專利名稱：用于防止組織樣品中偽像的方法和組合物的制作方法
用于防止組織樣品中偽像的方法和組合物背景1.領(lǐng)域本申請(qǐng)總體地涉及用于固定的組織樣品的方法和組合物。更具體地，本申請(qǐng)涉及用于防止偽像，改善已經(jīng)使用醛系固定劑保存的組織樣品中的染色，和增加組織染劑的可用使用壽命的方法和組合物。2.背景組織樣品可以包括一種或多種細(xì)胞、組織、器官、或其他獲自生物體的材料，以及整個(gè)生物體或其一部分。所述組織樣品可以有效用于研究和醫(yī)學(xué)、組織學(xué)、病理學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、和一般的生物科學(xué)的實(shí)踐。例如，組織樣品可以有助于疾病、病癥、功能、結(jié)構(gòu)的研究、 和生物樣本的其他特性。盡管組織樣品可以以許多方式獲得，包括來自尸體剖檢、活組織檢查、手術(shù)、尸檢等，一旦獲得，樣品通常經(jīng)歷蛋白水解酶和其他傾向于分解和降解生物材料的過程。為了保存組織樣品結(jié)構(gòu)或形態(tài)學(xué)，以及為了保持蛋白穩(wěn)定性，組織樣品經(jīng)常通過稱為固定的過程來保存。固定是化學(xué)過程，其可以通過終止正在進(jìn)行的生物反應(yīng)來防止樣品腐爛。存在許多固定方法以及試劑。例如，組織樣品可以使用交聯(lián)固定劑，諸如醛系固定劑來固定。認(rèn)為醛系、交聯(lián)固定劑可以與組織樣品中的蛋白和其他分子反應(yīng)形成亞甲基橋鍵。亞甲基橋鍵可以生成化學(xué)鍵的網(wǎng)絡(luò)，所述化學(xué)鍵可以防止大分子，諸如蛋白的運(yùn)動(dòng)，并基本保持組織樣品的物理結(jié)構(gòu)。固定后，可以防止破壞性酶進(jìn)一步降解組織樣品。盡管固定可以容許組織樣品在獲得后長(zhǎng)時(shí)間和否則將發(fā)生樣品自然降解的時(shí)間段內(nèi)進(jìn)行研究，但固定并非沒有缺點(diǎn)。例如，一些醛系固定劑可以導(dǎo)致或增加染色的組織樣品中的視覺偽像。在此類偽像的一個(gè)罕見實(shí)例中，在固定的組織樣品中的酸性條件下，可由醛系固定劑形成色素。例如，在甲醛固定劑中，可以形成酸性甲醛氧化蘇木精，或甲醛色素。 甲醛色素和來自其他醛系固定劑的色素可以在固定的樣品中形成呈褐色的有色色素沉積物。這樣的色素沉積物不僅可以分散注意力并且還阻止精確的組織樣品分析。在與醛系固定劑相關(guān)的偽像的另一個(gè)更常見的實(shí)例中，一些醛系固定劑可以導(dǎo)致細(xì)胞或細(xì)胞結(jié)構(gòu)皺縮。例如，使用醛系固定劑，諸如10%福爾馬林磷酸緩沖液處理的細(xì)胞可以在固定后皺縮約15%。該皺縮可以使細(xì)胞和細(xì)胞結(jié)構(gòu)變形并且，由此，改變細(xì)胞形態(tài)學(xué)。而且，該細(xì)胞皺縮還可以引起擴(kuò)散屏障，該屏障阻止或削弱組織染劑或醛系固定劑適當(dāng)?shù)剡M(jìn)入、染色、或固定樣品的各部分。在與醛系固定劑相關(guān)的潛在偽像的另一個(gè)實(shí)例中，在使用醛系固定劑固定過程中形成的亞甲基橋鍵網(wǎng)絡(luò)可以降低免疫反應(yīng)性，或阻止樣品中分子和用于分析的分子之間所需的相互作用。例如，與醛系固定劑相關(guān)的亞甲基橋鍵可以在染色過程中阻止抗體分子穿透樣品和到達(dá)目的抗原。因此，可能由于物理障礙阻止抗原的適當(dāng)視覺化，即使抗原的表位可能沒有被化學(xué)修飾。類似地，在使用醛系固定劑固定過程中形成的亞甲基橋鍵可以阻止一些組織染劑與樣品適當(dāng)?shù)慕Y(jié)合。例如，在固定過程中形成的亞甲基橋鍵可以結(jié)合與一些組織染劑相同的位點(diǎn)，并由此減少染劑結(jié)合并阻止合適的視覺化。
在不受理論限制的條件下，認(rèn)為已經(jīng)使用醛系固定劑固定的組織樣品的長(zhǎng)時(shí)間染色可能復(fù)制上述的一些傳統(tǒng)醛系偽像。如所提及地，一些染劑，諸如蘇木精和伊紅，可以與醛系固定劑競(jìng)爭(zhēng)組織樣品中的結(jié)合位點(diǎn)。因此，使用該染劑的長(zhǎng)時(shí)間染色可以導(dǎo)致一些醛系固定劑由樣品釋放至溶液中。一旦在溶液中，游離的醛系固定劑可以再次結(jié)合樣品并導(dǎo)致另外的偽像。這些偽像可以限制組織染色和可視化程序的有效性。因此，開發(fā)用于防止使用醛系固定劑制備的組織樣品中的偽像和改善其中的染色的方法和組合物將是本領(lǐng)域中的改進(jìn)。簡(jiǎn)述本發(fā)明提供用于防止已經(jīng)使用醛系固定劑固定的組織樣品中的偽像的新方法和組合物。一般地，所述方法可以包括使用醛系固定劑，諸如福爾馬林固定試劑固定組織樣品。醛系固定劑可以導(dǎo)致與組織樣品中的極性氨基酸和類似殘基形成亞甲基橋鍵。隨著時(shí)間的過去和在存在水的條件下，認(rèn)為這些亞甲基橋鍵中的一些可以天然地發(fā)生逆轉(zhuǎn)并將醛系固定劑釋放至溶液中。在不受理論限制的條件下，認(rèn)為組織樣品中游離的醛系固定劑分子的存在可以與組織染劑反應(yīng)或干擾組織染劑。本發(fā)明的范圍包括使固定的組織樣品與防止或抑制偽像形成的組合物相接觸。 該防止偽像的組合物可以包括以下列的方式與組織樣品中的游離醛系固定劑分子結(jié)合或否則反應(yīng)的任何化合物，所述方式是防止游離醛系固定劑形成偽像。例如，防止偽像的組合物可以包括一種或多種氨基酸、聚胺和/或在與醛系固定劑反應(yīng)時(shí)形成席夫堿Gchiff base)的化合物。合適的氨基酸的一些非限制性實(shí)例可以包括精氨酸，賴氨酸，酪氨酸，組氨酸，天冬酰胺，谷氨酰胺，和色氨酸殘基。合適的聚胺的一些非限制性實(shí)例包括由超過一個(gè)單元的單一類型氨基組成的聚合物(“均聚物”)和包含超過一種類型的氨基的聚合物(“雜聚物”)。因此，合適的聚胺的非限制性實(shí)例包括化學(xué)品或聚合物，其包括聚精氨酸，聚半胱氨酸，聚組氨酸，聚賴氨酸，腐胺，和聚乙烯亞胺，和/或帶正電氨基酸的均聚物或雜聚物。在無約束力的理論下，認(rèn)為聚胺和/或氨基酸與已經(jīng)由組織釋放的醛系固定劑結(jié)合或否則反應(yīng)，并可以，由此，防止或阻止固定劑結(jié)合組織和/或染劑而產(chǎn)生偽像。在類似的無約束力的理論下，認(rèn)為添加一種或多種形成席夫堿的化合物容許組織中的一部分，如果不是全部，游離固定劑通過被形成席夫堿的化合物捕獲和/或與形成席夫堿的化合物反應(yīng)而形成席夫堿，并由此防止或阻止游離醛系固定劑與組織樣品反應(yīng)而形成偽像。在一些情形中，游離固定劑、聚胺、和/或形成席夫堿的化合物之間的反應(yīng)在熱力學(xué)方面是有利的。因此，添加一種或多種氨基酸、聚胺、和/或形成席夫堿的化合物可以有效地防止組織樣品中的游離醛系固定劑形成新的或另外的偽像。固定的組織樣品可以在任意時(shí)刻與防止偽像的組合物相接觸。例如，固定的組織樣品可以在組織樣品與組織染劑溶液相接觸之前、之后、或同時(shí)與防止偽像的組合物接觸。 類似地，防止偽像的組合物可以單獨(dú)地或與含有一種或多種組織染劑的溶液組合地與固定的組織樣品合并。然而，在一些實(shí)施方案中，防止偽像的組合物和組織染劑合并在一起，隨后它們與組織樣品同時(shí)相接觸。事實(shí)上，因?yàn)榉乐箓蜗竦慕M合物可以意外地增加組織染劑的有用保存期，所以將組織染劑和防止偽像的組合物在溶液中混合在一起之后再將一部分該溶液與組織樣品合并會(huì)是有益的。
附圖簡(jiǎn)述以下說明可以根據(jù)若干附圖更好地理解，其中

圖1包含蘇木精和伊紅染色的骨髓樣品的照片，所述樣品未經(jīng)使用防止偽像的組合物處理；圖2包含蘇木精和伊紅染色的骨髓樣品的照片，所述樣品已經(jīng)使用防止偽像的組合物的代表性實(shí)施方案處理；圖3包含蘇木精和伊紅染色的人輸卵管組織樣品的照片，所述樣品未經(jīng)使用防止偽像的組合物處理；圖4包含蘇木精和伊紅染色的人輸卵管組織樣品的照片，所述樣品已經(jīng)使用防止偽像的組合物處理；圖5包含蘇木精和伊紅染色的人子宮內(nèi)膜組織樣品的照片，所述樣品未經(jīng)使用防止偽像的組合物處理；和圖6包含蘇木精和伊紅染色的人子宮內(nèi)膜組織樣品的照片，所述樣品已經(jīng)使用防止偽像的組合物處理。所述附圖與下列說明一起，可以有助于證明和解釋所述方法和組合物的原理。詳述可以參照下列的說明來理解所述發(fā)明的目前優(yōu)選的實(shí)施方案。應(yīng)該理解所述方法和組合物，如本文中一般公開地，可以以廣泛多樣的方式排列和設(shè)計(jì)。因此，本發(fā)明的實(shí)施方案的下列更詳細(xì)的描述不意欲限制本發(fā)明所要求保護(hù)的范圍，而僅代表本發(fā)明的目前優(yōu)選的實(shí)施方案。本申請(qǐng)一般地公開用于減少、逆轉(zhuǎn)、阻止或否則防止固定的組織樣品中的偽像的方法和組合物。更具體地，本申請(qǐng)公開了利用防止偽像的組合物來防止使用醛系固定劑固定的組織樣品中的偽像和改善其中的染色。為了更好地解釋所述的方法和組合物，本申請(qǐng)首先討論了醛系固定并然后討論了通過使樣品與防止偽像的組合物相接觸來防止使用醛系固定劑固定的組織樣品中的偽像。如所提及地，醛系固定劑可以用于化學(xué)地保存組織樣品。而且，已知的或新型的多種醛系固定劑可以用作所述固定劑。合適的醛系固定劑的一些實(shí)例包括甲醛，戊二醛，多聚甲醛，等。然而，為了更好地解釋防止偽像的組合物的應(yīng)用，本申請(qǐng)討論了一些非限制性實(shí)施方案，其中防止偽像的組合物用于已經(jīng)使用甲醛固定的組織樣品中。盡管在使用防止偽像的組合物處理前可以使用其他已知的或新型的甲醛溶液來固定組織樣品，但是甲醛經(jīng)常基于通常稱為福爾馬林的標(biāo)準(zhǔn)化甲醛水溶液來描述和使用。 甲醛，在室溫和1大氣壓下，是氣體。然而，甲醛通常作為水溶液來銷售。所使用的最常見水性濃度是37重量％ (40體積％ )溶液。該溶液包含37克甲醛氣體，至100克溶液中。 當(dāng)單獨(dú)保持在水中時(shí)，甲醛傾向于聚合。為了抑制甲醛溶液的聚合，加入甲醇直至約10體積％ -約15體積％的濃度。術(shù)語“福爾馬林”指定為這樣的溶液，即在水中的約37重量％ 甲醛氣體，通常具有約10體積％ -約15體積％甲醇。常用的甲醛固定試劑可以包括約10% 福爾馬林。因此，固定劑(或含有處于適合于組織樣品固定的濃度的固定劑或其他所需物質(zhì)的溶液)，即約10%福爾馬林可以包含約3. 7重量％ -約4重量％甲醛。在福爾馬林作為固定劑使用時(shí)，不同類型的福爾馬林或包含福爾馬林的固定試劑可以應(yīng)用于組織樣品。例如，組織樣品可以使用常規(guī)鋅-福爾馬林固定試劑、福爾馬林-乙酸固定試劑、或福爾馬林-醇固定試劑來固定。如本領(lǐng)域中已知地，所用的福爾馬林的形式可以取決于被固定的組織樣品的類型以及固定的樣品所需要的用途。合適濃度的固定劑可以用于固定試劑中，以化學(xué)保存組織樣品。事實(shí)上，固定試劑中的固定劑的濃度可以取決于所需的應(yīng)用。例如，如所述，常規(guī)福爾馬林固定試劑可以具有約3. 7重量％ -約4重量％甲醛的濃度。在另一個(gè)實(shí)例中，固定試劑具有約0. 2重量％ -約 6重量％甲醛的濃度。然而，在目前優(yōu)選的實(shí)例中，固定試劑具有約0.2重量約2重量％ 甲醛的濃度。在一個(gè)非限制性實(shí)例中，福爾馬林固定試劑具有約500毫滲摩爾-約2，000 毫滲摩爾的克分子滲透壓濃度和優(yōu)選約500毫滲摩爾-約1，200毫滲摩爾的克分子滲透壓濃度。然而，本公開內(nèi)容的教導(dǎo)可以關(guān)于不同合適濃度的不同固定劑來使用。醛系固定試劑，諸如福爾馬林固定試劑，可以另外包含適合于固定試劑的所需應(yīng)用的任何其他物質(zhì)。例如，固定試劑可以包含溶劑(例如，二甲基亞砜(“DMS0”)和水)、 去污劑、醇、緩沖液(例如，磷酸鹽緩沖液)、聚合物等。另外，醛系固定試劑可以包括可以起核酸，諸如DNA或RNA的穩(wěn)定劑作用的任何物質(zhì)。固定試劑，諸如含有福爾馬林和其他所需物質(zhì)的固定試劑，可以以任何合適的方式應(yīng)用于組織樣品中。例如，組織樣品可以浸沒于固定試劑中，用固定試劑灌注，用固定試劑噴灑，用固定試劑熏蒸，或否則與固定試劑接觸。在一個(gè)實(shí)例中，組織樣品可以完全浸沒于固定試劑中一段任何需要的時(shí)間量。然而，在另一個(gè)實(shí)例中，固定試劑可以注射至生物體，如斑馬魚(Danio rerio)的心臟中，注射體積與生物體心輸出量相匹配。在該實(shí)例中， 固定試劑可以然后灌注整個(gè)生物體。此外，可以遵從用于組織樣品固定的任何所需方法或方案。固定方法的實(shí)例參見 2007年12月10日提交的美國(guó)實(shí)用新型專利申請(qǐng)?zhí)?1/953，670，其標(biāo)題為制備用于顯微鏡分析的樣本的組合物和方法；將其全部?jī)?nèi)容通常引用結(jié)合于此。用于使用醛系固定劑，諸如福爾馬林固定試劑固定組織樣品的方案可以包括有助于固定組織樣品的任何步驟或程序。例如，組織樣品可以以多種方法來漂洗或洗滌。另外， 方案可以需要將組織樣品浸沒在固定試劑中一段合適的時(shí)間量。在一個(gè)非限制性實(shí)例中， 方案可以需要組織樣品浸沒在固定試劑中短至約30分鐘或長(zhǎng)至約72小時(shí)以上，其取決于樣品尺寸、類型、試劑溫度等。固定方案還可以包括加熱或冷卻樣品。方案還可以需要樣品通過一系列浴液(baths)脫水，所述一系列浴液可以逐漸增加醇濃度。而且，固定方案還可以包括將樣品包埋在石蠟中或甚至應(yīng)用第二固定劑。事實(shí)上，技術(shù)人員應(yīng)該認(rèn)識(shí)到固定方案可以包括許多另外的程序。此外，技術(shù)人員應(yīng)該認(rèn)識(shí)到已經(jīng)使用醛系固定劑固定的組織樣品可以以任何合適的方式來處理。例如，組織樣品可以冷凍，由低溫恒溫器切片，冷卻，保存，染色等。如前所述，一旦組織樣品已經(jīng)使用醛系固定劑固定，則與固定相關(guān)的偽像可以通過使組織樣品與防止偽像的組合物相接觸來防止，如本文中所述。防止偽像的組合物基于這樣的無約束力理論，即醛系固定劑與組織樣品中的極性氨基酸和類似殘基結(jié)合并與其形成亞甲基橋鍵。亞甲基橋鍵可以由亞甲醇或席夫堿中間物形成。亞甲醇或席夫堿中間物可以在醛系固定劑(例如，甲醛)與氨基酸殘基的N端或與賴氨酸、精氨酸、半胱氨酸、和組氨酸殘基上存在的氨基和/或硫醇基反應(yīng)時(shí)產(chǎn)生。亞甲醇和席夫堿中間物可以然后與精氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、組氨酸、色氨酸、胞嘧啶、和/或酪氨酸殘基反應(yīng)形成亞甲基橋鍵。(為了更完全討論通過甲醛和合成肽中的極性氨基酸和類似殘基反應(yīng)形成亞甲基橋鍵，參見 Bernard Metz 等，Identification of Formaldehyde-induced Modifications in Proteins =Reactionswith Model Peptides (鑒定蛋白中甲酸誘導(dǎo)的修飾與模型肽反應(yīng))，279J. BIOL. CHEM.(生物化學(xué))，6235-43 (2004年2月20日))。而且，在醛系固定過程中形成亞甲基橋鍵的化學(xué)反應(yīng)可以具有天然逆轉(zhuǎn)到一定程度的趨勢(shì)。例如，當(dāng)已經(jīng)使用醛系固定劑固定的樣品，即使以痕量暴露于水中，固定劑和組織之間的一些亞甲基橋鍵可以逆轉(zhuǎn)并且一些量的固定劑可以釋放至溶液中。經(jīng)過一段時(shí)期，亞甲基橋鍵的逐漸逆轉(zhuǎn)以釋放醛系固定劑可以促進(jìn)固定和染色的樣品中一些偽像的形成。在不受理論約束下，目前認(rèn)為醛系固定劑可以通過使組織樣品與防止偽像的組合物接觸而被阻止或防止形成偽像，所述防止偽像的組合物包括一種或多種以這樣的方式與醛系固定劑競(jìng)爭(zhēng)和/或反應(yīng)的化合物，所述方式是為釋放的或游離的固定劑提供備選的結(jié)合或反應(yīng)機(jī)會(huì)。另外，如果所述化合物呈現(xiàn)比組織樣品中的極性氨基酸或類似殘基更有利的結(jié)合條件，則由固定劑形成亞甲基橋鍵可以在熱力學(xué)上以有利于這些另外的化合物的方式被驅(qū)動(dòng)。所述化合物可以包括以這樣的方式與醛系固定劑反應(yīng)的任何化學(xué)品，所述方式是防止固定劑在組織樣品中形成偽像。與醛系固定劑結(jié)合、競(jìng)爭(zhēng)、和/或否則反應(yīng)的防止偽像的組合物中的化合物的一些實(shí)例可以包括一種或多種氨基酸、聚胺、和/或在與醛系固定劑反應(yīng)時(shí)形成席夫堿的化合物。在一些實(shí)施方案中，防止偽像的組合物包括一種或多種游離氨基酸，或不彼此結(jié)合形成聚合物的氨基酸。在這樣的實(shí)施方案中，組合物可以包括任何合適的氨基酸，所述合適的氨基酸能夠?qū)τ坞x醛系固定劑提供備選的結(jié)合或反應(yīng)位點(diǎn)，或否則能夠防止與醛系固定劑相關(guān)的偽像。所述游離氨基酸的一些非限制性實(shí)例包括游離的賴氨酸、精氨酸、酪氨酸殘基、組氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、和色氨酸殘基。事實(shí)上，在一些實(shí)施方案中，精氨酸、酪氨酸，和在更小的程度上，組氨酸、天冬酰胺，谷氨酰胺，和色氨酸殘基可以與由甘氨酸和甲醛形成的席夫堿加合物反應(yīng)，從而進(jìn)一步防止固定劑偽像。在一些實(shí)施方案中，防止偽像的組合物包括一種或多種聚胺。事實(shí)上，所述組合物可以包括任何聚胺，所述聚胺可以結(jié)合醛系固定劑(例如，甲醛)，可以對(duì)游離的醛系固定劑提供備選的結(jié)合或反應(yīng)位點(diǎn)，或可以以其他方式防止與醛系固定劑相關(guān)的偽像。防止使用醛系固定劑固定的組織樣品中的偽像的聚胺的一些非限制性實(shí)例可以包括均聚物(例如，含單一氨基的單體的有機(jī)聚合物)或雜聚物(例如，含混合氨基的單體的有機(jī)聚合物)。 均聚物的一些非限制性實(shí)例可以包括由聚賴氨酸、聚精氨酸、聚乙烯亞胺、聚色氨酸、腐胺、 尸胺、亞精胺、精胺、或任何其他合適的由單一氨基構(gòu)成的天然或合成聚合物組成。類似地， 雜聚物的一些非限制性實(shí)例包括這樣的聚合物，所述聚合物包含賴氨酸、聚賴氨酸、精氨酸、聚精氨酸、聚乙烯亞胺、聚色氨酸、腐胺、尸胺、亞精胺、精胺、和/或任何其他合適的天然或合成氨基，以任何合適的組合方式的組合。在防止偽像的組合物包括聚胺時(shí)，所述聚胺可以具有這樣的任何特性，即容許其防止游離醛系固定劑導(dǎo)致組織樣品中產(chǎn)生偽像。例如，防止偽像的組合物可以包括任何長(zhǎng)度的聚胺，所述長(zhǎng)度容許聚胺與溶液中的醛系固定劑結(jié)合或以其他的方式反應(yīng)。通過舉例說明，合適的聚胺可以包括容許聚胺與游離醛系固定劑結(jié)合或否則反應(yīng)的任何數(shù)量的氨基酸單體或殘基。例如，合適的聚賴氨酸或聚精氨酸可以分別包含約2-約1，500個(gè)賴氨酸或精氨酸殘基。另外，防止偽像的組合物可以包含任何分子量的聚胺，所述分子量適合于容許聚胺與醛系固定劑結(jié)合。在一個(gè)非限制性實(shí)例中，組合物包含分子量大于約20，000統(tǒng)一原子質(zhì)量單位的聚胺。然而，在另一個(gè)實(shí)例中，組合物包含分子量小于約20，000統(tǒng)一原子質(zhì)量單位的聚胺。在再一個(gè)實(shí)例中，組合物包括分子量在約4，000-約15，000之間的統(tǒng)一原子質(zhì)量單位的聚胺。雖然一些氨基酸和聚胺在與醛系固定劑反應(yīng)時(shí)可以形成席夫堿，但是在一些實(shí)施方案中，防止偽像的組合物包含一種或多種另外的在與醛系固定劑反應(yīng)時(shí)形成席夫堿的化合物。提出這樣的理論，即包含所述形成席夫堿的化合物的組合物可以以防止不需要的偽像的方式與組織樣品中的游離固定劑競(jìng)爭(zhēng)或?yàn)槠涮峁﹤溥x的結(jié)合和反應(yīng)機(jī)會(huì)。雖然所述組合物可以包含任何在與醛系固定劑反應(yīng)時(shí)形成席夫堿的化合物，但是合適的形成席夫堿的化合物的一些非限制性實(shí)例可以包括甘氨酸；精氨酸；天冬氨酸；聚乙烯亞胺；包含甘氨酸、精氨酸、天冬氨酸、聚乙烯亞胺的肽；和/或在與醛系固定劑反應(yīng)時(shí)形成席夫堿的任何其他天然或合成的化合物。形成席夫堿的化合物的一些另外的非限制性實(shí)例可以包括在與甲醛反應(yīng)時(shí)形成席夫堿的任何其他氨基酸。當(dāng)防止偽像的組合物包括包含形成席夫堿的化合物(例如，甘氨酸，精氨酸，天冬氨酸，和/或聚乙烯亞胺)的肽時(shí)，所述肽可以是天然的(例如，蛋白或其一部分)或合成的。另外，包含形成席夫堿的化合物的肽可以是僅包含單一類型的形成席夫堿的化合物的均肽(homop印tide)和/或所述肽可以是包含超過一種類型的形成席夫堿的化合物的雜肽 (heteropeptide)。在另一個(gè)實(shí)例中，所述肽中的氨基可以處于適合于防止使用醛系固定劑固定的組織樣品中的偽像的任何組合中。在再一個(gè)實(shí)例中，所述肽可以是任意長(zhǎng)度。例如， 所述肽可以短至約2個(gè)氨基酸或長(zhǎng)至約2，000個(gè)氨基酸以上。然而，在一些實(shí)例中，所述肽長(zhǎng)度范圍是約5-約200個(gè)氨基酸。在其他實(shí)例中，所述肽長(zhǎng)度范圍是約10-約50個(gè)氨基酸。在再一個(gè)實(shí)例中，所述組合物包含多個(gè)不同長(zhǎng)度的肽。防止偽像的組合物可以包括與游離醛系固定劑結(jié)合或反應(yīng)從而防止已經(jīng)使用醛系固定劑固定的組織樣品中的偽像的化學(xué)品或化合物的任意組合。事實(shí)上，在一些實(shí)施方案中，所述組合物包含一種或多種類型的聚胺。例如，所述組合物可以包含聚賴氨酸，聚精氨酸，或二者。然而，在其他實(shí)施方案中，所述組合物包含一種或多種形成席夫堿的化合物。 例如，所述組合物可以包含甘氨酸；精氨酸；天冬氨酸；聚乙烯亞胺；和/或包含甘氨酸，精氨酸，天冬氨酸，和/或聚乙烯亞胺的肽。在一些優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述組合物包含至少一種聚胺和至少一種形成席夫堿的化合物。在這樣的實(shí)施方案中，所述組合物可以包含任何合適數(shù)量的聚胺和形成席夫堿的化合物或它們的任何合適組合。在一個(gè)實(shí)例中，所述組合物包含聚賴氨酸、聚精氨酸、天冬酰胺、甘氨酸、和聚乙烯亞胺中的兩種或更多種的混合物。在另一個(gè)實(shí)例中，所述組合物包含聚賴氨酸和甘氨酸。在再一個(gè)實(shí)例中，所述組合物包含聚精氨酸和甘氨酸。防止偽像的組合物中的多種化合物也可以具有容許它們防止已經(jīng)使用醛系固定劑固定的組織樣品中的偽像的任何特性。例如，所述化合物(例如，一種或多種聚胺和/或形成席夫堿的化合物)可以具有多種不同官能團(tuán)、殘基數(shù)目、分子量、化學(xué)亞群，等。防止偽像的組合物還可以包含容許所述組合物防止已經(jīng)使用醛系固定劑固定的組織樣品中的偽像的任何其他元素或化學(xué)品。例如，所述組合物可以包含水和/或一種或多種緩沖液、醇、溶劑(例如，水或DMSO)、pH調(diào)節(jié)劑、去污劑、組織染劑、等。防止偽像的組合物的終溶液或用于處理固定的組織樣品的組合物的終溶液中的化合物可以具有容許該組合物防止已經(jīng)使用醛系固定劑固定的組織樣品中的偽像的任何濃度或濃度組合。例如，所述組合物的終溶液可以包含任何合適濃度的聚胺。在其中所述組合物包含一種或多種聚胺的一些實(shí)施方案中，所述組合物的終溶液中的一種或多種聚胺的濃度是約2重量％ -約IX 10,重量％。在其他實(shí)施方案中，所述組合物的終溶液中的各聚胺的濃度是約1X10_4重量％ -約1X10_8重量％。在其他實(shí)施方案中，所述組合物的終溶液中的各聚胺的濃度是約IX 10_6重量％ -約8. 3X IO-7重量％。例如，盡管防止偽像的組合物的終溶液可以包含不同濃度的不同聚胺，在一些情形中，所述終溶液包含終濃度為約3. 3 X ΙΟ"7重量％的聚胺(例如，聚賴氨酸和聚精氨酸)。在另一個(gè)實(shí)例中，防止偽像的組合物的終溶液可以包含任何合適濃度的形成席夫堿的化合物。在其中所述組合物包含一種或多種形成席夫堿的化合物的一些實(shí)施方案中， 所述終溶液中的一種或多種形成席夫堿的化合物的濃度是約1X10_2重量％ -約1X10, 重量％。在其他實(shí)施方案中，所述終溶液中各形成席夫堿的化合物的濃度是約1X10—4重量％ -約1X10—8重量％。在其他實(shí)施方案中，所述終溶液中各形成席夫堿的化合物的濃度是約IX 10_5重量％ -約9. 9X 10_7重量％。在一些優(yōu)選的實(shí)施方案中，形成席夫堿的化合物以約1 X IO-7重量％ -約9. 9 X IO-7重量％的濃度存在于所述終溶液中。盡管防止偽像的組合物的終溶液可以包含具有大致相同濃度的多種形成席夫堿的化合物，但是在一些情形中，所述組合物的終溶液包含濃度為約3X 10_6重量％的一種形成席夫堿的化合物(例如， 天冬氨酸)，濃度為約3X 10_5重量％的另一種形成席夫堿的化合物(例如，甘氨酸)，和濃度為約3X 10_7重量％的再一種形成席夫堿的化合物(例如，聚乙烯亞胺)。所述組合物的終溶液可以以任何合適的方式制備，所述方式是為該溶液提供足夠濃度的聚胺和/或形成席夫堿的化合物，從而防止與醛系固定劑相關(guān)的偽像。例如，防止偽像的組合物可以以終濃度或作為濃縮的儲(chǔ)液來制備和分配，所述儲(chǔ)液可以然后稀釋形成終溶液。事實(shí)上，因?yàn)橐缘蜐舛确乐箓蜗竦慕M合物開始并然后增加濃度直至獲得所需的結(jié)果是有益的，所以在一些實(shí)施方案中，濃縮的儲(chǔ)液可以是優(yōu)選的。在這樣的實(shí)施方案中，所述儲(chǔ)液可以具有任何合適濃度的醛反應(yīng)性化合物。另外，多種醛反應(yīng)性化合物的濃度可以逐個(gè)樣品而變化，其取決于諸如組織厚度、組織類型、溫度、處理時(shí)間期限等。濃縮的儲(chǔ)液可以以任何合適的方式添加至溶劑(例如，水、醇、組織染劑溶液等)， 以形成所述組合物的終溶液。例如，儲(chǔ)液可以借助于微量吸移管、滴管、量筒等添加至溶劑。 然而，在一些實(shí)施方案中，將儲(chǔ)液逐滴稀釋至溶劑中可以是有益的。例如，當(dāng)儲(chǔ)液包含約 0. 02%聚賴氨酸，約0. 02%聚精氨酸，約0. 01 %天冬酰胺，約0. 1 %甘氨酸，和約0. 001 %聚乙烯亞胺時(shí)，1滴(約40-約50微升)儲(chǔ)液可以添加至約600微升溶劑。可以然后向溶劑中添加額外滴數(shù)的儲(chǔ)液，直至在組織樣品中獲得所需的結(jié)果。例如，可以將2，3，4，5，或更多滴加入至600微升溶劑中。事實(shí)上，本領(lǐng)域中技術(shù)人員應(yīng)該認(rèn)識(shí)到組織類型、固定方法、組織染劑、組織厚度等在應(yīng)用和實(shí)驗(yàn)室之間可以變化很大。固定的組織樣品可以使用防止偽像的組合物，在容許所述組合物防止偽像的任何時(shí)刻來處理。例如，在組織樣品已經(jīng)被固定后但在該樣品被染色前，它可以與所述組合物接觸。在另一個(gè)實(shí)例中，樣品可以在該樣品被固定后，與染劑和所述組合物接觸。在該實(shí)例中， 所述組合物可以在染色過程中的任何合適時(shí)刻與樣品接觸。例如，所述組合物可以與組織染劑合并形成可以與組織樣品相接觸的溶液。然而，在其他實(shí)例中，染劑可以與組織樣品相接觸并然后可以將所述組合物加入至樣品周圍的染劑溶液中。事實(shí)上，在一些實(shí)施方案中，在染色過程中使用防止偽像的組合物處理樣品是有益的。例如，一些組織染劑可以與醛系固定劑競(jìng)爭(zhēng)組織中的結(jié)合位點(diǎn)，并由此，起防止偽像的作用。類似地，一些染劑可以逆轉(zhuǎn)由醛系固定劑形成的亞甲基橋鍵，從而將固定劑釋放至溶液中并增加與防止偽像的組合物中的聚胺和/或形成席夫堿的化合物結(jié)合或否則反應(yīng)的固定劑的量。在一些實(shí)例中，在染色過程中添加防止偽像的組合物也可以通過修飾組織樣品中結(jié)合位點(diǎn)起改善染色的作用。例如，防止偽像的組合物可以起修飾組蛋白尾部中的結(jié)合位點(diǎn)的作用，其可以增加與所述位點(diǎn)結(jié)合的染劑的量。在其他實(shí)施方案中，在組織樣品已經(jīng)固定和染色后使組織樣品和防止偽像的組合物相接觸可能是有益的。在一個(gè)實(shí)例中，樣品可以固定并使用第一染劑染色，隨后與包含防止偽像的組合物的第二染劑溶液接觸。例如，在樣品已經(jīng)固定并使用蘇木精染劑染色后，該樣品可以與包含防止偽像的組合物的伊紅染劑溶液相接觸。在另一個(gè)實(shí)例中，組織樣品可以在該樣品已經(jīng)固定并染色后使用防止偽像的組合物來處理。例如，固定、染色并隨后置于儲(chǔ)藏器中的組織樣品可以從儲(chǔ)藏器中移出并然后使用防止偽像的組合物來處理，以減少、 逆轉(zhuǎn)、或否則防止組織中的偽像。防止偽像的組合物可以與容許所述組合物防止已經(jīng)使用醛系固定劑固定的組織樣品中的偽像的任何組織染劑或任何數(shù)量的染劑一起使用。例如，所述組合物可以在使用簡(jiǎn)單染劑，包括但不僅限于蘇木精和/或伊紅染色的組織樣品上使用。合適的簡(jiǎn)單染劑的一些另外的實(shí)例包括嚇Rg橙、俾斯麥棕、洋紅、考馬斯藍(lán)、結(jié)晶紫、DAPI、溴化乙錠、品紅、 Hoechst染劑、紅海蔥(rodine)、孔雀石綠、甲基綠、亞甲基藍(lán)、中性紅、尼羅藍(lán)、尼羅紅、四氧化鋨、羅丹明、safanin等。在另一個(gè)實(shí)例中，所述組合物可以在使用復(fù)雜染劑，諸如免疫過氧化物酶、堿性磷酸酶、和/或免疫熒光染色的樣品上使用。例如，所述組合物可以在已經(jīng)使用一種或多種熒光團(tuán)，諸如綠色熒光蛋白染色的組織樣品上使用。在這樣的實(shí)例中，組織樣品可以使用任何合適數(shù)量諸如2、5、10、20、30或更多個(gè)熒光團(tuán)來染色。在另一個(gè)非限制性實(shí)例中，所述組合物可以用于防止已經(jīng)在原位雜交過程中染色或使用考馬斯藍(lán)染色的組織樣品中的偽像。防止偽像的組合物可以以任何方式添加至固定的組織樣品，所述方式是容許該組合物防止所述樣品中的偽像。例如，固定的組織樣品可以被防止偽像的組合物浸沒，被防止偽像的組合物噴灑，用防止偽像的組合物漂洗，或否則與防止偽像的組合物接觸。在一些實(shí)施方案中，在包含適當(dāng)濃度的一種或多種醛反應(yīng)性化合物和其他所需物質(zhì)的組合物的終溶液中浸沒樣品是有益的。在與組織樣品接觸后，防止偽像的組合物的終溶液可以保持與所述樣品相接觸持續(xù)足以防止與醛系固定劑相關(guān)的偽像的任意時(shí)間段。例如，樣品可以保持與所述組合物相接觸一段短至數(shù)秒或長(zhǎng)至數(shù)日的時(shí)期。例如，所述組合物的終溶液可以保持與固定的組織樣品相接觸小于約25分鐘。然而，在其他實(shí)例中，固定的組織可以與所述組合物的終溶液相接觸約10秒-約5分鐘的時(shí)間段。在其他實(shí)例中，組織樣品可以保持與所述組合物相接觸約2. 5分鐘-約3分鐘。一旦組織已經(jīng)與防止偽像的組合物接觸，來自所述組合物的聚胺和/或形成席夫堿的化合物可以通過本領(lǐng)域中已知的任何方法或技術(shù)從樣品中除去。例如，組合物的聚胺和/或形成席夫堿的化合物以及任何反應(yīng)的醛系固定劑可以通過沖洗樣品，在一系列浴液中洗滌樣品，等從組織樣品中除去。以這樣的方式，釋放的醛系固定劑可以從組織樣品中除去，從而防止釋放的固定劑導(dǎo)致樣品中增加偽像。使用與已經(jīng)釋放至溶液中的醛系固定劑結(jié)合或否則反應(yīng)的一種或多種聚胺和/ 或形成席夫堿的化合物可以提供若干優(yōu)勢(shì)。例如，使用所述的防止偽像的組合物處理固定的樣品可以起容許更多染劑結(jié)合組織樣品中的極性氨基酸和類似殘基的作用。因此，防止偽像的組合物可以改善組織染色并增加染色強(qiáng)度。類似地，使用所述組合物的處理可以減少組織樣品中醛系固定劑色素的量。所述組合物還可以起恢復(fù)使用醛系固定劑固定的組織的免疫反應(yīng)性的作用并，由此，增加以免疫組化法染色組織的能力。另外，所述組合物可以起捕獲醛系固定劑的作用，所述醛系固定劑已經(jīng)通過與染劑諸如蘇木精的延長(zhǎng)時(shí)間暴露而釋放至溶液中。因此，所述組合物可以防止另外的偽像的形成。而且，防止偽像的組合物可以使細(xì)胞和細(xì)胞結(jié)構(gòu)恢復(fù)至它們固定前的尺寸和形狀。以這樣的方式，所述組合物可以改善組織形態(tài)學(xué)和染色特征。另外，混合防止偽像的組合物和組織染劑(例如，蘇木精，伊紅，等)可以提供若干優(yōu)勢(shì)。在與混合所述組合物和組織染劑相關(guān)的出人意料的優(yōu)勢(shì)的一個(gè)實(shí)例中，所述組合物可以起增加組織染劑的有效保存期的作用。例如，其中無防止偽像的組合物的染劑溶液在其開始沉淀或否則失去其反應(yīng)性之前，僅可以在室溫和無細(xì)菌污染的條件下下維持幾天 (例如，一周)。具有防止偽像的組合物的相同組織染劑溶液可以維持2、3、4、5、6、7、8或更多倍更長(zhǎng)的時(shí)間而不發(fā)生沉淀且不過度降低反應(yīng)性。在一個(gè)非限制性實(shí)例中，在無防止偽像的組合物的染劑溶液的有效保存期為約7天的情況下，組織染劑的保存期可以增加選自約6-約8周的一段時(shí)期。該延長(zhǎng)的保存期可以通過在所述組合物的效力耗盡時(shí)，添加防止偽像的組合物1次，或2、3、4或更多次來實(shí)現(xiàn)。當(dāng)然，由防止偽像的組合物增加的組織染劑的保存期的倍數(shù)可以根據(jù)許多因素，諸如所用的染劑、組織厚度、組織類型、固定方法、防止偽像的組合物的濃度、組合物加入至染劑的次數(shù)等而變化。
實(shí)施例關(guān)于本公開內(nèi)容提供的附圖包括三種不同類型的固定的和染色的人組織樣品的比較圖像。具體地，圖1和2包含人骨髓組織的圖像，圖3和4包含人輸卵管組織的圖像， 且圖5和6包含人子宮內(nèi)膜組織的圖像。在各附圖中，樣品利用類似的固定劑介質(zhì)和技術(shù)制備。例如，在圖1-6中，組織樣品使用固定試劑，即約5%福爾馬林來固定。而且，圖1-6 中的樣品分別使用類似的方法和組合物來染色。例如，圖1-6中的樣品分別使用靶向組蛋白末端尾部(細(xì)胞核中)的蘇木精和靶向蛋白(細(xì)胞質(zhì)中)的伊紅來染色。另外，每幅照片均使用LEICA 光學(xué)顯微鏡，以1250X放大倍數(shù)拍攝。盡管圖1-6中的樣品以實(shí)質(zhì)上相同的方式固定和染色，但是僅一半樣品使用防止偽像的組合物處理。具體地，圖2、4和6中的樣品使用防止偽像的組合物處理，而圖1、3、5 中的樣品沒有。為了更好地說明防止偽像的組合物的效力，沒有使用防止偽像的組合物處理的多種組織樣品，或未處理樣品，與相應(yīng)的處理的組織樣品，或使用該組合物處理的組織樣品進(jìn)行比較。在一個(gè)比較實(shí)施例中，圖1和2圖示圖1中的未處理的骨髓組織樣品100具有若干偽像，這些偽像在圖2所示的處理的樣品200中減少或不存在。例如，圖1的樣品中的細(xì)胞核102的邊界(boarder)趨向于模糊和輪廓不分明，而圖2的樣品中的細(xì)胞核202趨向于清楚和輪廓分明。而且，在圖2中，核仁204與圖1中的核仁104相比似乎輪廓更分明和
更明顯。另外，圖1中的細(xì)胞質(zhì)106似乎具有空泡偽像，其中細(xì)胞質(zhì)106中充滿小泡，這使細(xì)胞質(zhì)106呈現(xiàn)大理石狀的外觀并使其輪廓不分明。相反，圖2中的細(xì)胞質(zhì)206似乎無任何明顯的細(xì)胞質(zhì)空泡化。因此，圖2中的細(xì)胞質(zhì)206似乎是平滑的并與圖1中的細(xì)胞質(zhì)邊界108相比似乎具有輪廓更分明的細(xì)胞質(zhì)邊界208。在另一個(gè)比較實(shí)施例中，圖3和4顯示圖3中未處理的輸卵管組織樣品300具有若干偽像，這些偽像在圖4中處理的輸卵管組織樣品400中減少或不存在。例如，圖3和 4的樣品300和400的比較顯示圖4中處理的樣品400中的纖毛402與圖3中未處理的樣品300中的纖毛302相比似乎輪廓更分明。類似地，圖4中通過細(xì)胞膜406的纖毛錨 (anchoring)404與圖3中的纖毛錨304相比似乎更明顯和輪廓分明。另外，圖4的處理的樣品400中的細(xì)胞質(zhì)408和細(xì)胞核410與圖3中未處理的樣品的細(xì)胞質(zhì)308和細(xì)胞核310 相比似乎更清楚和輪廓更分明。在最后的比較實(shí)施例中，圖5和6圖示圖5中未處理的子宮內(nèi)膜組織樣品500具有若干偽像，這些偽像在圖6中處理的子宮內(nèi)膜組織樣品600中減少或不存在。例如，圖5 中的基質(zhì)細(xì)胞502和子宮內(nèi)膜管狀腺細(xì)胞504與圖6中的基質(zhì)細(xì)胞602和子宮內(nèi)膜管狀腺細(xì)胞604相比似乎更加顯著地靠在一起。類似地，處理的樣品600(圖6)中的細(xì)胞核606和細(xì)胞質(zhì)608與圖5的未處理樣品500中的細(xì)胞核506和細(xì)胞質(zhì)508相比似乎更輪廓分明， 并包括圖5的未處理樣品500中的細(xì)胞核506和細(xì)胞質(zhì)508中不存在的細(xì)微特征。簡(jiǎn)言之，圖1、3、和5中的未處理的樣品和圖2、4、和6中的處理的樣品的比較顯示在圖2、4、和6中向樣品加入防止偽像的組合物可以極大地減少固定的和染色的組織樣品中的偽像。本方法和組合物可以具體表現(xiàn)為其他特定形式，而不偏離如在本文中廣泛所述和下面要求保護(hù)的其結(jié)構(gòu)、方法、或其他基本特征。所述的實(shí)施例和實(shí)施方案在所有方面僅被認(rèn)為是舉例說明性的而非限制性的。本發(fā)明的范圍因此通過所附的權(quán)利要求而非通過前述說明來指定。在權(quán)利要求的含義和等價(jià)范圍內(nèi)的所有變化包括在權(quán)利要求的范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種用于防止使用醛系固定劑固定的組織樣品中的固定劑偽像的方法，所述方法包括獲得使用醛系固定試劑固定的組織樣品；使所述組織樣品與防止偽像的組合物相接觸，所述防止偽像的組合物與游離醛系固定試劑反應(yīng)，從而防止偽像形成；和使所述組織樣品與組織染劑相接觸。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述防止偽像的組合物包含聚胺。
3.根據(jù)權(quán)利要求2的方法，其中所述防止偽像的組合物包含形成席夫堿的化合物。
4.根據(jù)權(quán)利要求2的方法，其中所述聚胺選自包含精氨酸、聚精氨酸、賴氨酸、聚賴氨酸、腐胺、聚乙烯胺、色氨酸、聚色氨酸、尸胺、亞精胺、精胺、及其組合的聚合物。
5.根據(jù)權(quán)利要求3的方法，其中所述形成席夫堿的化合物選自甘氨酸；精氨酸；天冬氨酸；包含甘氨酸、精氨酸、或天冬氨酸的肽；聚乙烯亞胺；及其組合。
6.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述醛系固定試劑包含甲醛。
7.根據(jù)權(quán)利要求2的方法，其中所述聚胺與處于選自以下的濃度的組織樣品相接觸a.約1Χ1(Γ2% -約 IX KT1 重量％ ；b.約1 X 10_4% -約 1 X 1(Γ8 重量 ％ ；c.約1Χ1(Γ6% -約 8. 3X10"重量％ ；d.約3.3X10—7 重量 ％。
8.根據(jù)權(quán)利要求3的方法，其中所述形成席夫堿的化合物存在于處于選自以下的濃度的終溶液中a.約1Χ1(Γ2% -約 IX KT1 重量％ ；b.約1 X 10_4% -約 1 X 1(Γ8 重量 ％ ；c.約1Χ1(Γ5% -約 9X10"重量％ ；禾口d.約1X10"% -約 9. 9X10"重量％。
9.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述組織染劑選自簡(jiǎn)單的組織染劑或復(fù)雜的組織染劑。
10.根據(jù)權(quán)利要求9的方法，其中所述組織染劑選自免疫過氧化物酶、熒光團(tuán)、蘇木精、 伊紅、及其組合。
11.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述組織染劑和所述防止偽像的組合物在接觸所述組織樣品之前合并在一起。
12.一種防止偽像的組合物，其防止使用醛系固定劑固定的組織樣品中的偽像，所述組合物包含終濃度為約IX 10_2重量％ -約IX 10,重量％的聚胺。
13.根據(jù)權(quán)利要求12的組合物，還包含形成席夫堿的化合物。
14.根據(jù)權(quán)利要求12的組合物，其中所述聚胺選自包含精氨酸、聚精氨酸、賴氨酸、聚賴氨酸、腐胺、聚乙烯胺、色氨酸、聚色氨酸、尸胺、亞精胺、精胺、及其組合的聚合物。
15.根據(jù)權(quán)利要求12的組合物，其中所述防止偽像的組合物還包含組織染劑。
16.根據(jù)權(quán)利要求13的組合物，其中所述形成席夫堿的化合物選自甘氨酸；精氨酸 ’天冬氨酸；聚乙烯亞胺；包含甘氨酸、精氨酸、或天冬氨酸的肽；聚乙烯亞胺；及其組合。
17.根據(jù)權(quán)利要求16的組合物，其中所述形成席夫堿的化合物包含甘氨酸。
18.根據(jù)權(quán)利要求12的組合物，其中所述組合物的終溶液包含處于選自以下的終濃度的聚胺a.約1 X 10_4% -約 1 X 1(Γ8 重量 ％ ；b.約1X10-6% -約 8.3X10—7 重量％ ；和c.約3. 3X10〃 重量 ％。
19.根據(jù)權(quán)利要求13的組合物，其中所述組合物的終溶液包含處于選自以下的終濃度的形成席夫堿的化合物a.約1Χ1(Γ2% -約 IX KT1 重量％ ；b.約1 X 10_4% -約 1 X 1(Γ8 重量 ％ ；c.約1Χ1(Γ5% -約 9X10"重量％ ；禾口d.約1X10"% -約 9. 9X10"重量％。
20.一種增加組織染劑的有效保存期的方法，所述方法包括 提供組織染劑；和將包含聚胺的防止偽像的組合物加入至所述組織染劑。
21.根據(jù)權(quán)利要求20的方法，其中所述防止偽像的組合物還包含形成席夫堿的化合物。
22.根據(jù)權(quán)利要求20的方法，其中所述組織染劑選自免疫過氧化物酶、熒光團(tuán)、蘇木精、伊紅、及其組合。
23.根據(jù)權(quán)利要求20的方法，其中所述聚胺選自包含精氨酸、聚精氨酸、賴氨酸、聚賴氨酸、腐胺、聚乙烯胺、色氨酸、聚色氨酸、尸胺、亞精胺、精胺、及其組合的聚合物。
24.根據(jù)權(quán)利要求21的方法，其中所述形成席夫堿的化合物選自甘氨酸；精氨酸；天冬氨酸；聚乙烯亞胺；包含甘氨酸、精氨酸、或天冬氨酸的肽；聚乙烯亞胺；及其組合。
全文摘要
描述了用于防止使用醛系固定劑固定的組織樣品中的偽像的方法和組合物。所述方法包括使用醛系固定劑，諸如福爾馬林固定試劑固定組織樣品。固定后，組織樣品可以與單獨(dú)的各自包含防止偽像的組合物或組織染劑的溶液相接觸。然而，因?yàn)榉乐箓蜗竦慕M合物可以增加染劑的保存期，所以所述染劑和所述組合物優(yōu)選在加入至樣品前混合。防止偽像的組合物可以包括一種或多種氨基酸、聚胺、和/或形成席夫堿的化合物。所述組合物的成分可以與游離的固定劑結(jié)合或反應(yīng)，以防止固定劑偽像。另外，防止偽像的組合物和游離的醛系固定劑之間的反應(yīng)可以是有利的，這歸因于防止偽像的組合物的組分的熱力學(xué)、小尺寸、高度擴(kuò)散能力、和/或高濃度。
文檔編號(hào)G01N33/50GK102203604SQ200980141997
公開日2011年9月28日 申請(qǐng)日期2009年10月20日 優(yōu)先權(quán)日2008年10月21日
發(fā)明者托馬斯·M·東德林格 申請(qǐng)人:托馬斯·M·東德林格