一種磷酸替米考星中磷酸根的檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種磷酸替米考星中磷酸根的檢測方法，本發(fā)明通過對樣品處理的優(yōu)選及供試品、對照品制備方法的試驗，建立了磷酸替米考星中磷酸根（PO4-3）的分析方法；通過對樣品處理和試劑配制的優(yōu)化，建立了獸藥磷酸替米考星中磷酸根（PO4-3）檢測方法；通過方法學(xué)驗證試驗研究表明：準(zhǔn)確度試驗的平均回收率為：100.6%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD:1.5%；精密度試驗的RSD為2.4%；線性關(guān)系良好Y=10.696X+0.0297，相關(guān)系數(shù)γ=0.9996 ； 從而充分說明，本發(fā)明所建立的方法準(zhǔn)確度高、專屬性強(qiáng)、重現(xiàn)性良好，通過對獸藥磷酸替米考星中磷酸根（PO4-3）量的控制，確保其安全性，從而更有效的防治牛、山羊、綿羊、奶牛、豬、雞等動物感染性疾病。
【專利說明】一種磷酸替米考星中磷酸根的檢測方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及制藥【技術(shù)領(lǐng)域】，特別是涉及一種磷酸替米考星中磷酸根（PCV3)的檢測 方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 替米考星為最新型大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，主要抗革蘭氏陽性菌如金葡萄菌、肺炎球 菌、鏈球菌等，對部分革蘭氏陰性菌如流感嗜血桿菌、巴氏桿菌及家禽支原體的活性比泰樂 菌素強(qiáng)。內(nèi)附吸收快，組織穿透力強(qiáng)，分布容積廣，半衰期可達(dá)1?2天，體內(nèi)維持時間長。 臨床主要用于牛、豬、雞、綿羊、山羊、兔等感染性疾病，特別是用于畜禽呼吸道疾病，并取得 顯著療效。該藥具有抗菌活性強(qiáng)、藥代動力學(xué)特征優(yōu)良、用量少、毒性小等特點(diǎn)。臨床應(yīng)用 表明：替米考星是一種安全有效的新型獸藥，具有廣闊的應(yīng)用前景。
[0003] 替米考星具有同泰樂菌素相似的廣譜抗菌活性，對革蘭氏陽性菌和某些革蘭氏陰 性菌、霉形體、螺旋體等均有抑制作用，對胸膜肺炎放線桿菌、巴氏桿菌及霉形體具有比泰 樂菌素更強(qiáng)的抗菌活性。Inamoto等報道，替米考星（TMS)、金霉素（CTC)、甲砜霉素（TP)和 泰樂菌素（TS)對日本1980?1989年間從豬肺炎損害部位分離出的61株多殺性巴氏桿菌 和35株胸膜肺炎放線桿菌的抗菌作用，大多數(shù)菌株對TMS、CTC、TP敏感。CTC和TP分別在 3. 13 μ g/ml和0.78 μ g/ml時對51株（83.6% )和46株（75.4% )多殺性巴氏桿菌有抑 制作用。TS對幾乎所有菌株的抗菌活性較低，MIC彡6. 25 μ g/ml。TMS對23株（37. 7% ) 多殺性巴氏桿菌的MIC彡1. 56 μ g/ml，但在3. 13 μ g/ml時，TP和TMS分別能抑制32株 (91. 4% )和33株（94. 3% )放線桿菌，可見作為同一大環(huán)內(nèi)酯類藥物，泰樂菌素對兩種細(xì) 菌的抗菌活性均不及替米考星。Salmon SA等用從美國、加拿大分離到的515株致病菌對 頭孢噻呋、恩諾沙星、紅霉素、磺胺二甲嘧啶、壯觀霉素、林可霉素、磺胺嘧啶/TMP、氨芐青霉 素和替米考星等9種藥物的敏感性進(jìn)行測定。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，抗菌作用最強(qiáng)的是恩諾沙星和頭 孢噻呋，替米考星對巴氏桿菌和胸膜肺炎放線桿菌活性中等。替米考星對雞霉形體表現(xiàn)出 較強(qiáng)的體外抗菌活性。Jordan等報道了替米考星和泰樂菌素對家禽6株雞敗血霉形體和3 株滑液霉形體的體外MIC值。替米考星對6株雞敗血霉形體的MIC值分別為：< 0. 0125、 0· 0025、0· 0025, > 12. 5、0· 004、0· 1、0· 0125、0· 006 和 0· 025 μ g/ml ;而泰樂菌素的 MIC 值 則分別為：< 〇· 〇125、0· 02、0· 02、3· 2、0· 016、0· 8、0· 0125、0· 025 和 0· 025μ g/ml。Ziv 等應(yīng) 用替米考星對從奶牛乳房炎分離的112株金黃色葡萄球菌和其它致病菌進(jìn)行MIC-90測定。 結(jié)果替米考星對乳房炎金黃色葡萄球菌和鏈球菌均很敏感，其中對化膿性鏈球菌活性最強(qiáng) (MIC-90為0. 04 μ g/ml)。替米考星在小于3. 12 μ g/ml時能抑制90. 8%的其它革蘭氏陽性 乳房炎致病菌。
[0004] 綜上所述，磷酸替米考星作為一種較新的大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，其較強(qiáng)的抗菌活性 和優(yōu)越的藥物動力學(xué)特征，使它在畜禽敏感菌引起的肺炎、巴氏桿菌病以及乳房炎等疾病 的防治方面發(fā)揮著重要作用。因此，建立磷酸替米考星的質(zhì)量控制體系，保證其產(chǎn)品質(zhì)量就 具有非常實際的意義。
[0005] 磷酸替米考星的合成過程中，成鹽結(jié)晶步驟會帶入大量的游離磷酸，這些磷酸的 遺留不僅降低產(chǎn)品的穩(wěn)定性，同時會對藥品的安全性帶來影響。因此，確立磷酸替米考星中 磷酸根的檢測指標(biāo)，對于確保磷酸替米考星的安全性具有非常重要的意義。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的就在于提供一種磷酸替米考星中磷酸根（PCV3)的檢測方法。
[0007] 本發(fā)明采用下述技術(shù)方案實現(xiàn)：
[0008] -種磷酸替米考星中磷酸根的檢測方法，其特征在于采用顯色法將供試品溶液在 紫外分光光度計上于650nm處測吸光度，查標(biāo)準(zhǔn)曲線計算，其中
[0009] 供樣品溶液的制備：精密稱取樣品2g，于250ml容量瓶中，加純化水稀釋至刻度， 充分搖勻，精密吸取試驗溶液5ml于100ml的容量瓶中，加10%三氯乙酸溶液10ml，用水稀 釋至刻度，后精密吸取濾液2ml于50ml容量瓶中，加純化水5ml，鑰酸銨溶液、米吐爾溶液各 2ml，于沸水浴中加熱35min，放冷，用水稀釋至刻度，搖勻即可。
[0010] 所述標(biāo)準(zhǔn)曲線采用如下方法制備：配制濃度依次為〇· 613μ g/ml、0. 9198μ g/ml、 L 2264 μ g/ml、L 5330 μ g/ml、L 8396 μ g/ml、2. 1462 μ g/ml、2. 4528 μ g/ml、2. 7594 μ g/ml 的PCV3溶液，以空白為參比，用紫外分光光度計于650nm處測吸光度，以已知P(V3濃度為縱 坐標(biāo)，以測得的吸光度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，相關(guān)系數(shù)R > 〇. 999。
[0011] 所述鑰酸銨溶液的制備方法為：精密稱取鑰酸銨溶液5g，加水50ml，微熱使溶解 后，倒入加有75ml濃硫酸和50ml水的冷混液的棕色試劑瓶中，于冰箱中保存。
[0012] 所述米吐爾溶液的制備方法為：精密稱取對甲基對甲氨基酚硫酸鹽0. 2g，和亞硫 酸鈉 lg，加水l〇ml溶解與44g亞硫酸氫鈉溶于190ml水所成的溶液，混合均勻過濾，盛入棕 色瓶中，冰箱保存。
[0013] 試驗過程發(fā)現(xiàn)：采用GB/T5009. 87-2003《食品中磷的測定》進(jìn)行樣品處理，步 驟繁瑣，消化時間長，并且由于磷酸替米考星具有良好的水溶性導(dǎo)致顯色不穩(wěn)定，為此，本 發(fā)明通過對樣品處理的優(yōu)選及供試品、對照品制備方法的試驗，建立了磷酸替米考星中 磷酸根（P〇 4_3)的分析方法；通過對樣品處理和試劑配制的優(yōu)化，建立了獸藥磷酸替米考 星中磷酸根（P〇 4_3)檢測方法；通過方法學(xué)驗證試驗研究表明：準(zhǔn)確度試驗的平均回收率 為：100. 6%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD: 1.5 % ;精密度試驗的RSD為2.4% ;線性關(guān)系良好Y = 10. 696X+0. 0297,相關(guān)系數(shù)γ = 0. 9996 ;從而充分說明，本發(fā)明所建立的方法準(zhǔn)確度高、專 屬性強(qiáng)、重現(xiàn)性良好，通過對獸藥磷酸替米考星中磷酸根（P〇4_ 3)量的控制，確保其安全性， 從而更有效的防治牛、山羊、綿羊、奶牛、豬、雞等動物感染性疾病。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0014] 圖1為磷酸根（PCV3)標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。

【具體實施方式】
[0015] 采用顯色法將供試品溶液在紫外分光光度計上于650nm處測吸光度，查標(biāo)準(zhǔn)曲線 計算所得。
[0016] 樣品名稱：磷酸替米考星，（來源：寧夏泰瑞制藥股份有限公司）。
[0017] 儀器：水浴鍋
[0018] 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：配制濃度依次為0· 613μ g/ml、0. 9198μ g/ml、l. 2264μ g/ml、 1· 5330μ g/ml、l. 8396μ g/ml、2. 1462μ g/ml、2. 4528μ g/ml、2. 7594μ g/ml 的 P(V3 溶液， 以空白為參比。用紫外分光光度計于650nm處測吸光度，以已知PCV3濃度為縱坐標(biāo)，以測 得的吸光度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（相關(guān)系數(shù)R > 〇. 999)。
[0019] 鑰酸銨溶液（A液）的制備：精密稱取鑰酸銨溶液5g，加水50ml，微熱使溶解后，倒 入加有75ml濃硫酸和50ml水的冷混液的棕色試劑瓶中，于冰箱中保存（保存期2周）。
[0020] 米吐爾溶液（B液）的制備：精密稱取米吐爾（硫酸對甲氨基酚）0.2g，和亞硫酸 鈉 lg，加水l〇ml溶解與44g亞硫酸氫鈉溶于190ml水所成的溶液,混合均勻過濾，盛入棕色 瓶中，冰箱保存（保存期為2周）。
[0021] 10%三氯乙酸溶液的制備：稱取固體三氯醋酸10. 0g，加水100ml溶解，搖勻后轉(zhuǎn) 移至棕色試劑瓶中待用。
[0022] 供試品溶液的制備方法：精密稱取磷酸替米考星樣品2g，于250ml容量瓶中，加純 化水稀釋至刻度，充分搖勻，精密吸取試驗溶液5ml于100ml的容量瓶中，加10%三氯乙酸 溶液l〇ml，用水稀釋至刻度，精密吸取濾液2ml于50ml容量瓶中，加純化水5ml，A液、B液 各2ml，于沸水浴中加熱35min，放冷，用水稀釋至刻度，搖勻，（若有沉淀物則用無磷濾紙過 濾）。
[0023]

【權(quán)利要求】
1. 一種磷酸替米考星中磷酸根的檢測方法，其特征在于采用顯色法將供試品溶液在紫 外分光光度計上于650nm處測吸光度，查標(biāo)準(zhǔn)曲線計算，其中 供樣品溶液的制備：精密稱取樣品2g，于250ml容量瓶中，加純化水稀釋至刻度，充分 搖勻，精密吸取試驗溶液5ml于100ml的容量瓶中，加10%三氯乙酸溶液10ml，用水稀釋 至刻度，后精密吸取濾液2ml于50ml容量瓶中，加純化水5ml，鑰酸銨溶液、米吐爾溶液各 2ml，于沸水浴中加熱35min，放冷，用水稀釋至刻度，搖勻即可。
2. 按照權(quán)利要求1所述的磷酸替米考星中磷酸根的檢測方法，其特征在于所述標(biāo) 準(zhǔn)曲線采用如下方法制備：配制濃度依次為〇· 613Pg/ml、0. 9198Pg/ml、L 2264Pg/ml、 1. 533(^g/ml、l. 8396Pg/ml、2. 1462Pg/ml、2. 4528Pg/ml、2. 7594Pg/ml 的 PCV3 溶液，以空白 為參比，用紫外分光光度計于650nm處測吸光度，以已知P(V3濃度為縱坐標(biāo)，以測得的吸光 度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，相關(guān)系數(shù)R > 0. 999。
3. 按照權(quán)利要求1所述的磷酸替米考星中磷酸根的檢測方法，其特征在于所述鑰酸銨 溶液的制備方法為：精密稱取鑰酸銨溶液5g，加水50ml，微熱使溶解后，倒入加有75ml濃硫 酸和50ml水的冷混液的棕色試劑瓶中，于冰箱中保存。
4. 按照權(quán)利要求1所述的磷酸替米考星中磷酸根的檢測方法，其特征在于所述米吐爾 溶液的制備方法為：精密稱取對甲基對甲氨基酚硫酸鹽〇. 2g，和亞硫酸鈉 lg，加水10ml溶 解與44g亞硫酸氫鈉溶于190ml水所成的溶液，混合均勻過濾，盛入棕色瓶中，冰箱保存。
【文檔編號】G01N21/33GK104266987SQ201410435947
【公開日】2015年1月7日 申請日期:2014年8月29日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月29日
【發(fā)明者】任勇, 張金霞, 包潔華, 李曉萍 申請人:寧夏泰瑞制藥股份有限公司