專利名稱：：一種用磁珠分離基因組dna試劑盒及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：—種應(yīng)用磁珠從樣品中提取基因組DNA的試劑盒，屬于生物
技術(shù)領(lǐng)域：
，涉及試劑盒的組成及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：生命是由基因組決定的。絕大部分基因組，包括所有的細(xì)胞生命形式的基因組，都是由DNA組成。因此為了進(jìn)行測(cè)序、雜交和基因的表達(dá)，獲得高分子量和高純度的DNA是非常重要的前提，DNA的提取也就成為分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)最重要、最基本的操作之一。在真核生物中，95%的基因組DNA存在于細(xì)胞核中，5%分布在線粒體和葉綠體等細(xì)胞器中。植物組織中絕大部分是核DNA，它和組蛋白、非組蛋白結(jié)合在一起，以核蛋白(即染色質(zhì)或染色體)的形式存在于細(xì)胞核內(nèi)。DNA提取的方法通常要滿足以下幾個(gè)條件1)保證DNA結(jié)構(gòu)的完整性；2)純化后不應(yīng)存在對(duì)酶有抑制作用的物質(zhì)；3)排除有機(jī)溶劑和金屬離子的污染；4)蛋白質(zhì)、多糖、脂類等雜質(zhì)的含量降到最低程度；5)排除RNA分子的污染；6)提取方法要簡(jiǎn)便、省時(shí)、費(fèi)用低，盡可能的避免使用危險(xiǎn)的化學(xué)試劑?；蚪MDNA提取主要分為三大步，第一是細(xì)胞裂解，使細(xì)胞質(zhì)膜和核膜破碎，讓基因組DNA和其它核酸分子及其它生物大分子尤其是蛋白質(zhì)解離而游離出來(lái)；第二步是去除與DNA結(jié)合的蛋白質(zhì)、多糖及脂類等生物大分子，去除其它不需要的核酸分子；第三步是基因組DNA的富集，將游離在液相中的核酸選擇性分配、沉淀或吸附純化。目前用于細(xì)胞裂解的方式主要有機(jī)械作用、化學(xué)作用和酶作用。1)機(jī)械作用包括低滲裂解、超聲裂解、微波裂解、凍融裂解和顆粒破碎等物理裂解方法。這些方法用機(jī)械力使細(xì)胞破碎，但機(jī)械力也可引起核酸鏈的斷裂，因而不適于高分子量長(zhǎng)鏈核酸的分離。2)化學(xué)作用在一定的PH環(huán)境和變性條件下，細(xì)胞破裂，蛋白質(zhì)變性沉淀，核酸被釋放到水相。上述變性條件可通過(guò)加熱、加入表面活性劑(SDS、TritonX2100、Tween20、NP240、CTAB、sar2cosyl、Chelex2100等)或強(qiáng)離子劑(異硫氰酸胍、鹽酸胍、肌酸胍)而獲得。目前基因組DNA提取試劑盒主要用CTAB法、SDS法和異硫氰酸胍裂解。3)酶作用主要是通過(guò)加入溶菌酶或蛋白酶(蛋白酶K、植物蛋白酶或鏈酶蛋白酶)以使細(xì)胞破裂，核酸釋放?；蚪MDNA的分離與純化的常規(guī)方法主要有1)酚抽提/沉淀法將細(xì)胞裂解后，多次苯酚氯仿等有機(jī)溶劑抽提使蛋白質(zhì)變性沉淀于有機(jī)相，而核酸保留在水相，達(dá)到分離核酸的目的，加入RNA酶除去核酸中的RNA，然后加入異丙醇或乙醇等沉淀DNA，用70%乙醇漂洗沉淀，除去分離過(guò)程中殘留的有機(jī)溶劑和鹽離子，最后用TE溶解DNA備用。2)密度梯度離心法雙鏈DNA、單鏈DNA、RNA與蛋白質(zhì)具有不同的密度，因而可以通過(guò)密度離心形成不同密度的純樣品區(qū)帶，該方法適用大量核酸樣本的制備。3)層析法層析法是利用不同物質(zhì)一些理化性質(zhì)的差異而建立起來(lái)的分離分析方法，包括吸附層析、親和層析、離子交換層析等方法。在一定的條件下，核酸可以被選擇性地吸附到硅土、硅膠或玻璃表面而與其它生物分子分離，結(jié)合到固相載體的核酸可以用低鹽緩沖液或水洗脫下來(lái)。磁珠是指那些直徑在幾十納米到數(shù)微米，在磁場(chǎng)下表現(xiàn)出磁性，由無(wú)機(jī)/有機(jī)或無(wú)機(jī)/無(wú)機(jī)材料組成的外形多呈現(xiàn)為球狀的復(fù)合粒子，用于生物分離的磁珠表面修飾活性功能基團(tuán)。磁珠法提取基因組DNA是近幾年才發(fā)展起來(lái)的核酸提取方法。其提取方法不需要苯酚和氯仿等毒性大的有機(jī)溶劑，提取的基因組DNA純度高、產(chǎn)量高。提取步驟簡(jiǎn)單省時(shí)，不需要離心，不僅可以滿足從小量到大量不同提取規(guī)模的要求，還能夠選擇手動(dòng)或者自動(dòng)化操作，使分離技術(shù)取得了巨大的進(jìn)步。在磁珠合成過(guò)程中，通過(guò)共聚合和表面修飾等引入活性基團(tuán)，這些活性基團(tuán)有-C00H，-NH2，-OH，-COH，-SH，_S03等，利用磁珠表面的這些功能基團(tuán)和具有生物活性分子，如單克隆抗體，鏈霉親和素，凝集素、酶以及寡聚核苷酸等，以共價(jià)鍵的形式偶聯(lián)在磁珠的表面，制備成帶有磁性的親和吸附劑。然后將這些具有磁性的親和吸附劑與生物樣品共同孵育后，目標(biāo)分子能夠迅速被磁珠捕獲，可以在磁場(chǎng)作用下從液相中沉降下來(lái)，經(jīng)過(guò)簡(jiǎn)單的洗滌，從而分離得到表面結(jié)合有目標(biāo)分子的磁珠復(fù)合物，通過(guò)改變洗滌條件可以將目標(biāo)分子從磁珠上洗脫下來(lái)。目前用于基因組DNA提取磁珠的種類根據(jù)殼層分子的功能基團(tuán)而分為以下幾種1)表面修飾-C00H的磁珠。2)表面修飾_NH2的磁珠。3)表面修飾Si02的磁珠。4)表面修飾親和分子的磁珠。5)表面未做修飾的裸Fe304納米粒子。目前國(guó)內(nèi)外開(kāi)發(fā)了多種商品化的DNA提取純化試劑盒，其分離原理有的利用核酸的分子量差異，有的利用特異性膜與DNA結(jié)合達(dá)到分離、回收的目的。著名的國(guó)外的試劑盒生產(chǎn)廠家有Sigma，Promega、Invitrogen、TaKaRa、Whatman等，它們針對(duì)不同來(lái)源的材料如微生物、動(dòng)物體液、血液和組織、植物、加工產(chǎn)品、轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品等開(kāi)發(fā)出一系列的試劑盒，這些試劑盒針對(duì)不同的材料來(lái)源設(shè)計(jì)了不同的提取方法，操作簡(jiǎn)單、高效，DNA質(zhì)量較高，但價(jià)格昂貴。因此市場(chǎng)上需要開(kāi)發(fā)一些操作簡(jiǎn)單、成本低、提取的DNA質(zhì)量好、產(chǎn)量高的基因組DNA提取試劑盒。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種基因組DNA提取試劑盒，該試劑盒制備過(guò)程簡(jiǎn)單，成本低，易于質(zhì)量控制，產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，可用于各種樣品基因組DNA提取。包括1)具有磁力并可分離磁珠的磁架。2)表面修飾配基的磁珠。3)用于提取基因組DNA的試劑。4)試劑盒說(shuō)明書(shū)。本發(fā)明的另一目的在于提供一種磁珠制備方法。包括1)制備直徑lOnm-10iim的磁球通過(guò)共沉淀的方法合成均一、超順磁性、單發(fā)散性的磁珠。2)磁球包被配基本發(fā)明的另一目的在于提供一種應(yīng)用磁珠提取基因組DNA的方法。包括以下步驟1)樣品研磨和細(xì)胞裂解將樣品在液氮中充分研磨，將研磨好的樣品加入離心管中，再加入細(xì)胞裂解液裂解細(xì)胞，以釋放核酸。2)基因組DNA吸附向溶液中加入修飾的磁珠，并加入結(jié)合液，基因組DNA被磁珠表面吸附。RNA、蛋白質(zhì)、多糖及脂類等物質(zhì)則不被吸附。將離心管置于磁架上，磁珠將完全吸附在離心管壁。3)去除雜質(zhì)加入漂洗液，對(duì)表面吸附有核酸并附著于離心管壁的磁珠進(jìn)行洗滌，將磁珠表面的雜質(zhì)洗去。4)基因DNA洗脫回收吸附在磁珠表面的基因組DNA可以直接作為PCR反應(yīng)的模板，即直接把含有磁珠的液體加到PCR反應(yīng)液中。也可以加入洗脫液或者ddH20，使吸附在磁珠表面的基因組DNA分子解吸，進(jìn)入洗脫液中，用于后續(xù)的其它分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。所述磁架帶有磁場(chǎng)，是用于采用磁珠分離基因組DNA吸附磁珠。所述制備磁球的材料一般用硫酸鐵銨((NH4)Fe(S04)2)和七水合硫酸亞鐵((NH山Fe(S0山)，其中Fe2+和Fe3+的濃度比為1:2-1:4，優(yōu)選1:2。制備磁球時(shí)，通氨水的時(shí)間20-40分鐘，優(yōu)選30分鐘，溫度保持在40-60度，優(yōu)選50度。所述磁球表面修飾Si02。以硅酸鈉為修飾材料，其中1克磁球需要硅酸鈉5-13克，優(yōu)選10克。所述組織包括動(dòng)物、植物、細(xì)菌、真菌、血液、病毒、法醫(yī)學(xué)樣品等。所述細(xì)胞裂解液為含表面活性劑的溶液，優(yōu)選含0.1-10%SDS、TritonX_100、Tween20、NP240、1_2%CTAB等。根據(jù)實(shí)驗(yàn)者材料不同，本發(fā)明配制了幾種不同的細(xì)胞裂解液供實(shí)驗(yàn)者選擇。所述結(jié)合液為一種鹽溶液。所述漂洗液是兩種，一種是去蛋白的溶液，一種是去雜質(zhì)的溶液，都含有40%-70%乙醇。所述洗脫液為10mmol/LTris-Cl禾PlmMEDTA，pH8.0的溶液。所述提取的基因組DNA用于后續(xù)的實(shí)驗(yàn)包括PCR擴(kuò)增、基因克隆、基因組文庫(kù)構(gòu)建、測(cè)序、分子雜交和分子標(biāo)記等。本發(fā)明運(yùn)用硫酸鐵銨((NH4)Fe(S04)2)和七水合硫酸亞鐵((NH4)2Fe(S04)2)，通過(guò)共沉淀的方法合成的磁珠，通過(guò)表面修飾可以引入不同的活性基團(tuán)。因?yàn)橐肓瞬煌幕钚曰鶊F(tuán)，磁珠可以應(yīng)用于細(xì)胞和微生物的分離和鑒定、蛋白質(zhì)純化、核酸富集等。本發(fā)明修飾了Si02的磁珠可以把基因組DNA吸附在表面，蛋白質(zhì)、多糖及脂類等其它雜質(zhì)不被吸附。用漂洗液將其它雜質(zhì)沖洗掉，吸附在磁珠表面的基因組DNA可以直接作為PCR反應(yīng)的模板，也可以加入洗脫液或ddH20，將吸附在磁珠表面的基因組DNA洗脫并用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)為實(shí)驗(yàn)者提供了一種基因組DNA快速提取試劑盒。本試劑盒可以貯存在4度，也可以在室溫放置，便于運(yùn)輸。運(yùn)用此試劑盒提供的試劑和方法提取的基因組DNA，產(chǎn)量高，純度高，不需要使用苯酚和氯仿等毒性大的有機(jī)溶劑，安全性好，操作簡(jiǎn)單、快速，省時(shí)，同時(shí)可以提取多個(gè)樣品，易于實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化。本發(fā)明含有幾種裂解液供實(shí)驗(yàn)者選擇，可以從多種材料中分離基因組DNA，包括動(dòng)物、植物、細(xì)菌、真菌、血液、病毒、動(dòng)物源飼料、法醫(yī)學(xué)樣品等。所獲得的基因組DNA可以用于PCR擴(kuò)增、基因克隆、基因組文庫(kù)構(gòu)建、測(cè)序、分子雜交和分子標(biāo)記等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。圖1為本發(fā)明的磁珠顯微圖。圖2(a)為磁架。1為底座，2為離心管孔，3為磁場(chǎng)區(qū)。圖2(b)為磁架。4為固定裝置。圖3為楊樹(shù)葉片基因組DNA電泳圖，1_10為基因組DNA，M為Marker。圖4為楊樹(shù)葉片基因組DNA酶切電泳圖，1-10為酶切的基因組DNA，M為Marker。圖5為小鼠基因組DNA電泳圖，1-10為基因組DNA，M為Marker。圖6(a)為小鼠13-actin基因熒光定量檢測(cè)擴(kuò)增曲線結(jié)果。圖6(b)為小鼠5htia基因熒光定量檢測(cè)擴(kuò)增曲線結(jié)果。圖6(c)為小鼠e-actin基因熒光定量檢測(cè)熔解曲線結(jié)果。圖6(d)為小鼠5htia基因熒光定量檢測(cè)熔解曲線結(jié)果。圖7為不同磁珠試劑盒提取煙草葉片基因組DNA電泳圖。1和2為國(guó)內(nèi)某磁珠試劑盒提取的基因組DNA;3和4為國(guó)外某磁珠試劑盒提取的基因組DNA;5和6為本發(fā)明試劑盒提取的基因組DNA;M為Marker。圖8為不同磁珠試劑盒提取小鼠肌肉組織基因組DNA電泳圖。1和2為國(guó)內(nèi)某磁珠試劑盒提取的基因組DNA;3和4為國(guó)外某磁珠試劑盒提取的基因組DNA;5和6為本發(fā)明試劑盒提取的基因組DNA;M為Marker。具體實(shí)施例方式實(shí)施例1:用磁珠分離基因組DNA試劑盒制備本實(shí)施例包括以下步驟1)磁球的制備以硫酸鐵銨和硫酸亞鐵銨為材料合成均一、超順磁、單發(fā)散性多聚磁球。9.6g硫酸鐵銨，3.0g硫酸亞鐵銨分別溶解于25ml水和lml濃鹽酸中。將上述溶液裝入三口燒瓶，通氮?dú)猓?000rpm攪伴，并滴加26ml濃氨水，滴加時(shí)間大約30min，持續(xù)通氮，攪拌約一小時(shí)停止攪拌，反應(yīng)完畢，水洗幾次去掉微小顆粒。這個(gè)過(guò)程三口燒瓶溫度保持在50度左右。2)磁球修飾配基取一定量的磁流體于三口燒瓶中。按一定比例稱取硅酸鈉，溶解于約100mlddH20，并加入lml濃氨水，轉(zhuǎn)速約550rpm，開(kāi)始滴加硅酸鈉溶液，一個(gè)小時(shí)左右滴加完畢，然后向溶液中滴加0.5M鹽酸調(diào)pH到6，滴加時(shí)間約為30min，繼續(xù)攪拌一會(huì)，反應(yīng)完畢，用水洗去小顆粒。磁珠懸浮在中性溶液或dc^O里(參見(jiàn)圖1)。3)磁架的設(shè)計(jì)及制造，磁架是用AUTOCAD軟件設(shè)計(jì)并由專門(mén)的工廠生產(chǎn)(參見(jiàn)圖2)。4)配制用于基因組DNA提取的試劑，包括裂解液(100mMTris-C1，1.4MNaCl，50mMEDTA，2%CTAB(動(dòng)物和細(xì)菌等為10%SDS)pH8.0)，結(jié)合液(3MNaAcpH5.2)，洗液A(100mMTris-Cl，0.5MNaCl，lmMEDTA.pH8.040%乙醇)，漂洗液B(25mMTris-Cl(8.0)，1MNaClpH8.070%乙醇)，洗脫液(1Ommol/LTris-Cl和lmMEDTA，pH8.0)。5)分裝，根據(jù)提取基因組的數(shù)量需要磁珠和試劑的量和提取的材料來(lái)分裝磁珠和試劑。6)每個(gè)試劑盒附說(shuō)明書(shū)一份。由圖1可以看出，包被了Si02磁珠微粒細(xì)小、均勻。圖2為磁架，設(shè)計(jì)合理，使用方便，可以固定在其它設(shè)備上使用。另外本發(fā)明提供包含磁架的試劑盒和不包含磁架的試劑盒供實(shí)驗(yàn)者選擇，以節(jié)省實(shí)驗(yàn)者的費(fèi)用。實(shí)施例2:應(yīng)用本試劑盒分離楊樹(shù)葉片基因組DNA及DNA酶切檢測(cè)利用實(shí)施例1所述試劑盒分離楊樹(shù)葉片基因組DNA并進(jìn)行酶切實(shí)驗(yàn)檢測(cè)。本實(shí)例包括以下步驟1)基因組DNA提?、偃?0mg植物組織，液氮研磨。②加入450y1細(xì)胞裂解液，65。C水浴30min。③加入300y1結(jié)合液，溫和混勻，12000rpm離心去沉淀。加入50y1磁珠，溫和混勻，保持磁珠懸浮5min。⑤將離心管置于磁架上，去除液體。⑥加入800iU洗液A，溫和混勻，將離心管置于磁架上，去除液體。⑦加入800iU洗液A，溫和混勻，將離心管置于磁架上，去除液體。⑧室溫晾干約10min。⑨加入100iU洗脫液，溫和混勻，保持磁珠懸浮5min。把離心管置于磁架上，靜置2min，小心將液體吸入一新的離心管中，此即為所提取的基因組DNA。⑩利用瓊脂糖凝膠電泳對(duì)所提基因組DNA進(jìn)行檢測(cè)(參見(jiàn)圖3)。2)酶切取上述楊樹(shù)葉基因組DNA用限制性內(nèi)切酶Pstl和Msel進(jìn)行酶切，限制性酶切體系如下基因組DNA4iUlOXReactionbuffer2.5u1Pstl1u1MseI1U110XBSA2ill水9.5U1總體積20ill混勻，37度酶切3小時(shí)，用瓊脂糖凝膠電泳對(duì)所切基因組DNA檢測(cè)(參見(jiàn)圖4)。由圖3和圖4所示，運(yùn)用本發(fā)明的試劑盒分離植物基因組DNA，濃度大，純度高，雙酶切3小時(shí)后，DNA帶型彌散，說(shuō)明酶切非常完全，實(shí)驗(yàn)重復(fù)性好，保證了后續(xù)實(shí)驗(yàn)的成功性和穩(wěn)定性。實(shí)施例3利用本試劑盒分離小鼠肌肉組織DNA并進(jìn)行熒光定量PCR檢測(cè)利用實(shí)施例1所述試劑盒分離小鼠肌肉組織基因組DNA并進(jìn)行熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)檢測(cè)。本實(shí)例包括以下步驟1)基因組DNA提?、偃?0mg小鼠肌肉組織，液氮研磨。②加入450y1細(xì)胞裂解液，10ii1蛋白酶K(20mg/ml)，10ii1RNaseA，58。C水浴30min。③加入300ii1結(jié)合液，溫和混勻，12000rpm離心去沉淀。加入50y1磁珠，溫和混勻，保持磁珠懸浮5min。⑤將離心管置于磁架上，去除液體。加入800iU洗液A，溫和混勻，將離心管置于磁架上，去除液體。⑦加入800iil洗液A，溫和混勻，將離心管置于磁架上，去除液體。⑧室溫晾干約10min。⑨加入100iil洗脫液，溫和混勻，保持磁珠懸浮5min。放入磁架，靜置2min，小心將液體吸入一新的離心管中，此即為所提取的基因組DNA。⑩瓊脂糖凝膠電泳對(duì)所提基因組DNA進(jìn)行檢測(cè)(參見(jiàn)圖5)。2)熒光定量檢測(cè)取上述小鼠肌肉組織基因組DNA，用ABI公司的7700PCR儀對(duì)小鼠5htia基因進(jìn)行熒光定量檢測(cè)，利用小鼠P-actin基因作為校正。結(jié)果如表l。引物P-actin引物序列P-actinF5'ATCATGTTTGAGACCTTCAACA3'P-actinR5，CATCTCTTGCTCGAAGTCCA3'5htia引物序列5-HTIAF:5'AACAAGTGGACTCTGGGTC3'5-HTIAR:5'TGGAGATGAGAAAGCCAATG3'PCR擴(kuò)增體系因?yàn)镈NA濃度較高，分別把上述基因組DNA稀釋20倍，取1做作為PCR擴(kuò)增模板。ddH2017.5illTaqPCRBuffer2ii1d證Mixture2ii1Taq0.5U1PrimerF1li1PrimerRlulDNA1ii1Total25u1PCR擴(kuò)增條件P-actin擴(kuò)增條件i.94。C預(yù)變性2minii.94。C變性30seciii.63。C退火30seciv.72。C延伸30sec35循環(huán)5htia擴(kuò)增條件退火溫度為57。C，其它條件同上。表1小鼠5htia基因和P-actin基因擴(kuò)增CT值和濃度<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>由圖5所示，運(yùn)用本發(fā)明的試劑盒分離動(dòng)物基因組DNA，濃度和純度高。由圖6(a)、(b)、(c)、和(d)可以看出，運(yùn)用本發(fā)明試劑盒提取的基因組DNA進(jìn)行熒光定量PCR檢測(cè)，13-actin擴(kuò)增范圍非常穩(wěn)定，5htia基因擴(kuò)增有一定的規(guī)律，其擴(kuò)增曲線和熔解曲線圖非常漂亮，熔解曲線呈現(xiàn)單峰，擴(kuò)增特異，說(shuō)明DNA純度高。運(yùn)用本試劑盒可以同時(shí)提取多個(gè)樣品的基因組DNA，實(shí)驗(yàn)重復(fù)性好，即使是不同的人不同的時(shí)間操做，也能得到一致的結(jié)果，從而保證了后續(xù)實(shí)驗(yàn)的成功性和穩(wěn)定性，避免了人工操做引起的差異和錯(cuò)誤。實(shí)施例4本發(fā)明的試劑盒與市場(chǎng)上已有的磁珠法基因組DNA提取試劑盒分離動(dòng)物和植物基因組DNA的比較。利用實(shí)施例1所述試劑盒，根據(jù)實(shí)施例2和實(shí)施例3所述方法，與市場(chǎng)上已有磁珠法分離基因組DNA試劑盒分別進(jìn)行了動(dòng)物(小鼠肌肉)和植物(煙草葉片)基因組DNA提取比較實(shí)驗(yàn)，所用對(duì)比試劑盒分別為國(guó)外某磁珠提取DNA試劑盒，國(guó)內(nèi)某磁珠提取基因組DNA試劑盒，每個(gè)實(shí)驗(yàn)兩個(gè)重復(fù)。所提取的基因組DNA進(jìn)行了紫外分光光度計(jì)和瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)(參見(jiàn)圖7，圖8)。紫外分光光度檢測(cè)如表2和表3:表2植物基因組DNA紫外分光光度檢測(cè)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>表3動(dòng)物基因組DNA紫外分光光度檢測(cè)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>由圖7、圖8和表2表3可以看出，本發(fā)明提取基因組DNA與國(guó)外某磁珠試劑盒提取的基因組DNA濃度和得率及純度沒(méi)有明顯區(qū)別，在得率和濃度上都比國(guó)內(nèi)某磁珠試劑盒提取的基因組DNA高。但是本發(fā)明成本低，在價(jià)格上要比國(guó)外的磁珠試劑盒便宜許多。權(quán)利要求一種用磁珠分離基因組DNA試劑盒及其應(yīng)用，其技術(shù)體系包括(1)磁球的制備；(2)磁球配基修飾；(3)磁架的設(shè)計(jì)及制造；(4)基因組DNA提取試劑；(5)基因組DNA提取的方法。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述，其特征在于，它是一種用磁珠分離基因組DNA的試劑盒。3.根據(jù)權(quán)利要求l所述，其特征在于，用硫酸鐵銨((NH4)Fe(S04)2)利七水合硫酸亞鐵((NH4)2Fe(S04)2)為磁性材料，通過(guò)共沉淀的方法來(lái)合成磁球。其中，硫酸鐵銨和七水合硫酸亞鐵的用量分別為9.6克和3.0克，合成過(guò)程中溫度保持在50度，通氨水的時(shí)間是30分鐘，其間要通氮?dú)?，并且?000rpm轉(zhuǎn)速攪伴。反應(yīng)一小時(shí)后，磁球就合成了。合成的磁球可以修飾不同的配基，作為吸附和結(jié)合相應(yīng)分子的載體。4.根據(jù)權(quán)利要求1或權(quán)利要求3所述，其特征在于，磁球修飾配基，以硅酸鈉為材料修飾配基為SiOy用于吸附基因組DNA。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述，其特征在于，配有磁架，其作用為吸附磁珠。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述，其特征在于，基因組DNA提取試劑，包括裂解液(lOOmMTris-C1，1.4MNaCl，50mMEDTA，2%CTAB(動(dòng)物、細(xì)菌等為10%SDS)pH8.0)，結(jié)合液(3MNaAcpH5.2)，洗液A(lOOmMTris-Cl，O.5MNaCl，lmMEDTA.pH8.040%乙醇)，洗液B(25mMTris-Cl(8.0)，腦aClpH8.070%乙醇)，洗脫液(1Ommol/LTris-Cl和lmMEDTA，pH8.0)。所述試劑根據(jù)材料不同，裂解液不同。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述，其特征在于，基因組DNA提取的方法。所用方法根據(jù)材料不同，方法稍有調(diào)整，主要步驟包括細(xì)胞裂解、核酸吸附、雜質(zhì)去除和核酸洗脫。8.根據(jù)權(quán)利要求1或權(quán)利要求2所述用磁珠分離基因組DNA試劑盒，其特征在于可以從動(dòng)物、植物、細(xì)菌、真菌、血液、病毒、動(dòng)物源飼料、法醫(yī)學(xué)樣品等分離基因組DNA，所獲得的基因組DNA可以用于PCR擴(kuò)增、基因克隆、基因組文庫(kù)構(gòu)建、測(cè)序、分子雜交和分子標(biāo)記等實(shí)驗(yàn)。全文摘要本發(fā)明提供了一種用磁珠分離基因DNA試劑盒及其應(yīng)用。試劑盒包括磁珠、磁架、基因組DNA提取試劑(裂解液、結(jié)合液、漂洗液A和漂洗液B和洗脫液)及說(shuō)明書(shū)，基因組DNA提取主要步驟包括細(xì)胞裂解、核酸吸附、雜質(zhì)去除和核酸洗脫。應(yīng)用本試劑盒提取基因組DNA不需要使用苯酚和氯仿等毒性大的有機(jī)溶劑，安全性好，操作簡(jiǎn)單、快速，省時(shí)，同時(shí)可以提取多個(gè)樣品。本試劑盒可以從動(dòng)物、植物、細(xì)菌、真菌、血液、病毒、動(dòng)物源飼料、法醫(yī)學(xué)樣品等材料中提取基因組DNA，DNA得率高，純度高，所獲得的基因組DNA可以用于PCR擴(kuò)增、基因克隆、基因組文庫(kù)構(gòu)建、測(cè)序、分子雜交和分子標(biāo)記等實(shí)驗(yàn)。本試劑盒可以貯存在4度，也可以在室溫放置，便于運(yùn)輸。文檔編號(hào)C12N15/10GK101792757SQ20101013596公開(kāi)日2010年8月4日申請(qǐng)日期2010年3月30日優(yōu)先權(quán)日2010年3月30日發(fā)明者周衛(wèi)東申請(qǐng)人:上海鼎國(guó)生物技術(shù)有限公司