一種磷酸替米考星中磷酸根的檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種磷酸替米考星中磷酸根的檢測方法,本發(fā)明通過對樣品處理的優(yōu)選及供試品、對照品制備方法的試驗,建立了磷酸替米考星中磷酸根(PO4-3)的分析方法;通過對樣品處理和試劑配制的優(yōu)化,建立了獸藥磷酸替米考星中磷酸根(PO4-3)檢測方法;通過方法學(xué)驗證試驗研究表明:準(zhǔn)確度試驗的平均回收率為:100.6%,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD:1.5%;精密度試驗的RSD為2.4%;線性關(guān)系良好Y=10.696X+0.0297,相關(guān)系數(shù)γ=0.9996 ; 從而充分說明,本發(fā)明所建立的方法準(zhǔn)確度高、專屬性強(qiáng)、重現(xiàn)性良好,通過對獸藥磷酸替米考星中磷酸根(PO4-3)量的控制,確保其安全性,從而更有效的防治牛、山羊、綿羊、奶牛、豬、雞等動物感染性疾病。
【專利說明】一種磷酸替米考星中磷酸根的檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及制藥【技術(shù)領(lǐng)域】,特別是涉及一種磷酸替米考星中磷酸根(PCV3)的檢測 方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 替米考星為最新型大環(huán)內(nèi)酯類抗生素,主要抗革蘭氏陽性菌如金葡萄菌、肺炎球 菌、鏈球菌等,對部分革蘭氏陰性菌如流感嗜血桿菌、巴氏桿菌及家禽支原體的活性比泰樂 菌素強(qiáng)。內(nèi)附吸收快,組織穿透力強(qiáng),分布容積廣,半衰期可達(dá)1?2天,體內(nèi)維持時間長。 臨床主要用于牛、豬、雞、綿羊、山羊、兔等感染性疾病,特別是用于畜禽呼吸道疾病,并取得 顯著療效。該藥具有抗菌活性強(qiáng)、藥代動力學(xué)特征優(yōu)良、用量少、毒性小等特點(diǎn)。臨床應(yīng)用 表明:替米考星是一種安全有效的新型獸藥,具有廣闊的應(yīng)用前景。
[0003] 替米考星具有同泰樂菌素相似的廣譜抗菌活性,對革蘭氏陽性菌和某些革蘭氏陰 性菌、霉形體、螺旋體等均有抑制作用,對胸膜肺炎放線桿菌、巴氏桿菌及霉形體具有比泰 樂菌素更強(qiáng)的抗菌活性。Inamoto等報道,替米考星(TMS)、金霉素(CTC)、甲砜霉素(TP)和 泰樂菌素(TS)對日本1980?1989年間從豬肺炎損害部位分離出的61株多殺性巴氏桿菌 和35株胸膜肺炎放線桿菌的抗菌作用,大多數(shù)菌株對TMS、CTC、TP敏感。CTC和TP分別在 3. 13 μ g/ml和0.78 μ g/ml時對51株(83.6% )和46株(75.4% )多殺性巴氏桿菌有抑 制作用。TS對幾乎所有菌株的抗菌活性較低,MIC彡6. 25 μ g/ml。TMS對23株(37. 7% ) 多殺性巴氏桿菌的MIC彡1. 56 μ g/ml,但在3. 13 μ g/ml時,TP和TMS分別能抑制32株 (91. 4% )和33株(94. 3% )放線桿菌,可見作為同一大環(huán)內(nèi)酯類藥物,泰樂菌素對兩種細(xì) 菌的抗菌活性均不及替米考星。Salmon SA等用從美國、加拿大分離到的515株致病菌對 頭孢噻呋、恩諾沙星、紅霉素、磺胺二甲嘧啶、壯觀霉素、林可霉素、磺胺嘧啶/TMP、氨芐青霉 素和替米考星等9種藥物的敏感性進(jìn)行測定。結(jié)果發(fā)現(xiàn),抗菌作用最強(qiáng)的是恩諾沙星和頭 孢噻呋,替米考星對巴氏桿菌和胸膜肺炎放線桿菌活性中等。替米考星對雞霉形體表現(xiàn)出 較強(qiáng)的體外抗菌活性。Jordan等報道了替米考星和泰樂菌素對家禽6株雞敗血霉形體和3 株滑液霉形體的體外MIC值。替米考星對6株雞敗血霉形體的MIC值分別為:< 0. 0125、 0· 0025、0· 0025, > 12. 5、0· 004、0· 1、0· 0125、0· 006 和 0· 025 μ g/ml ;而泰樂菌素的 MIC 值 則分別為:< 〇· 〇125、0· 02、0· 02、3· 2、0· 016、0· 8、0· 0125、0· 025 和 0· 025μ g/ml。Ziv 等應(yīng) 用替米考星對從奶牛乳房炎分離的112株金黃色葡萄球菌和其它致病菌進(jìn)行MIC-90測定。 結(jié)果替米考星對乳房炎金黃色葡萄球菌和鏈球菌均很敏感,其中對化膿性鏈球菌活性最強(qiáng) (MIC-90為0. 04 μ g/ml)。替米考星在小于3. 12 μ g/ml時能抑制90. 8%的其它革蘭氏陽性 乳房炎致病菌。
[0004] 綜上所述,磷酸替米考星作為一種較新的大環(huán)內(nèi)酯類抗生素,其較強(qiáng)的抗菌活性 和優(yōu)越的藥物動力學(xué)特征,使它在畜禽敏感菌引起的肺炎、巴氏桿菌病以及乳房炎等疾病 的防治方面發(fā)揮著重要作用。因此,建立磷酸替米考星的質(zhì)量控制體系,保證其產(chǎn)品質(zhì)量就 具有非常實際的意義。
[0005] 磷酸替米考星的合成過程中,成鹽結(jié)晶步驟會帶入大量的游離磷酸,這些磷酸的 遺留不僅降低產(chǎn)品的穩(wěn)定性,同時會對藥品的安全性帶來影響。因此,確立磷酸替米考星中 磷酸根的檢測指標(biāo),對于確保磷酸替米考星的安全性具有非常重要的意義。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0006] 本發(fā)明的目的就在于提供一種磷酸替米考星中磷酸根(PCV3)的檢測方法。
[0007] 本發(fā)明采用下述技術(shù)方案實現(xiàn):
[0008] -種磷酸替米考星中磷酸根的檢測方法,其特征在于采用顯色法將供試品溶液在 紫外分光光度計上于650nm處測吸光度,查標(biāo)準(zhǔn)曲線計算,其中
[0009] 供樣品溶液的制備:精密稱取樣品2g,于250ml容量瓶中,加純化水稀釋至刻度, 充分搖勻,精密吸取試驗溶液5ml于100ml的容量瓶中,加10%三氯乙酸溶液10ml,用水稀 釋至刻度,后精密吸取濾液2ml于50ml容量瓶中,加純化水5ml,鑰酸銨溶液、米吐爾溶液各 2ml,于沸水浴中加熱35min,放冷,用水稀釋至刻度,搖勻即可。
[0010] 所述標(biāo)準(zhǔn)曲線采用如下方法制備:配制濃度依次為〇· 613μ g/ml、0. 9198μ g/ml、 L 2264 μ g/ml、L 5330 μ g/ml、L 8396 μ g/ml、2. 1462 μ g/ml、2. 4528 μ g/ml、2. 7594 μ g/ml 的PCV3溶液,以空白為參比,用紫外分光光度計于650nm處測吸光度,以已知P(V3濃度為縱 坐標(biāo),以測得的吸光度為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,相關(guān)系數(shù)R > 〇. 999。
[0011] 所述鑰酸銨溶液的制備方法為:精密稱取鑰酸銨溶液5g,加水50ml,微熱使溶解 后,倒入加有75ml濃硫酸和50ml水的冷混液的棕色試劑瓶中,于冰箱中保存。
[0012] 所述米吐爾溶液的制備方法為:精密稱取對甲基對甲氨基酚硫酸鹽0. 2g,和亞硫 酸鈉 lg,加水l〇ml溶解與44g亞硫酸氫鈉溶于190ml水所成的溶液,混合均勻過濾,盛入棕 色瓶中,冰箱保存。
[0013] 試驗過程發(fā)現(xiàn):采用GB/T5009. 87-2003《食品中磷的測定》進(jìn)行樣品處理,步 驟繁瑣,消化時間長,并且由于磷酸替米考星具有良好的水溶性導(dǎo)致顯色不穩(wěn)定,為此,本 發(fā)明通過對樣品處理的優(yōu)選及供試品、對照品制備方法的試驗,建立了磷酸替米考星中 磷酸根(P〇 4_3)的分析方法;通過對樣品處理和試劑配制的優(yōu)化,建立了獸藥磷酸替米考 星中磷酸根(P〇 4_3)檢測方法;通過方法學(xué)驗證試驗研究表明:準(zhǔn)確度試驗的平均回收率 為:100. 6%,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD: 1.5 % ;精密度試驗的RSD為2.4% ;線性關(guān)系良好Y = 10. 696X+0. 0297,相關(guān)系數(shù)γ = 0. 9996 ;從而充分說明,本發(fā)明所建立的方法準(zhǔn)確度高、專 屬性強(qiáng)、重現(xiàn)性良好,通過對獸藥磷酸替米考星中磷酸根(P〇4_ 3)量的控制,確保其安全性, 從而更有效的防治牛、山羊、綿羊、奶牛、豬、雞等動物感染性疾病。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0014] 圖1為磷酸根(PCV3)標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。
【具體實施方式】
[0015] 采用顯色法將供試品溶液在紫外分光光度計上于650nm處測吸光度,查標(biāo)準(zhǔn)曲線 計算所得。
[0016] 樣品名稱:磷酸替米考星,(來源:寧夏泰瑞制藥股份有限公司)。
[0017] 儀器:水浴鍋
[0018] 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制:配制濃度依次為0· 613μ g/ml、0. 9198μ g/ml、l. 2264μ g/ml、 1· 5330μ g/ml、l. 8396μ g/ml、2. 1462μ g/ml、2. 4528μ g/ml、2. 7594μ g/ml 的 P(V3 溶液, 以空白為參比。用紫外分光光度計于650nm處測吸光度,以已知PCV3濃度為縱坐標(biāo),以測 得的吸光度為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(相關(guān)系數(shù)R > 〇. 999)。
[0019] 鑰酸銨溶液(A液)的制備:精密稱取鑰酸銨溶液5g,加水50ml,微熱使溶解后,倒 入加有75ml濃硫酸和50ml水的冷混液的棕色試劑瓶中,于冰箱中保存(保存期2周)。
[0020] 米吐爾溶液(B液)的制備:精密稱取米吐爾(硫酸對甲氨基酚)0.2g,和亞硫酸 鈉 lg,加水l〇ml溶解與44g亞硫酸氫鈉溶于190ml水所成的溶液,混合均勻過濾,盛入棕色 瓶中,冰箱保存(保存期為2周)。
[0021] 10%三氯乙酸溶液的制備:稱取固體三氯醋酸10. 0g,加水100ml溶解,搖勻后轉(zhuǎn) 移至棕色試劑瓶中待用。
[0022] 供試品溶液的制備方法:精密稱取磷酸替米考星樣品2g,于250ml容量瓶中,加純 化水稀釋至刻度,充分搖勻,精密吸取試驗溶液5ml于100ml的容量瓶中,加10%三氯乙酸 溶液l〇ml,用水稀釋至刻度,精密吸取濾液2ml于50ml容量瓶中,加純化水5ml,A液、B液 各2ml,于沸水浴中加熱35min,放冷,用水稀釋至刻度,搖勻,(若有沉淀物則用無磷濾紙過 濾)。
[0023]
【權(quán)利要求】
1. 一種磷酸替米考星中磷酸根的檢測方法,其特征在于采用顯色法將供試品溶液在紫 外分光光度計上于650nm處測吸光度,查標(biāo)準(zhǔn)曲線計算,其中 供樣品溶液的制備:精密稱取樣品2g,于250ml容量瓶中,加純化水稀釋至刻度,充分 搖勻,精密吸取試驗溶液5ml于100ml的容量瓶中,加10%三氯乙酸溶液10ml,用水稀釋 至刻度,后精密吸取濾液2ml于50ml容量瓶中,加純化水5ml,鑰酸銨溶液、米吐爾溶液各 2ml,于沸水浴中加熱35min,放冷,用水稀釋至刻度,搖勻即可。
2. 按照權(quán)利要求1所述的磷酸替米考星中磷酸根的檢測方法,其特征在于所述標(biāo) 準(zhǔn)曲線采用如下方法制備:配制濃度依次為〇· 613Pg/ml、0. 9198Pg/ml、L 2264Pg/ml、 1. 533(^g/ml、l. 8396Pg/ml、2. 1462Pg/ml、2. 4528Pg/ml、2. 7594Pg/ml 的 PCV3 溶液,以空白 為參比,用紫外分光光度計于650nm處測吸光度,以已知P(V3濃度為縱坐標(biāo),以測得的吸光 度為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,相關(guān)系數(shù)R > 0. 999。
3. 按照權(quán)利要求1所述的磷酸替米考星中磷酸根的檢測方法,其特征在于所述鑰酸銨 溶液的制備方法為:精密稱取鑰酸銨溶液5g,加水50ml,微熱使溶解后,倒入加有75ml濃硫 酸和50ml水的冷混液的棕色試劑瓶中,于冰箱中保存。
4. 按照權(quán)利要求1所述的磷酸替米考星中磷酸根的檢測方法,其特征在于所述米吐爾 溶液的制備方法為:精密稱取對甲基對甲氨基酚硫酸鹽〇. 2g,和亞硫酸鈉 lg,加水10ml溶 解與44g亞硫酸氫鈉溶于190ml水所成的溶液,混合均勻過濾,盛入棕色瓶中,冰箱保存。
【文檔編號】G01N21/33GK104266987SQ201410435947
【公開日】2015年1月7日 申請日期:2014年8月29日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月29日
【發(fā)明者】任勇, 張金霞, 包潔華, 李曉萍 申請人:寧夏泰瑞制藥股份有限公司