一種梅山豬或其肉制品的基因組分子鑒定試劑盒的制作方法
【技術領域】
[0001] 本實用新型涉及生物領域，特別涉及一種梅山豬或其肉制品的基因組分子鑒定試 劑盒。
【背景技術】
[0002] 梅山豬原產(chǎn)于太湖流域的上海市嘉定、寶山、松江等區(qū)縣和江蘇的昆山、太倉等市 縣，是太湖豬中的典型代表，有肉質(zhì)好、耐粗飼、抗病力強等優(yōu)良特性。嘉定區(qū)的梅山豬品種 其肌肉鮮嫩、肌纖維細而密，含水量較少，肌肉脂肪豐富，呈大理石狀，俗稱"五花肉"，風味 醇厚，細膩酥軟。隨著人們生活水平的提高，對畜禽產(chǎn)品的質(zhì)量要求越來越高，許多以追求 高產(chǎn)為目的培育的外三元等品種在國內(nèi)越來越不受歡迎，取而代之的是豬肉市場消費追求 多樣化、精細化、肉質(zhì)高品質(zhì)化。梅山豬因肉質(zhì)鮮美、香甜濃香而受到上海市民青睞，盡管價 格比較高卻供不應求，導致市場上極易出現(xiàn)假冒梅山豬肉或其品牌或以次充好、以假亂真 的銷售行為。但目前尚沒有鑒定梅山豬肉或其肉制品的方法可以有效地保護正宗梅山豬肉 或其肉制品的質(zhì)量品質(zhì)和品牌形象。
[0003] 目前，制定了以活體豬為檢測對象的鑒別梅山豬的地方性標準方法，但是對梅山 豬宰殺后分割肉或其他肉制品就不能使用地方標準方法進行鑒定了。而傳統(tǒng)的鑒別方法則 通過測定豬胴體和肉質(zhì)特征來評價生鮮肉或其肉制品品質(zhì)，包括瘦肉率、嫩度、pH值、肉色 等區(qū)別肉品質(zhì)好壞。但由于飼養(yǎng)條件和豬個體存在差異，且對測試豬生長日齡和取樣部位 有具體要求，使得檢測人員的工作十分不便并且使檢測結(jié)果容易發(fā)生較大的誤差，導致檢 測結(jié)果缺乏重復性和準確性。此外，由于肉質(zhì)指標大多沒有統(tǒng)一的數(shù)值范圍，個體差異也比 較明顯，因此肉質(zhì)指標也不能作為鑒定梅山豬的依據(jù)。目前，豬全基因組測序技術雖然可以 鑒別不同品種、甚至不同個體的豬，但需要檢測的基因數(shù)目很多，成本大，不可能在實際日 常商業(yè)活動中推廣。而若只檢測不同品種豬個別基因，則不能區(qū)分轉(zhuǎn)基因豬肉制品和純種 豬肉制品。
[0004] DNA分子標記是基于基因組DNA序列豐富的多態(tài)性發(fā)展而來的一種遺傳標記，可 直接反映DNA水平上的差異，具有其它遺傳標記所不具有的優(yōu)點，如變異穩(wěn)定豐富、信息量 大、受環(huán)境因素影響小、不受取材部位、發(fā)育時期限制、可隨時檢測、操作方便等，故可以用 于動植物等品種鑒定、遺傳育種等領域，近年來得到了迅速的發(fā)展。ISSR是Zietkiewicz 等于1994創(chuàng)建的一類在PCR反應基礎上的DNA分子標記技術，它是根據(jù)基因組內(nèi)廣泛存在 的微衛(wèi)星序列設計的單一引物對基因組進行擴增的標記系統(tǒng)，它對兩個序列相同但方向相 反的簡單重復序列（SSR)之間的區(qū)域進行擴增。ISSR技術和PCR技術聯(lián)合使用具有很高 的特異性和靈敏度且準確快速，近年來在品種鑒定、種質(zhì)資源和遺傳多樣性研宄中得到了 廣泛應用：申請?zhí)枮?01310209120. 8的發(fā)明專利公開了利用ISSR分子標記技術鑒別四川 白鵝真?zhèn)蔚姆椒?。其中共用?個ISSR標記，形成了 11個鵝品種（系）DNA用三個遺傳 標記分別PCR擴增后的標準電泳圖譜，用于鑒別被鑒定的鵝群是否是真正的四川白鵝。中 國專利CN103484555A(公開日2014. 01. 01)公開了利用ISSR分子標記法對甘薯品種真實 性進行鑒別的方法，成功構建的甘薯品種單一引物的ISSR指紋圖譜，使得甘薯品種真實性 的鑒定簡便、快捷、重復性和穩(wěn)定性好。中國專利CN102839219A(公開日2012. 12. 26)公 開了一種霍亂弧菌流行株分子鑒定方法或其ISSR-PCR引物及試劑盒，通過提供對霍亂弧 菌流行株具有特異性分子鑒定作用的1條ISSR-PCR引物來檢測某一分離獲得的霍亂弧菌 菌株基因組DNA，進而確定該霍亂弧菌菌株是否為流行株。中國專利CN101956016A(公開 日2011. 01. 26) -種適于水稻品種真實性鑒定的ISSR指紋圖譜構建方法，提供一種快速、 準確的水稻品種的ISSR指紋圖譜構建方法或其應用。中國專利CN103215365A(公開日 2013. 07. 24)公開了一種陸川豬或其肉制品的DNA分子鑒定方法，其中ISSR-PCR所用的引 物為麗14、麗12和麗29。最終繪制了 7張陸川豬或其肉制品的電泳圖譜，建立了陸川豬 或其肉制品的DNA指紋圖譜，可作為區(qū)分鑒定陸川豬或其肉制品的依據(jù)。
[0005] 但國內(nèi)外還未見利用分子鑒定方法鑒定梅山豬或其肉制品的方法，建立可以區(qū)分 梅山豬制品或其他品種豬肉制品的方法，以此來解決涉及梅山豬或其肉制品的假冒銷售糾 紛，從而有效保護梅山豬地方品種的市場地位和品牌形象。 【實用新型內(nèi)容】
[0006] 本實用新型要解決的技術問題是為了克服現(xiàn)有技術中梅山豬或其肉制品難以鑒 定且鑒定檢測方法過于繁瑣、難以大量推廣的缺陷，提供一種梅山豬或其肉制品的基因組 分子鑒定試劑盒以快速、簡便、大規(guī)模地鑒定梅山豬或其肉制品。
[0007] 本實用新型是通過下述技術方案來解決上述技術問題：
[0008] 一種梅山豬或其肉制品的基因組分子鑒定試劑盒，包括盒蓋、盒體、襯墊、裝有 ISSR-PCR反應混合物的容器、裝有特異性擴增梅山豬基因組的引物的容器、裝有陽性對照 純種梅山豬基因組DNA的容器和裝有水的容器，所述襯墊設置于所述盒體內(nèi)，所述襯墊上 設有容器孔，所述的裝有ISSR-PCR反應混合物的容器、所述裝有特異性擴增梅山豬基因組 的引物的容器、所述裝有陽性對照純種梅山豬基因組DNA的容器和所述裝有水的容器放置 于所述容器孔內(nèi)。
[0009] 較佳地，所述容器孔為4個，每個容器孔內(nèi)分別放置所述裝有ISSR-PCR反應混合 物的容器、所述裝有特異性擴增梅山豬基因組的引物的容器、所述裝有陽性對照的容器和 所述裝有水的容器；更佳地，所述的容器孔在所述襯墊上分成兩排平行排列。
[0010] 所述的容器為本領域常規(guī)的容器，較佳地為離心管，更佳地為1. 5mL離心管。
[0011] 所述的ISSR-PCR反應混合物為本領域常規(guī)的ISSR-PCR反應混合物；較佳地 包括可以實行ISSR-PCR反應的TaqDNA聚合酶和PCR緩沖液；更佳地，包括2XTaqPCR MasterMix，所述2XTaqPCRMasterMix包含TaqDNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反應緩沖液、 PCR反應的增強劑和優(yōu)化劑及穩(wěn)定劑。
[0012] 所述的引物為本領域常規(guī)的特異性擴增梅山豬基因組所用的引物；較佳地為利用 ISSR-PCR法特異性擴增梅山豬基因組所用的引物；更佳地，為梅山1，所述梅山1的序列為 ATGATGATGATGATGATGA〇
[0013] 所述的水為本領域常規(guī)的水；較佳的為去離子水；更佳地為無菌去離子水。
[0014] 較佳地，所述的基因組分子鑒定試劑盒還包括一份使用說明書，所述的使用說明 書記載利用ISSR-PCR反應鑒定梅山豬或其肉制品的操作步驟。更佳地，所述的操作步驟包 括：
[0015]1)、提取生鮮肉和/或肉制品的基因組DNA;
[0016]2)、以步驟1)所述的基因組DNA為模板，利用核苷酸序列如SEQIDNO. 1所示的 引物，進行PCR反應。
[0017] 最佳地，還包括以下的步驟：
[0018]3)、構建步驟2)所述的PCR反應的擴增片段的電泳圖譜；或
[0019] 4)、根據(jù)步驟3)所述的電泳圖譜，鑒定梅山豬的生鮮肉和/或肉制品。
[0020] 本實用新型的積極進步效果在于：1、本實用新型所述的梅山豬或其肉制品的基因 組分子鑒定試劑盒利用ISSR-PCR方法操作簡單快捷，能夠鑒定梅山豬或其肉制品并且將 梅山豬與其他品種豬肉的肉制品鑒定區(qū)分；2、所述試劑盒中含有純種梅山豬基因組DNA作 為陽性對照可將待測樣品的ISSR-PCR擴增結(jié)果電泳圖譜與陽性對照的電泳圖譜相比較， 結(jié)果更為可靠。故本實用新型所述的梅山豬或其肉制品的基因組分子鑒定試劑盒能夠快 速、簡便、大規(guī)模地鑒定梅山豬或其肉制品。
【附圖說明】
[0021] 圖1為本實用新型實施例1~2所述的梅山豬或其肉制品的基因組分子鑒定試劑 盒的結(jié)構示意圖，其中1為盒蓋；2為盒體；3為裝有ISSR-PCR反應混合物的容器、4為裝有 特異性擴增梅山豬基因組的引物的容器、5為裝有陽性對照純種梅山豬基因組DNA的容器、 6為裝有水的容器、7為襯墊。
【具體實施方式】
[0022] 下面舉較佳實施例，并結(jié)合附圖來更清楚完整地說明本實用新型。
[0023] 所述的常溫為本領域常規(guī)的室溫，較佳地為15~35°C。
[0024] 鑒定梅山豬或其肉制品的專用引物梅山1由英濰捷基（上海）貿(mào)易有限公司合 成，梅山 1 的序列為ATGATGATGATGATGATGA。
[0025] 梅山豬、梅杜二元雜豬樣品來源于上海市嘉定區(qū)梅山豬育