一種從葛根中同時(shí)分離純化葛根素和大豆苷元的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種從葛根中同時(shí)分離純化葛根素和大豆苷元的方法,屬醫(yī)藥領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]葛根為豆科植物葛Pueraria 1bata的干燥根,是衛(wèi)生部批準(zhǔn)的藥食同源類植物,被廣泛用于保健食品和生物醫(yī)藥等領(lǐng)域[1]?,F(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明葛根具有消炎解熱、擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈血管、抗心律失調(diào)、生津止渴等多種藥理作用,對(duì)高血糖、高血脂、高血壓和心腦血管疾病也具有一定的療效。
[0003]葛根素(8- β -D-葡萄吡喃糖-4’,7- 二羥基異黃酮)是葛根中主要的功能性異黃酮成分,具有很好的藥用與保健價(jià)值。作為一種天然生物活性成分,人們對(duì)葛根素的藥理特性已進(jìn)行了廣泛研究。據(jù)相關(guān)報(bào)道,葛根素具有舒張血管、保護(hù)心臟、消炎、抗氧化、抑制酒精導(dǎo)致的運(yùn)動(dòng)失常等癥狀;此外,葛根素可以抑制由于持續(xù)高血糖引起的糖基化終端產(chǎn)物的產(chǎn)生,可用于治療糖尿病及視網(wǎng)膜疾?。桓鸶剡€可以抑制帕金森癥細(xì)胞內(nèi)的多種物質(zhì)的基因表達(dá),并具有類雌激素活性可用于預(yù)防女性更年期病癥。葛根素的藥理功效顯著,作用獨(dú)特,具有很好的臨床應(yīng)用與產(chǎn)品開發(fā)的前景。
[0004]除葛根素外,葛根中還含有葛根素-6" -O-葡萄糖苷、大豆苷、大豆苷元等其他異黃酮成分。目前,已公開的專利中有許多關(guān)于葛根中異黃酮功能成分分離純化的方法,但大多只關(guān)注于葛根素單一成分的分離,對(duì)其他異黃酮成分未加以利用,造成資源的浪費(fèi)?,F(xiàn)有提取方法提取效率低,或使用大量有機(jī)溶劑,成本高且較難以實(shí)現(xiàn)工業(yè)化應(yīng)用。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0005]本發(fā)明在于提供一種克服現(xiàn)有技術(shù)缺點(diǎn),盡量減少有機(jī)溶劑的使用,并易于實(shí)現(xiàn)工業(yè)化應(yīng)用的從葛根中同時(shí)分離純化葛根素和大豆苷元的方法。本發(fā)明方法是通過以下步驟來實(shí)現(xiàn)的:
[0006](I)干燥葛根粉碎后過40目篩制成葛根粉,按I公斤葛根粉加入1L I % β -環(huán)糊精水溶液,在20-40°C條件下攬摔提取30min,取提取液;將料渣進(jìn)行二次提取,并合并提取液;
[0007](2)將提取液流過H103大孔樹脂床,進(jìn)行吸附操作;
[0008](3)用4倍柱床體積水清洗樹脂床,然后用4倍柱床體積的75%乙醇進(jìn)行洗脫操作,收集洗脫液,濃縮回收乙醇;
[0009](4)往濃縮液中加HCl至HCl濃度為2mol/L,并在90°C水浴條件下酸解60min ;
[0010](5)酸解液趁熱過濾,往濾液中加5倍體積水稀釋后流過H103大孔樹脂床,進(jìn)行吸附操作;
[0011](6)用4倍柱床體積水清洗樹脂床,然后用4倍柱床體積的50%乙醇進(jìn)行洗脫操作,收集洗脫液,并濃縮回收乙醇;濃縮液在4°C條件下貯存24h,收集沉淀得到葛根素;
[0012](7)用4倍柱床體積的95%乙醇對(duì)樹脂柱進(jìn)行洗脫操作,收集洗脫液,并濃縮回收乙醇;往濃縮液中加入等體積的水,在4°C條件下貯存24h,收集沉淀得到大豆苷元。
[0013]為了達(dá)到更好的技術(shù)效果:
[0014]步驟⑵將提取液優(yōu)選以lOOml/min通過H103大孔樹脂床。
[0015]步驟(3)用4倍柱床體積蒸饋水優(yōu)選以50ml/min的流速清洗樹脂床。
[0016]步驟(3) 75 %的乙醇溶液優(yōu)選以以50ml/min的流速對(duì)樹脂進(jìn)行洗脫。
[0017]步驟(5)優(yōu)選以25ml/min流速通過H103大孔樹脂床。
[0018]步驟(6)用4倍柱床體積水優(yōu)選以10ml/min的流速清洗樹脂床,然后用4倍柱床體積的50%乙醇優(yōu)選以10ml/min的流速進(jìn)行洗脫操作。
[0019]本發(fā)明:(1)在提取步驟,在水溶液中加入1%的環(huán)糊精,獲得了對(duì)異黃酮的高提取效率。用水溶液代替乙醇溶液,實(shí)現(xiàn)了綠色提??;并且提取液直接上柱,無需濃縮回收乙醇,節(jié)約了能源;(2)通過大量實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)Η103樹脂具有突出的吸附葛根異黃酮效果(圖1) ;(3)利用葛根素為C-糖苷化合物,很難被酸水解,而其O-糖苷衍生物如葛根素-6”-0-葡萄糖苷等可以被酸水解的特點(diǎn)。通過酸水解將葛根素O-糖苷衍生物轉(zhuǎn)化為葛根素,將大豆苷轉(zhuǎn)化為大豆苷元(圖2) ;(4)利用葛根素和大豆苷元極性差異,用50%乙醇從Η103樹脂洗脫葛根素,用95%乙醇洗脫大豆苷元,實(shí)現(xiàn)二者分離(圖3) ; (5)本發(fā)明僅在樹脂洗脫時(shí)少量使用乙醇,無需使用其他有機(jī)溶劑,樹脂吸附解析后可重復(fù)利用,所有步驟均可放大實(shí)現(xiàn)工業(yè)化應(yīng)用,真正實(shí)現(xiàn)了綠色分離純化。
[0020]本發(fā)明的有益效果:綠色分離純化;提取效率高,所得產(chǎn)品收率高、純度好;能實(shí)現(xiàn)同時(shí)分離得到高純度的葛根素和大豆苷元;工藝簡(jiǎn)單,容易推廣。
【附圖說明】
[0021]圖1六種市售樹脂對(duì)葛根素的平衡吸附等溫線(25°C )
[0022]圖2 H103樹脂洗脫液經(jīng)酸水解前后的HPLC色譜圖,a:酸水解前;b:酸水解后;峰1:葛根素;峰2:葛根素-6”-O-葡萄糖苷;峰3:大豆苷;峰4:大豆苷元
圖3 H103樹脂用50%乙醇(a)和95%乙醇(b)洗脫液的HPLC色譜圖,峰1:葛根素;峰2:大豆苷元。
【具體實(shí)施方式】
[0023]下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步說明,但本發(fā)明不限于這些實(shí)施例。實(shí)施例I
[0024](I)取Ikg干燥葛根粉碎過后40目篩制成葛根粉,加入1L的1% β-環(huán)糊精水溶液,在室溫下攪拌提取30min,然后將混合物在5000r/min條件下離心5min,取上清液。將濾渣進(jìn)行二次提取,合并濾液,即得葛根異黃酮提取液。
[0025](2)H103樹脂經(jīng)常規(guī)凈化操作后,裝入內(nèi)徑為4cm的樹脂柱,樹脂柱床高為80cm。
[0026](3)以100ml/min的流速使葛根異黃酮提取液流過樹脂柱,進(jìn)行吸附操作。
[0027](4)吸附操作結(jié)束后,用4L清水以50ml/min的流速清洗樹脂柱;然后用4L75%的乙醇溶液以50ml/min的流速對(duì)樹脂吸附的異黃酮進(jìn)行洗脫;收集洗脫液,60°C減壓濃縮回收乙醇。
[0028](5)往濃縮液中加濃鹽酸,鹽酸最終濃度為2mol/L,并在90°C水浴條件下酸解60mino
[0029](6)酸解結(jié)束后,趁熱過濾,往濾液中加5倍體積水稀釋。在另一根內(nèi)徑為2cm的樹脂柱中裝入H103樹脂,樹脂柱床高為70cm。濾液以25ml/min的流速使葛根異黃酮提取液流過樹脂柱,進(jìn)行吸附操作。
[0030](7)用IL清水以10ml/min的流速清洗樹脂柱;然后用IL 50%的乙醇溶液以10ml/min的流速對(duì)樹脂吸附的異黃酮進(jìn)行洗脫;收集洗脫液,60°C減壓濃縮至體積約為200ml。濃縮液在4°C條件下貯存24h,收集結(jié)晶并干燥得到38.6g產(chǎn)物;經(jīng)HPLC分析產(chǎn)物中葛根素含量為90.6%。
[0031](8)再用IL 95%乙醇對(duì)樹脂柱進(jìn)行洗脫操作,收集洗脫液,并濃縮回收乙醇至體積約為50ml。往濃縮液中加入等體積的水,在4°C條件下貯存24h,收集結(jié)晶并干燥得到3.7g產(chǎn)物;經(jīng)HPLC分析產(chǎn)物中大豆苷元含量為80.3%。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種從葛根中同時(shí)分離純化葛根素和大豆苷元的方法,其特征在于包括以下步驟: (1)干燥葛根粉碎后過40目篩制成葛根粉,按I公斤葛根粉加入1L1% β-環(huán)糊精水溶液,在20-40°C條件下攬摔提取30min,取提取液;將料渣進(jìn)行二次提取,并合并提取液; (2)將提取液流過H103大孔樹脂床,進(jìn)行吸附操作; (3)用4倍柱床體積水清洗樹脂床,然后用4倍柱床體積的75%乙醇進(jìn)行洗脫操作,收集洗脫液,濃縮回收乙醇; (4)往濃縮液中加HCl至HCl濃度為2mRl/L,并在90°C水浴條件下酸解60min; (5)酸解液趁熱過濾,往濾液中加5倍體積水稀釋后流過H103大孔樹脂床,進(jìn)行吸附操作; (6)用4倍柱床體積水清洗樹脂床,然后用4倍柱床體積的50%乙醇進(jìn)行洗脫操作,收集洗脫液,并濃縮回收乙醇;濃縮液在4°C條件下貯存24h,收集沉淀得到葛根素; (7)用4倍柱床體積的95%乙醇對(duì)樹脂柱進(jìn)行洗脫操作,收集洗脫液,并濃縮回收乙醇;往濃縮液中加入等體積的水,在4°C條件下貯存24h,收集沉淀得到大豆苷元。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于:步驟(2)將提取液優(yōu)選以100ml/min通過H103大孔樹脂床。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于:步驟(3)用4倍柱床體積蒸餾水優(yōu)選以50ml/min的流速清洗樹脂床。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于:步驟(3)75%的乙醇溶液優(yōu)選以以50ml/min的流速對(duì)樹脂進(jìn)行洗脫。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于:步驟(5)優(yōu)選以25ml/min流速通過H103大孔樹脂床。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于:步驟(6)用4倍柱床體積水優(yōu)選以1ml/min的流速清洗樹脂床,然后用4倍柱床體積的50%乙醇優(yōu)選以10ml/min的流速進(jìn)行洗脫操作。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種從葛根中同時(shí)分離純化葛根素和大豆苷元的方法,具體包括β-環(huán)糊精的水溶液提取,樹脂吸附,洗脫,酸解后吸附洗脫等步驟。本方法工藝簡(jiǎn)單,無需特殊設(shè)備,適合大規(guī)模工業(yè)化應(yīng)用,可同時(shí)得到純度為90%以上的葛根素和純度80%以上的大豆苷元產(chǎn)品。
【IPC分類】C07D407/04, C07D311/36
【公開號(hào)】CN105218533
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510672421
【發(fā)明人】張清峰, 郭玉顯, 郭海東, 上官新晨, 尹忠平, 陳繼光
【申請(qǐng)人】江西農(nóng)業(yè)大學(xué)
【公開日】2016年1月6日
【申請(qǐng)日】2015年10月13日