苯并三氮唑類化合物、制備方法和其醫(yī)藥用圖
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥領域，具體涉及涉及一類小分子苯并三氮唑類化合物、藥學上可 接受的鹽及其醫(yī)藥用途。 技術背景
[0002] 癌癥長期以來威脅著人類的健康，與糖尿病、心腦血管疾病并稱為人類健康的三 大殺手。對于癌癥，目前的主要治療手段分為外科手術治療、放療和化療。雖然，對于早期 的癌癥患者，可以通過手術的方法切除腫瘤，但是到中晚期之后，癌細胞就會擴散，相應的 手術切除方法也不會達到很好的治療效果。
[0003] 隨著人類基因組計劃及測序技術的飛速發(fā)展，通過對人類腫瘤樣本進行全基因組 測序分析，可以準確地獲取腫瘤基因組復雜的遺傳信息，對腫瘤的發(fā)生發(fā)展及其遺傳復雜 性獲得更多的認識，并為腫瘤的分子分型和患者的個性化治療提供有利信息。腫瘤是一種 基因病這一觀點現(xiàn)已被廣泛接受，腫瘤的發(fā)生是由多個相關基因（高頻突變和低頻突變 的基因）共同突變引起的，包括癌基因的激活表達和抑癌基因的失活，這也是腫瘤細胞無 限制生長的分子基礎。雖然腫瘤細胞中存在大量不同類型的基因突變，但只有少數(shù)基因 (15-20個）的突變才能開啟腫瘤發(fā)生的進程。在人類眾多的癌基因中，RAS是腫瘤中突變 概率最高的基因家族之一。據(jù)統(tǒng)計RAS突變腫瘤約占人類所有惡性腫瘤總數(shù)的三分之一， 且其頻發(fā)于肺癌，結腸癌和胰腺癌中，這三類腫瘤和乳腺癌一起構成人類四大致死性癌癥。 可見RAS突變腫瘤危害極大。
[0004] RAS蛋白是原癌基因 RAS的編碼產(chǎn)物，為RAS超家族蛋白重要成員之一，是一類分 子量為20~25kDa的單體GTP結合蛋白。RAS蛋白在正常生理狀態(tài)下通常處于非活化狀 態(tài)，RAS蛋白的活化受到嚴格地調(diào)控，活化的RAS蛋白在發(fā)揮其功能后迅速恢復到非活化狀 態(tài)，有序地調(diào)控下游信號通路，從而維持細胞正常的生長、分化等。但RAS作為原癌基因，一 旦被激活就成了具有致癌活性的癌基因。RAS基因最常見的激活方式是基因的錯義突變， 通常發(fā)生在12,13和61位密碼子上?；蛲蛔儗е翿AS蛋白空間結構的改變，使RAS處 于與GTP結合的持續(xù)活化狀態(tài)，不斷激活下游信號通路，從而導致細胞的增殖失控，產(chǎn)生癌 變。RAS基因家族的三個成員HRAS、NRAS和KRAS，它們在不同的腫瘤類型中突變概率不盡 相同，存在著組織特異性，HRAS常見突變于皮膚（黑色素瘤）和頭頸癌中，NRAS常見突變于 造血系統(tǒng)惡性腫瘤中，而KRAS則常見突變于結直腸癌、肺癌（尤其是非小細胞肺癌）及胰 腺癌中。KRAS的突變占所有RAS基因突變的86%，約占人類所有惡性腫瘤的21.6%。在結 腸癌中，KRAS突變腫瘤占到45 %，肺癌中有35 %，而胰腺癌則高達90 %。有研究報道，KRAS 突變能造成某些特定的細胞表現(xiàn)出干細胞特性，而HRAS和NRAS卻沒有這種功能，這一特性 也被認為是KRAS較HRAS和NRAS在人類腫瘤中有更高突變概率的可能原因，KRAS基因的 突變更利于癌癥的發(fā)生。
[0005] RAS基因作為重要的癌基因自發(fā)現(xiàn)以來已被研究了三十多年，其蛋白結構、功能、 活化機制及上下游信號通路也日益明確；RAS基因，尤其是KRAS基因，在人類腫瘤中的高突 變率及其在腫瘤發(fā)生發(fā)展中重要的推動作用使其成為腫瘤分子靶向治療的一個理想的靶 點，也是腫瘤細胞中主要的依賴性癌基因。然而迄今為止臨床上尚無有效治療RAS突變腫 瘤的小分子抑制劑。因此針對RAS突變進行藥物開發(fā)和腫瘤治療具有重要意義。
[0006] 本發(fā)明以等基因細胞系T29和KTlP(KRASm)為篩選模型，利用協(xié)同致死模型經(jīng)過 對大量化合物的生物活性篩選后創(chuàng)新性地發(fā)現(xiàn)一類含有苯并三氮唑類結構骨架的小分子 有機化合物及其藥學上可接受的鹽具有特異性抑制RAS突變腫瘤細胞存活的能力，并在此 基礎上設計并合成了一類特異性靶向RAS突變的抗癌小分子活性化合物，經(jīng)過后續(xù)深入研 究發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明化合物具有很好的抑制RAS突變惡性腫瘤生長和轉移活性，并且對RAS突變 的腫瘤細胞也具有優(yōu)異的選擇性。這類化學結構新穎的活性化合物可以用于治療由于RAS 突變引起的腫瘤生長和轉移，并有希望成為腫瘤治療的一類候選藥物。該類化合物或含有 該類化合物的藥物組合物在制備治療靶向于RAS基因突變的腫瘤藥物中的用途，以及用于 制備預防和治療各種由于RAS基因突變引發(fā)的腫瘤發(fā)生和發(fā)展，包括腫瘤生長、浸潤和轉 移藥物中的用途。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的第一個目的在于提供一類結構新穎的苯并三氮唑類化合物可作為預防 和治療由RAS基因突變引起的抗腫瘤先導化合物，包括其藥學上可接受的鹽等。
[0008] 本發(fā)明合成結構如式（I)所示的一類苯并三氮唑或苯并異咪唑化合物或藥學上 可接受的鹽：
[0010] 其中：
[0011] m和P指鏈狀亞甲基的個數(shù)，分別為0、1、2、3或者4。
[0012] η指羰基的個數(shù)，分別為0或者1個。
[0013] R1指苯環(huán)上的取代基，取自下列基團：氫、甲基、甲氧基、鹵素、芐氧基、氰基、酰胺 基。
[0014] R2取自下列基團：氰基、ONO2、鹵素、羥基、羧基、甲氧基、環(huán)丙烷基、呋喃基、乙烯 基、乙烯基羧基、三氟甲基、5-溴呋喃基、苯基、吡啶基、甲苯基、甲磺酰苯基、C1-C3烷氧基 苯基、環(huán)戊氧基苯基、鹵代苯基、硝基苯基、芐氧基苯基、羥基苯基。
[0015] 本發(fā)明所示結構式中，當R2為取代苯基，m = 0時，其由下述結構式（II)表示：
[0018] p指鏈狀亞甲基的個數(shù)，分別為〇、1、2、3或者4。
[0019] η指羰基的個數(shù)，分別為0或者1個。
[0020] R1指苯環(huán)上的取代基，取自下列基團：氫、甲基、甲氧基、鹵素、芐氧基、氰基、酰胺 基。
[0021] R3取自下列基團：氫、羥基、甲基、鹵素、C1-C3烷氧基、環(huán)戊氧基、三氟甲基、芐氧 基、硝基、甲磺?；?。
[0022] 本發(fā)明提供苯并三氮唑類化合物或其類似物或藥學上可接受的鹽，包括：
[0023] 5-溴呋喃-2-羧酸[2- (4-甲氧基苯基）-2Η-苯并三唑-5-基]-酰胺，
[0024] 5-溴呋喃-2-羧酸[2- (4-氯苯基）-2Η-苯并三唑-5-基]-酰胺，
[0025] 5-溴呋喃-2-羧酸[2- (4-溴苯基）-2Η-苯并三唑-5-基]-酰胺，
[0026] 5-溴呋喃-2-羧酸[2- (4-甲基苯基）-2Η-苯并三唑-5-基]-酰胺，
[0027] 5-溴呋喃-2-羧酸[2_(3, 5-二甲基苯基）-2Η_苯并三唑-5-基]-酰胺，
[0028] 5-溴呋喃-2-羧酸[2- (4-芐氧基苯基）-2Η-苯并三唑-5-基]-酰胺，
[0029] 5-溴呋喃-2-羧酸[2- (4-乙酰氨基苯基）-2Η-苯并三唑-5-基]-酰胺，
[0030] 5-溴呋喃-2-羧酸[2- (4-氰基苯基）-2Η-苯并三唑-5-基]-酰胺，
[0031] 5-溴呋喃-2-羧酸[2-(4-氟苯基）-2Η-苯并三唑-5-基]-酰胺，
[0032] 5-溴呋喃-2-羧酸[2-(3, 4, 5-三甲氧基苯基）-2Η-苯并三唑-5-基]-酰胺，
[0033] 5-溴呋喃-2-羧酸[2-苯基-2Η-苯并三唑-5-基]-酰胺，
[0034] 5-溴呋喃-2-羧酸[2-芐基-2Η-苯并三唑-5-基]-酰胺，
[0035] 5-溴呋喃-2-羧酸[1-(3-苯基丙基）-IH-苯并三唑-5-基]-酰胺，
[0036] 1-苯基羧酸[2-(4-甲氧基苯基）-2H_苯并三唑-5-基]-酰胺，
[0037] 1-(2-吡啶基）_羧酸[2-(4-甲氧基苯基）-2H_苯并三唑-5-基]-酰胺，
[0038] 1-(2,3,4_三甲氧基苯基）_羧酸[2-(4-甲氧基苯基）-2H_苯并三唑-5-基]-酰 胺，
[0039] 1-(2,4_二甲氧基苯基）_羧酸[2-(4-甲氧基苯基）-2H_苯并三唑-5-基]-酰 胺，
[0040] 2-(4-碘苯基）-N-[2-(4-甲氧基苯基）-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
[0041] 2-(4-溴苯基）-N-[2-(4-甲氧基苯基）-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
[0042] 2-(4-氯苯基）-N-[2-(4-甲氧基苯基）-2H_苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
[0043] 2- (4-氟-苯基）-N- [2- (4-甲氧基-苯基）-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
[0044] 2-(2-溴苯基）-N-[2-(4-甲氧基苯基）-2H_苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
[0045] 2-(4-甲基苯基）-N-[2-(4-甲氧基苯基）-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
[0046] 2-(4-甲基磺酰苯基）-N-[2-(4-甲氧基苯基）-2H_苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
[0047] 2-(4-硝基苯基）-N-[2-(4-甲氧基苯基）-2H_苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
[0048] 2-(4-甲氧基苯基）-N-[2-(4-甲氧基苯基）-2H_苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
[0049] 2- (3, 4, 5-三甲氧基苯基）-N- [2- (4-甲氧基苯基）-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰 胺，
[0050] 4-溴-N- [2- (4-甲氧基苯基）-2H-苯并三唑-5-基]-丁酰胺，
[0051] 3-((2-(4-甲氧基苯基-2H-苯并三唑-5-基）氨基）-3-氧代乙酸，
[0052] 2-溴-N-[2-(4-甲氧基苯基）-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
[0053] 2-溴-N-[2-(3, 4, 5-三甲氧基苯基）-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
[0054] 2-氰基-N-[2-(4-甲氧基苯基）-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
[0055] 2-甲氧基-N-[2-(4-甲氧基苯基）-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
[0056] 2-(2-甲氧基乙基）-N-[2-(4-甲氧基苯基）-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
[0057] 2-羥基-N-[2-(4-甲氧基苯基）-2H_苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
[0058] 1-環(huán)丙基羧酸-[2-(4-甲氧基苯基）-2H_苯并三唑-5-基]-酰胺，
[0059] 2-(4-芐氧基苯基）-N-[2-(4-甲氧基苯基）-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
[0060] 2-(4-羥基苯基）-N-[2-(4-甲氧基苯基）-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
[0061] 2- (4-異丙氧基苯基）-N- [2- (4-甲氧基苯基）-2H-苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
[0062] 2-(4-丙氧基苯基）-N-[2-(4-甲氧基苯基）-2H_苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
[0063] 2-(4-環(huán)戊氧基苯基）-N-[2-(4-甲氧基苯基）-2H_苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
[0064] 5- (N-2-苯基乙基氨基）-2- (4-甲氧基苯基）-2H-苯并三唑，
[0065] 5-(^3-苯基丙基氨基）-2-(4-甲氧基苯基）-2!1-苯并三唑，
[0066] 5- (N-4-甲氧基芐基氨基）-2- (4-甲氧基苯基）-2H-苯并三唑，
[0067] 5- (N-2-甲氧基芐基氨基）-2- (4-甲氧基苯基）-2H-苯并三唑，
[0068] 5- (N-2- (4-甲氧基苯基乙基）氨基）-2- (4-甲氧基苯基）-2H-苯并三唑，
[0069] 5- (N-2, 4-二甲氧基芐基氨基）-2- (4-甲氧基苯基）-2H-苯并三唑，
[0070] 5- (N-2, 4, 6-三甲氧基芐基氨基）-2- (4-甲氧基苯基）-2H-苯并三唑，
[0071] 5-(N-4-三氟甲基芐基氨基）-2-(4-甲氧基苯基）-2H-苯并三唑，
[0072] 5- (N-3-溴芐基氨基）-2- (4-甲氧基苯基）-2H-苯并三唑，
[0073] 5- (N-2- (3, 4, 5-三甲氧基苯基）乙基氨基）-2- (4-甲氧基苯基）-2H-苯并三唑，
[0074] 5- (N- (2-呋喃甲基）氨基）-2- (4-甲氧基苯基）-2H-苯并三唑，
[0075] 1-氯-N-[2-(4-甲氧基苯基）-2H_苯并三唑-5-基]-乙酰胺，
[0076] 3-氯-N- [2- (4-甲氧基苯基）-2H-苯并三唑-5-基]-丁酰胺，
[0077] 3- [2- (4-甲氧基苯基）-2H-苯并三唑-5-基氨基甲?；鵠-丙烯酸，
[0078] 三氟甲基-N-[2-(4-甲氧基苯基）-2H_苯并三唑-5-基]-乙酰胺，或
[0079] 硝酸2- ((2- (4-甲氧基苯基）-2H-苯并三唑-5-基）氨基-2-氧代乙基酯。
[0080] 本發(fā)明還提出了由所述苯并三氮唑類小分子有機化合物與酸形成的酸加成鹽；優(yōu) 選地，所述酸為鹽酸、氫溴酸、硫酸、磷酸、乙酸、酒石酸、水楊酸、梓檬酸、甲磺酸、對甲苯磺 酸、乳酸、丙酮酸、馬來酸、琥珀酸之任意的一種。
[0081] 本發(fā)明還提出了一種制備所述苯并三氮唑類小分子有機化合物的方法，包括以下 步驟：
[0082] 方法一：
[0083]
[0084] (1)由4-硝基鄰苯二胺在亞硝酸鈉與乙酸存在下產(chǎn)生固體的5-硝基苯并三氮 唑；
[0085] (2)由步驟（1)得到的5-硝基苯并三氮唑與各種鹵代烷烴在堿性條件下發(fā)生取代 反應，經(jīng)分離后得到5-硝基-2-取代基-2H-苯并三唑；
[0086] (3)由步驟（2)得到的5-硝基-2-取代基-2H-苯并三唑在鐵粉（或者鋅粉、鎂 粉）及鹽酸（或者乙酸）的存在下生成取代的5-氨基-2H-苯并三氮唑關鍵中間體； [0087] (4)由步驟（3)得到的取代的5-氨基-2H-苯并三氮唑關鍵中間體與各種酸、酰鹵 或者酸酐偶聯(lián)形成所述最終產(chǎn)物苯并三氮唑類化合物。
[0090] (1)由各種取代芳香胺與亞硝酸鈉在酸性條件下形成重氮鹽；
[0091] (2)由步驟（1)得到的生成重氮鹽與間苯二胺形成偶氮中間體；
[0092] (3)由步驟⑵得到的偶氮中間體在硫酸銅、氨水以及吡啶的存在下生成取代的 5-氨基-2H-苯并三氮唑關鍵中間體；
[0093] (4)由步驟（3)得到的取代的5-氨基-2H-苯并三氮唑關鍵中間體與各種酸、酰鹵 或者酸酐偶聯(lián)形成所述最終產(chǎn)物苯并三氮唑類化合物；
[0094] 所述酸為鹽酸、乙酸。
[0095] 本發(fā)明還提出了一種制備所述的苯并三唑類化合物的藥學上可接受的鹽的方法， 其特征在于，所述方法包括以下步驟：
[0096] (1)將苯并三氮唑類化合物類化合物溶于相應的有機溶劑（甲醇、乙醇、丙酮、乙 腈、乙醚、二氯甲烷、三氯甲烷、乙酸乙酯、二氧六環(huán)、乙二醇二甲醚）中；
[0097] (2)將氯化氫、溴化氫、硫酸、磷酸、乙酸、酒石酸、水楊酸、檸檬酸、甲磺酸、對甲苯 磺酸、乳酸、丙酮酸、馬來酸、琥珀酸溶于相應的有機溶劑（甲醇、乙醇、丙酮、乙腈、乙醚、二 氯甲烷、三氯甲烷、乙酸乙酯、二氧六環(huán)、乙二醇二甲醚