一種杏鮑菇多糖組分的制備方法及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種多糖組分的制備方法，尤其涉及一種杏鮑菇多糖組分的制備方法及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]杏鮑燕(Pleuro tus eryngii Quel.)隸屬真菌門、擔(dān)子菌綱、傘菌目、側(cè)耳科、側(cè)耳屬真菌，被譽(yù)為“菇中之王”，主要分布于典型的亞熱帶草原-干旱沙漠地區(qū)?，F(xiàn)代研究表明杏鮑菇中富含多糖，多糖具有抗病毒、抗腫瘤以及提高免疫力的藥理學(xué)功效。
[0003]遲桂榮報(bào)道采用氯仿-甲醇混合溶劑提取、95%乙醇醇沉、活性炭脫色、Sevage法脫蛋白、Sephadex G-50、Sephadex G-100柱層析分離杏鮑燕中純多糖，過程較繁瑣且損失量大，而目前從杏鮑菇中快速獲取抗結(jié)腸癌細(xì)胞增殖的多糖組分的制備研究未見文獻(xiàn)報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供一種工藝簡單、易規(guī)?；男吁U菇多糖組分的制備方法。
[0005]本發(fā)明所要解決的另一個(gè)技術(shù)問題是提供該杏鮑菇多糖組分的應(yīng)用。
[0006]為解決上述問題，本發(fā)明所述的一種杏鮑菇多糖組分的制備方法，包括以下步驟:
⑴提取:將干燥的杏鮑菇粉碎至50~120目后加水進(jìn)行水提，經(jīng)過濾得到濾液；該濾液經(jīng)減壓干燥至膏狀，即得杏鮑菇水提取物；
⑵醇沉:所述杏鮑菇水提取物用其質(zhì)量5~10倍的水進(jìn)行溶解，然后加入所述杏鮑菇水提取物質(zhì)量10~20倍的體積分?jǐn)?shù)為85%~95%的乙醇溶液醇沉，離心收集沉淀，重復(fù)1~3次，合并沉淀物，該沉淀物經(jīng)干燥得杏鮑菇多糖粗提物；
⑶纖維素柱色譜分離:所述杏鮑菇多糖粗提物加入其質(zhì)量10~20倍的水進(jìn)行溶解，然后采用纖維素柱分別以水、0.1 mol/L氯化鈉水溶液、0.4 mol/L氯化鈉水溶液按5~10倍的柱體積進(jìn)行梯度洗脫，收集0.4 mol/L氯化鈉水溶液洗脫液；該洗脫液經(jīng)減壓干燥至0.5L~1.0 L后，用透析膜透析除鹽15 h~24 h，最后對(duì)膜內(nèi)截留液減壓干燥即得淡黃色粉末狀的杏鮑菇多糖組分。
[0007]所述步驟⑴中水提條件是指料液比為lg: 10~30 mL、溫度為80°C~95°C、提取次數(shù)為1~3次、每次提取時(shí)間為1~5 ho
[0008]所述步驟⑴、所述步驟⑶中的減壓干燥條件均是指真空度為0.07-0.09 MPa，溫度% 65-80 0C0
[0009]所述步驟⑵中干燥條件是溫度為65~80°C。
[0010]所述步驟⑶中纖維素柱為DEAE-52。
[0011]所述步驟⑶中透析膜的截留分子量為3000 D~10000D。
[0012]如上所述的一種杏鮑菇多糖組分的制備方法制得的杏鮑菇多糖組分在制備抗結(jié)腸癌藥物或保健食品中的應(yīng)用，其特征在于:該杏鮑菇多糖組分作為有效組分按常規(guī)方法與藥學(xué)上可接受的任何載體制成各類抗結(jié)腸癌制劑，或作為有效組分按常規(guī)方法與食品科學(xué)上可接受的任何載體制成各類保健類食品。
[0013]本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下優(yōu)點(diǎn):
1、本發(fā)明采用水提取，可以將杏鮑菇中脂溶性小分子或生物大分子與水溶性多糖分開，不但成本廉價(jià)，而且易規(guī)?；瘜?shí)施。
[0014]2、本發(fā)明采用醇沉處理，可有效去除樣品中小分子化合物。
[0015]3、本發(fā)明纖維素柱可以再生循環(huán)使用，同時(shí)纖維素柱不使用有機(jī)試劑，對(duì)環(huán)境不造成污染，同時(shí)制備方法簡單，平均成本低廉。
[0016]4、本發(fā)明所獲得的杏鮑菇多糖組分經(jīng)測試，具有很好的抗結(jié)腸癌的作用。
[0017]⑴實(shí)驗(yàn)方法采用國際通用的MTT測定方法進(jìn)行:首先，在96孔細(xì)胞板上接種2X 14個(gè)對(duì)數(shù)生長期的結(jié)腸癌細(xì)胞HCT116，3個(gè)復(fù)孔，細(xì)胞貼壁后；再加入不同濃度待測樣品，共設(shè)置7個(gè)藥物濃度梯度，分別為:1.0 yg/mL、5.0 yg/mL、10.0 yg/mL、20 yg/mL、30 yg/mL、40 yg/mL和50 μ g/mL的該多糖組分樣品組；72小時(shí)后，于96孔板對(duì)應(yīng)孔中加入5 mg/mL的MTT溶液20 μ L，繼續(xù)培養(yǎng)3 h ;棄去96孔板中上清液，加入100 μ L DMSO溶解，使用酶標(biāo)儀檢測570 nm波長下的吸光值并計(jì)算待測樣品對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞生長的半數(shù)抑制濃度IC500
[0018]⑵實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，實(shí)施例1~3組多糖組分對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞株均有明顯的抑制作用，依次為 35.4 μ g/mL,34.2 μ g/mL,36.1 μ g/mL，平均值為 35.2 μ g/mL。
【具體實(shí)施方式】
[0019]實(shí)施例1 一種杏鮑菇多糖組分的制備方法，包括以下步驟:
⑴提取:將1.0 Kg干燥的杏鮑菇粉碎至120目后加水進(jìn)行水提，經(jīng)過濾得到濾液；該濾液在真空度為0.07 MPa、溫度為80°C的條件下經(jīng)減壓干燥至膏狀，即得杏鮑菇水提取物402.4 go
[0020]其中:水提條件是指料液比為Ig:10 mL、溫度為95°C、提取次數(shù)為3次、每次提取時(shí)間為I h。
[0021]⑵醇沉:杏鮑菇水提取物用其質(zhì)量5倍的水進(jìn)行溶解，然后加入杏鮑菇水提取物質(zhì)量20倍的體積分?jǐn)?shù)為85%的乙醇溶液醇沉，離心收集沉淀，重復(fù)I次，合并沉淀物，該沉淀物在溫度為65°C的條件下干燥得杏鮑菇多糖粗提物184.5 go
[0022]⑶纖維素柱色譜分離:杏鮑菇多糖粗提物加入其質(zhì)量10倍的水進(jìn)行溶解，然后采用DEAE-52纖維素柱分別以水、0.1 mol/L氯化鈉水溶液、0.4 mol/L氯化鈉水溶液按5~10倍的柱體積進(jìn)行梯度洗脫，收集0.4 mol/L氯化鈉水溶液洗脫液；該洗脫液經(jīng)減壓干燥至
0.5 L后，用透析膜透析除鹽24 h，最后對(duì)膜內(nèi)截留液在真空度為0.07 MPa、溫度為80°C的條件下減壓干燥即得淡黃色粉末狀的杏鮑菇多糖組分54.8 go
[0023]其中:透析膜的截留分子量為3000 D。
[0024]實(shí)施例2 —種杏鮑菇多糖組分的制備方法，包括以下步驟:
⑴提取:將5.0 Kg干燥的杏鮑菇粉碎至50目后加水進(jìn)行水提，經(jīng)過濾得到濾液；該濾液在真空度為0.09 MPa、溫度為65°C的條件下經(jīng)減壓干燥至膏狀，即得杏鮑菇水提取物1845.0 go
[0025]其中:水提條件是指料液比為Ig:30 mL、溫度為80°C、提取次數(shù)為I次、每次提取時(shí)間為5 ho
[0026]⑵醇沉:杏鮑菇水提取物用其質(zhì)量10倍的水進(jìn)行溶解，然后加入杏鮑菇水提取物質(zhì)量10倍的體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇溶液醇沉，離心收集沉淀，重復(fù)3次，合并沉淀物，該沉淀物在溫度為80°C的條件下干燥得杏鮑菇多糖粗提物864.3 go
[0027]⑶纖維素柱色譜分離:杏鮑菇多糖粗提物加入其質(zhì)量20倍的水進(jìn)行溶解，然后采用DEAE-52纖維素柱分別以水、0.1 mol/L氯化鈉水溶液、0.4 mol/L氯化鈉水溶液按10倍的柱體積進(jìn)行梯度洗脫，收集0.4 mol/L氯化鈉水溶液洗脫液；該洗脫液經(jīng)減壓干燥至1.0L后，用透析膜透析除鹽15 h，最后對(duì)膜內(nèi)截留液在真空度為0.09 MPa、溫度為65°C的條件下減壓干燥即得淡黃色粉末狀的杏鮑菇多糖組分262.6 go
[0028]其中:透析膜的截留分子量為10000D。
[0029]實(shí)施例3 —種杏鮑菇多糖組分的制備方法，包括以下步驟:
⑴提取:將2.0 Kg干燥的杏鮑菇粉碎至80目后加水進(jìn)行水提，經(jīng)過濾得到濾液；該濾液在真空度為0.08 MPa、溫度為75°C的條件下經(jīng)減壓干燥至膏狀，即得杏鮑菇水提取物796.6 go
[0030]其中:水提條件是指料液比為Ig:20 mL、溫度為90°C、提取次數(shù)為2次、每次提取時(shí)間為3 ho
[0031]⑵醇沉:杏鮑菇水提取物用其質(zhì)量8倍的水進(jìn)行溶解，然后加入杏鮑菇水提取物質(zhì)量15倍的體積分?jǐn)?shù)為90%的乙醇溶液醇沉，離心收集沉淀，重復(fù)2次，合并沉淀物，該沉淀物在溫度為75°C的條件下干燥得杏鮑菇多糖粗提物356.9 go
[0032]⑶纖維素柱色譜分離:杏鮑菇多糖粗提物加入其質(zhì)量15倍的水進(jìn)行溶解，然后采用DEAE-52纖維素柱分別以水、0.1 mol/L氯化鈉水溶液、0.4 mol/L氯化鈉水溶液按8倍的柱體積進(jìn)行梯度洗脫，收集0.4 mol/L氯化鈉水溶液洗脫液；該洗脫液經(jīng)減壓干燥至0.8L后，用透析膜透析除鹽20 h，最后對(duì)膜內(nèi)截留液在真空度為0.08 MPa、溫度為75°C的條件下減壓干燥即得淡黃色粉末狀的杏鮑菇多糖組分105.2 go
[0033]其中:透析膜的截留分子量為8000D。
[0034]上述實(shí)施例1~3制得的杏鮑菇多糖組分在制備抗結(jié)腸癌藥物或保健食品中的應(yīng)用是指:該杏鮑菇多糖組分作為有效組分按常規(guī)方法與藥學(xué)上可接受的任何載體制成各類抗結(jié)腸癌制劑，或作為有效組分按常規(guī)方法與食品科學(xué)上可接受的任何載體制成各類保健類食品。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種杏鮑菇多糖組分的制備方法，包括以下步驟: ⑴提取:將干燥的杏鮑菇粉碎至50~120目后加水進(jìn)行水提，經(jīng)過濾得到濾液；該濾液經(jīng)減壓干燥至膏狀，即得杏鮑菇水提取物； ⑵醇沉:所述杏鮑菇水提取物用其質(zhì)量5~10倍的水進(jìn)行溶解，然后加入所述杏鮑菇水提取物質(zhì)量10~20倍的體積分?jǐn)?shù)為85%~95%的乙醇溶液醇沉，離心收集沉淀，重復(fù)1~3次，合并沉淀物，該沉淀物經(jīng)干燥得杏鮑菇多糖粗提物； ⑶纖維素柱色譜分離:所述杏鮑菇多糖粗提物加入其質(zhì)量10~20倍的水進(jìn)行溶解，然后采用纖維素柱分別以水、0.1 mol/L氯化鈉水溶液、0.4 mol/L氯化鈉水溶液按5~10倍的柱體積進(jìn)行梯度洗脫，收集0.4 mol/L氯化鈉水溶液洗脫液；該洗脫液經(jīng)減壓干燥至0.5L~1.0 L后，用透析膜透析除鹽15 h~24 h，最后對(duì)膜內(nèi)截留液減壓干燥即得淡黃色粉末狀的杏鮑菇多糖組分。2.如權(quán)利要求1所述的一種杏鮑菇多糖組分的制備方法，其特征在于:所述步驟⑴中水提條件是指料液比為Ig:10-30 mL、溫度為80°C ~95°C、提取次數(shù)為1~3次、每次提取時(shí)間為1~5 ho3.如權(quán)利要求1所述的一種杏鮑菇多糖組分的制備方法，其特征在于:所述步驟⑴、所述步驟⑶中的減壓干燥條件均是指真空度為0.07~0.09 MPa，溫度為65~80 °C。4.如權(quán)利要求1所述的一種杏鮑菇多糖組分的制備方法，其特征在于:所述步驟⑵中干燥條件是溫度為65~80°C。5.如權(quán)利要求1所述的一種杏鮑菇多糖組分的制備方法，其特征在于:所述步驟⑶中纖維素柱為DEAE-52。6.如權(quán)利要求1所述的一種杏鮑菇多糖組分的制備方法，其特征在于:所述步驟⑶中透析膜的截留分子量為3000 D~10000D。7.如權(quán)利要求1所述的一種杏鮑菇多糖組分的制備方法制得的杏鮑菇多糖組分在制備抗結(jié)腸癌藥物或保健食品中的應(yīng)用，其特征在于:該杏鮑菇多糖組分作為有效組分按常規(guī)方法與藥學(xué)上可接受的任何載體制成各類抗結(jié)腸癌制劑，或作為有效組分按常規(guī)方法與食品科學(xué)上可接受的任何載體制成各類保健類食品。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種杏鮑菇多糖組分的制備方法，該方法包括以下步驟：⑴提?。簩⒏稍锏男吁U菇粉碎后加水進(jìn)行水提，經(jīng)過濾得到濾液；該濾液經(jīng)減壓干燥至膏狀，即得杏鮑菇水提取物；⑵醇沉：所述杏鮑菇水提取物用水溶解后加入乙醇溶液醇沉，經(jīng)離心、干燥得杏鮑菇多糖粗提物；⑶纖維素柱色譜分離：所述杏鮑菇多糖粗提物加水溶解后采用纖維素柱進(jìn)行梯度洗脫，收集0.4？mol/L氯化鈉水溶液洗脫液；該洗脫液經(jīng)減壓干燥、透析膜透析除鹽，最后對(duì)膜內(nèi)截留液減壓干燥即得淡黃色粉末狀的杏鮑菇多糖組分。本發(fā)明工藝簡單、易規(guī)?；宜@得的杏鮑菇多糖組分具有很好的抗結(jié)腸癌的作用，可應(yīng)用于制備抗結(jié)腸癌藥物或保健食品。
【IPC分類】C08B37/00
【公開號(hào)】CN105111326
【申請?zhí)枴緾N201510586754
【發(fā)明人】梅麗娟, 黨軍, 張莉, 王啟蘭, 陶燕鐸, 邵赟, 于瑞濤
【申請人】中國科學(xué)院西北高原生物研究所
【公開日】2015年12月2日
【申請日】2015年9月15日