一種巖黃連總堿的質(zhì)量檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種巖黃連總堿的質(zhì)量檢測方法，該方法包括對該有效部位的薄層鑒別，水分、熾灼殘?jiān)⒅亟饘偌吧辂}的檢查，采用紫外分光光度法測定總生物堿含量以及采用高效液相色譜法同時(shí)測定去氫碎葉紫堇堿、脫氫甲卡維汀、藥根堿、脫氫卡維丁、鹽酸巴馬汀和鹽酸小檗堿的含量。該方法具有較強(qiáng)的專屬性和良好的重現(xiàn)性，能有效控制巖黃連總堿的質(zhì)量，確保產(chǎn)品的安全有效、質(zhì)量可控。
【專利說明】一種巖黃連總堿的質(zhì)量檢測方法
[0001]
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0002]本發(fā)明屬于中藥分析領(lǐng)域，涉及一種中藥有效部位的質(zhì)量檢測方法，具體涉及一種巖黃連總生物堿的質(zhì)量檢測方法。
【背景技術(shù)】[0003]巖黃連為S粟科植物石生黃堇Corydalis saxicola Bunting的全草,是齡、桂高寒山區(qū)珍貴的中草藥材。本品味苦、性涼，具清利濕熱，散瘀消腫功效。用于瘡癤腫毒，肝炎，肝硬化，肝癌。
[0004]迄今為止對巖黃連的化學(xué)成分的研究不多，報(bào)道的現(xiàn)已分離鑒定出的化合物主要是生物堿，尚未有其他類化合物的報(bào)道。1980年，柯珉珉最早對巖黃連的化學(xué)成分進(jìn)行研究，應(yīng)用PH梯度分離，在強(qiáng)堿性部位分得水溶性季銨堿類生物堿小檗堿(berberine)及脫氫卡維丁 (巖黃連堿，dehydrocavidine)。K.H.Janbaz等于2003年報(bào)道,水溶性季銨堿類化合物，如小檗堿，具有肝損傷保護(hù)作用。
[0005]巖黃連中主要有效成分是以脫氫卡維丁為代表的生物堿類化合物，而這類化合物具有潛在的抗HBV活性和肝保護(hù)活性。
[0006]經(jīng)檢索，目前關(guān)于巖黃連的專利主要集中在巖黃連生物堿的制備工藝上，沒有關(guān)于質(zhì)量控制的相關(guān)專利。中藥長期以來，質(zhì)量難以有效控制，有效控制中藥產(chǎn)品的質(zhì)量是一個重大的課題，現(xiàn)有技術(shù)中采用的方法不完整，少數(shù)針對性不強(qiáng)，使用這些方法難以達(dá)到真正控制質(zhì)量的目的。以上巖黃連總堿由于缺少系統(tǒng)的質(zhì)量控制方法，難以控制其質(zhì)量，以致正常的臨床用藥及療效無法保證。
[0007]目前有關(guān)巖黃連制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究中，上市品種巖黃連注射液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)是采用薄層色譜定性鑒別脫氫卡維丁和鹽酸小檗堿，采用高效液相色譜法測定脫氫卡維丁的含量。文獻(xiàn)報(bào)道的巖黃連片和巖黃連直腸栓都是采用的與巖黃連注射液同樣的方法建立的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。本發(fā)明針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，采用新的手段對巖黃連總堿的質(zhì)量進(jìn)行控制，特別是采用高效液相色譜法同時(shí)測定該藥物中多種成分的含量，解決了巖黃連總堿質(zhì)量控制的難題，本發(fā)明提供了一種實(shí)用的質(zhì)量控制方法。該方法提供了薄層鑒別，水分、熾灼殘?jiān)?、重金屬含量等檢查，紫外分光光度法測定藥物中巖黃連總堿和高效液相色譜法測定藥物中去氫碎葉紫堇堿、脫氫甲卡維汀、藥根堿、脫氫卡維丁、鹽酸巴馬汀、鹽酸小檗堿成分的含量等質(zhì)量控制方法，提高后的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)能更好地控制巖黃連總堿的質(zhì)量，本發(fā)明的質(zhì)量控制方法，具有較強(qiáng)的專屬性和良好的重現(xiàn)性，真正體現(xiàn)中藥安全有效、質(zhì)量可控。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008]本發(fā)明的目的在于提供一種巖黃連的質(zhì)量控制方法。為了達(dá)到這個目的，采用如下技術(shù)方案:[0009]一種巖黃連總堿的質(zhì)量檢測方法，該方法包括以下步驟:
[0010](I)以巖黃連為對照藥材，以脫氫卡維丁、鹽酸巴馬汀、鹽酸小檗堿為對照品，對巖黃連總堿進(jìn)行薄層鑒別；
[0011](2)對巖黃連總堿的水分、熾灼殘?jiān)?、重金屬及砷鹽進(jìn)行檢查；
[0012](3)采用紫外分光光度法測定巖黃連總堿中總生物堿的含量；
[0013](4)采用高效液相色譜法同時(shí)測定巖黃連總堿中去氫碎葉紫堇堿、脫氫甲卡維汀、藥根堿、脫氫卡維丁、鹽酸巴馬汀和鹽酸小檗堿的含量。
[0014]上述巖黃連總堿的質(zhì)量檢測方法，巖黃連總堿的薄層鑒別方法步驟為:
[0015]a.供試品溶液的制備:取本品10mg，加入25ml甲醇溶解，超聲處理30分鐘，濾過，濾液作為供試品溶液；
[0016]b.對照藥材溶液的制備:取巖黃連對照藥材0.1g,加5ml甲醇，超聲處理30分鐘，濾過,濾液作為對照藥材溶液；
[0017]c.對照品溶液的制備:取脫氫卡維丁、鹽酸巴馬汀、鹽酸小檗堿對照品，加甲醇制成每Iml含脫氫卡維丁 0.2mg、鹽酸巴馬汀0.2mg、鹽酸小檗堿0.1mg的混合液,作為混合對照品溶液；
[0018]d.薄層條件及結(jié)果:照中國藥典2010年版一部附錄VI B記載的薄層色譜法進(jìn)行試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各5 μ 1，點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以比例為9: 2: 5: 3的乙酸乙酯-二氯甲烷-甲醇-濃氨試液，及比例為7: I: 2的正丁醇-冰醋酸-水為展開劑，展開，取出，吹干，置波長為365nm紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對照品及對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
[0019]上述巖黃連總堿的質(zhì)量檢測方法，巖黃連總堿水分、熾灼殘?jiān)⒅亟饘偌吧辂}的檢查方法步驟為:
[0020]a.照中國藥典2010年版一部附錄IX H第一法記載的水分測定法對巖黃連總堿的水分進(jìn)行測定，巖黃連總堿中水分不得超過5.0% ；
[0021]b.照中國藥典2010年版一部附錄IX J記載的熾灼殘?jiān)鼫y定法對巖黃連總堿的熾灼殘?jiān)M(jìn)行測定，巖黃連總堿中熾灼殘?jiān)坏眠^2.0% ；
[0022]c.中國藥典2010年版一部附錄IX E第二法記載的重金屬檢查方法進(jìn)行測定，砷鹽的檢查按中國藥典2010年版一部附錄IX F記載的第一法古蔡氏法進(jìn)行測定，巖黃連總堿中重金屬不得過百萬分之十，砷鹽不得過百萬分之二。
[0023]上述巖黃連總堿的質(zhì)量檢測方法，紫外分光光度法測定巖黃連總堿中總生物堿的含量步驟為:
[0024]a.對照品溶液的制備取經(jīng)五氧化二磷干燥過夜的脫氫卡維丁對照品約10mg，精密稱定，置IOOml量瓶中，加1%鹽酸甲醇溶液至刻度，搖勻，作為貯備液，備用；
[0025]b.標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取對照品貯備液0.3ml, 0.4ml, 0.5ml, 0.6ml, 0.8ml，1.0ml，分別置IOml量瓶中，加入1%鹽酸甲醇溶液至刻度,搖勻；以1%鹽酸甲醇溶液為空白，照中國藥典2010年版一部附錄V A記載的紫外-可見分光光度法，在347nm波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；
[0026]c.供試品溶液的制備取本品約25mg，精密稱定，置50ml容量瓶中，加1%鹽酸甲醇溶液至刻度，作為樣品貯備液，備用；精密吸取樣品貯備液1.0ml置50ml量瓶中，加1%鹽酸甲醇溶液至刻度，搖勻，即得；
[0027]d.測定法:取供試品溶液，以1%鹽酸甲醇溶液為空白，依法測定吸收度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中脫氫卡維丁的量，計(jì)算，即得。本品含總生物堿以脫氫卡維丁C21H2304N 計(jì)，不得少于 50.0%。
[0028]上述巖黃連總堿的質(zhì)量檢測方法，高效液相色譜法同時(shí)測定巖黃連總堿中去氫碎葉紫堇堿、脫氫甲卡維汀、藥根堿、脫氫卡維丁、鹽酸巴馬汀和鹽酸小檗堿的含量步驟為:
[0029]a.色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)米用Hanbon 0DS-2C18,規(guī)格為250mmX4.6mm,5μπι的色譜柱，以比例為18.5: 81.5的乙腈-0.0lmol/L磷酸二氫鉀水溶液為流動相，柱溫30°C,檢測波長347nm,流速1.0ml/min,進(jìn)樣量10 μ I,采樣時(shí)間50min ；
[0030]b.對照品溶液的制備精密稱取去氫碎葉紫堇堿、脫氫甲卡維汀、藥根堿、脫氫卡維丁、鹽酸巴馬汀、鹽酸小檗堿適量，加甲醇分別制成單個標(biāo)準(zhǔn)品儲備液，分別精密取各儲備液適量，配制成混合標(biāo)準(zhǔn)品儲備液，以上6個化合物在混合標(biāo)準(zhǔn)品儲備液中的質(zhì)量濃度分別為 0.0238，0.0889，0.0134，0.098，0.06292，0.0174mg/mL ；
[0031]c.供試品溶液的制備供試品溶液制備取本品約25mg，精密稱定，置50ml量瓶中，加1%鹽酸甲醇至刻度，搖勻，過0.45 μ m直徑微孔濾膜，取續(xù)濾液，即得；
[0032]d.測定法:分別精密吸取對照品與供試品溶液各10 μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得，本品含去氫碎葉紫堇堿、脫氫甲卡維汀、藥根堿、脫氫卡維汀、鹽酸巴馬汀、鹽酸小檗堿總量不得少于32.0%。
[0033]有益效果:
[0034]本發(fā)明對巖黃連總堿提出了質(zhì)量控制方法，該方法提供了鑒別、檢查、紫外分光光度法和高效液相色譜法同時(shí)測定藥物中巖黃連總堿及去氫碎葉紫堇堿、脫氫甲卡維汀、藥根堿、脫氫卡維丁、鹽酸巴馬汀、鹽酸小檗堿的含量，提高后的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)能更好地控制巖黃連的質(zhì)量，本發(fā)明的質(zhì)量控制方法，具有較強(qiáng)的專屬性和良好的重現(xiàn)性，真正體現(xiàn)中藥安全有效、質(zhì)量可控。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0035]圖1為本發(fā)明供試樣品在乙酸乙酯-二氯甲烷-甲醇-濃氨試液(9: 2: 5: 3)展開條件下的薄層色譜圖，其中條帶從左至右依次為:混合對照品、巖黃連對照藥材、樣品I (批號:20071014)、樣品 I (批號:20071018)、樣品 I (批號=20071022)；
[0036]圖2為本發(fā)明供試樣品在正丁醇-冰醋酸-水(7: I: 2)展開條件下的薄層色譜圖，其中條帶從左至右依次為:混合對照品、巖黃連對照藥材、樣品I (批號:20071014)、樣品 I (批號:20071018)、樣品 I (批號=20071022)；
[0037]圖3為本發(fā)明去氫碎葉紫堇堿、脫氫甲卡維汀、藥根堿、脫氫卡維丁、鹽酸巴馬汀、鹽酸小檗堿混合對照品液相色譜圖(圖中I為去氫碎葉紫堇堿，2為脫氫甲卡維汀，3為藥根堿，4為脫氫卡維丁,5為鹽酸巴馬汀,6為鹽酸小檗堿)；
[0038]圖4為本發(fā)明巖黃連總堿供試品(批號:20071014)液相色譜圖(標(biāo)號同圖3)?！揪唧w實(shí)施方式】
[0039]本發(fā)明所述的倍半萜類和姜黃素類成分同時(shí)測定的方法是經(jīng)過大量篩選試驗(yàn)得到的最優(yōu)方案，結(jié)合【具體實(shí)施方式】，對本發(fā)明進(jìn)一步說明如下:
[0040]1.巖黃連總堿薄層鑒別:
[0041]L I儀器、試藥與試劑
[0042]FAl 104型萬分之一電子分析天平(上海天平儀器廠)；紫外分析儀WD-9403C型(北京市六一儀器廠)；水浴鍋(鞏義市英峪予華儀器廠)；硅膠G、H薄層板(青島海洋化工廠)；巖黃連總堿(批號:20071014、20071018、20071022);脫氫卡維丁對照品(中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用，批號:111667-200601)；鹽酸巴馬汀對照品(中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用，批號:110732-200506);鹽酸小檗堿對照品(中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用，批號:110713-200508)。正丁醇為分析純(上海實(shí)意化學(xué)試劑有限公司，批號:20080227);乙酸乙酯為分析純(國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號:T20090406);氨水為分析純(南京化學(xué)試劑有限公司，批號:080920759);冰醋酸為分析純(國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號:T20090305);濃硫酸為分析純(上海久億化學(xué)試劑有限公司，批號:091022)；乙醇為分析純(南京化學(xué)試劑有限公司，批號:09081310871);乙醚為分析純(上海中試化工總公司，批號:20100415);正己烷為分析純(上海試四赫維化工有限公司，批號:0904102)；二氯甲烷為分析純(上海凌峰化學(xué)試劑有限公司，批號:042101);水為雙重蒸餾水。
[0043]1.2鑒別實(shí)驗(yàn)方法
[0044]巖黃連總生物堿薄層色譜鑒別條件為:取本品10mg，加入25ml甲醇溶解，超聲處理30分鐘，濾過，濾液作為供試品溶液。另取巖黃連對照藥材0.lg，加5ml甲醇，超聲處理30分鐘，濾過，濾液作為對照藥材溶液。再取脫氫卡維丁對照品、鹽酸巴馬汀對照品、鹽酸小檗堿對照品，加甲醇制成每Iml含脫氫卡維丁 0.2mg、鹽酸巴馬汀0.2mg、鹽酸小檗堿0.1mg的混合液，作為混合對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2010年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各5 μ 1，點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-二氯甲烷-甲醇-濃氨試液(9: 2: 5: 3)及正丁醇-冰醋酸-水(7: I: 2)為展開劑，展開，取出，吹干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品及對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。結(jié)果見圖1、2。
[0045]2 檢查:
[0046]參照《中國藥典》及相關(guān)技術(shù)要求，對本品的水分、熾灼殘?jiān)?、重金屬及砷鹽進(jìn)行了檢查和測定。
[0047]2.1水分照水分測定法(2010年版《中國藥典》一部附錄IX H第一法)測定，結(jié)果見表I。
[0048]表I巖黃連總生物堿水分測定值
[0049]
【權(quán)利要求】
1.一種巖黃連總堿的質(zhì)量檢測方法，其特征在于該方法包括以下步驟: (1)以巖黃連為對照藥材，以脫氫卡維丁、鹽酸巴馬汀、鹽酸小檗堿為對照品，對巖黃連總堿進(jìn)行薄層鑒別； (2)對巖黃連總堿的水分、熾灼殘?jiān)⒅亟饘偌吧辂}進(jìn)行檢查； (3)采用紫外分光光度法測定巖黃連總堿中總生物堿的含量； (4)采用高效液相色譜法同時(shí)測定巖黃連總堿中去氫碎葉紫堇堿、脫氫甲卡維汀、藥根堿、脫氫卡維丁、鹽酸巴馬汀和鹽酸小檗堿的含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述巖黃連總堿的質(zhì)量檢測方法，其特征在于巖黃連總堿的薄層鑒別方法步驟為: a.供試品溶液的制備:取本品10mg，加入25ml甲醇溶解，超聲處理30分鐘，濾過，濾液作為供試品溶液； b.對照藥材溶液的制備:取巖黃連對照藥材0.lg，加5ml甲醇，超聲處理30分鐘，濾過，濾液作為對照藥材溶液； c.對照品溶液的制備:取脫氫卡維丁、鹽酸巴馬汀、鹽酸小檗堿對照品，加甲醇制成每Iml含脫氫卡維丁 0.2mg、鹽酸巴馬汀0.2mg、鹽酸小檗堿0.1mg的混合液,作為混合對照品溶液； d.薄層條件及結(jié)果:照中國藥典2010年版一部附錄VIB記載的薄層色譜法進(jìn)行試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各5 μ 1，點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以比例為9: 2: 5: 3的乙酸乙酯-二氯甲烷-甲醇-濃氨試液，及比例為7:1: 2的正丁醇-冰醋酸-水為展開劑，展開，取出，吹干，置波長為365nm紫外光燈下檢視，供試品色譜中，在與對照品及對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述巖黃連總堿的質(zhì)量檢測方法，其特征在于巖黃連總堿水分、熾灼殘?jiān)?、重金屬及砷鹽的檢查方法步驟為: a.照中國藥典2010年版一部附錄IXH第一法記載的水分測定法對巖黃連總堿的水分進(jìn)行測定，巖黃連總堿中水分不得超過5.0% ； b.照中國藥典2010年版一部附錄IXJ記載的熾灼殘?jiān)鼫y定法對巖黃連總堿的熾灼殘?jiān)M(jìn)行測定，巖黃連總堿中熾灼殘?jiān)坏眠^2.0% ； c.中國藥典2010年版一部附錄IXE第二法記載的重金屬檢查方法進(jìn)行測定，砷鹽的檢查按中國藥典2010年版一部附錄IX F記載的第一法古蔡氏法進(jìn)行測定，巖黃連總堿中重金屬不得過百萬分之十，砷鹽不得過百萬分之二。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述巖黃連總堿的質(zhì)量檢測方法，其特征在于紫外分光光度法測定巖黃連總堿中總生物堿的含量步驟為: a.對照品溶液的制備取經(jīng)五氧化二磷干燥過夜的脫氫卡維丁對照品約10mg，精密稱定，置100ml量瓶中，加1%鹽酸甲醇溶液至刻度，搖勻，作為貯備液，備用； b.標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取對照品貯備液0.3ml，0.4ml，0.5ml，0.6ml,0.8ml, 1.0ml，分別置IOml量瓶中，加入1%鹽酸甲醇溶液至刻度，搖勻；以1%鹽酸甲醇溶液為空白，照中國藥典2010年版一部附錄V A記載的紫外-可見分光光度法，在347nm波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線； c.供試品溶液的制備取本品約25mg，精密稱定，置50ml容量瓶中，加1%鹽酸甲醇溶液至刻度，作為樣品貯備液，備用；精密吸取樣品貯備液1.0ml置50ml量瓶中，加1%鹽酸甲醇溶液至刻度，搖勻，即得； d.測定法:取供試品溶液，以1%鹽酸甲醇溶液為空白，依法測定吸收度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中脫氫卡維丁的量，計(jì)算，即得。本品含總生物堿以脫氫卡維丁 C21H2304N計(jì)，不得少于50.0%。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述巖黃連總堿的質(zhì)量檢測方法，其特征在于高效液相色譜法同時(shí)測定巖黃連總堿中去氫碎葉紫堇堿、脫氫甲卡維汀、藥根堿、脫氫卡維丁、鹽酸巴馬汀和鹽酸小檗堿的含量步驟為: a.色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)米用Hanbon0DS-2C18,規(guī)格為250mmX4.6mm, 5 μ m的色譜柱，以比例為18.5: 81.5的乙腈-0.01mol/L磷酸二氫鉀水溶液為流動相，柱溫30°C，檢測波長347nm,流速1.0ml/min,進(jìn)樣量10 μ I,采樣時(shí)間50min ； b.對照品溶液的制備精密稱取去氫碎葉紫堇堿、脫氫甲卡維汀、藥根堿、脫氫卡維丁、鹽酸巴馬汀、鹽酸小檗堿適量，加甲醇分別制成單個標(biāo)準(zhǔn)品儲備液，分別精密取各儲備液適量，配制成混合標(biāo)準(zhǔn)品儲備液，以上6個化合物在混合標(biāo)準(zhǔn)品儲備液中的質(zhì)量濃度分別為.0.0238，0.0889，0.0134，0.098，0.06292,0.0174mg/mL ； c.供試品溶液的制備供試品溶液制備取本品約25mg，精密稱定，置50ml量瓶中，加1%鹽酸甲醇至刻度，搖勻，過0.45 μ m直徑微孔濾膜，取續(xù)濾液，即得； d.測定法:分別精密吸取對照品與供試品溶液各10μ1，注入液相色譜儀，測定，即得，本品含去氫碎葉紫堇堿、脫氫甲卡維汀、藥根堿、脫氫卡維汀、鹽酸巴馬汀、鹽酸小檗堿總量不得少于32.0%。
【文檔編號】G01N33/15GK103575849SQ201310408106
【公開日】2014年2月12日 申請日期:2013年9月9日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月9日
【發(fā)明者】季德, 陸兔林, 池玉梅, 毛春芹, 謝輝, 李林, 殷放宙, 周淵, 劉會珍, 李惠連 申請人:南京中醫(yī)藥大學(xué)