本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種酪氨酸激酶抑制劑及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

蛋白激酶是一種磷酸轉(zhuǎn)移酶，轉(zhuǎn)移三磷酸腺苷atp的伽馬磷酸脂基到特定的氨基酸殘基，用以實(shí)現(xiàn)蛋白的磷酸化，從而實(shí)現(xiàn)其生理和生化功能。

蛋白激酶在信息傳導(dǎo)上有著重要功能。反常的蛋白激酶不能進(jìn)行正常的信號(hào)傳遞，可能會(huì)引起病變，例如：腫瘤細(xì)胞增生、細(xì)胞死亡、炎癥、心血管疾病等蛋白激酶。蛋白激酶主要分為兩類：蛋白酪氨酸激酶ptks和受體酪氨酸激酶rtks。met族蛋白激酶中的ros1/c-met是rtps的一個(gè)重要亞系，也稱作hhgfr和ron；ros1/c-met能夠?qū)ζ鹗寄[瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和代謝起到重要作用，是多種藥物臨床研究的目標(biāo)靶點(diǎn)。

因此，生物醫(yī)療技術(shù)領(lǐng)域急需ros1/c-met激酶抑制劑，尤其是小分子化合物的酪氨酸激酶抑制劑。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種酪氨酸激酶抑制劑，該激酶抑制劑能夠抑制c-met、vegf、kdr、ron、kit、pdgf、fgf、src等多種參與信號(hào)傳導(dǎo)的酪氨酸激酶的活性，能有效抑制腫瘤細(xì)胞的增殖，使臨床癌癥治療取得更好效果。

為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明通過(guò)如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn):

在本發(fā)明的一個(gè)方面，提供了一種具有通式(i)的鹽類化合物，

其中，

r1選自鹵素、鹵素負(fù)離子、低級(jí)鹵代烷烴基、低級(jí)烷烴基、低級(jí)烯烴基、低級(jí)炔烴基、取代飽和或不飽和環(huán)烷基，取代或不取代芳香烷基、取代或不取代芳香基、取代或不取代雜環(huán)基、取代或不取代雜環(huán)烷基、或?yàn)榭眨?/p>

y選自c、o、n、s或?yàn)榭眨?/p>

x選自碳酸根、硫酸根、亞硫酸根、硫酸氫根、磷酸根、亞磷酸根、磷酸氫根、磷酸二氫根、鉬酸根、氯酸根、或?yàn)榭铡?/p>

優(yōu)選的，所述通式(i)化合物包括下述具體結(jié)構(gòu)的化合物：

在本發(fā)明的另一方面，還提供了一種藥物組合物，該組合物包含安全有效量的上述化合物和藥學(xué)上可接受的載體。

上述可接受的載體是無(wú)毒的、能輔助施用并且對(duì)化合物的治療效果沒(méi)有不利影響。此類載體可以是本領(lǐng)域的技術(shù)人員通常能得到的任何固體賦形劑、液體賦形劑、半固體賦形劑或者在氣霧劑組合物中的氣體賦形劑。固體藥物賦形劑包括淀粉、纖維素、滑石、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明膠、麥芽、稻米、面粉、白堊、硅膠、硬脂酸鎂、硬脂酸鈉、甘油硬脂酰酯、氯化鈉、無(wú)水脫脂乳等。液體和半固體賦形劑可以選自甘油、丙二醇、水、乙醇和各種油，包括那些源于石油、動(dòng)物、植物或人工合成的油，例如，花生油、豆油、礦物油、芝麻油等、優(yōu)選的液體載體，特別是用于可注射溶液的，包括水、鹽水、葡萄糖水溶液和甘醇。另外還可以在組合物中加入其它輔劑如香味劑、甜味劑等。

本發(fā)明的化合物以治療上的有效量施用，其施用方式可以是口服、全身施用(例如，透過(guò)皮膚的、鼻吸入的或者用栓劑)或腸胃外施用(例如，肌肉內(nèi)、靜脈內(nèi)或皮下)。優(yōu)選的施用方式是口服，它可根據(jù)疾病程度調(diào)節(jié)。

本發(fā)明的化合物的實(shí)際施用量(即活性組分)依賴于許多因素，如待治療疾病的嚴(yán)重性、治療對(duì)象的年齡和相對(duì)健康程度、所使用的化合物的效能、施用途徑和形式，以及其他因素。

本發(fā)明藥物組合物的各種劑型可以按照藥學(xué)領(lǐng)域的常規(guī)方法制備。例如使該化合物與一種或者多種載體混合，然后將其制成所需的劑型，如片劑、藥丸、膠囊、半固體、粉末、緩釋劑型、溶液、混懸液、配劑、氣霧劑等等。

在本發(fā)明的另一方面，還提供了一種包含上述鹽類化合物的酪氨酸激酶抑制劑。

所述酪氨酸激酶包括c-met、vegf、kdr、ron、kit、pdgf、fgf、src激酶。

在本發(fā)明的另一方面，還提供了上述鹽類化合物在制備治療癌癥的藥物中的應(yīng)用。

由于酪氨酸激酶是目前效果明顯的抗腫瘤藥物靶點(diǎn)，而本發(fā)明的鹽類化合物具有顯著的酪氨酸激酶抑制活性，通過(guò)實(shí)驗(yàn)證實(shí)這些化合物對(duì)各種癌細(xì)胞增殖具有抑制作用，因此本發(fā)明鹽類化合物適用于治療各種癌癥。尤其是對(duì)于肺癌、胃癌、卵巢癌、結(jié)腸癌、惡性膠質(zhì)瘤具有較好的治療效果。

在本發(fā)明的另一方面，還提供了上述鹽類化合物在制備治療炎癥的藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明鹽類化合物與多種信號(hào)傳導(dǎo)激酶如c-met、vegf、kdr、ron、kit、pdgf、fgf、src等都具有良好的生物活性作用，并與多種信號(hào)傳導(dǎo)路徑相關(guān)聯(lián)，因此對(duì)多種疾病有治療效果，如癌癥、炎癥、淋巴水腫、糖尿病等。

本發(fā)明的酪氨酸激酶抑制劑，能夠抑制c-met、vegf、kdr等多種信號(hào)傳導(dǎo)激酶的生物活性，能有效抑制細(xì)胞增殖，對(duì)多種疾病如癌癥具有良好的治療效果，尤其是對(duì)肺癌、胃癌、卵巢癌、惡性膠質(zhì)瘤等具有顯著的治療效果，應(yīng)用前景非常廣闊。

附圖說(shuō)明

下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施方式對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說(shuō)明。

圖1是本發(fā)明實(shí)施例7的化合物6對(duì)人肺腺癌細(xì)胞hcc78的增殖抑制擬合曲線圖；

圖2是本發(fā)明實(shí)施例7的化合物6對(duì)人惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞u87mg的增殖抑制擬合曲線圖；

圖3是本發(fā)明實(shí)施例7的化合物6對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞huvec的增殖抑制擬合曲線圖；

圖4是本發(fā)明實(shí)施例7的化合物2和4對(duì)人惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞u87mg的增殖抑制擬合曲線圖；

圖5是本發(fā)明實(shí)施例7的化合物2和4對(duì)人胃癌細(xì)胞mkn-45的增殖抑制擬合曲線圖；

圖6是本發(fā)明實(shí)施例7的化合物2和4對(duì)人肺腺癌細(xì)胞hcc78的增殖抑制擬合曲線圖；

圖7是本發(fā)明實(shí)施例7的化合物2、4、6對(duì)人卵巢癌細(xì)胞sk-ov-3的增殖抑制擬合曲線圖；

圖8是本發(fā)明實(shí)施例7的化合物2、4、6對(duì)人結(jié)腸癌細(xì)胞hct116的增殖抑制擬合曲線圖；

圖9是本發(fā)明實(shí)施例7的化合物2、4、6對(duì)人肺腺癌細(xì)胞a549的增殖抑制擬合曲線。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1酪氨酸激酶抑制劑對(duì)甲苯磺酸鹽化合物的合成

化合物1(n-[3-氟-4-[[6-甲氧基-7-[[3-(嗎啉-4-基)丙基]氧]喹啉-4-基]氧]苯基]-n'-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1,1-二甲酰胺)(632mg,1mmol)溶于四氫呋喃(10ml)中，冰水浴至內(nèi)溫0℃后，加入對(duì)甲苯磺酸(173mg，1mmol)，室溫下反應(yīng)2h，反應(yīng)完畢后過(guò)濾得白色固體n-[3-氟-4-[[6-甲氧基-7-[[3-(嗎啉-4-基)丙基]氧]喹啉-4-基]氧]苯基]-n'-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1,1-二甲酰胺對(duì)甲苯磺酸鹽(化合物2)650mg，產(chǎn)率81％。

¹hnmr(500mhz,dmso-d6):δ10.41(s,1h),9.99(s,1h),9.48(brs,1h),8.50(d,j＝5hz,1h),7.92(dd,1h),7.52-7.65(m,4h),7.40-7.48(m,4h),7.10-7.18(m,4h),6.46(d,j＝5.5hz,1h),4.26(t,2h),4.10(d,2h),4.10(m,1h),3.97(s,3h),3.66(t,2h),3.60(m,2h),3.15(m,2h),2.21-2.36(m,5h),1.45-1.51(m,4h)。

lc-ms(esi)m/z633(m+h)。

實(shí)施例2酪氨酸激酶抑制劑谷氨酸鹽化合物的合成

化合物1(n-[3-氟-4-[[6-甲氧基-7-[[3-(嗎啉-4-基)丙基]氧]喹啉-4-基]氧]苯基]-n'-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1,1-二甲酰胺)(632mg,1mmol)溶于四氫呋喃/水(10ml,1:1)中，冰水浴至內(nèi)溫0℃后，加入l-谷氨酸(147mg，1mmol)，室溫下反應(yīng)8h，反應(yīng)完畢后過(guò)濾得白色固體n-[3-氟-4-[[6-甲氧基-7-[[3-(嗎啉-4-基)丙基]氧]喹啉-4-基]氧]苯基]-n'-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1,1-二甲酰胺谷氨酸鹽(化合物3)450mg，產(chǎn)率58％。

lc-ms(esi)m/z633(m+h)。

實(shí)施例3酪氨酸激酶抑制劑正丁磷酸鹽化合物的合成

化合物1(n-[3-氟-4-[[6-甲氧基-7-[[3-(嗎啉-4-基)丙基]氧]喹啉-4-基]氧]苯基]-n'-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1,1-二甲酰胺)(632mg,1mmol)溶于二氯甲烷(10ml)中，冰水浴至內(nèi)溫0℃后，加入正丁磷酸(154mg，1mmol)，室溫下反應(yīng)4h，反應(yīng)完畢后過(guò)濾得白色固體n-[3-氟-4-[[6-甲氧基-7-[[3-(嗎啉-4-基)丙基]氧]喹啉-4-基]氧]苯基]-n'-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1,1-二甲酰胺正丁磷酸鹽(化合物4)650mg，產(chǎn)率83％。

¹hnmr(500mhz,dmso-d6):δ10.43(s,1h),9.94(s,1h),9.20(brs,1h),8.51(d,j＝5hz,1h),7.92(dd,1h),7.52-7.65(m,4h),7.40-7.48(m,4h),7.10-7.18(m,4h),6.46(d,j＝5.5hz,1h),4.21(t,2h),4.15(d,2h),4.08(m,1h),3.77(m,2h),3.66(t,2h),3.60(m,2h),3.15(m,2h),2.21-2.36(m,5h),1.45-1.51(m,4h),1.23(m,4h).1.10(t,3h),

lc-ms(esi)m/z633(m+h)。

實(shí)施例4酪氨酸激酶抑制劑蘋果酸鹽化合物的合成

化合物1(n-[3-氟-4-[[6-甲氧基-7-[[3-(嗎啉-4-基)丙基]氧]喹啉-4-基]氧]苯基]-n'-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1,1-二甲酰胺)(632mg,1mmol)溶于四氫呋喃(10ml)中，冰水浴至內(nèi)溫0℃后，加入蘋果酸(134mg，1mmol)，室溫下反應(yīng)8h，反應(yīng)完畢后過(guò)濾得白色固體n-[3-氟-4-[[6-甲氧基-7-[[3-(嗎啉-4-基)丙基]氧]喹啉-4-基]氧]苯基]-n'-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1,1-二甲酰胺蘋果酸鹽(化合物5)550mg，產(chǎn)率72％。

lc-ms(esi)m/z633(m+h)。

實(shí)施例5酪氨酸激酶抑制劑阿侖膦酸鹽化合物的合成

化合物1(n-[3-氟-4-[[6-甲氧基-7-[[3-(嗎啉-4-基)丙基]氧]喹啉-4-基]氧]苯基]-n'-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1,1-二甲酰胺)(632mg,1mmol)溶于n,n-二甲基甲酰胺(10ml)中，冰水浴至內(nèi)溫0℃后，加入阿侖膦酸(249mg，1mmol)，室溫下反應(yīng)8h，反應(yīng)完畢后過(guò)濾得白色固體n-[3-氟-4-[[6-甲氧基-7-[[3-(嗎啉-4-基)丙基]氧]喹啉-4-基]氧]苯基]-n'-(4-氟苯基)環(huán)丙烷-1,1-二甲酰胺阿侖膦酸鹽(化合物6)150mg，產(chǎn)率17％。

lc-ms(esi)m/z633(m+h)。

實(shí)施例6酪氨酸激酶抑制活性檢測(cè)

將上述實(shí)施例的鹽類化合物應(yīng)用于對(duì)c–met和kdr激酶抑制活性的檢測(cè)和篩選。

1.方法

(1)向384孔板中加入4μl配制的激酶緩沖溶液，或是4μl的激酶溶液(100％抑制對(duì)照)；向孔中加入2μl的化合物，或是2μl不含化合物的buffer(0％inhibition對(duì)照)；以上所有樣品或?qū)φ站O(shè)2復(fù)孔。

(2)25℃孵育5min；

(3)向孔中加入2μl的atp/底物/mgcl2/mncl2/seb/dtt混合液；

(4)1000rpm離心1min，30℃震蕩孵育30min；

(5)向孔中加入8μlxl-665/抗體的混合液；

(6)25℃孵育1h；

(7)pherastarfs儀器讀取665nm和620nm信號(hào)；

(8)根據(jù)試劑盒說(shuō)明書分析數(shù)據(jù)，并用graphpadprism5擬合計(jì)算ic50。

ratio＝665nm/620nm

2.實(shí)驗(yàn)結(jié)果

各送檢化合物及參比化合物的檢測(cè)結(jié)果總結(jié)如下表1和表2所示，其中對(duì)照化合物是現(xiàn)有的c–met激酶抑制劑foretinib(結(jié)構(gòu)式如下)。for-oxide、for-methyl的化學(xué)結(jié)構(gòu)式也分別如下。

表1化合物6對(duì)c–met的抑制活性

表2化合物6對(duì)kdr的抑制活性

表3化合物2和4對(duì)c–met/kdr的抑制活性

由表1-3的數(shù)據(jù)可知，本發(fā)明上述實(shí)施例的鹽類化合物具有c–met、kdr等酪氨酸激酶的抑制活性。

實(shí)施例7對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖抑制試驗(yàn)

1.方法

(1)細(xì)胞培養(yǎng)：將腫瘤細(xì)胞(如人肺腺癌細(xì)胞hcc78、人惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞u87mg、人胃癌細(xì)胞mkn-45、人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞huvec、人肺腺癌細(xì)胞a549等)用細(xì)胞培養(yǎng)基培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為37℃，5％co2。

(2)細(xì)胞接種：取處于指數(shù)生長(zhǎng)期，狀態(tài)良好的細(xì)胞，加入適量胰酶消化細(xì)胞，收集細(xì)胞離心，棄上清。用含血清的培養(yǎng)液重新混懸細(xì)胞，然后計(jì)數(shù)并取細(xì)胞懸液按3000/孔接種于96孔板上，90μl/孔。將培養(yǎng)板轉(zhuǎn)入恒溫co2培養(yǎng)箱中，在37℃，5％co2及飽和濕度條件下培養(yǎng)24小時(shí)。

(3)加入受試化合物：10μl/孔，培養(yǎng)72小時(shí)，每組設(shè)3個(gè)平行孔。

(4)結(jié)果測(cè)定：化合物作用72小時(shí)后，加入10μl/孔的cck8，置于培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間，在450nm處測(cè)吸光值。

2.實(shí)驗(yàn)結(jié)果

各送檢化合物的檢測(cè)結(jié)果總結(jié)如下表4-6所示：

表4化合物6對(duì)人肺腺癌細(xì)胞hcc78、人惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞u87mg、人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞huvec、人胃癌細(xì)胞mkn-45的增殖抑制結(jié)果(對(duì)應(yīng)的擬合曲線見(jiàn)圖1-3)

表5化合物2和4對(duì)人惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞u87mg、人胃癌細(xì)胞mkn-45、人肺腺癌細(xì)胞hcc78的增殖抑制結(jié)果(對(duì)應(yīng)的擬合曲線見(jiàn)圖4-6)

表6化合物2、4、6對(duì)人卵巢癌細(xì)胞sk-ov-3、人結(jié)腸癌細(xì)胞hct116、人肺腺癌細(xì)胞a549的增殖抑制結(jié)果(對(duì)應(yīng)的擬合曲線見(jiàn)圖7-9)

由上述表4-6的數(shù)據(jù)可知，本發(fā)明的鹽類化合物通過(guò)抑制c–met、kdr等酪氨酸激酶的活性，能夠有效抑制人肺腺癌細(xì)胞、人胃癌細(xì)胞、人結(jié)腸癌細(xì)胞、人卵巢癌細(xì)胞、人惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞等各種癌細(xì)胞的增殖，特別適用于癌癥的治療。

以上所述實(shí)施例僅表達(dá)了本發(fā)明的實(shí)施方式，其描述較為具體和詳細(xì)，但并不能因此而理解為對(duì)本發(fā)明專利范圍的限制。應(yīng)當(dāng)指出的是，對(duì)于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干變形和改進(jìn)，這些都屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。因此，本發(fā)明專利的保護(hù)范圍應(yīng)以所附權(quán)利要求為準(zhǔn)。