一種選擇性提取dna的方法
【專利摘要】本發(fā)明的一種選擇性提取DNA的方法屬于生物技術(shù)的【技術(shù)領(lǐng)域】。步驟有，將表面修飾后的固相介質(zhì)和DNA樣品的溶液混合，加入中性鹽并使混合溶液中鹽濃度為0.4～0.5mol/L，調(diào)節(jié)混合溶液pH至4～5，震蕩20～30分鐘，離心分離；再將吸附上清液的pH值調(diào)至3～4加入表面修飾后的固相介質(zhì)，并震蕩20～30分鐘，離心分離；將每次分離出來的吸附了DNA分子的固相介質(zhì)分別分散在pH為8.0～11.0的水溶液中，震蕩20～30分鐘；離心分離，即可分別獲得不同長度的DNA溶液。本發(fā)明的方法可選擇性提取DNA分子，具有選擇提取效率高、原料簡單廉價易得、操作快速便捷等優(yōu)點。
【專利說明】一種選擇性提取DNA的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物技術(shù)的【技術(shù)領(lǐng)域】，特別涉及一種基于鹽屏蔽作用的利用固相介質(zhì)選擇性提取不同片段DNA的方法。

【背景技術(shù)】
[0002]DNA提取是分子生物學(xué)、生物化學(xué)、醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域的一項基礎(chǔ)工作。隨著DNA分子技術(shù)在臨床疾病診斷、進出口檢驗檢疫、法醫(yī)學(xué)檢驗、血液質(zhì)量控制等領(lǐng)域基礎(chǔ)與應(yīng)用研宄的逐漸深入。對DNA分子進行選擇性以及目的性提取特別是對小片段DNA的選擇性提取已經(jīng)成為了 DNA分析技術(shù)應(yīng)用推廣的一個難題。
[0003]1979年，以二氧化硅為基質(zhì)的固相提取DNA方法第一次被提出。目前商業(yè)上應(yīng)用的提取DNA試劑盒主要是磁珠法、玻璃珠法等以二氧化硅為基質(zhì)，采用向體系中加入高濃度的鹽，通過鹽橋建立的靜電相互作用實現(xiàn)DNA的吸附和脫附，從而達到提取純化DNA的目的。然而由于該種方法依靠的是間接的靜電相互作用力，它的提取效率只有70%左右，并且它對DNA的吸附?jīng)]有選擇性，另外對小片段DNA分子的吸附效果甚微。近年來，細胞外血漿中游離小片段DNA(CfDNA)越來越多的引起人們的重視，它的成功純化富集對非侵入性產(chǎn)前診測、惡性腫瘤早期診斷、癌癥治療過程檢測等臨床疾病診療過程具有重要意義。此外，受第二代測序技術(shù)對目標DNA片段長度的限制(通常要求在一個合適的范圍內(nèi)如?200bp)，因此急需一種高效選擇性提取小片段DNA的方法。目前，選擇性提取不同長度片段DNA通常是采用凝膠電泳回收法，這種方法不僅費時費力，且存在易污染、回收效率低等諸多弊端。因此，尋求一種便捷，高效，安全無污染的選擇性提取不同片段DNA分子尤其是提取小片段DNA分子具有十分重要的意義。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是，克服現(xiàn)有技術(shù)提取DNA分子的缺點，提供一種可高效選擇性提取不同片段DNA分子的方法。
[0005]具體的技術(shù)方案如下。
[0006]一種選擇性提取DNA的方法，具體步驟為:(I)將用硅烷偶聯(lián)試劑進行表面修飾的固相介質(zhì)和DNA樣品的溶液混合，表面修飾后的固相介質(zhì)的用量是全部DNA樣品質(zhì)量的100?200倍，加入中性鹽并使混合溶液中鹽濃度為0.4?0.5mol/L，調(diào)節(jié)混合溶液pH至4?5，將混合溶液震蕩20?30分鐘以完成長片段DNA分子與固相介質(zhì)之間的靜電吸附，所述的長片段DNA是指片段長度大于或等于400bp的DNA ;采用離心分離的方式，分離吸附了長片段DNA的固相介質(zhì)和含短片段DNA的吸附上清液；然后，將含短片段DNA的吸附上清液的PH值調(diào)至3?4再加入固相介質(zhì)并震蕩20?30分鐘，以完成短片段DNA分子與固相介質(zhì)之間的靜電吸附，所述的短片段DNA是指片段長度小于或等于200bp的DNA ;固相介質(zhì)的用量大于或等于剩余DNA樣品質(zhì)量的300倍，采用離心分離方式，分離出吸附了短片段DNA的固相介質(zhì)；
[0007](2)將兩次分離出來的吸附了 DNA的固相介質(zhì)分別分散在pH為8.0?11.0的水溶液中，震蕩20?30分鐘以完成DNA分子與固相介質(zhì)之間的靜電脫附；采用離心分離的方式，分離出固相介質(zhì)，分別獲得長片段DNA溶液和短片段DNA溶液。
[0008]當長片段DNA樣品包含兩種不同長度的長片段DNA時，還能夠?qū)煞N不同長度的長片段DNA分離開，具體過程是:將步驟(2)得到的長片段DNA溶液的pH值調(diào)節(jié)至4.0?5.0，長片段DNA溶液中鹽濃度調(diào)節(jié)至0.6?0.8mol/L，加入表面修飾后的固相介質(zhì)，震蕩20?30分鐘以完成最長片段DNA分子與固相介質(zhì)之間的靜電吸附，表面修飾后的固相介質(zhì)的用量為長片段DNA樣品總質(zhì)量的100?200倍，所述的最長片段DNA是指片段長度大于或等于100bp的DNA ;離心分離吸附了最長片段DNA的固相介質(zhì)和含次長片段DNA的吸附上清液；然后調(diào)節(jié)含次長片段DNA的吸附上清液pH值至3?4，加入表面修飾后的固相介質(zhì)，震蕩20?30分鐘以完成次長片段DNA分子與固相介質(zhì)之間的靜電吸附，表面修飾后的固相介質(zhì)的用量為大于或等于次長片段DNA樣品質(zhì)量的300倍，所述的次長片段DNA是指片段長度大于或等于400bp且比最長片段DNA的片段長度短250bp或250bp以上的DNA ；尚心分尚出吸附了次長片段DNA的固相介質(zhì)；將分尚出來的吸附了最長片段DNA的固相介質(zhì)和吸附了次長片段DNA的固相介質(zhì)分別分散在pH為8.0?11.0的水溶液中，震蕩20?30分鐘以完成DNA分子與固相介質(zhì)之間的靜電脫附；采用離心分離的方式，分離出固相介質(zhì)，分別獲得最長片段DNA溶液和次長片段DNA溶液。
[0009]本發(fā)明步驟(I)中所述的中性鹽，優(yōu)選NaCl或KC1。
[0010]本發(fā)明步驟(I)中所述的固相介質(zhì)優(yōu)選尺寸在微米區(qū)間的硅藻土、尺寸在毫米區(qū)間的玻璃珠、尺寸范圍在50 μπι?10nm的無定形的氧化娃微粒、尺寸范圍在50 μπι?10nm的介孔氧化娃微粒、尺寸范圍在50 μπι?10nm的無定形氧化娃包覆磁性內(nèi)核微?；虺叽绶秶?0 μπι?10nm的介孔氧化娃包覆磁性內(nèi)核微粒，所述的磁性內(nèi)核為Fe，Co，Ni，F(xiàn)e3O4, Fe2O3或其混合物。
[0011]本發(fā)明步驟(I)中所述的用硅烷偶聯(lián)試劑進行表面修飾的固相介質(zhì)，可用現(xiàn)有方法得到，也可按下述方法得到:
[0012]將氨基酸溶于水中，調(diào)節(jié)溶液pH值至11，將溶液置于冰水浴中，緩慢加入與氨基酸等摩爾量的3-環(huán)氧基丙基三甲氧基硅烷，將反應(yīng)溶液升溫至65°C，攪拌反應(yīng)4小時，再加入與氨基酸等摩爾量的3-環(huán)氧基丙基三甲氧基硅烷繼續(xù)攪拌反應(yīng)4小時，獲得末端帶有氨基酸衍生基團的硅烷偶聯(lián)劑；
[0013]取固相介質(zhì)并分散在水中，加入末端帶有氨基酸衍生基團的硅烷偶聯(lián)劑，硅烷偶聯(lián)劑的用量為每克固相介質(zhì)使用130ml，調(diào)整溶液pH值至3.0，在60°C反應(yīng)3小時，將固相介質(zhì)用離心或磁吸分離出再用水和乙醇分別洗滌兩次，即得到表面修飾后的固相介質(zhì)。
[0014]本發(fā)明的方法有以下有益效果:
[0015]1、對DNA同時具有高的吸附效率和脫附效率，總提取效率高。
[0016]2、可以選擇性分離不同片段長度尤其是兩種或兩種以上片段長度相差300bp以上的小片段DNA，從而對DNA進行選擇性提取。
[0017]3、選擇性提取效率高，尤其對短片段DNA的選擇性提取效率在90%以上。
[0018]4、原料簡單廉價易得，操作快速便捷。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0019]圖1是實施例3、4、6的相關(guān)瓊脂糖凝膠電泳圖。
[0020]圖2是實施例9的相關(guān)瓊脂糖凝膠電泳圖。

【具體實施方式】
[0021]借助以下實施例對本發(fā)明做進一步描述，應(yīng)理解，以下實施例是示范性的，而不是限制性的，可根據(jù)上述發(fā)明的技術(shù)方案和實際情況，來確定具體的實施方法。
[0022]本發(fā)明中所述的DNA吸附率，是固相介質(zhì)吸附的DNA質(zhì)量與原溶液中該DNA總質(zhì)量的比值。不同長度片段DNA選擇性吸附效率是通過瓊脂糖凝膠電泳圖像軟件定量得到。選擇性提取效率是指經(jīng)過吸附和脫附后最終提取出的全部DNA中，指定片段長度的DNA所占的質(zhì)量百分比。
[0023]實施例1
[0024]將0.5mg表面賴氨酸修飾的硅藻土微粒分散在100 μ I含有2000bp質(zhì)粒DNA和10bp線性雙鏈DNA分子(濃度均為25ng/ μ I)的水溶液中，用NaCl調(diào)節(jié)體系中Na+濃度為0.4mol/Lo調(diào)節(jié)溶液pH值為5.0，混勻后搖床震蕩20分鐘。用6000rpm離心分出吸附了 DNA的硅藻土粒子。另取0.75mg表面賴氨酸修飾的硅藻土微粒分散在上述吸附上清中，溶液PH值調(diào)節(jié)為4.0?；靹蚝髶u床震蕩20分鐘，用6000rpm離心分出第二次吸附了 DNA的娃藻土微粒。
[0025]將兩次離心分離出的吸附了 DNA的硅藻土微粒分別分散在pH = 8.0的水溶液中，混勻后搖床震蕩20分鐘。用6000rpm離心分離出硅藻土微粒。測量兩次脫附上清中DNA量，可得選擇性提取效率達到97%。
[0026]實施例2
[0027]將1.0mg表面賴氨酸修飾的硅藻土微粒分散在100 μ I含有2000bp質(zhì)粒DNA和10bp線性雙鏈DNA分子(濃度均為25ng/ μ I)的水溶液中，用KCl調(diào)節(jié)體系中K+濃度為0.5mol/Lo調(diào)節(jié)溶液pH值為4.0，混勻后搖床震蕩30分鐘。用6000rpm離心分出吸附了DNA的娃藻土粒子。另取1.0mg表面賴氨酸修飾的娃藻土微粒分散在上述吸附上清中，溶液pH值調(diào)節(jié)為3.0o混勻后搖床震蕩20分鐘，用6000rpm離心分出第二次吸附了 DNA的硅藻土微粒。
[0028]將兩次離心分離出的吸附了 DNA的硅藻土微粒分別分散在pH = 11.0的水溶液中，混勻后搖床震蕩30分鐘。用6000rpm離心分離出硅藻土微粒。測量兩次脫附上清中DNA量，可得選擇性提取效率達到95%。
[0029]實施例3
[0030]將0.5mg表面賴氨酸修飾的硅藻土微粒分散在100 μ I含有100bp和10bp線性雙鏈DNA分子(濃度各為25ng/ μ I)的水溶液中，調(diào)節(jié)體系中鹽濃度為0.4mol/L，調(diào)節(jié)溶液pH值為5.0，混勻后搖床震蕩20分鐘。用6000rpm離心分出吸附了 DNA的硅藻土微粒。另取1.0mg表面賴氨酸修飾的娃藻土微粒分散在上述吸附上清中，溶液pH值調(diào)節(jié)為4.0o混勻后搖床震蕩20分鐘，用6000rpm離心分出第二次吸附了 DNA的硅藻土微粒。
[0031]將兩次離心分離出的吸附了 DNA的硅藻土微粒分散在pH = 10.0的水溶液中，混勻后搖床震蕩20分鐘。用6000rpm離心分離出硅藻土微粒。測量兩次脫附上清中DNA量，并進行瓊脂糖凝膠電泳定性及定量觀察選擇性分離100bp和10bp DNA情況，如圖1中的2a、2d所示。從瓊脂糖凝膠電泳圖中可以看到硅藻土兩次吸附的DNA分子分別為100bp和lOObp，采用定量軟件計算得到選擇性提取效率為95%，圖中的S1、Ia和Id是對照組，SI為空白對照、Ia和Id是OM鹽濃度下吸附上清和脫附上清的對照。從對照組可以看出，在不使用鹽的情況下是不能將100bp和10bp兩種片段長度的DNA進行分離的。
[0032]實施例4
[0033]將0.5mg表面賴氨酸修飾的娃藻土微粒分散在100 μ I含有750bp和10bp線性雙鏈DNA分子(濃度各為25ng/ μ I)的水溶液中，調(diào)節(jié)體系中鹽濃度為0.4mol/L，調(diào)節(jié)溶液pH值為5.0，混勻后搖床震蕩20分鐘。用6000rpm離心分出吸附了 DNA的硅藻土微粒。另取1.0mg表面賴氨酸修飾的娃藻土粒子分散在上述吸附上清中，溶液pH值調(diào)節(jié)為4.0o混勻后搖床震蕩20分鐘，用6000rpm離心分出第二次吸附了 DNA的硅藻土微粒。
[0034]將兩次離心分離出的吸附了 DNA的硅藻土微粒分別分散在pH = 10.0的水溶液中，混勻后搖床震蕩20分鐘。用6000rpm離心分離出硅藻土微粒。測量兩次脫附上清中DNA量，并進行瓊脂糖凝膠電泳定性及定量觀察選擇性分離750bp和10bp DNA情況，如圖1中的4a、4d所示。從瓊脂糖凝膠電泳圖中可以看到硅藻土兩次吸附的DNA分子分別為750bp和lOObp，采用定量軟件計算得到選擇性提取效率為93 %。圖中的S3、3a和3d是對照組，S3為空白對照、3a和3d是OM鹽濃度下吸附上清和脫附上清的對照。從對照組可以看出，在不使用鹽的情況下是不能將750bp和10bp兩種片段長度的DNA進行分離的。
[0035]實施例5
[0036]將0.5mg表面賴氨酸修飾的娃藻土微粒分散在100 μ I含有500bp和10bp線性雙鏈DNA分子(濃度各為25ng/ μ I)的水溶液中，調(diào)節(jié)體系中鹽濃度為0.4mol/L，調(diào)節(jié)溶液pH值為5.0，混勻后搖床震蕩20分鐘。用6000rpm離心分出吸附了 DNA的硅藻土微粒。另取1.0mg表面賴氨酸修飾的娃藻土粒子分散在上述吸附上清中，溶液pH值調(diào)節(jié)為4.0o混勻后搖床震蕩20分鐘，用6000rpm離心分出第二次吸附了 DNA的硅藻土粒子。
[0037]將兩次離心分離出的吸附了 DNA的硅藻土微粒分別分散在pH = 10.0的水溶液中，混勻后搖床震蕩20分鐘。用6000rpm離心分離出硅藻土微粒。測量兩次脫附上清中DNA量，可得提取效率為94%。
[0038]實施例6
[0039]將0.5mg表面賴氨酸修飾的娃藻土微粒分散在100 μ I含有400bp和10bp線性雙鏈DNA分子(濃度各為25ng/ μ I)的水溶液中，調(diào)節(jié)體系中鹽濃度為0.4mol/L，調(diào)節(jié)溶液pH值為5.0，混勻后搖床震蕩20分鐘。用6000rpm離心分出吸附了 DNA的硅藻土微粒。另取1.0mg表面賴氨酸修飾的娃藻土粒子分散在上述吸附上清中，溶液pH值調(diào)節(jié)為4.0o混勻后搖床震蕩20分鐘，用6000rpm離心分出第二次吸附了 DNA的硅藻土粒子。
[0040]將兩次離心分離出的吸附了 DNA的硅藻土微粒分別分散在pH = 10.0的水溶液中，混勻后搖床震蕩20分鐘。用6000rpm離心分離出硅藻土微粒。測量兩次脫附上清中DNA量，并進行瓊脂糖凝膠電泳定性及定量觀察選擇性分離400bp和10bp DNA情況，如圖1中的6a和6d所示。從瓊脂糖凝膠電泳圖中可以看到硅藻土兩次吸附的DNA分子分別為400bp和100bp，采用定量軟件計算得到選擇性提取效率為92%。圖中的S5、5a和5d是對照組，S5為空白對照、5a和5d是OM鹽濃度下吸附上清和脫附上清的對照。從對照組可以看出，在不使用鹽的情況下是不能將400bp和10bp兩種片段長度的DNA進行分離的。
[0041]實施例7
[0042]將0.5mg表面賴氨酸修飾的硅藻土微粒分散在100 μ I含有100bp和200bp線性雙鏈DNA分子(濃度各為25ng/ μ I)的水溶液中，調(diào)節(jié)體系中鹽濃度為0.4mol/L，調(diào)節(jié)溶液pH值為5.0，混勻后搖床震蕩20分鐘。用6000rpm離心分出吸附了 DNA的硅藻土微粒。另取1.0mg表面賴氨酸修飾的娃藻土粒子分散在上述吸附上清中，溶液pH值調(diào)節(jié)為4.0o混勻后搖床震蕩20分鐘，用6000rpm離心分出第二次吸附了 DNA的硅藻土粒子。
[0043]將兩次離心分離出的吸附了 DNA的硅藻土微粒分別分散在pH = 10.0的水溶液中，混勻后搖床震蕩20分鐘。用6000rpm離心分離出硅藻土微粒。測量兩次脫附上清中DNA量，可得選擇性提取效率為90%。
[0044]實施例8
[0045]將0.8mg表面賴氨酸修飾的硅藻土微粒分散在100 μ I含有100bp、750bp和10bp三種片段長度DNA分子(濃度各為25ι^/μ1)的水溶液中，調(diào)節(jié)體系中鹽濃度為0.4mol/L,調(diào)節(jié)溶液pH值為5.0，混勻后搖床震蕩20分鐘。用6000rpm離心分離出第一次吸附了 DNA的硅藻土微粒。再取1.0mg表面賴氨酸修飾的硅藻土微粒分散在吸附后上清中，溶液PH值調(diào)節(jié)為4.0?；靹蚝髶u床震蕩20分鐘，用6000rpm離心分出第二次吸附了 DNA的娃藻土微粒。
[0046]將第一次吸附了 DNA的硅藻土微粒分散在pH = 10.0的水溶液中，混勻后搖床震蕩20分鐘進行靜電脫附。用6000rpm離心分離出娃藻土微粒。取0.5mg表面賴氨酸修飾的娃藻土微粒分散在上述脫附上清中，溶液pH值調(diào)節(jié)為5.0，加入鹽濃度至0.8mol/Lo混勻后搖床震蕩20分鐘，用6000rpm離心分出第三次吸附了 DNA的硅藻土微粒，再取1.0mg表面賴氨酸修飾的硅藻土微粒分散在上述第三次吸附上清中，溶液pH值調(diào)節(jié)為4.0，混勻后搖床震蕩20分鐘，用6000rpm離心分出第四次吸附了 DNA的硅藻土微粒。
[0047]將第三次、第四次、第二次離心分離出的吸附了 DNA的硅藻土微粒分別分散在pH=10.0的水溶液中，混勻后搖床震蕩20分鐘。用6000rpm離心分離出硅藻土微粒。測量各脫附上清中DNA量，并進行瓊脂糖凝膠電泳定性及定量觀察選擇性分離1000bp、750bp、10bp DNA情況及效率，如圖2中的2a、3a、3d所示。從瓊脂糖凝膠電泳圖中可以看到三次脫附得到的DNA分子依次為1000bp、750bp和lOObp，采用定量軟件計算得到10bp DNA選擇性提取效率為95 %，750bp DNA的選擇性提取效率為88 %，100bp DNA的選擇性提取效率為80%。圖中的S、la、ld分別為空白對照，OM鹽吸附上清和OM鹽脫附上清對照實驗。
[0048]實施例9
[0049]將實施例6中的固相介質(zhì)由表面賴氨酸修飾的硅藻土微粒改為表面賴氨酸修飾的300nm無定型二氧化娃納米粒子，其余條件不變，也能將400bp和10bp的DNA分離，選擇性提取效率為93%。
[0050]實施例10
[0051]將實施例6中的固相介質(zhì)由表面賴氨酸修飾的硅藻土微粒改為表面賴氨酸修飾的300nm介孔二氧化娃包覆Fe3O4納米粒子，其余條件不變，也能將400bp和10bp的DNA分離，選擇性提取效率為90 %。
[0052]實施例11
[0053]將實施例6中的固相介質(zhì)由表面賴氨酸修飾的娃藻土微粒改為表面精氨酸修飾的硅藻土微粒，其余條件不變，也能將400bp和10bp的DNA分離，選擇性提取效率為90%。
[0054]實施例12
[0055]將實施例5中的固相介質(zhì)由表面賴氨酸修飾的娃藻土微粒改為表面組氨酸修飾的硅藻土微粒，其余條件不變，也能將500bp和10bp的DNA分離，選擇性提取效率為94%。
【權(quán)利要求】
1.一種選擇性提取DNA的方法，具體步驟為:(I)將用硅烷偶聯(lián)試劑進行表面修飾的固相介質(zhì)和DNA樣品的溶液混合，表面修飾的固相介質(zhì)的用量是全部DNA樣品質(zhì)量的100?200倍，加入中性鹽并使混合溶液中鹽濃度為0.4?0.5mol/L，調(diào)節(jié)混合溶液pH至4?5，將混合溶液震蕩20?30分鐘以完成長片段DNA分子與固相介質(zhì)之間的靜電吸附，所述的長片段DNA是指片段長度大于或等于400bp的DNA ;采用離心分離的方式，分離吸附了長片段DNA的固相介質(zhì)和含短片段DNA的吸附上清液；然后，將含短片段DNA的吸附上清液的pH值調(diào)至3?4，再加入表面修飾后的固相介質(zhì)并震蕩20?30分鐘，以完成短片段DNA分子與固相介質(zhì)之間的靜電吸附，所述的短片段DNA是指片段長度小于或等于200bp的DNA ;固相介質(zhì)的用量大于或等于剩余DNA樣品質(zhì)量的300倍，采用離心分離方式，分離出吸附了短片段DNA的固相介質(zhì)； (2)將兩次分離出來的吸附了 DNA的固相介質(zhì)分別分散在pH為8.0?11.0的水溶液中，震蕩20?30分鐘以完成DNA分子與固相介質(zhì)之間的靜電脫附；采用離心分離的方式，分離出固相介質(zhì)，分別獲得長片段DNA溶液和短片段DNA溶液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種選擇性提取DNA的方法，其特征在于，當長片段DNA樣品包含兩種不同長度的長片段DNA時，還能夠?qū)煞N不同長度的長片段DNA分離開，具體過程是:將步驟(2)得到的長片段DNA溶液的pH值調(diào)節(jié)至4.0?5.0，長片段DNA溶液中鹽濃度調(diào)節(jié)至0.6?0.8mol/L，加入表面修飾后的固相介質(zhì)，震蕩20?30分鐘以完成最長片段DNA分子與固相介質(zhì)之間的靜電吸附，表面修飾后的固相介質(zhì)的用量為長片段DNA樣品總質(zhì)量的100?200倍，所述的最長片段DNA是指片段長度大于或等于100bp的DNA ;離心分離吸附了最長片段DNA的固相介質(zhì)和含次長片段DNA的吸附上清液；然后調(diào)節(jié)含次長片段DNA的吸附上清液pH值至3?4，加入表面修飾后的固相介質(zhì)，震蕩20?30分鐘以完成次長片段DNA分子與固相介質(zhì)之間的靜電吸附，表面修飾后的固相介質(zhì)的用量為大于或等于次長片段DNA樣品質(zhì)量的300倍，所述的次長片段DNA是指片段長度大于或等于400bp且比最長片段DNA的片段長度短250bp或250bp以上的DNA ;離心分離出吸附了次長片段DNA的固相介質(zhì)；將分離出來的吸附了最長片段DNA的固相介質(zhì)和吸附了次長片段DNA的固相介質(zhì)分別分散在pH為8.0?11.0的水溶液中，震蕩20?30分鐘以完成DNA分子與固相介質(zhì)之間的靜電脫附；采用離心分離的方式，分離出固相介質(zhì)，分別獲得最長片段DNA溶液和次長片段DNA溶液。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種選擇性提取DNA的方法，其特征在于，步驟(I)中所述的中性鹽，是NaCl或KCl。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種選擇性提取DNA的方法，其特征在于，步驟(I)中所述的固相介質(zhì)是尺寸在微米區(qū)間的硅藻土、尺寸在毫米區(qū)間的玻璃珠、尺寸范圍在50 μπι?10nm的無定形的氧化娃微粒、尺寸范圍在50 μπι?10nm的介孔氧化娃微粒、尺寸范圍在50 μπι?10nm的無定形氧化娃包覆磁性內(nèi)核微?；虺叽绶秶?0 μπι?10nm的介孔氧化娃包覆磁性內(nèi)核微粒，所述的磁性內(nèi)核為Fe，Co，Ni，F(xiàn)e3O4, Fe2O3或其混合物。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種選擇性提取DNA的方法，其特征在于，步驟(I)中所述的用硅烷偶聯(lián)試劑進行表面修飾的固相介質(zhì)，是按下述方法得到的:將氨基酸溶于水中，調(diào)節(jié)溶液PH值至11，將溶液置于冰水浴中，加入與氨基酸等摩爾量的3-環(huán)氧基丙基三甲氧基硅烷，將反應(yīng)溶液升溫至65°C，攪拌反應(yīng)4小時，再加入與氨基酸等摩爾量的3-環(huán)氧基丙基三甲氧基硅烷繼續(xù)攪拌反應(yīng)4小時，獲得末端帶有氨基酸衍生基團的硅烷偶聯(lián)劑； 取固相介質(zhì)并分散在水中，加入末端帶有氨基酸衍生基團的硅烷偶聯(lián)劑，硅烷偶聯(lián)劑的用量為每克固相介質(zhì)使用130ml，調(diào)整溶液pH值至3.0，在60°C反應(yīng)3小時，將固相介質(zhì)用離心或磁吸分離出再用水和乙醇分別洗滌兩次，即得到表面修飾后的固相介質(zhì)。
【文檔編號】C12N15/10GK104513819SQ201410789081
【公開日】2015年4月15日 申請日期:2014年12月17日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月17日
【發(fā)明者】劉玲玲, 莊家騏, 楊文勝 申請人:吉林大學(xué)