試管中的包 含lOg/L乳糖的M-17培養(yǎng)基值ifco公司制）中接種1接種環(huán)，在40°C下靜置一晚進(jìn)行培 養(yǎng)。接著，W在2mL的10質(zhì)量％脫脂奶粉水溶液值ifco公司制）中成為1質(zhì)量％的方式 接種該培養(yǎng)物之后，在40°C下靜置一晚進(jìn)行培養(yǎng)，作為預(yù)培養(yǎng)。在主培養(yǎng)培養(yǎng)基（3質(zhì)量％ 脫脂奶粉水溶液）IOOmL中接種1質(zhì)量％預(yù)培養(yǎng)物，在40°C下靜置24小時(shí)進(jìn)行培養(yǎng)。對(duì)培 養(yǎng)后的菌液在4°C、W 8000 X g進(jìn)行15分鐘離屯、分離，去除沉淀物。對(duì)于得到的沉淀物去除 液（上清）使用分級(jí)分子量20000Da的離屯、分離方式超濾過(guò)濾器（Centricut MiniV-20 : KURABO INDUSTRIES LTD.制造），在4°C，W 3000Xg進(jìn)行1小時(shí)超濾，得到低分子級(jí)分 lOmL。該低分子級(jí)分中包含干燥固體成分2% (20000 yg/mL)。另外，該乳酸菌發(fā)酵物（乳 成分）上清的低分子級(jí)分的平均分子量為300化左右。
[0059] 需要說(shuō)明的是，平均分子量是將上述低分子級(jí)分溶解于50mM氯化鋼溶液之后，在 下述條件下進(jìn)行HPLC而測(cè)定的值。 W60] 出PLC條件]
[0061]裝置：Waters-eOOE
[0062]檢測(cè)器 JSI RI-980
[0063]柱：ShodexSUGA 服 S-804
[0064] 柱溫：80°C 陽(yáng)0化]流動(dòng)相：50mM NaCl
[0066] 流速：1血/分鐘
[0067]注入量：IOyL W側(cè)由戊糖素的生成量計(jì)算出上述得到的低分子級(jí)分的戊糖素生成抑制率（％)。首 先，作為底物溶液，準(zhǔn)備將50mM核糖、50mM賴氨酸鹽酸鹽、50mM精氨酸鹽酸鹽和IOOmM憐酸 鋼緩沖液（pH7. 4)分別等量混合而成的溶液。接著，將該底物溶液與對(duì)上述得到的低分子 級(jí)分用IOOmM憐酸鋼緩沖液（pH7. 4)進(jìn)行了稀釋的待檢試樣溶液混合W使底物溶液：待檢 試樣溶液成為5 :1，在60°C的恒溫槽中進(jìn)行24小時(shí)反應(yīng)。作為對(duì)照，代替低分子級(jí)分使用 水同樣地進(jìn)行反應(yīng)。需要說(shuō)明的是，作為空白使用不包含核糖、賴氨酸、精氨酸的緩沖液。加 熱結(jié)束之后，對(duì)各待檢體照射330nm的激發(fā)光，測(cè)定生成的390nm的巧光強(qiáng)度，W巧光量計(jì) 算出戊糖素的生成量。由該巧光強(qiáng)度通過(guò)W下的式子計(jì)算戊糖素生成抑制率。將運(yùn)些結(jié)果 示于表1中。 W例[數(shù)學(xué)式1]
[0070]戊糖素生成抑制率（％) = ((Ec-Eb)-(Es-Eb))/巧C-Eb) XlOO
[0071] Es:試樣的巧光強(qiáng)度
[0072] Ec :對(duì)照的巧光強(qiáng)度
[0073] Eb:空白的巧光強(qiáng)度
[0076] 由W上的結(jié)果可知，對(duì)于乳酸菌發(fā)酵物（乳成分）上清的低分子級(jí)分，在0.05質(zhì) 量％運(yùn)樣低的濃度下為高的戊糖素生成抑制率。另外，也可W確認(rèn)，戊糖素生成抑制率濃度 依賴地提高。
[0077] 實(shí)施例2
[0078] 乳酸菌發(fā)酵物（乳成分）上清的高分子級(jí)分的戊糖素生成抑制活性：
[0079] 將嗜熱鏈球菌YIT2084株師RM BP-10879)的-80°C保存菌株向2血試管中的包 含lOg/L乳糖的M-17培養(yǎng)基值ifco公司制）中接種1接種環(huán)，在40°C下靜置一晚進(jìn)行培 養(yǎng)。接著，W在2mL的10質(zhì)量％脫脂奶粉水溶液值ifco公司制）中成為1質(zhì)量％的方式接 種該培養(yǎng)物之后，在40°C下靜置一晚進(jìn)行培養(yǎng)，作為預(yù)培養(yǎng)。在發(fā)酵罐中準(zhǔn)備的主培養(yǎng)培養(yǎng) 基（包含1 %的大豆膚的10質(zhì)量％脫脂奶粉水溶液）IL中W 0. 1質(zhì)量％接種該預(yù)培養(yǎng)物， 在40°C下邊使用8N的氨氧化鋼溶液將培養(yǎng)基保持在抑7邊在轉(zhuǎn)速10化pm的條件下培養(yǎng)24 小時(shí)。接著，在冰中進(jìn)行冷卻之后，W終濃度成為10% w/v的方式加入立氯乙酸（TCA)，在 4°C下靜置2小時(shí)。對(duì)其W 18300X g進(jìn)行30分鐘離屯、，向上清液中加入等量的99質(zhì)量％冷 乙醇，進(jìn)而在4°C下靜置一晚。對(duì)其用透析管（Spectra/Por Membrane (MW3500) :Spectrum Medical Ltd.制造）進(jìn)行透析，按照常規(guī)方法對(duì)得到的高分子級(jí)分進(jìn)行冷凍干燥。需要說(shuō) 明的是，該乳酸菌發(fā)酵物（乳成分）上清的高分子級(jí)分的平均分子量為90萬(wàn)化左右。平 均分子量的測(cè)定方法與乳酸菌發(fā)酵物（乳成分）上清的低分子級(jí)分是同樣的。
[0080] 對(duì)于上述得到的乳酸菌發(fā)酵物（乳成分）上清的高分子級(jí)分，與實(shí)施例1同樣地 計(jì)算出戊糖素生成抑制率（％)。將其結(jié)果示于表2。 陽(yáng)0川[表引[0082]
[0083] 由W上的結(jié)果可知，對(duì)于乳酸菌發(fā)酵物（乳成分）上清的高分子級(jí)分，在0.05質(zhì) 量％運(yùn)樣低的濃度下也為高的戊糖素生成抑制率。另外，也可W確認(rèn)，戊糖素生成抑制率濃 度依賴地提高。
[0084] 實(shí)施例3
[00化]乳酸菌發(fā)酵物（蘆苔）上清的戊糖素生成抑制活性：
[0086] 將庫(kù)拉索蘆苔（學(xué)名：Aloe barbadensis Miller)的冷凍葉解凍之后進(jìn)行破碎， 加入2倍量的水和巧樣酸0. 05質(zhì)量％，在40°C下使纖維素酶（纖維素酶"化OZ址a" 3S : 化kult Pharmaceutical IndustiT Co. ,Ltd.制造）作用3小時(shí)。之后，暫時(shí)加熱至90°C之 后冷卻至室溫，并進(jìn)行過(guò)濾，進(jìn)行減壓濃縮至成為化ix3. 5為止，得到庫(kù)拉索蘆苔提取液。 對(duì)于得到的庫(kù)拉索蘆苔提取液（pH3. 7)在100°C下進(jìn)行100分鐘加熱滅菌。向其中接種植 物乳桿菌的標(biāo)準(zhǔn)株（ATCC14917)的預(yù)培養(yǎng)菌液1%之后，在30°C下靜置72小時(shí)進(jìn)行培養(yǎng)。 培養(yǎng)之后，通過(guò)過(guò)濾，采集濾液，得到乳酸菌發(fā)酵物（蘆苔）上清。該乳酸菌發(fā)酵物（蘆苔） 上清中包含干燥固體成分2. 9% (29000 y g/mL)。
[0087] 對(duì)于上述得到的乳酸菌發(fā)酵物（蘆苔）上清，與實(shí)施例1同樣地，計(jì)算出戊糖素生 成抑制率（％)。另外，對(duì)于沒(méi)有用植物乳桿菌進(jìn)行發(fā)酵的庫(kù)拉索蘆苔提取液，也同樣地計(jì) 算出戊糖素生成抑制率（％)。將它們的結(jié)果示于表3和4中。
[0092]由W上的結(jié)果可知，乳酸菌發(fā)酵物（蘆苔）上清與沒(méi)有用乳酸菌發(fā)酵的庫(kù)拉索蘆 苔提取液相比較，W 0. 05質(zhì)量％運(yùn)樣低的濃度具有1. 4倍W上高的戊糖素生成抑制率。另 夕F，也可W確認(rèn)，戊糖素生成抑制率濃度依賴地提高。 陽(yáng)〇9引 實(shí)施例4
[0094] 化妝水的調(diào)制：
[0095] 調(diào)制W下表5所述的組成的化妝水。需要說(shuō)明的是，化妝水是向成分7中加入成 分1~6并充分地進(jìn)行攬拌而調(diào)制的。
[0098] *直接使用實(shí)施例1中得到的乳酸菌發(fā)酵物（乳成分）上清的低分子級(jí)分。
[0099] 實(shí)施例5 陽(yáng)100] 乳液的調(diào)制： 陽(yáng)101] 調(diào)制W下表6所述的組成的乳液。需要說(shuō)明的是，乳液是如下調(diào)制的：向成分11 中加入成分7、8和10進(jìn)行加溫，在80°C下加入成分1~6進(jìn)行乳化，之后加入成分9進(jìn)行 攬拌，冷卻至室溫。

陽(yáng)104] *直接使用實(shí)施例2中得到的乳酸菌發(fā)酵物（乳成分）上清的高分子級(jí)分。 陽(yáng)105] 實(shí)施例6 陽(yáng)106] 霜的調(diào)制： 陽(yáng)107] 調(diào)制W下表7所述的組成的霜。需要說(shuō)明的是，霜是如下調(diào)制的：向成分13中加 入成分9、10、12進(jìn)行加溫，在80°C下加入成分1~8進(jìn)行乳化，之后加入成分11進(jìn)行攬拌， 冷卻至室溫。
[0110] *直接使用實(shí)施例3中得到的乳酸菌發(fā)酵物（蘆苔）上清。 陽(yáng)1川 產(chǎn)化h的可利用忡
[0112] 本發(fā)明的戊糖素生成抑制劑能夠用于與戊糖素相關(guān)的疾病的預(yù)防、治療。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種戊糖素生成抑制劑，其以乳酸菌發(fā)酵物作為有效成分。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的戊糖素生成抑制劑，其中，乳酸菌發(fā)酵物的濃度以干燥固體 成分計(jì)為〇. 05質(zhì)量％時(shí)，戊糖素生成抑制率為25%以上。3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的戊糖素生成抑制劑，其中，作為乳酸菌發(fā)酵物，使用用乳 酸菌使含有乳成分的培養(yǎng)基發(fā)酵而成的物質(zhì)。4. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的戊糖素生成抑制劑，其中，作為乳酸菌發(fā)酵物，使用由用 乳酸菌使含有乳成分的培養(yǎng)基發(fā)酵而成的物質(zhì)得到的上清。5. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的戊糖素生成抑制劑，其中，作為乳酸菌發(fā)酵物，使用由用 乳酸菌使含有乳成分的培養(yǎng)基發(fā)酵而成的物質(zhì)得到的上清的低分子級(jí)分。6. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的戊糖素生成抑制劑，其中，作為乳酸菌發(fā)酵物，使用由用 乳酸菌使含有乳成分的培養(yǎng)基發(fā)酵而成的物質(zhì)得到的上清的高分子級(jí)分。7. 根據(jù)權(quán)利要求3~6中的任一項(xiàng)所述的戊糖素生成抑制劑，其中，乳酸菌為嗜熱鏈球 菌。8. 根據(jù)權(quán)利要求3~6中的任一項(xiàng)所述的戊糖素生成抑制劑，其中，乳酸菌為嗜熱鏈球 菌YIT2084 株（FERMBP-10879)。9. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的戊糖素生成抑制劑，其中，作為乳酸菌發(fā)酵物，使用用乳 酸菌使含有蘆薈的培養(yǎng)基發(fā)酵而成的物質(zhì)。10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的戊糖素生成抑制劑，其中，乳酸菌為植物乳桿菌。
【專利摘要】一種戊糖素生成抑制劑，作為具有抑制戊糖素生成的作用的成分，以具有更強(qiáng)的作用、安全性高的乳酸菌發(fā)酵物作為有效成分。FERM BP-1087920060818
【IPC分類】A61P29/00, A61K35/74, A61P37/08, A61P43/00, A61P17/00
【公開(kāi)號(hào)】CN105358165
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201480038614
【發(fā)明人】伊澤直樹(shù), 丹羽大輔, 曾根俊郎
【申請(qǐng)人】株式會(huì)社益力多本社
【公開(kāi)日】2016年2月24日
【申請(qǐng)日】2014年6月25日
【公告號(hào)】US20160166622, WO2015002043A1