使用蛋白質(zhì)溶液治療疼痛的制作方法
【專利說明】使用蛋白質(zhì)溶液治療疼痛
【背景技術(shù)】
[0001] 本技術(shù)設(shè)及治療疼痛的方法，包括與損傷和炎癥性疾病相關(guān)的疼痛。特別地，方法 包括使用含細(xì)胞因子的溶液，包括源自血液和其它組織的運種溶液。
[0002] 疼痛可W描述為與實際或潛在的組織損傷或疾病相關(guān)的不愉快的感覺，是美國咨 詢醫(yī)生的最常見的原因。在基礎(chǔ)水平，疼痛是身體的報警機(jī)制，W避免暴露于潛在的有害環(huán) 境或生理刺激或使所述暴露最小化。然而，疼痛一-特別是慢性疼痛一-可W顯著影響生 活質(zhì)量，包括幸福感和工作能力。
[0003] 疼痛可W由傷害，或各種潛在疾病的任一種引起。例如，傷害性疼痛由可能引起組 織傷害的刺激（如熱、冷、力學(xué)作用和化學(xué)物）對外周神經(jīng)的刺激引起。神經(jīng)性疼痛由神經(jīng) 系統(tǒng)自身的損傷引起。
[0004] 疼痛可W表征為急性或慢性。急性疼痛通常由疾病、炎癥或組織傷害引起，在潛在 原因清除或治療后消退。因此，急性疼痛通常是短暫的，并且有自身限制性。另一方面，慢 性疼痛可能本身是疾病，并且可W與慢性潛在病癥如關(guān)節(jié)炎和神經(jīng)病相關(guān)。
[0005] 對于疼痛有各種治療。很多治療著眼于清除潛在的疼痛刺激，另外的阻斷疼痛感 知。著眼于疼痛感知的治療包括麻醉藥和鎮(zhèn)痛藥。鎮(zhèn)痛藥包括鴉片劑（如嗎啡和可待因）、 對乙酷氨基酪、非類固醇抗炎藥（如阿司匹林、布洛芬和糞普生）。
[0006] 然而，很多運樣的治療可能存在副作用，并且可能有受限制的長期利用，因為潛在 的病癥變得嚴(yán)重。因此需要開發(fā)治療疼痛的新療法，特別是改進(jìn)功效和降低副作用的療法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本技術(shù)提供用于治療疼痛的方法和治療性組合物。方法包括治療與骨關(guān)節(jié)炎相 關(guān)的疼痛疾病、與滑膜炎相關(guān)的疼痛、紙骼關(guān)節(jié)疼痛、背部疼痛、與手術(shù)后注射相關(guān)的疼痛、 與肌腫注射相關(guān)的疼痛、與運動醫(yī)學(xué)過程相關(guān)的疼痛、與挫傷相關(guān)的疼痛、與肌肉拉傷相關(guān) 的疼痛、與肺氣腫相關(guān)的疼痛或與創(chuàng)傷性損傷后骨關(guān)節(jié)炎相關(guān)的疼痛。在各種實施方式中， 方法包括將血液來源的組合物施用到疼痛位置，所述施用通過如將所述組合物直接注射到 疼痛位置的組織進(jìn)行。所述組合物包含選自比-Ira、sTNF-Rl、sTNF-RII、IGF-I、EGF、服F、 PDGF-AB、PDGF-BB、VEGF、TGF-e I和sIklRII的至少兩種蛋白質(zhì)，其中各蛋白質(zhì)在所述組 合物中的濃度大于所述蛋白質(zhì)在正常血液中的濃度。例如，組合物可W包含：
[0008] (a)至少約 10, OOOpg/ml 的ILl-ra;
[0009] (b)至少約 1，200pg/ml 的 sTNF-RI;和
[0010] (C)蛋白質(zhì)，選自 sTNF-RII、IGF-I、EGF、服F、PDGF-AB、PDGF-BB、VEGF、TGF-0 1、 S比-IRII及其混合物，其中所述蛋白質(zhì)的濃度高于正常血液中所述蛋白質(zhì)的基線濃度。
[0011] 在一些實施方式中，所述組合物進(jìn)一步包含選自sTNF-RII、IGF-I、EGF、HGF、 PDGF-AB、PDGF-BB、VEGF、TGF-e 1、S比-IRII及其混合物的蛋白質(zhì)，其中所述蛋白質(zhì)在所述 組合物中的濃度大于所述蛋白質(zhì)在正常血液中的濃度。所述組合物可W包含白細(xì)胞、血小 板和其組合。
[0012] 本技術(shù)還提供制備用于治療哺乳動物對象中的疼痛疾病的組合物的方法，包括：
[0013] (a)從所述對象獲得包含細(xì)胞因子生成細(xì)胞如白細(xì)胞的液體；
[0014] 化）分級分離所述液體W產(chǎn)生包含白介素-1受體括抗劑的蛋白質(zhì)溶液；
[0015] (C)將所述自體的蛋白質(zhì)溶液施用到所述對象中的疼痛的位置。
[0016] 所述包含細(xì)胞因子生成細(xì)胞的液體可W包括全血、骨髓抽吸物、脂肪組織、尿液、 其部分和其混合物。例如，分級分離可W包括將血液置于容器，可操作W將所述血液分離為 兩或多個部分的分離器；W及離屯、所述分離器W產(chǎn)生富血小板血漿部分。所述富血小板血 漿可W與固相提取材料如聚丙締酷胺珠接觸，W形成所述自體的蛋白質(zhì)溶液。
【附圖說明】
[0017] 圖1的框圖描述生成抗炎性細(xì)胞因子組合物的方法；
[0018] 圖2是分級分離裝置的圖；
[0019] 圖3顯示在離屯、之前（圖3A)和之后（圖3B)激活樣品產(chǎn)生抗炎性細(xì)胞因子的裝 置；
[0020] 圖4是產(chǎn)生血凝塊的裝置的圖；
[0021] 圖5是能產(chǎn)生抗炎性細(xì)胞因子組合物的單一裝置的圖；
[0022] 對應(yīng)的參考數(shù)字指示附圖數(shù)個視圖中的對應(yīng)部分。應(yīng)指出，本文所列圖意在舉例 說明本技術(shù)材料、組合物、裝置和方法的一般特征，W用于描述某些實施方式的目的。運些 圖不一定精確反映任意給定實施方式的特征，且不必定用于完整定義或限制本技術(shù)范圍內(nèi) 的特定實施方式。
[002引發(fā)明詳述
[0024] 下列技術(shù)描述僅示例一種或多種發(fā)明的組合物性質(zhì)、制造和應(yīng)用，且不意在限制 本申請或所述其他申請中要求權(quán)利的任何特定發(fā)明的范圍、實施和應(yīng)用，所述其他申請可 能提交要求對本申請的優(yōu)先權(quán)，或其中公開的專利。在本詳細(xì)描述的結(jié)尾處提供關(guān)于術(shù)語 和短語的非限制性討論，用于協(xié)助理解本技術(shù)。
[00巧]本技術(shù)設(shè)及使用包含蛋白質(zhì)（包括白介素-1受體括抗劑和其他細(xì)胞因子）的組 合物治療疼痛。在各種實施方式中，治療人或其它哺乳動物對象中的疼痛疾病的方法包 括：
[0026] (a)從一個或多個哺乳動物對象獲得含細(xì)胞因子生成細(xì)胞的液體（"細(xì)胞因子細(xì) 胞懸液"，如下進(jìn)一步所討論）；
[0027] 化）分級分離液體W生成含一種或多種蛋白質(zhì)如白介素-1受體括抗劑的蛋白質(zhì) 溶液訊
[0028] (C)將所述蛋白質(zhì)溶液施用到所述對象中的疼痛位置。
[002引蛋白質(zhì)組合物
[0030] 本技術(shù)提供治療人或其它哺乳動物對象中的疼痛的方法，所述方法使用包含溶 解、懸浮或另外攜帶從而W生理學(xué)可接受介質(zhì)形式遞送給哺乳動物對象的蛋白質(zhì)的組合物 (本文稱為"蛋白質(zhì)溶液")。在各種實施方式中，所述組合物包含產(chǎn)自正常哺乳動物對象全 血的蛋白質(zhì)（如細(xì)胞因子）。所述組合物還包含活細(xì)胞，包括血小板、白細(xì)胞、和其組合。
[0031] 在各種實施方式中，所述蛋白質(zhì)溶液包含至少2種選自W下的蛋白質(zhì)Jklra(白 介素-I受體括抗劑）、sTNF-RI、sTNF-RII (可溶性腫瘤壞死因子受體2)、IGF-I (膜島素樣 生長因子1)、EGF (表皮生長因子）、HGF (肝細(xì)胞生長因子）、PDGF-AB (來源于血小板的生長 因子AB)、PDGF-BB (來源于血小板的生長因子BB)、VEGF (血管內(nèi)皮生長因子）、TGF-0 1 (轉(zhuǎn) 化生長因子0 I)、SlL-IRII(可溶性白介素受體II)，其中所述組合物中各蛋白質(zhì)的濃度 大于正常血液中所述蛋白質(zhì)的濃度。為清晰起見，所述蛋白質(zhì)溶液可包含來自所述組的3 種或更多蛋白質(zhì)。盡管所述組合物中每一種蛋白質(zhì)濃度可大于正常血液中其各自濃度，但 不必定2種W上蛋白質(zhì)的濃度大于正常血液中其各自濃度。
[0032] 在各種實施方式中，蛋白質(zhì)溶液包括下列組分。
[0033] 表1.蛋白質(zhì)溶液示例性蛋白質(zhì)組分

[0036] 蛋白質(zhì)濃度能用實施例4所示方法測量。
[0037] 優(yōu)選地，所述組合還包含活的白細(xì)胞、裂解的白細(xì)胞或兩者。在優(yōu)選組合物中，所 述蛋白質(zhì)溶液包含單核細(xì)胞、粒細(xì)胞和血小板。在各種實施方式中，蛋白質(zhì)溶液包含下列組 分。
[0038] 表2.蛋白質(zhì)溶液示例性細(xì)胞組分
[0040] 應(yīng)理解該濃度為種特異性。此外，應(yīng)理解濃度可隨著個體對象而變化。因此，在包 括從含細(xì)胞因子生成細(xì)胞的血液或其它組織生成蛋白質(zhì)溶液的方法中，所述蛋白質(zhì)溶液的 蛋白質(zhì)和細(xì)胞濃度可與上述不同；上述值是濃度均值，如對象群體中所見。
[0041] 在各種實施方式中，所述蛋白質(zhì)溶液中一種或多種蛋白質(zhì)或其它組分的濃度大于 正常血液中該組分的濃度。（具有所述更高組分濃度的組合物被稱為"富含"運些組分。） 如本文所示，"正常"血液或其它組織中的組分濃度是獲得組織的哺乳動物對象一般群體中 所見濃度，例如正常全血中。應(yīng)理解該濃度為種特異性。在抗炎性細(xì)胞因子組合物獲自特 定對象組織的方法中，蛋白質(zhì)或細(xì)胞的"正常"濃度可W是進(jìn)行加工獲得蛋白質(zhì)或細(xì)胞之前 的個體血液中的濃度，所述對象是所述組合物待施用所述組合物的對象（即自體的程序， 如下進(jìn)一步描述）。
[0042] 因此，在各種實施方式中，所述蛋白質(zhì)溶液中一種或多種組分的濃度是正常血液 中該組分濃度的大于約1. 5倍、約2倍或約3倍。例如，相對于正常（全）血，組合物中的 組分可具有更高濃度，如下所示：
[0043] ?比-Ira，濃度是至少約2. 5倍、或至少約3倍或至少約5倍；
[0044] ? STNF-RI，濃度是至少約2倍、或至少約2. 5倍或至少約3倍；
[004引 ? sTNF-RII，濃度是至少約2倍、或至少約2. 5倍或至少約3倍；
[0046] ? SlL-IRII，濃度是至少約1. 5倍、或至少約1. 8倍或至少約2倍；
[0047] ? EGF，濃度是至少約2倍、或至少約3倍或至少約5倍；
[004引 ? HGF，濃度是至少約2倍、或至少約3倍或至少約4倍；
[0049] ? PDGF-AB，濃度是至少約2倍、或至少約3倍或至少約5倍；
[0050] ? PDGF-BB，濃度是至少約2倍、或至少約3倍或至少約5倍；
[0051] ? TGF- 0 1，濃度是至少約3倍、或至少約4倍或至少約6倍；
[0052] ? IGF-I，濃度是至少約1. 2倍、或至少約1. 4倍或至少約1. 5倍；
[0053] ? VEGF，濃度是至少約2倍、或至少約2. 5倍或至少約3倍；
[0054] ?白細(xì)胞，濃度是至少約2倍、或至少約3倍或至少約4倍；
[005引 ?血小板，濃度是至少約2倍、或至少約3倍或至少約4倍；
[0056] ?中性粒細(xì)胞，濃度是至少1. 5倍、或至少2倍或至少3倍；
[0057] ?單核細(xì)胞，濃度是至少3倍、或至少4倍或至少6倍；
[0058] ?淋己細(xì)胞，濃度是至少5倍、或至少8倍或至少10倍；和
[0059] ?嗜堿性細(xì)胞，濃度是至少2倍、或至少4倍或至少6倍。
[0060] 同樣，所述蛋白質(zhì)溶液中的紅細(xì)胞濃度優(yōu)選是正常血液中紅細(xì)胞濃度的至少一 半，或至少S分之一。
[0061] 例如，蛋白質(zhì)溶液可包含：
[0062] (a)至少約 10, OOOpg/ml ILl-ra ;
[0063] (b)至少約 1，200pg/ml sTNF-RI ;和
[0064] (C)蛋白質(zhì)，選自 sTNF-RII、IGF-I、EGF、服F、PDGF-AB、PDGF-BB、VEGF、TGF-e 1、 和S比-IRII W及其混合物，其中所述蛋白質(zhì)的濃度大于正常血液中該蛋白質(zhì)的基線濃度。 另一示例中，蛋白質(zhì)溶液包含：
[0065] (a)血小板，濃度為約到約；
[006引 化）白介素-1受體括抗劑（比-Ira)，濃度是正常血液中比-Ira濃度的至少3倍；
[0067] (C)可溶性組織壞死因子因子-rl (sTNF-rl)，濃度是正常血液中IL-Ira濃度的至 少2倍；
[006引 （C)白細(xì)胞，濃度是正常血液中白細(xì)胞濃度的至少2倍訊
[006引 （d)血小板，濃度是正常血液中血小板濃度的至少2倍。
[0070] 在一些實施方式中，所述蛋白質(zhì)溶液中的IL-Ira濃度優(yōu)選是該蛋白質(zhì)溶液中的 白介素-1 a濃度的至少5, 000倍或至少10, 000倍。比-Ira:白介素-1 0 (IL-1 P )濃度之 比優(yōu)選是至少100。在一些實施方式中，所述蛋白質(zhì)溶液中的IL-Ira濃度優(yōu)選是該蛋白質(zhì) 溶液中的IL-I P濃度的至少1500倍或至少8000倍。SlL-IRII:白介素-1 0 (IL-1 P )濃 度之比優(yōu)選大于1。在一些實施方式中，所述蛋白質(zhì)溶液中的SlklRII優(yōu)選是該蛋白質(zhì)溶 液中的白介素-1 P濃度的至少2000倍或至少45000倍。
[0071] 在各種實施方式中，所述蛋白質(zhì)溶液包含源自對象的一種或多種組分（如血小 板），根據(jù)本技術(shù)的治療方法向所述對象施用所述溶液。因此，運類組分是"自體的"。在一 些實施方式中，所述蛋白質(zhì)溶液（例如自體的蛋白質(zhì)溶液）基本上由運樣的自體的組分組 成。在其它實施方式中，所述溶液的一或多種組分可W從非自體來源（即從與待施用所述 溶液的對象通物種的對象）或異種來源（即從不是待施用所述溶液的物種的動物來源）獲 得。
[0072] 制備蛋白質(zhì)溶液的方法
[0073] 蛋白質(zhì)溶液可通過多種方法（包括混合個體組分）和方法的任一種制備，（其中 一種或多種組分獲自源材料。在各種實施方式中，所述蛋白質(zhì)溶液通過分級分離細(xì)胞因子 細(xì)胞懸液制備，從而生成含ILl-ra的蛋白質(zhì)溶液。
[0074] 通過細(xì)胞因子生成細(xì)胞接觸提取物質(zhì)來獲得蛋白質(zhì)溶液
[00巧]在各種實施方式中，通過從含細(xì)胞因子生成細(xì)胞的組織獲得一種或多種組分來制 備蛋白質(zhì)溶液。如本文所示，"細(xì)胞因子生成組織"是獲自哺乳動物對象的組織，包含能生成 細(xì)胞因子的細(xì)胞。運種細(xì)胞包括白細(xì)胞、脂肪基質(zhì)細(xì)胞、骨髓基質(zhì)細(xì)胞和其組合。應(yīng)理解白 細(xì)胞包括單核細(xì)胞、淋己細(xì)胞和粒細(xì)胞如中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞及嗜堿性粒細(xì)胞。用于 本技術(shù)方法的白細(xì)胞優(yōu)選包括單核細(xì)胞和中性粒細(xì)胞。本文所用的細(xì)胞因子生成組織包括 血液、脂肪組織、骨髓、和其部分，如下進(jìn)一步所討論。
[0076] 本文所用的血液包括全血、血漿、富血小板血漿、貧血小板血漿和血凝塊。在優(yōu)選 實施方式中，本技術(shù)方法使用含白細(xì)胞和血小板的富血小板血漿（PRP)，包含通過沉淀全血 產(chǎn)生的白膜層。本文所用的脂肪組織包括任何脂肪組織，包括白色和棟色脂肪組織，其可獲 自皮下、網(wǎng)膜/內(nèi)臟、乳腺、性腺或其它脂肪組織位置。本文所用的骨髓包括紅髓和黃髓。在 優(yōu)選實施方式中，骨髓是獲自紅髓和黃髓的骨髓濃縮物，包括造血和間充質(zhì)干細(xì)胞。如上所 討論，相對于根據(jù)本技術(shù)方法治療的對象，用于本發(fā)明的血液、脂肪和骨髓組織可W來自自 體或同種異體來源。
[0077] 在一些實施方式中，方法包括分級分離液體（"細(xì)胞因子細(xì)胞懸液"），所述液體包 含能生成細(xì)胞因子如ILl-ra和STNF-Rl的細(xì)胞。如上所討論，運種細(xì)胞包括白細(xì)胞、脂肪 基質(zhì)細(xì)胞、骨髓基質(zhì)細(xì)胞和其組合。在一些實施方式中，所述細(xì)胞因子細(xì)胞懸液是含白細(xì)胞 的液體。應(yīng)理解所述細(xì)胞因子細(xì)胞懸液包括細(xì)胞和胞外液體，無論細(xì)胞和液體的相對比例 如何。在一些實施方式中，所述懸液可主要包括細(xì)胞，液體僅作為副成分，基本用于濕潤細(xì) 胞。在一些實施方式中，所述液體可包括兩相，由W下構(gòu)成：主要由液體組成的相和主要由 細(xì)胞組成的相，僅在攬拌或其它混合后形成液體中的細(xì)胞的懸液。