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用于增加植物的有效磷酸鹽的微生物菌株、組合物、和方法_2

文檔序號(hào):8476372閱讀:來源:國知局
莖、 側(cè)枝以及種子等)。
[0048] 如在此使用,術(shù)語"磷酸鹽溶解"或"溶解磷酸鹽"等旨在指不可溶的磷酸鹽(例 如磷礦石等)轉(zhuǎn)化為可溶的磷酸鹽形式。
[0049] 如在此使用,術(shù)語"溶解磷酸鹽的有機(jī)體"旨在指能夠?qū)⒉蝗艿牧姿猁}轉(zhuǎn)化為可溶 的磷酸鹽形式的任何有機(jī)體。
[0050] 如在此使用,術(shù)語"一種或更多種微量營養(yǎng)素"旨在指植物生長、植物健康、和/或 植物發(fā)育所需的營養(yǎng)素。
[0051] 如在此使用,術(shù)語"一種或更多種生物刺激素"旨在指能夠增強(qiáng)植物和土壤內(nèi)的代 謝或生理過程的任何物質(zhì)。
[0052] 如在此使用,術(shù)語"一種或更多種潤濕劑"旨在指能夠降低和/或減小水的表面張 力的任何物質(zhì)。
[0053] 菌株
[0054] 在一個(gè)實(shí)施例中,在此描述的一種或更多種菌株是一種或更多種溶解磷酸鹽的真 菌菌株。在另一實(shí)施例中,該一種或更多種菌株是一種或更多種拜賴青霉菌株。如在此使 用,物種名"拜賴青霉"旨在包括物種名"拜賴青霉"的所有迭代,例如貫穿本文公開的那些 物種名(例如"拜拉吉青霉菌(Penicilliumbilaji)"、"拜萊青霉菌"等)。
[0055] 在另一實(shí)施例中,該一種或更多種菌株是具有保藏登錄號(hào)V08/021001的拜賴青 霉菌株的后代(保藏在國家計(jì)量研宄所(NationalMeasurementInstitute))。在另一實(shí)施 例中,該一種或更多種菌株是具有保藏登錄號(hào)ATCC-20851的拜賴青霉菌株的后代(保藏在 美國模式培養(yǎng)物保藏所(AmericanTypeCultureCollection))。在另一實(shí)施例中,該一種 或更多種菌株是具有保藏登錄號(hào)ATCC-22348的拜賴青霉菌株的后代(保藏在美國模式培 養(yǎng)物保藏所(AmericanTypeCultureCollection))。仍在另一實(shí)施例中,該一種或更多種 菌株是具有保藏登錄號(hào)V08/021001的拜賴青霉菌株和具有保藏登錄號(hào)ATCC-20851的拜賴 青霉菌株的后代。仍在另一實(shí)施例中,該一種或更多種菌株是具有保藏登錄號(hào)V08/021001 的拜賴青霉菌株和具有保藏登錄號(hào)ATCC-22348的拜賴青霉菌株的后代。仍在另一實(shí)施例 中,該一種或更多種菌株是具有保藏登錄號(hào)ATCC-20851的拜賴青霉菌株和具有保藏登錄 號(hào)ATCC-22348的拜賴青霉菌株的后代。
[0056] 仍在另一實(shí)施例中,這些菌株是選自下組的青霉屬菌株,該組由以下各項(xiàng)組成:
[0057] 具有保藏登錄號(hào)NRRLB-50776的菌株,
[0058] 具有保藏登錄號(hào)NRRLB-50777的菌株,
[0059] 具有保藏登錄號(hào)NRRLB-50778的菌株,
[0060] 具有保藏登錄號(hào)NRRLB-50779的菌株,
[0061] 具有保藏登錄號(hào)NRRLB-50780的菌株,
[0062] 具有保藏登錄號(hào)NRRLB-50781的菌株,
[0063] 具有保藏登錄號(hào)NRRLB-50782的菌株,
[0064] 具有保藏登錄號(hào)NRRLB-50783的菌株,
[0065] 具有保藏登錄號(hào)NRRLB-50784的菌株,
[0066] 具有保藏登錄號(hào)NRRLB-50785的菌株,
[0067] 具有保藏登錄號(hào)NRRLB-50786的菌株,
[0068] 具有保藏登錄號(hào)NRRLB-50787的菌株,
[0069] 具有保藏登錄號(hào)NRRLB-50788的菌株,以及
[0070] 它們的菌株中的兩種或更多種的混合物。
[0071] 在一個(gè)具體實(shí)施例中,該一種或更多種菌株可以是上述保藏菌株中的一種或更多 種(例如包括以上菌株中的至少兩種、以上菌株中的至少三種、以上菌株中的至少四種、以 上菌株中的至少五種、以上菌株中的至少六種、以上菌株中的至少七種、以上菌株中的至少 八種、以上菌株中的至少九種、以上菌株中的至少十種、以上菌株中的至少十一種、以上菌 株中的至少十二種、多達(dá)并且包括所有以上菌株)。
[0072] 在一個(gè)實(shí)施例中,該菌株是具有保藏登錄號(hào)NRRLB-50776的菌株。在一個(gè)實(shí)施例 中,該菌株是具有保藏登錄號(hào)NRRLB-50777的菌株。在一個(gè)實(shí)施例中,該菌株是具有保藏 登錄號(hào)NRRLB-50778的菌株。在一個(gè)實(shí)施例中,該菌株是具有保藏登錄號(hào)NRRLB-50779 的菌株。在一個(gè)實(shí)施例中,該菌株是具有保藏登錄號(hào)NRRLB-50780的菌株。在一個(gè)實(shí)施例 中,該菌株是具有保藏登錄號(hào)NRRLB-50781的菌株。在一個(gè)實(shí)施例中,該菌株是具有保藏 登錄號(hào)NRRLB-50782的菌株。在一個(gè)實(shí)施例中,該菌株是具有保藏登錄號(hào)NRRLB-50783 的菌株。在一個(gè)實(shí)施例中,該菌株是具有保藏登錄號(hào)NRRLB-50784的菌株。在一個(gè)實(shí)施例 中,該菌株是具有保藏登錄號(hào)NRRLB-50785的菌株。在一個(gè)實(shí)施例中,該菌株是具有保藏 登錄號(hào)NRRLB-50786的菌株。在一個(gè)實(shí)施例中,該菌株是具有保藏登錄號(hào)NRRLB-50787 的菌株。在一個(gè)實(shí)施例中,該菌株是具有保藏登錄號(hào)NRRLB-50788的菌株。
[0073] 在另一實(shí)施例中,該一種或更多種菌株可以是保藏菌株之一的后代。在另一實(shí) 施例中,一種或更多種保藏菌株是生物學(xué)純培養(yǎng)物(例如具有至少60%、至少65%、至少 70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少 94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、高達(dá)100 %純的純度的培養(yǎng) 物)。
[0074] 保藏的真菌培養(yǎng)物源自分離的天然存在的真菌菌株。在2012年,所有保藏菌株都 收集在加拿大的薩斯卡通(Saskatoon)。保藏菌株的培養(yǎng)物可以由休眠真菌孢子和/或活 真菌組成。
[0075] 可以使用固態(tài)或液體發(fā)酵和適合碳源來生長在此描述的青霉屬真菌,并且具體 地,是具有以下保藏登錄號(hào)的菌株:NRRLB-50776、NRRLB-50777、NRRLB-50778、NRRL B-50779、NRRLB-50780、NRRLB-50781、NRRLB-50782、NRRLB-50783、NRRLB-50784、NRRL B-50785、NRRLB-50786、NRRLB-50787和NRRLB-50788??梢允褂帽绢I(lǐng)域普通技術(shù)人員已 知的任何適合方法來生長青霉菌分離物。例如,真菌可以培養(yǎng)在固體生長培養(yǎng)基(例如馬 鈴薯葡萄糖瓊脂或麥芽瓊脂)上,或培養(yǎng)在包含適合液體培養(yǎng)基(例如察氏培養(yǎng)基或馬鈴 薯葡萄糖肉湯)的燒瓶中。在制備青霉菌的接種物中可以使用這些培養(yǎng)方法,這些接種物 用于包衣種子和/或施加至待被施加至土壤的載體。
[0076] 可以通過接種固體培養(yǎng)基(例如泥炭或蛭石基的基質(zhì)),或谷物(包括但不局限 于燕麥、小麥、大麥、或水稻),來實(shí)現(xiàn)青霉屬孢子的固態(tài)生產(chǎn)。用適當(dāng)?shù)那嗝箤俚逆咦討乙?(lx102-lx107cfu/ml)接種滅菌培養(yǎng)基(通過高壓滅菌或輻射滅菌達(dá)到),并且取決于基 質(zhì),將濕度調(diào)節(jié)至20%至50%。該材料在室溫下孵育2至8周。還可以通過液體發(fā)酵生產(chǎn) 孢子(坎寧安(Cunningham)等人,1990,加拿大植物學(xué)期刊(CanJBot) 68:2270-2274)。 可以通過在適當(dāng)pH和溫度條件下,在任何適合培養(yǎng)基(例如馬鈴薯葡萄糖肉湯或蔗糖酵母 提取物培養(yǎng)基)中培養(yǎng)真菌來達(dá)到液體生產(chǎn)(如可以由本領(lǐng)域任何普通技術(shù)人員來進(jìn)行)。
[0077] 生成的材料可以直接以組合物的形式使用,如種子處理劑,或可以收獲孢子,通 過離心進(jìn)行濃縮,進(jìn)行配制,并然后且使用風(fēng)干的、冷凍干燥的、或流化床干燥的技術(shù)進(jìn)行 干燥(弗里森(FriesenT.),希爾(HillG.),帕格斯利(PugsleyT.),霍洛韋(Holloway G.),和齊默爾曼(Zi_ermanD.),2005,實(shí)驗(yàn)確定在對(duì)流風(fēng)干期間拜賴青霉分生孢子的活 性損失(ExperimentaldeterminationofviabilitylossofPenicilliumbilaiae conidiaduringconvectiveair-drying),應(yīng)用微生物學(xué)和生物技術(shù)(ApplMicrobiol Biotechnol) 68:397-404),以生產(chǎn)可濕性粉末。
[0078] 如以下更詳細(xì)地表明,在"材料&方法"部分中,根據(jù)國際承認(rèn)用于專利程序的微 生物菌種保藏布達(dá)佩斯條約,在2012年10月1日,將上述保藏菌株保藏在農(nóng)業(yè)研宄服務(wù) 菌種保藏中心(theAgriculturalResearchServiceCultureCollection),北大學(xué)街 (NorthUniversityStreet) 1815 號(hào),皮奧瑞亞(Peoria),伊利諾州,61604,美國。
[0079] 組合物
[0080] 在另一個(gè)方面,本發(fā)明涉及包含載體和在此描述的保藏的菌株中的一種或更多種 的接種物(孢子形式或處于營養(yǎng)態(tài))的組合物。在某些實(shí)施例中,該組合物可以是以下形 式:液體、漿液、固體或粉末(可濕性粉末或干粉末)。在另一實(shí)施例中,該組合物可以是種 子包衣的形式。處于液體、漿液、或粉末(例如可濕性粉末)形式的組合物都可以適合包衣 種子。當(dāng)用于包衣種子時(shí),該組合物可以被施加至種子并且允許干燥。在其中該組合物是 粉末(例如可濕性粉末)的實(shí)施例中,在施加至種子之前,需要將一種液體(例如水)添加 至該粉末。
[0081]裁體:
[0082] 在此描述的載體將允許一種或更多種保藏的真菌菌株保持有效(例如能夠溶解 磷酸鹽)并且一旦被配制就有活力。在此描述的載體的非限制性實(shí)例包括液體、漿液、或固 體(包括可濕性粉末或干粉末)。在一個(gè)實(shí)施例中,該載體是如在此描述的土壤可兼容的載 體。
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