一種轉(zhuǎn)基因大豆油dna提取方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于生物【技術(shù)領(lǐng)域】，公開了一種轉(zhuǎn)基因大豆油DNA提取方法。轉(zhuǎn)基因大豆油DNA提取方法，主要步驟包括：首先將轉(zhuǎn)基因大豆油與TE溶液混合，磁力攪拌器攪拌2h充分乳化，12000r/min離心20min，小心取出下層水相；加入等體積的異丙醇，混勻，常溫靜置30min，12000r/min離心15min，去上清保留沉淀；加入TE溶解沉淀，加入2/3體積的氯仿：異戊醇進(jìn)行抽提，12000r離心15min，取出上清，加入等體積異丙醇沉淀10min，離心10min，倒掉上清，用無水乙醇洗滌沉淀，沉淀常溫干燥后，用50ulTE溶液溶解，即得到轉(zhuǎn)基因大豆油的DNA溶液。本發(fā)明的轉(zhuǎn)基因大豆油DNA提取方法的有益效果是：可以從轉(zhuǎn)基因大豆油中提取到高質(zhì)量的適宜于PCR檢測的DNA，操作簡單、耗時(shí)短、利于快速檢測。
【專利說明】—種轉(zhuǎn)基因大豆油DNA提取方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物【技術(shù)領(lǐng)域】，是一種適用于PCR擴(kuò)增的轉(zhuǎn)基因大豆油DNA的提取方法。

【背景技術(shù)】
[0002]目前從轉(zhuǎn)基因大豆被批準(zhǔn)種植以后，世界上每年的種植面積都在增加，至今已增加到5000多萬公頃，并且還有增加的趨勢。中國是轉(zhuǎn)基因大豆的主要進(jìn)口國家之一。進(jìn)口轉(zhuǎn)基因大豆多用于提取大豆油，因此大豆油轉(zhuǎn)基因檢測十分重要。2002年我國農(nóng)業(yè)部發(fā)布的《轉(zhuǎn)基因生物標(biāo)識管理辦法》及衛(wèi)生部出臺的《轉(zhuǎn)基因食品衛(wèi)生管理辦法》規(guī)定，包括大豆、玉米、油菜、棉花、番茄5類17種產(chǎn)品以及以轉(zhuǎn)基因動植物、微生物或者其直接加工品為原料生產(chǎn)的食品和食品添加劑必須進(jìn)行標(biāo)識。除此之外，實(shí)用植物油的核酸檢測技術(shù)在植物油原料成分鑒定、摻假食用油的鑒定領(lǐng)域的需求也日顯突出。人們?nèi)粘Ｊ秤玫拇蠖褂投酁榫珶挻蠖褂停诘玫酱钟秃笥纸?jīng)較為復(fù)雜的精煉過程，僅沉降和脫膠兩個(gè)步驟就除去大豆粗油中大部分的DNA，DNA提取非常困難，導(dǎo)致后續(xù)的轉(zhuǎn)基因檢測很難實(shí)現(xiàn)。高質(zhì)量DNA模板的獲取，是轉(zhuǎn)基因大豆油進(jìn)行檢測的前提，因此，研究精煉大豆油中DNA的提取方法，不僅對實(shí)施食品標(biāo)簽和標(biāo)識，保護(hù)消費(fèi)者的知情權(quán)和選擇權(quán)具有重要意義，同時(shí)對食用油脂的摻假檢測也具有重要的參考意義。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的是建立一種方便、簡單的轉(zhuǎn)基因大豆油DNA的提取方法。
[0004]本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是:一種轉(zhuǎn)基因大豆油DNA提取方法，首先將轉(zhuǎn)基因大豆油與TE溶液混合,磁力攪拌器攪拌2h乳化，12000r/min離心20min,小心取出下層水相；加入等體積的異丙醇，混勻，常溫靜置30min, 12000r/min離心15min,去上清保留沉淀；加入TE溶解沉淀，加入2/3體積的氯仿:異戊醇進(jìn)行抽提，12000r離心15min,取出上清,加入等體積異丙醇沉淀1min,離心1min,倒掉上清；用無水乙醇洗漆沉淀；沉淀常溫干燥后，用50ulTE溶液溶解，即得到轉(zhuǎn)基因大豆油的DNA溶液。
[0005]本發(fā)明的轉(zhuǎn)基因大豆油DNA提取方法的有益效果是:可以從轉(zhuǎn)基因大豆油中提取到高質(zhì)量的適宜于PCR檢測的基因組DNA，操作簡單、耗時(shí)短、利于快速檢測。

【具體實(shí)施方式】
[0006]本發(fā)明的一種轉(zhuǎn)基因大豆油DNA提取方法，包括以下步驟:
(1)取30ml轉(zhuǎn)基因大豆油，加入12mlTE溶液，置于磁力攪拌器上攪拌2h，充分乳化；
(2)將乳化的大豆油放入45ml離心管中12000r，離心20min；
(3)小心去掉上層油相，取水相，加入等體積的異丙醇常溫靜置30min；
(4)12000r/min離心15min,小心倒掉上層液體，留沉淀；
(5)加入ImlTE溶液溶解沉淀；(6)加入2/3體積的氯仿:異戊醇進(jìn)行抽提，氯仿:異戊醇體積比為24:1;
(7)12000r,離心15min,取上清,加入等體積的異丙醇,沉淀1min ；
(8)12000r離心1min,棄上清，留沉淀；
(9)用預(yù)冷的無水乙醇洗滌沉淀，12000r離心Imin；
(10)沉淀在室溫干燥，用50ulTE溶液溶解，_20°C貯存?zhèn)溆谩?br> 【權(quán)利要求】
1.一種轉(zhuǎn)基因大豆油0嫩提取方法，其特征在于:將轉(zhuǎn)基因大豆油與溶液混合，磁力攪拌器攪拌211乳化；1200017111111離心20111111，小心取出下層水相；加入等體積的異丙醇，混勻，常溫靜置30111111，120001-/111111離心15111111，去上清保留沉淀；加入呢溶解沉淀，加入2/3體積的氯仿:異戊醇進(jìn)行抽提，120001'離心15-！！，取出上清；加入等體積異丙醇沉淀10111111，離心10111111，倒掉上清；用無水乙醇洗滌沉淀；沉淀常溫干燥后，用501x112溶液溶解，即得到轉(zhuǎn)基因大豆油的0嫩溶液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:氯仿:異戊醇體積比為24:1。
【文檔編號】C12N15/10GK104450678SQ201410609976
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2014年11月4日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月4日
【發(fā)明者】劉曼, 逄淑梅, 牟特 申請人:青島康大分析檢測有限公司