一種hla-dqbi常規(guī)基因剔除實驗小鼠模型的建立方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及到基因剔除研宄的新用途，特別是一種HLA-DQBI基因剔除實驗小鼠模型的建立方法。
【背景技術(shù)】
[0002]基因剔除提出技術(shù)既可以細(xì)胞水平上進(jìn)行，從而建立新的細(xì)胞系，也可以在整體水平行以建立基因剔除動物，通過觀察個體的表型變化，推測基因在體內(nèi)的可能功能，HLA-DQBI基因剔除動物模型，不僅為變應(yīng)性鼻炎、支氣管哮喘、精神分裂癥、擴(kuò)張型心肌病、多發(fā)性硬化癥、孕婦反復(fù)流產(chǎn)、慢性乙型肝炎、肺結(jié)核等免疫性疾病及宮頸癌等惡性腫瘤相關(guān)疾病闡明發(fā)病機制、同時也為相關(guān)疾病發(fā)病機制的闡明提供了良好的途徑。為闡明以上疾病的發(fā)病機制和對以上疾病的基因治療和發(fā)展特異性藥物療法提供一定基礎(chǔ)，也有報道指出有些疾病與種族遺傳有關(guān)，進(jìn)而闡明疾病臨床表型多樣性的本質(zhì)，為臨床個體化治療提供一定依據(jù)，同時也為我國群體多態(tài)性研宄、人類學(xué)研宄、疾病相關(guān)性研宄等提供有價值的科學(xué)遺傳依據(jù)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]為了克服以上技術(shù)缺陷，本發(fā)明提供一種HLA-DQBI常規(guī)基因剔除動物模型的建立方法。
[0004]本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案為，一種HLA-DQBI常規(guī)基因剔除實驗小鼠模型的建立方法，包括以下步驟:
[0005](I)通過對129/SV種系小鼠進(jìn)行基因型鑒定；
[0006](2)應(yīng)用PCR和Southern-bloting對提取的DNA進(jìn)行測序和篩選，確定實驗小鼠；
[0007](3)采用Neo Cassette基因替換與ES細(xì)胞基因剔除技術(shù)結(jié)合進(jìn)行目的常規(guī)基因剔除；
[0008](4)構(gòu)建HLA-DQBI基因剔除小鼠模型。
[0009]所述129/SV種系小鼠是在所有小鼠飼養(yǎng)于下述SPF環(huán)境中，室內(nèi)溫度控制在22°C?26°C，濕度50%?65%，光照控制12h明/12h暗；小鼠籠盒、墊料、飲用水均經(jīng)高溫高壓滅菌處理；飼料為經(jīng)印Co輻照滅菌的全營養(yǎng)飼料。飼養(yǎng)過程中，每天進(jìn)入動物房I次，觀察小鼠生長情況并記錄小鼠的質(zhì)量變化情況；每周更換兩次墊料并補充食物和水。采用H2-ebl+/_雄性小鼠與雌性小鼠按1:1比例間歇同籠兄妹近親繁殖方法繁殖，連續(xù)生產(chǎn)3-4胎，子鼠3周后離乳，離乳后種鼠亦同籠交配，H2-ebl基因剔除小鼠采用純合子交配繁殖。
[0010]所述常規(guī)基因剔除是通過基因打靶，把需要剔除的基因的幾個重要的外顯子或者功能區(qū)域用Neo Cassette替換掉，這樣的小鼠其全身所有的組織和細(xì)胞中都不表達(dá)該基因產(chǎn)物。此類基因剔除鼠一般用于研宄某個基因在對小鼠全身生理病理的影響，而且這個基因沒有胚胎致死性。
[0011]本發(fā)明所帶來的的有益效果是:本發(fā)明在研宄疾病發(fā)病機制中主要是應(yīng)用基因剔除技術(shù)，HLA-DQBl位于人類白細(xì)胞抗原(human lymphocyte antigen，HLA) II類基因DQ座位點，屬于經(jīng)典的HLAII類基因范疇，具基因多態(tài)性，與抗原處理和提呈有關(guān)。研宄發(fā)現(xiàn)，HLA-DQBl與變應(yīng)性鼻炎、支氣管哮喘、精神分裂癥、擴(kuò)張型心肌病、多發(fā)性硬化癥、孕婦反復(fù)流產(chǎn)、慢性乙型肝炎、肺結(jié)核等免疫性疾病及宮頸癌等惡性腫瘤相關(guān)，具體機制仍未闡明，因而構(gòu)建HLA-DQB1，不僅為闡明AR發(fā)病機制、同時也為相關(guān)疾病發(fā)病機制的闡明提供了良好的途徑。
【具體實施方式】
[0012]—種HLA-DQBI常規(guī)基因剔除實驗小鼠模型的建立方法，包括以下步驟:
[0013](I)通過對129/SV種系小鼠進(jìn)行基因型鑒定；
[0014](2)應(yīng)用PCR和Southern-bloting對提取的DNA進(jìn)行測序和篩選，確定實驗小鼠；
[0015](3)采用Neo Cassette基因替換與ES細(xì)胞基因剔除技術(shù)結(jié)合進(jìn)行目的常規(guī)基因剔除；
[0016](4)構(gòu)建HLA-DQBI基因剔除小鼠模型。
[0017]所述129/SV種系小鼠是在所有小鼠飼養(yǎng)于下述SPF環(huán)境中，室內(nèi)溫度控制在22°C?26°C，濕度50%?65%，光照控制12h明/12h暗；小鼠籠盒、墊料、飲用水均經(jīng)高溫高壓滅菌處理；飼料為經(jīng)印Co輻照滅菌的全營養(yǎng)飼料。飼養(yǎng)過程中，每天進(jìn)入動物房I次，觀察小鼠生長情況并記錄小鼠的質(zhì)量變化情況；每周更換兩次墊料并補充食物和水。采用H2-ebl+/_雄性小鼠與雌性小鼠按1:1比例間歇同籠兄妹近親繁殖方法繁殖，連續(xù)生產(chǎn)3-4胎，子鼠3周后離乳，離乳后種鼠亦同籠交配，H2-ebl基因剔除小鼠采用純合子交配繁殖。
[0018]所述常規(guī)基因剔除是通過基因打靶，把需要剔除的基因的幾個重要的外顯子或者功能區(qū)域用Neo Cassette替換掉，這樣的小鼠其全身所有的組織和細(xì)胞中都不表達(dá)該基因產(chǎn)物。此類基因剔除鼠一般用于研宄某個基因在對小鼠全身生理病理的影響，而且這個基因沒有胚胎致死性。
[0019]本發(fā)明在研宄疾病發(fā)病機制中主要是應(yīng)用基因剔除技術(shù)，HLA-DQBl位于人類白細(xì)胞抗原(human lymphocyte antigen，HLA) II類基因DQ座位點，屬于經(jīng)典的HLA II類基因范疇，具基因多態(tài)性，與抗原處理和提呈有關(guān)。研宄發(fā)現(xiàn)，HLA-DQBl與變應(yīng)性鼻炎、支氣管哮喘、精神分裂癥、擴(kuò)張型心肌病、多發(fā)性硬化癥、孕婦反復(fù)流產(chǎn)、慢性乙型肝炎、肺結(jié)核等免疫性疾病及宮頸癌等惡性腫瘤相關(guān)，具體機制仍未闡明，因而構(gòu)建HLA-DQBl，不僅為闡明AR發(fā)病機制、同時也為相關(guān)疾病發(fā)病機制的闡明提供了良好的途徑。
[0020]本發(fā)明不局限于上述實施方式，任何人應(yīng)得知在本發(fā)明啟示下做出的結(jié)構(gòu)變化所得出的相同或相近的技術(shù)方案，均落入本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
[0021]本發(fā)明未詳細(xì)描述的技術(shù)、形狀、構(gòu)造部分均為公知技術(shù)。
【主權(quán)項】
1.一種HLA-DQBI常規(guī)基因剔除實驗小鼠模型的建立方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)通過對129/SV種系小鼠進(jìn)行基因型鑒定； (2)應(yīng)用PCR和Southern-bloting對提取的DNA進(jìn)行測序和篩選，確定實驗小鼠； (3)采用NeoCassette基因替換與ES細(xì)胞基因剔除技術(shù)結(jié)合進(jìn)行目的常規(guī)基因剔除； (4)構(gòu)建HLA-DQBI基因剔除小鼠模型。
2.如權(quán)利要求1所述的HLA-DQBI常規(guī)基因剔除實驗小鼠模型的建立方法，其特征在于，所述129/SV種系小鼠是在所有小鼠飼養(yǎng)于下述SPF環(huán)境中，室內(nèi)溫度控制在22°C?26°C，濕度50%?65%，光照控制12h明/12h暗；小鼠籠盒、墊料、飲用水均經(jīng)高溫高壓滅菌處理；飼料為經(jīng)印Co輻照滅菌的全營養(yǎng)飼料；飼養(yǎng)過程中，每天進(jìn)入動物房I次，觀察小鼠生長情況并記錄小鼠的質(zhì)量變化情況；每周更換兩次墊料并補充食物和水；采用H2-ebl+/_雄性小鼠與雌性小鼠按1:1比例間歇同籠兄妹近親繁殖方法繁殖，連續(xù)生產(chǎn)3-4胎，子鼠3周后離乳，離乳后種鼠亦同籠交配。
3.如權(quán)利要求1所述的HLA-DQBI常規(guī)基因剔除實驗小鼠模型的建立方法，其特征在于，所述常規(guī)基因剔除是通過基因打靶，把需要剔除的基因的幾個重要的外顯子或者功能區(qū)域用Neo Cassette替換掉，這樣的小鼠其全身所有的組織和細(xì)胞中都不表達(dá)該基因產(chǎn)物。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種HLA-DQBI常規(guī)基因剔除實驗小鼠模型的建立方法，包括以下步驟：(1)通過對129/SV種系小鼠進(jìn)行基因型鑒定；(2)應(yīng)用PCR和Southern-bloting對提取的DNA進(jìn)行測序和篩選，確定實驗小鼠；(3)采用Neo？Cassette基因替換與ES細(xì)胞基因剔除技術(shù)結(jié)合進(jìn)行目的常規(guī)基因剔除；(4)構(gòu)建HLA-DQBI基因剔除小鼠模型。本發(fā)明所帶來的有益效果是：不僅為闡明AR發(fā)病機制、同時也為相關(guān)疾病發(fā)病機制的闡明提供了良好的途徑。
【IPC分類】A01K67-027, C12N15-873
【公開號】CN104561100
【申請?zhí)枴緾N201410811894
【發(fā)明人】張華 , 李林格, 呂靚
【申請人】張華 , 李林格, 呂靚
【公開日】2015年4月29日
【申請日】2014年12月24日