專利名稱：一種心臟特異microRNA敲減小鼠模型建立的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種心臟特異microRNA敲減小鼠模型建立 的方法。
背景技術(shù)：
人類疾病絕大多數(shù)源于基因表達(dá)的異常。近年，發(fā)現(xiàn)了一類具有基因表達(dá)轉(zhuǎn)錄后 水平調(diào)節(jié)作用的小分子非編碼RNA，稱為“微小RNA (microRNA, miRNA) ”。通常，miRNA通過(guò) 與特定mRNA的3'非翻譯區(qū)(UTR)結(jié)合，導(dǎo)致mRNA降解或以mRNA為模版的翻譯過(guò)程受到 抑制，從而達(dá)到負(fù)向調(diào)節(jié)某一基因表達(dá)的作用。miRNA功能的研究對(duì)于進(jìn)一步揭示疾病的發(fā) 生發(fā)展具有重大意義。在研究某一具體miRNA時(shí)，常常采用“失功能”的策略，如“敲減” (Knockdown, KD)， 即通過(guò)某種方法使細(xì)胞或動(dòng)物體內(nèi)特定miRNA含量減少，再通過(guò)觀察細(xì)胞等出現(xiàn)的表型， 分析該miRNA的功能。目前，比較常用的方法是采用人工合成的miRNA抑制劑或拮抗劑(如 AMO等)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染或?qū)?dòng)物進(jìn)行靜脈注射。但其應(yīng)用具有明顯的不足成本較高，需 要反復(fù)注射，其中，較為突出的是作用時(shí)間短和無(wú)法傳代。有實(shí)驗(yàn)表明，細(xì)胞轉(zhuǎn)染miRNA抑 制劑后，最多可作用7天。這顯然無(wú)法滿足某些疾病研究的要求。無(wú)法傳代更是制約了一 些胚胎發(fā)育的研究。miR-328可能參與心律失常的發(fā)生，在我們前期研究中，建立了 miR-328過(guò)表達(dá)的 轉(zhuǎn)基因小鼠，結(jié)果表明miR-328過(guò)表達(dá)后，小鼠極易出現(xiàn)心律失常。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明主要是解決現(xiàn)有技術(shù)所存在的不足。即作用時(shí)間短和無(wú)法傳代。細(xì)胞轉(zhuǎn) 染miRNA抑制劑后，最多可作用7天，無(wú)法滿足某些疾病，如腫瘤、代謝等研究的要求，無(wú)法 傳代更是制約了一些胚胎發(fā)育的研究等的技術(shù)問(wèn)題；本發(fā)明提供了一種能夠建立可穩(wěn)定遺 傳的心肌特異的miRNA敲減動(dòng)物模型，為后續(xù)的心律失常研究及藥物篩選提供動(dòng)物模型， 該模型具有可穩(wěn)定遺傳，具有對(duì)抗致心律失常因素的效果，對(duì)機(jī)體是長(zhǎng)期作用的一種心臟 特異microRNA敲減小鼠模型建立的方法。本發(fā)明的上述技術(shù)問(wèn)題主要是通過(guò)下述技術(shù)方案得以解決的一種心臟特異microRNA敲減小鼠模型建立的方法，其特征在于，包括以下步驟步驟1，構(gòu)建心臟特異miR328敲減質(zhì)粒；步驟2，在上述心臟特異miR328敲減質(zhì)粒的基礎(chǔ)上，建立miR-328轉(zhuǎn)基因小鼠模型。在上述的一種心臟特異microRNA敲減小鼠模型建立的方法，所述的步驟1中，具 體的操作步驟如下步驟1. 1、選取miRBase上小鼠mature-miR328序列，根據(jù)堿基互補(bǔ)原則設(shè)計(jì)其反 義序列，并在第9-12個(gè)堿基處人為突變?yōu)椴换パa(bǔ)堿基；
步驟1. 2、將六個(gè)拷貝該反義序列串聯(lián)，每個(gè)拷貝之間由“aatt”連接，將該序列經(jīng) Sal I和Hind III酶切，并連接入含有心肌特異啟動(dòng)子alph_MHC啟動(dòng)子的pBluescript載 體；步驟1. 3、連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化入感受態(tài)細(xì)胞DH5 α，建立重組質(zhì)粒 pBluescript-S_miR3280在上述的一種心臟特異microRNA敲減小鼠模型建立的方法，所述的步驟2中，具 體的操作步驟如下步驟2. 1、以Spe I雙酶切步驟1. 3中所完成的重組質(zhì)粒，電泳膠回收獲得純化的 顯微注射用轉(zhuǎn)基因構(gòu)件，該構(gòu)件包括心肌特異啟動(dòng)子α-MHC、S-328和轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)；步驟2. 2、選取Β6雌性小鼠將全部輸卵管依次置于含透明質(zhì)酸酶的胚胎培養(yǎng)液中 分離受精卵，進(jìn)行體外培養(yǎng)，將經(jīng)顯微注射后成活的受精卵移植于見(jiàn)栓的ICR的輸卵管壺 腹部，待ICR小鼠分娩，得到子代小鼠。在上述的一種心臟特異microRNA敲減小鼠模型建立的方法，它還包括一個(gè)提取 與篩選gDNA的步驟，其操作步驟如下將步驟2. 2中子代小鼠的小鼠尾尖置于消化液中，加 入PCI、異丙醇，以70%乙醇溶液沖洗沉淀，加入170UL1XTE，震蕩混勻，以gDNA為模板，用 S-328篩選引物擴(kuò)增轉(zhuǎn)基因片段。在上述的一種心臟特異microRNA敲減小鼠模型建立的方法，它還包括一個(gè)總RNA 的提取與RT-PCR的步驟，其具體的操作步驟如下按Trizol試劑說(shuō)明進(jìn)行總RA提取，按逆 轉(zhuǎn)錄試劑說(shuō)明進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄獲得cDNA，以S-328篩選引物對(duì)其表達(dá)進(jìn)行分析。在上述的一種心臟特異microRNA敲減小鼠模型建立的方法，所述的步驟1. 2中， Sal I和Hind III酶切上述六拷貝序列與pBluescript載體3h，CIP對(duì)載體去磷酸化lh，純 化后，經(jīng)T4連接酶將二者連接，連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化入感受態(tài)細(xì)胞DH5 α，涂板，次日，觀察菌落生 長(zhǎng)情況，挑取菌落進(jìn)行測(cè)序，確定重組質(zhì)粒pBlueScript-miR328。在上述的一種心臟特異microRNA敲減小鼠模型建立的方法，所述的步驟2. 1 中，電泳膠回收獲得純化的顯微注射用轉(zhuǎn)基因構(gòu)件的步驟包括用Spe I酶切構(gòu)建的質(zhì)粒 IOug,電泳將顯微注射片段與載體片段分開(kāi)，將凝膠中6000bp的顯微注射片段進(jìn)行回收， 用Qiangen膠回收試劑盒對(duì)其進(jìn)行純化；純化后的片段濃度為200ng/uL ；所述的調(diào)整顯微 注射用轉(zhuǎn)基因構(gòu)件時(shí)，使其轉(zhuǎn)基因構(gòu)件濃度至Ing 2ng/uL。在上述的一種心臟特異microRNA敲減小鼠模型建立的方法，所述步驟2. 2中，選 取B6雌性小鼠為首日13時(shí)，注射PMSG 5IU/只；隔日12時(shí)注射HCG 5IU/只，并與雄性B6 小鼠合籠，同時(shí)將發(fā)情雌性ICR小鼠與結(jié)扎輸精管的ICR雄性小鼠合籠，第四日將見(jiàn)栓B6 小鼠頸椎離斷處死，仰臥位開(kāi)腹，剪取輸卵管近卵巢端0. 5cm置于生理鹽水中，將全部輸卵 管依次置于含透明質(zhì)酸酶的胚胎培養(yǎng)液中分離受精卵，進(jìn)行體外培養(yǎng)，并于第四日13時(shí)進(jìn) 行顯微注射；并將經(jīng)顯微注射后成活的受精卵移植于見(jiàn)栓的ICR的輸卵管壺腹部，3周后， ICR小鼠分娩，乳鼠生后3w用耳標(biāo)為其編號(hào)，并剪取0. 5cm尾尖進(jìn)行外源基因在基因組整合 的鑒定。在上述的一種心臟特異microRNA敲減小鼠模型建立的方法，將小鼠尾尖置于 0. 5mL消化液中，55°C消化3h ；加入等體積PCI, 1. 5X 104rpm離心lOmin，上清移入新管，加 0. 4mL異丙醇，翻轉(zhuǎn)，離心5min ；以70%乙醇溶液沖洗沉淀，離心后晾干；加入170uLlXTE，震蕩混勻。在上述的一種心臟特異microRNA敲減小鼠模型建立的方法，將所述的PCR產(chǎn)物進(jìn) 行0.8%瓊脂糖凝膠電泳，觀察外源轉(zhuǎn)基因是否整合入基因組中。因此，本發(fā)明具有如下優(yōu)點(diǎn)能夠建立一種可穩(wěn)定遺傳的心肌特異的miRNA敲減 動(dòng)物模型，為后續(xù)的心律失常研究及藥物篩選提供動(dòng)物模型，該模型具有可穩(wěn)定遺傳，具有 對(duì)抗致心律失常因素的效果，對(duì)機(jī)體是長(zhǎng)期作用


附圖1是顯微注射用轉(zhuǎn)基因構(gòu)件示意圖，其中轉(zhuǎn)基因構(gòu)件S-328序列分別為Mmu 小鼠成熟miR-328序列，AMO 反義序列，Sponges 含突變的反義單元，Sponges-miR-328 miR-328敲減構(gòu)件；附圖2是轉(zhuǎn)基因小鼠與野生型小鼠心肌組織miR-328含量的比較示意圖；附圖3是為心電圖測(cè)定示意圖(電刺激小鼠產(chǎn)生房顫情況)。
具體實(shí)施例方式下面通過(guò)實(shí)施例，并結(jié)合附圖，對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步具體的說(shuō)明。實(shí)施例l、pBluescript-S-miR328 質(zhì)粒的構(gòu)建 選取miRBase上小鼠mature-miR328序列，根據(jù)堿基互補(bǔ)原則設(shè)計(jì)其反義序列。將 六個(gè)拷貝該反義序列串聯(lián)，每個(gè)拷貝之間由“aatt”連接。將該序列經(jīng)Sal I和Hind III酶 切，并連接入含有心肌特異啟動(dòng)子alph-MHC啟動(dòng)子的pBluescript載體。連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化入 感受態(tài)細(xì)胞DH5ci，次日晨挑取7個(gè)菌落，進(jìn)行測(cè)序鑒定。測(cè)序結(jié)果表明，7個(gè)質(zhì)粒全部與預(yù) 期吻合。成功建立重組質(zhì)粒pBluescript-S-miR328。2、miR_328轉(zhuǎn)基因小鼠的建立以Spe I雙酶切上述重組質(zhì)粒，電泳膠回收獲得純化的顯微注射用轉(zhuǎn)基因構(gòu)件。 該構(gòu)件包括心肌特異啟動(dòng)子α -MHC、S-328和轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)。調(diào)整該構(gòu)件的濃度至Ing 2ng/uL。首日13時(shí)選取B6雌性小鼠，注射5IU PMSG ；隔日12時(shí)注射5IU HCG，并與雄性B6 小鼠合籠。同時(shí)將發(fā)情雌性ICR小鼠與結(jié)扎輸精管的ICR雄性小鼠合籠。第四日將見(jiàn)栓B6 小鼠頸椎離斷處死，仰臥位開(kāi)腹，剪取輸卵管近卵巢端0. 5cm置于生理鹽水中。將全部輸卵 管依次置于含透明質(zhì)酸酶的胚胎培養(yǎng)液中分離受精卵，進(jìn)行體外培養(yǎng)。13時(shí)進(jìn)行顯微注射。將經(jīng)顯微注射后成活的受精卵移植于見(jiàn)栓的ICR的輸卵管壺腹部，術(shù)中注意操作 輕柔和保溫。3周后，ICR小鼠分娩。乳鼠生后3w用耳標(biāo)為其編號(hào)，并剪取0.5cm左右尾尖 進(jìn)行外源基因在基因組整合的鑒定。3、gDNA的提取與篩選將小鼠尾尖置于0. 5mL消化液中，55°C消化3h。加入等體積PCI，1. 5X 104rpm離 心lOmin，上清移入新管，加0. 4mL異丙醇，翻轉(zhuǎn)，離心5min。以70%乙醇溶液沖洗沉淀，離 心后晾干。加入170uLlXTE，震蕩混勻。以gDNA為模板，用S-328篩選引物擴(kuò)增轉(zhuǎn)基因片段。
PCR產(chǎn)物進(jìn)行0. 8%瓊脂糖凝膠電泳，觀察外源轉(zhuǎn)基因是否整合入基因組中。4、總 RNA 的提取與 RT-PCR按Trizol試劑說(shuō)明進(jìn)行總RNA提取，按逆轉(zhuǎn)錄試劑說(shuō)明進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄獲得cDNA。以 S-328篩選引物對(duì)其表達(dá)進(jìn)行分析。5、northern blot圖2為miR-328敲減小鼠與野生型小鼠心肌組織miR-328含量的比較示意圖，圖 中表明(以TO做內(nèi)參照，敲減小鼠心肌組織內(nèi)成熟miR-328明顯低于野生型心肌miR-328)6、心電圖測(cè)定結(jié)合表1，心電圖測(cè)定示意圖中表明miR-328敲減小鼠可對(duì)抗致心律失常的因素。 電刺激10秒后，KD小鼠出現(xiàn)房顫，在應(yīng)用維拉帕米后，房顫加重，(η = 10)。另外，本發(fā)明還有這樣一些技術(shù)特征Α.構(gòu)建 pBluescript-S-miR328 質(zhì)粒時(shí)，Sal I 和 Hind III酶切上述六拷貝序列與pBluescript載體3h，CIP對(duì)載體去磷酸化lh，純化后(5ug產(chǎn)物)，經(jīng)T4連接 酶將二者連接，連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化入感受態(tài)細(xì)胞DH5 α (50uL)，涂板，次日，觀察菌落生長(zhǎng)情況， 挑取(7個(gè)菌落)菌落進(jìn)行測(cè)序，確定重組質(zhì)粒pBlUesCript-miR328;B.利用含Sal I和Hind III酶切位點(diǎn)的六拷貝序列^tcgacacggaagggcctcagggccagaattacggaagggcctcagggccagaattacggaagggcctcagggccagaattacggaagggcctcagggccagaattacggaagggcctcagggccagaattacggaagggcctcagggccagaagcttRtcRac =Sal I 位點(diǎn)aaRctt :Hind IIIaatt 鏈接區(qū)上述序列含六個(gè)與成熟miR-328不完全互補(bǔ)的反義序列，在體內(nèi)可以“吸 附” miR-328，有如“海面”。所以，我們又將該敲減策略成為“海綿”(Sponges，SP或S)策略。C.電泳膠回收獲得純化的顯微注射用轉(zhuǎn)基因構(gòu)件的步驟包括用Spe I酶切構(gòu)建的質(zhì)粒10ug，電泳將顯微注射片段與載體片段分開(kāi)，將凝膠中 6000bp的顯微注射片段進(jìn)行回收，用Qiangen膠回收試劑盒對(duì)其進(jìn)行純化。純化后的片段 濃度為200ng/uL，調(diào)整顯微注射用轉(zhuǎn)基因構(gòu)件的濃度至Ing 2ng/uL ；D.首日13時(shí)選取B6雌性小鼠，注射PMSG 5IU(國(guó)際單位)/只；隔日12時(shí)注射 HCG 5IU/只，并與雄性B6小鼠合籠，同時(shí)將發(fā)情雌性ICR小鼠與結(jié)扎輸精管的ICR雄性小 鼠合籠，第四日將見(jiàn)栓B6小鼠頸椎離斷處死，仰臥位開(kāi)腹，剪取輸卵管近卵巢端0. 5cm置于 生理鹽水中，將全部輸卵管依次置于含透明質(zhì)酸酶的胚胎培養(yǎng)液中分離受精卵，進(jìn)行體外 培養(yǎng)，13時(shí)進(jìn)行顯微注射；E.將經(jīng)顯微注射后成活的受精卵移植于見(jiàn)栓的ICR的輸卵管壺腹部，3周后，ICR 小鼠分娩，乳鼠生后3w用耳標(biāo)為其編號(hào)，并剪取0. 5cm尾尖進(jìn)行外源基因在基因組整合的 鑒定；F.將PCR產(chǎn)物進(jìn)行0. 8%瓊脂糖凝膠電泳，觀察外源轉(zhuǎn)基因是否整合入基因組中。
本文中所描述的具體實(shí)施例僅僅是對(duì)本發(fā)明精神作舉例說(shuō)明。本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng) 域的技術(shù)人員可以對(duì)所描述的具體實(shí)施例做各種各樣的修改或補(bǔ)充或采用類似的方式替 代，但并不會(huì)偏離本發(fā)明的精神或者超越所附權(quán)利要求書(shū)所定義的范圍。
權(quán)利要求
一種心臟特異microRNA敲減小鼠模型建立的方法，其特征在于，包括以下步驟步驟1，構(gòu)建心臟特異miR328敲減質(zhì)粒；步驟2，在上述心臟特異miR328敲減質(zhì)粒的基礎(chǔ)上，建立miR 328轉(zhuǎn)基因小鼠模型。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種心臟特異microRNA敲減小鼠模型建立的方法，其特征在 于，所述的步驟1中，具體的操作步驟如下步驟1. 1、選取miRBase上小鼠mature-miR328序列，根據(jù)堿基互補(bǔ)原則設(shè)計(jì)其反義序 列，并在第9-12個(gè)堿基處突變?yōu)椴换パa(bǔ)堿基；步驟1.2、將六個(gè)拷貝該反義序列串聯(lián)，每個(gè)拷貝之間由“aatt”連接，將該序列經(jīng) Sal I和Hind III酶切，并連接入含有心肌特異啟動(dòng)子alph_MHC啟動(dòng)子的pBluescript載 體；步驟1. 3、連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化入感受態(tài)細(xì)胞DH5 α，建立重組質(zhì)粒pBluescript-S-miR328。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種心臟特異microRNA敲減小鼠模型建立的方法，其特征在 于，所述的步驟2中，具體的操作步驟如下步驟2. 1、以Spe I雙酶切步驟1. 3中所完成的重組質(zhì)粒，電泳膠回收獲得純化的顯微 注射用轉(zhuǎn)基因構(gòu)件，該構(gòu)件包括心肌特異啟動(dòng)子α-MHC、S-328和轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)；步驟2. 2、選取Β6雌性小鼠將全部輸卵管依次置于含透明質(zhì)酸酶的胚胎培養(yǎng)液中分離 受精卵，進(jìn)行體外培養(yǎng)，將經(jīng)顯微注射后成活的受精卵移植于見(jiàn)栓的ICR的輸卵管壺腹部， 待ICR小鼠分娩，得到子代小鼠。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種心臟特異microRNA敲減小鼠模型建立的方法，其特征在 于，它還包括一個(gè)提取與篩選gDNA的步驟，其操作步驟如下將步驟2. 2中子代小鼠的小鼠 尾尖置于消化液中，加入PCI、異丙醇，以70%乙醇溶液沖洗沉淀，加入170UL1XTE，震蕩混 勻，以gDNA為模板，用S-328篩選引物擴(kuò)增轉(zhuǎn)基因片段。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種心臟特異microRNA敲減小鼠模型建立的方法，其特征在 于，它還包括一個(gè)總RNA的提取與RT-PCR的步驟，其具體的操作步驟如下按Trizol試劑 說(shuō)明進(jìn)行總RA提取，按逆轉(zhuǎn)錄試劑說(shuō)明進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄獲得cDNA，以S-328篩選引物對(duì)其表達(dá) 進(jìn)行分析。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種心臟特異microRNA敲減小鼠模型建立的方法，其特征在 于，所述的步驟1. 2中，Sal I和Hind III酶切上述六拷貝序列與pBluescript載體3h，CIP 對(duì)載體去磷酸化lh，純化后，經(jīng)T4連接酶將二者連接，連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化入感受態(tài)細(xì)胞DH5 α， 涂板，次日，觀察菌落生長(zhǎng)情況，挑取菌落進(jìn)行測(cè)序，確定重組質(zhì)粒pBlueSCript-miR328。
7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種心臟特異microRNA敲減小鼠模型建立的方法，其特征 在于，所述的步驟2. 1中，電泳膠回收獲得純化的顯微注射用轉(zhuǎn)基因構(gòu)件的步驟包括用 Spe I酶切構(gòu)建的質(zhì)粒10ug，電泳將顯微注射片段與載體片段分開(kāi)，將凝膠中6000bp的 顯微注射片段進(jìn)行回收，用Qiangen膠回收試劑盒對(duì)其進(jìn)行純化；純化后的片段濃度為 200ng/uL ；所述的調(diào)整顯微注射用轉(zhuǎn)基因構(gòu)件時(shí)，使其轉(zhuǎn)基因構(gòu)件濃度至Ing 2ng/uL。
8.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種心臟特異microRNA敲減小鼠模型建立的方法，其特征在 于，所述步驟2. 2中，選取B6雌性小鼠為首日13時(shí)，注射PMSG 5IU/只；隔日12時(shí)注射HCG 5IU/只，并與雄性B6小鼠合籠，同時(shí)將發(fā)情雌性ICR小鼠與結(jié)扎輸精管的ICR雄性小鼠合 籠，第四日將見(jiàn)栓B6小鼠頸椎離斷處死，仰臥位開(kāi)腹，剪取輸卵管近卵巢端0. 5cm置于生理鹽水中，將全部輸卵管依次置于含透明質(zhì)酸酶的胚胎培養(yǎng)液中分離受精卵，進(jìn)行體外培養(yǎng)， 并于第四日13時(shí)進(jìn)行顯微注射；并將經(jīng)顯微注射后成活的受精卵移植于見(jiàn)栓的ICR的輸卵 管壺腹部，3周后，ICR小鼠分娩，乳鼠生后3w用耳標(biāo)為其編號(hào)，并剪取0. 5cm尾尖進(jìn)行外源 基因在基因組整合的鑒定。
9.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種心臟特異microRNA敲減小鼠模型建立的方法，其特征 在于，將小鼠尾尖置于0. 5mL消化液中，55 °C消化3h ；加入等體積PCI，1. 5X104rpm離心 IOmin,上清移入新管，加0. 4mL異丙醇，翻轉(zhuǎn)，離心5min ；以70%乙醇溶液沖洗沉淀，離心后 晾干；加入170uLlXTE，震蕩混勻。
10.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種心臟特異microRNA敲減小鼠模型建立的方法，其特 征在于，將所述的PCR產(chǎn)物進(jìn)行0. 8%瓊脂糖凝膠電泳，觀察外源轉(zhuǎn)基因是否整合入基因組 中。
全文摘要
本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種心臟特異microRNA敲減小鼠模型建立的方法。本發(fā)明提供一種利用miRNA海綿技術(shù)建立轉(zhuǎn)基因小鼠，外源基因構(gòu)件包括心肌特異啟動(dòng)子、miR-328海綿及轉(zhuǎn)錄終止信號(hào)，該小鼠心肌miR-328被敲減近50％，由于miR-328參與心律失常的發(fā)生，該小鼠模型適于抗心律失常藥物的篩選。由于該方法基于轉(zhuǎn)基因小鼠，因此，該模型能夠穩(wěn)定表達(dá)“海綿”以穩(wěn)定敲減miRNA，同時(shí)能夠遺傳。該小鼠表型穩(wěn)定了，適于后續(xù)功能研究。
文檔編號(hào)C12N15/63GK101985628SQ20101025285
公開(kāi)日2011年3月16日 申請(qǐng)日期2010年8月13日 優(yōu)先權(quán)日2010年8月13日
發(fā)明者呂延杰, 楊寶峰, 潘振偉, 馬寧, 高旭 申請(qǐng)人:哈爾濱醫(yī)科大學(xué)