在同時間點比較化合物處理的培養(yǎng)物與DMSO對照培養(yǎng)物確定增強(qiáng)的血管發(fā)生。48用化合物I-l(10nM)將HUVEC培養(yǎng)物處理7天導(dǎo)致血管增加和網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)形成。當(dāng)以證實誘導(dǎo)p-連環(huán)蛋白的濃度處理HUVEC培養(yǎng)物時，可抑制血管形成并且觀察到細(xì)胞增殖增加，從而進(jìn)一步支持了GSK-3a/PpTYR與(3-連環(huán)蛋白之間的窗的治療作用。實施例10:中風(fēng)后恢復(fù)MCAO模型I.一般方法在一組行為試驗時預(yù)先訓(xùn)練成年雄性Wistar大鼠，包括圖盤觸及，網(wǎng)格步行，前肢不對稱(圓柱體支撐)，前肢抑制(游泳試驗)(參見下文的試驗的詳細(xì)描述)。在中風(fēng)前行為評價后，大鼠接受手術(shù)，在此過程中，誘導(dǎo)中風(fēng)。將大鼠假擬隨機(jī)分成5個等同的組(n-12)，確保在每個治療組中右側(cè)和左側(cè)中風(fēng)的數(shù)量相等。第一組接受使用媒介物的假擬手術(shù)作為治療。由承辦人確定測試化合物和媒介物的給藥(劑量，途徑，定時)。將核心體溫維持在37'C(+/-1°)。在手術(shù)后，評價所有動物中風(fēng)后l,7和14d的行為。在行為評價結(jié)束時，所有大鼠進(jìn)行MRI以便確定梗死體積。使用一種方式方差分析比較組行為特征和中風(fēng)體積以便確定化合物在MCAO中風(fēng)后功能恢復(fù)比例和程度上的治療有益牲。II.中腦動脈閉塞稱重每只動物(平均體重為340g)且然后使用異氟烷麻醉(攜帶2l/min醫(yī)用級氧的4%異氟烷以便誘導(dǎo)手術(shù)平面且然后是含有21/min氧的2%以便維持手術(shù)平面)。在誘導(dǎo)麻醉后，對每只大鼠分別使用耳穿孔標(biāo)記并且給予皮下劑量的丁丙諾啡(O.025mg/kg)。監(jiān)測直腸溫度并且在手術(shù)過程中維持在37°C+/-rc，且直到大鼠蘇醒和活動為止(約3h)。然后將大鼠放入定位放置的離體定位儀，使得頭側(cè)面面向上。剃刮左眼與耳之間的評分并且用手術(shù)用無菌擦洗液洗滌。在右眼眶與外耳道之間的中間位置做縱形切口。切開下面的顳肌，從頭蓋骨中剝離并且小心地縮回以保護(hù)面神經(jīng)。雙縫合線遠(yuǎn)離頭蓋骨側(cè)面固49定顳肌。從顴骨后開始并且沿頭蓋骨顳嵴實施顱骨切開術(shù)以便前側(cè)延伸耳暴露大腦中動脈(MCA)和嗅覺通路。打開硬腦膜和MCA基底并且將第一分枝的前部電凝固至嗅覺通路前側(cè)，導(dǎo)致右背外側(cè)大腦皮質(zhì)梗死形成o在MCA電凝固術(shù)完成時注意到中風(fēng)發(fā)生的時間。一旦出血得到控制，就復(fù)位顳肌并且縫合皮膚。然后從離體定位儀上取下大鼠并且放回至恢復(fù)室。給予第二種皮下劑量的丁丙諾啡(O.025mg/kg)與2cc林格液。在1/2籠中準(zhǔn)備好水，濕大鼠食物和溫?zé)釅|，而在恢復(fù)室內(nèi)也一樣。一旦大鼠蘇醒并且看到食物和飲水，它就返回到其動物群居的籠中。III.用于行為測試的方法托盤觸及寸吏用采用來自Whishaw，0'Connor和Dunnett(1986)"i殳計的方法的操作確定前爪的應(yīng)用。使每只動物禁食，以便在每天測試后出現(xiàn)喂食時間。將動物方文入由2-mm桿，邊緣距邊緣9mm構(gòu)成的具有底部和朝向的測試籠(IOX18X10cm高)。將包含雞飼料顆粒的4-cm寬和5-cm深的托盤固定在每只盒子的外部。要求大鼠前肢伸展通過桿中的縫隙，握住并且取回食物。每天訓(xùn)練動物20-30min，最少10天或直到50%的采樣數(shù)達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)(注意這指的是兩只爪合并為50%)。大部分大鼠趨向于僅使用主要的爪觸及。如果大鼠無法達(dá)到14天訓(xùn)練內(nèi)50%采樣數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)，那么從本研究中將其排除。此外，從本研究中排除表現(xiàn)出雙爪均使用的任何大鼠。雙爪均使用的大鼠使用任一爪觸及或通常等同使用每只爪同樣成功的觸及)。將"采樣數(shù)"定義為導(dǎo)致食物顆粒消耗的成功握住和隨意再獲取食物顆粒。將"未抓到"定義為隨意再取食物顆粒不成功(沒有適當(dāng)握住顆?；蛟谠佾@取過程抓丟掉了顆粒，使得顆粒無法消耗)。將采樣數(shù)的百分比計算為期限過程中的采樣總數(shù)除以觸及的總數(shù)。對左和右爪單獨計算該值(或中風(fēng)后受影響和未受影的)。一旦達(dá)到so%的標(biāo)準(zhǔn)成功(包括由兩只爪觸及的)，就在5min觸及的過程中給每只大鼠錄影。將本期限的結(jié)果用作手術(shù)前的基線。手術(shù)前的測試期還用于確定每只大鼠的爪的支配地位。在用于觸及的優(yōu)勢爪的對側(cè)的腦半球內(nèi)施加中風(fēng)損害。手術(shù)后測試由測試動物的每周5min觸及試驗組成。在監(jiān)測器上使用每次觸及的依次框架分析觀察每一期限。由2位不同的記錄員對每一期限進(jìn)行評分。每一記錄員最終計算的采樣數(shù)百分比在彼此5%的范圍內(nèi)。如果最終評分之間出現(xiàn)更大的不一致，那么由2位觀察者給該期限重新評分。在各組中使用一種方式方差分析比較每組中受影響和未受影響的爪的采樣數(shù)百分比。在上述模型中測試化合物1-1。中風(fēng)可靠地產(chǎn)生在手術(shù)后7和14天時觸及行為缺陷。添加化合物1-1比媒介物治療明顯改善了中風(fēng)后7和14天時的這一缺陷。網(wǎng)格步行4吏用由兩個1m長和25cm寬(5mm厚)的沿一個長邊上間隔1cm打一個鉆孔的樹脂玻璃操作盤組成的儀器測定前肢和后肢協(xié)調(diào)。將操作盤間隔2.5cm放置并且通過幾個金屬棒(3腿直徑)經(jīng)所述的孔連接。將棒隨機(jī)間隔l，2或3cm放置。懸掛和定向該儀器，使得在具有25cm高的壁上形成lm長的狹窄通道(2.5cm寬)。這些才奉構(gòu)成底部。使用3次試驗將每只動物導(dǎo)入該儀器，其中將大鼠在每次隨后的試驗中距離目標(biāo)盒子較遠(yuǎn)的距離放置。即在第一次試驗時，將大鼠放置在網(wǎng)格近端并且面向目標(biāo)盒子。一旦大鼠進(jìn)入了目標(biāo)盒子，就將其放置的網(wǎng)格上一半路徑的點上，再次面對目標(biāo)盒子。在第三次和最終的試驗時，將大鼠放置在入口并且使其橫過整個網(wǎng)格到達(dá)目標(biāo)盒子。在手術(shù)前這種訓(xùn)練操作對每只大鼠僅進(jìn)行一次。在所有51隨后的測試試驗時，將動物各自放置在儀器的入口并且要求它們橫過整個網(wǎng)格而到達(dá)目標(biāo)盒子。在中風(fēng)前進(jìn)行3次試驗的一個測試期。中風(fēng)厚的每一測試期包括3次試驗。在接近水平面的范圍給每次試驗錄影。由2位觀察者使用依次框架分析給錄像帶評分。對通過網(wǎng)格mid80%的左側(cè)和右側(cè)(受影響和未受影響)前肢和后肢放置錯誤的數(shù)量進(jìn)行計數(shù)。使用遮蔽膠帶在儀器的外部標(biāo)記mid80%的網(wǎng)格。無論肢體(部分或全部，即恰好爪或整個腿部)通過棒的水平面如何伸展均被視為錯誤。在三次試驗中對同側(cè)和對側(cè)肢單獨計算前肢和后肢錯誤的總和并且獨立分析。使用一種方式方差分析在各組之間比較評分。在上述模型中測試化合物1-1。中風(fēng)可靠地產(chǎn)生在手術(shù)后7和14天時觸及行為缺陷?；衔?-1明顯改善了中風(fēng)后7和14天時的這一缺陷。前爪不對稱(圓柱體試驗)通過將大鼠放入直徑為25cm的透明丙烯酸圓柱體測定動物的前爪不對稱。將該圓柱體放在帶有定位的反光鏡的透明工作臺上，使得可以從下面給動物攝影。這一有利位置提供了在動物探查圓柱體時其前爪的清晰照片。在探查過程中，大鼠趨向于直立許多。在每次直立時，大鼠將其前爪指向圓柱體的一側(cè)以便提供平衡和支持，同時探查圓柱體。探查包括依靠圓柱體的左側(cè)和右側(cè)(同時直立)和直立向上。正常大鼠同樣地左和右前爪以支撐壁。當(dāng)直立向上探查壁時，大鼠使用兩爪支撐。在前20次直立過程中，注意支撐爪。對在直立過程中觸及圓柱體壁的第一只爪計數(shù)。測試持續(xù)至記錄了20次直立。由2位觀察者給錄像帶記錄評分。對左和右爪壁觸及計數(shù)。因此，就每次支撐而言，評分可以為L或R或L&R。—個測試期在手術(shù)前進(jìn)行且在此后是指定的手術(shù)后測試期限。手術(shù)前試驗用于測定大鼠不具有預(yù)先存在的爪偏好(即15/20以上的壁觸及了一側(cè))。如果它們確實表現(xiàn)出一側(cè)偏好，那么將它們從52本研究中除去。將手術(shù)后評分表示為使用受影響的(中風(fēng)損傷對側(cè))爪觸及的百分比。使用一種方式方差分析對這一評分在各組中進(jìn)行比較。在上述模型中測試化合物1-1。中風(fēng)可靠地產(chǎn)生在手術(shù)后7和14天時觸及行為缺陷?；衔?-1在低劑量下明顯改善了中風(fēng)后7和14天時的這一缺陷。前肢抑制(游泳試驗)在正常大鼠中，游泳通過后肢進(jìn)行性中風(fēng)進(jìn)行。前肢一般因任何中風(fēng)而受到抑制并且保持不動和共同在動物下顎下。通過給游泳過程中的動物攝影評價前肢抑制。將動物導(dǎo)入充滿了25cm深的室溫水(251C)的玻璃缸(30wx901x43hcra)的一端并且在它們游至9.5平方厘米可見平臺時攝影，該平臺比位于對側(cè)的水面高出2cm。通過對三次放入玻璃缸的左和右前肢中風(fēng)的數(shù)量進(jìn)行計數(shù)進(jìn)行抑制評分。僅對mid80%長度進(jìn)行評分。使用遮蔽膠帶在玻璃缸外部標(biāo)記mid80%。如果動物在游泳試驗過程中無法觸及玻璃缸側(cè)面，那么認(rèn)為游泳可評分。使用一種方式方差分析對左和右(中風(fēng)后受影響和未受影響)前肢中風(fēng)的總數(shù)在各組中進(jìn)行比較。在上述模型中測試化合物1-1。中風(fēng)可靠地產(chǎn)生在手術(shù)后7和14天時觸及行為缺陷。化合物1-1明顯改善了中風(fēng)后7和l4天時的這一缺陷。pTYR生物標(biāo)記分析為了追蹤化合物1-1在進(jìn)行MCAO的大鼠CNS中的活性，在本研究結(jié)束時從媒介物治療和化合物治療的動物中摘除腦并且獲得蛋白質(zhì)裂解物(如本文實施例6中所述。通過蛋白質(zhì)印跡分析裂解物(參見實施例3)并且探測GSK-3ot/ppTYR水平?；衔?-1在所有劑量下使腦中的pTYR信號均表現(xiàn)出比媒介物治療的無13-連環(huán)蛋白誘導(dǎo)的大鼠明顯降低。粘合劑去除試驗使用粘合劑去除試驗測試大鼠的前肢軀體感覺缺陷53(SchallertT等，1984#3)。每只動物通過在每一測試天時放置包扎帶的圓形創(chuàng)口貼(直徑約1.2cm)接受3次試驗，并且記錄從左側(cè)前肢上取下刺激物所需的平均時間(秒)。IV.用于分子和組織學(xué)分析的方法分子分析蛋白質(zhì)裂解物獲自所有媒介物和化合物治療的動物的大腦并且進(jìn)行加工，以便通過蛋白質(zhì)印跡測定法對GSK3cc/0pTYR和P-連環(huán)蛋白進(jìn)行生物標(biāo)記分析，從而確?；衔飳Π袠?biāo)的活性。腦脊髓液獲自所有媒介物和化合物治療的動物并且通過ELISA分析BMF水平作為神經(jīng)元可塑性的可替代標(biāo)記。組織學(xué)分析石蠟包i里的腦才羊品獲自Neuroinvestigations并且將其切成放置在玻璃載玻片上的6um切片，并且通過免疫組織化學(xué)或免疫熒光分析與中風(fēng)后恢復(fù)過程中有益效果相關(guān)的標(biāo)記/表型千細(xì)胞動員/增殖使用用于對室下區(qū)(SVZ)中BrdU陽性細(xì)胞定量的Aperio系統(tǒng)染色BrdU并且進(jìn)行分析。神經(jīng)發(fā)生對雙皮層蛋白(DCX)進(jìn)行免疫熒光染色并且結(jié)合使用用于定量的手工計數(shù)的SVZ中的BrdU。血管發(fā)生:使用用于對梗死周圍中vWF陽性細(xì)胞定量的Aperio系統(tǒng)染色馮維勒布蘭德因子VIII(vWF)并且進(jìn)行分析。盡管已經(jīng)描述了本發(fā)明的許多實施方案，但是顯而易見，可以改變我們的基礎(chǔ)實施例以便提供使用或包括本發(fā)明化合物，方法和工藝的其它實施方案。因此，可以理解本發(fā)明的范圍由待批權(quán)利要求定義。5權(quán)利要求1.式I的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中RX為C1-3烷基且RY為C1-3烷基。2.權(quán)利要求l所述的化合物，其中RX為甲基或乙基。3.權(quán)利要求2所述的化合物，其中RX為曱基。4.權(quán)利要求1-3中任意一項所述的化合物，其中RY為甲基。5.權(quán)利要求l所述的化合物，選自如下<formula>formulaseeoriginaldocumentpage2</formula>6.權(quán)利要求l所述的化合物，選自如下:7.組合物，其包含權(quán)利要求1-6中任意一項的化合物和藥學(xué)上可接受的載體，佐劑或媒介物。8.權(quán)利要求7所述的組合物，其還包含選自化療劑或抗增殖劑，抗炎劑，免疫調(diào)節(jié)劑或免疫抑制劑，神經(jīng)營養(yǎng)因子，治療心血管疾病的活性劑，治療糖尿病的活性劑或治療免疫缺陷性疾患的活性劑的治療劑。9.使用權(quán)利要求1-6中任意一項的化合物抑制離體或體外生物樣品中GSK-3活性的方法。10.治療或減輕疾病或疾患的嚴(yán)重性的方法，所述疾病或疾患選自糖尿病，骨質(zhì)疏;松癥，阿爾茨海默病，亨廷頓病，帕金森病，AIDS-相關(guān)癡呆，雙相型情感障礙，肌萎縮性側(cè)索硬化(ALS，LouGehrig病)，多發(fā)性硬化(MS)，精神分裂癥，白細(xì)胞減少，中風(fēng)和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，所述的方法包括對患者給予權(quán)利要求1-6中任意一項的化合物的步驟。11.權(quán)利要求10所述的方法，其中所述的疾病為中風(fēng)。12.權(quán)利要求10所述的方法，其中所述的疾病為糖尿病。13.權(quán)利要求10所述的方法，其中所述的疾病為精神分裂癥。14.權(quán)利要求10所述的方法，其中所述的疾病為雙相型情感障礙。15.權(quán)利要求10所述的方法，其中所述的疾病為白細(xì)胞減少。16.治療或減輕疾病或疾患的嚴(yán)重性的方法，所述疾病或疾患選自中風(fēng)，脊髓損傷，外傷性腦損傷，沙-馬-圖病和糖尿病神經(jīng)病變，所述的方法包括對患者給予權(quán)利要求1-6中任意一項的化合物的步驟。17.權(quán)利要求16所述的方法，其中所述的疾病或疾患為中風(fēng)。18.權(quán)利要求17所述的方法，其中在局部缺血發(fā)生后給予所述的化合物。19.權(quán)利要求17所述的方法，其中所述的化合物用于中風(fēng)后恢復(fù)。20.權(quán)利要求IO所述的方法，所述的方法包括對所述患者給予額外的治療劑的步驟，所述的額外的治療劑選自治療糖尿病的活性劑，治療骨質(zhì)疏松癥的活性劑，治療阿爾茨海默病的活性劑，治療亨廷頓病的活性劑，治療帕金森病的活性劑，治療AIDS-相關(guān)癡呆的活性劑，治療雙相型情感障礙的活性劑，治療肌萎縮性側(cè)索硬化(ALS，LouGehrig病)的活性劑，治療多發(fā)性硬化(MS)的活性劑，治療精神分裂癥的活性劑，治療白細(xì)胞減少的活性劑，治療中風(fēng)的活性劑和治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的活性劑，其中a)所述的額外的治療劑適合于治療所述的疾??；且b)將所述的額外的治療劑與所述的組合物一起作為單一劑型或與所述組合物分別作為多劑型的組成部分給予。21.權(quán)利要求16所述的方法，所述的方法包括對所述患者給予額外的治療劑的步驟，所述的額外的治療劑選自治療中風(fēng)的活性劑，治療脊髓損傷的活性劑，治療外傷性腦損傷的活性劑，治療沙-馬-圖病的活性劑或治療糖尿病神經(jīng)病變的活性劑。22.權(quán)利要求16-19中任意一項所述的方法，所述方法與物理療法聯(lián)用。23.增加神經(jīng)元細(xì)胞中軸突和樹突分枝的方法，所述的方法包括使所述的細(xì)胞接觸權(quán)利要求1-6中任意一項的化合物的步驟。24.增加神經(jīng)元細(xì)胞中神經(jīng)發(fā)生的方法，所述的方法包括4吏所述的細(xì)胞接觸權(quán)利要求1-6中任意一項的化合物的步驟。25.增加神經(jīng)元細(xì)胞中血管發(fā)生的方法，所述的方法包括4吏所述的細(xì)胞接觸權(quán)利要求1-6中任意一項的化合物的步驟。26.增加神經(jīng)元細(xì)胞的可塑性的方法，所述的方法包括使所述的細(xì)胞接觸權(quán)利要求1-6中任意一項的化合物的步驟。全文摘要本發(fā)明涉及用作蛋白激酶抑制劑的化合物(I)。本發(fā)明還提供了包含那些化合物的藥學(xué)上可接受的組合物和使用所述化合物和組合物治療各種疾病，疾患和病癥的方法。本發(fā)明還提供了制備本發(fā)明化合物的方法。文檔編號C07D471/04GK101668760SQ200880013873公開日2010年3月10日申請日期2008年3月10日優(yōu)先權(quán)日2007年3月9日發(fā)明者A·皮爾斯,G·亨克爾,J·科姆,J·科特,M·劉,T·紐伯格,淮高申請人:沃泰克斯藥物股份有限公司