一株微生物采油菌w-y3及其應用
【專利摘要】本發(fā)明公開了一株微生物采油菌W?Y3及其應用。本發(fā)明的微生物采油菌W?Y3已于2016年5月23日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏號為CGMCC No.12493。通過實驗證明：本發(fā)明的微生物采油菌W?Y3不僅具有降解石油的功能，可用于石油污染的治理和修復，而且還可以用于微生物采油，提高采油率，具有很好的應用前景。CGMCC No.1249320160523
【專利說明】
一株微生物采油菌W-Y3及其應用
技術領域
[0001 ]本發(fā)明屬于生物技術領域，具體涉及一株微生物采油菌W-Y3及其應用。
【背景技術】
[0002] 石油污染分布廣泛，涉及采油、煉油、化工、機械等各種工業(yè)以及石油泄漏等各種 污染環(huán)境。石油烴組分復雜多樣，疏水性強而難以被普通微生物所接觸、所降解、所利用。
[0003] 微生物采油技術就是通過向地層中注入營養(yǎng)或微生物，利用油藏中微生物的生長 代謝活動，提高原油產(chǎn)量和采收率。傳統(tǒng)的石油功能菌株多分離于水體和土壤中?，F(xiàn)有的研 究表明，微生物除分別在水體和土壤外，在石油油相中也有廣泛的分布，因此從石油油相中 分離相關的功能菌株對石油烴污染治理修復和微生物采油技術具有重要意義。

【發(fā)明內容】

[0004] 本發(fā)明的一個目的是提供一株紅簍菌Rhodocista sp.W-Y3。
[0005] 本發(fā)明提供的紅簍菌Rhodocista sp.W-Y3的保藏編號為CGMCC No. 12493。
[0006] 本發(fā)明的另一個目的是提供紅簍菌Rhodocista SP.W-Y3的新用途。
[0007] 本發(fā)明提供了上述紅簍菌Rhodocista Sp.W-Y3或其菌懸液或其培養(yǎng)液或其發(fā)酵 產(chǎn)物或含有其的菌劑在石油降解中的應用。
[0008] 本發(fā)明還提供了上述紅簍菌Rhodocista Sp.W-Y3或其菌懸液或其培養(yǎng)液或其發(fā) 酵產(chǎn)物或含有其的菌劑在制備石油降解的產(chǎn)品中的應用。
[0009] 本發(fā)明還提供了上述紅簍菌Rhodocista Sp.W-Y3或其菌懸液或其培養(yǎng)液或其發(fā) 酵產(chǎn)物或含有其的菌劑在石油污染治理和/或修復中的應用。
[0010]本發(fā)明還提供了上述紅簍菌Rhodocista Sp.W-Y3或其菌懸液或其培養(yǎng)液或其發(fā) 酵產(chǎn)物或含有其的菌劑在制備石油污染治理和/或修復的產(chǎn)品中的應用。
[0011] 本發(fā)明還提供了上述紅簍菌Rhodocista SP.W-Y3或其菌懸液或其培養(yǎng)液或其發(fā) 酵產(chǎn)物或含有其的菌劑在微生物采油中的應用。
[0012] 本發(fā)明還提供了上述紅簍菌Rhodocista SP.W-Y3或其菌懸液或其培養(yǎng)液或其發(fā) 酵產(chǎn)物或含有其的菌劑在制備微生物采油的產(chǎn)品中的應用。
[0013] 本發(fā)明還有一個目的是提供一種產(chǎn)品。
[0014] 本發(fā)明提供的產(chǎn)品的活性成分為上述紅簍菌Rhodocista SP.W-Y3或其菌懸液或 其培養(yǎng)液或其發(fā)酵產(chǎn)物或含有其的菌劑；
[0015] 所述產(chǎn)品具有如下1)-3)中任一種功能：
[0016] 1)石油降解；
[0017] 2)石油污染治理和/或修復；
[0018] 3)微生物采油。
[0019] 本發(fā)明還有一個目的是提供一種石油污染治理和/或修復的方法。
[0020] 本發(fā)明提供的石油污染治理和/或修復的方法包括如下步驟：用上述紅簍菌 Rhodocista sp.W_Y3或其菌懸液處理石油污染物。
[0021] 本發(fā)明的最后一個目的是提供一種微生物驅油的方法。
[0022] 本發(fā)明提供的微生物驅油的方法包括如下步驟:在采油的過程中，加入上述紅簍 菌Rhodocista sp.W_Y3或其菌懸液。
[0023]本發(fā)明提供了一種微生物采油菌W-Y3,該菌株已于2016年5月23日保藏于中國微 生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏號為CGMCC No. 12493。通過實驗證明：本發(fā) 明的微生物采油菌W-Y3不僅具有降解石油的功能，可用于石油污染的治理和修復，而且還 可以用于微生物采油，提高采油率，具有良好的應用前景。
【附圖說明】
[0024] 圖1為基于W-Y3菌株16S rDNA的系統(tǒng)發(fā)育樹。
[0025]圖2為降解石油前后全烴組分變化。
[0026]圖3為物模驅油結果曲線。
[0027] 保藏說明
[0028] 菌種名稱:紅簍菌
[0029] 拉丁名：Rhodocista sp ·
[0030] 菌株編號:W-Y3
[0031]保藏機構：中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心
[0032] 保藏機構簡稱:CGMCC
[0033]地址:北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號
[0034] 保藏日期：2016年5月23日
[0035] 保藏中心登記入冊編號：CGMCC No .12493
【具體實施方式】
[0036] 下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。
[0037] 下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。
[0038] 下述實施例中的定量試驗，均設置三次重復實驗，結果取平均值。
[0039] 實施例1、W_Y3菌株的分離與鑒定
[0040] 1、W_Y3菌株的分離
[00411 取1 g原油（2015年3月取自滄州市大港油田油井原油)加入到121°C滅菌30min的液 體無機鹽培養(yǎng)基(5g/L NaCl、lg/L NH4H2P04、lg/L(NH4)2S04、lg/L K2HP04、3g/L ΚΝ03，ρΗ 7-8)中，37 °C、150rpm振蕩培養(yǎng)30d后，稀釋涂布在LB培養(yǎng)基（lOg/LNaCl、lOg/L蛋白胨、5g/L酵 母粉，pH 7-8)平板上，培養(yǎng)7d后，挑取單菌落劃線純化后保存，并將分離純化獲得的分離物 命名為W-Y3菌株。
[0042] 2、W_Y3菌株的分子鑒定
[0043]將W-Y3菌株接種于液體LB培養(yǎng)基（10g/L NaCl、10g/L蛋白胨、5g/L酵母粉，pH 7-8)中，30°C、150rpm振蕩培養(yǎng)24h。取lml新鮮培養(yǎng)菌液4°C、8000rpm離心5min，收集菌體于 2ml離心管中，采用DNA提取試劑盒提取DNA。電泳檢測后，采用通用引物8F/1492R進行PCR擴 增，得到含有W-Y3菌株16S rDNA保守區(qū)的PCR產(chǎn)物。引物序列如下：
[0044] 8F:5，-AGA GTT TGA TCC TGG CTC AG-3,；
[0045] 1492R:5'-GGT TAC CTT GTT ACG ACT T-3'。
[0046] 電泳檢測PCR產(chǎn)物并測序，測序結果表明：W-Y3菌株16S rDNA的核苷酸序列如序列 1所示?；赪-Y3菌株16S rDNA序列，使用軟件MEGA構建系統(tǒng)發(fā)育樹如圖1所示。將序列1提 交GenBank，根據(jù)BLAST搜索和同源性分析比較的結果，與已知菌種Rhodoc i s ta pekingensis的最高相似性僅為96.08%，表明該菌是一種新發(fā)現(xiàn)的新菌。
[0047]綜合上述鑒定結果，W-Y3菌株名稱為紅簍菌，其分類命名為Rhodocista sp.，該菌 株已于2016年5月23日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心（簡稱 CGMCC，地址:北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，中國科學院微生物研究所，郵編100101)，保 藏號為CGMCC No .12493。
[0048] 實施例2、W_Y3菌株在石油污染治理修復中的應用
[0049] 1、W_Y3菌液的獲得
[0050] 將W-Y3菌株接種于液體LB培養(yǎng)基（10g/L氯化鈉、10g/L蛋白胨、5g/L酵母粉，pH 7-8)中，30°C、150rpm振蕩培養(yǎng)24h，得到W-Y3菌液(W-Y3菌液的濃度為108-109CFU/ml)。
[00511 2、W-Y3菌液降解石油
[0052] 將步驟1得到的W-Y3菌液按照體積分數(shù)為5%的比例接種于石油無機鹽培養(yǎng)基 (lg/L石油、5g/L NaCl、lg/L NH4H2P〇4、lg/L(NH4)2S〇4、lg/L K2HP〇4、3g/L ΚΝ03，ρΗ 7-8)中 (W-Y3菌液的濃度為106-10#1]/1111)，30°(：、150印111振蕩培養(yǎng)7(1，得到1-￥3降解產(chǎn)物。
[0053] 3、按文獻"原油降解菌的分離及其降解性能"中的方法測定W-Y3降解產(chǎn)物中的石 油殘余量，并計算石油降解率。石油降解率的公式：（石油加入量-石油參與量)/石油加入 量。計算結果表明：石油的降解率為59.9%。
[0054] 4、按行業(yè)標準SY/T5779-2008石油和沉積有機質烴類氣相色譜分析方法測定W-Y3 菌液降解前后的全烴組分變化。
[0055] 結果如圖2所示，其中，黑色圖譜為降解前石油烴組分，紅色圖譜為降解后石油烴 組分。從圖2可以看出，經(jīng)過W-Y3作用后，石油烴組分顯著降低，說明W-Y3菌株具有降解石油 的功能，可用于石油污染的治理和修復。
[0056] 實施例3、W_Y3菌株在微生物采油技術中的應用
[0057]通過室內物模驅油實驗評價微生物菌種的驅油效果，具體實驗方法如下：
[0058] 1、按照油藏區(qū)塊滲透率(600μπι2)，采用高壓模型管（規(guī)格0:25x500mm,購至海安 石油科研儀器有限公司）內填裝不同目數(shù)的石英砂制作為填砂模型管；
[0059] 2、采用滲透率測量裝置測量模型管滲透率，選擇符合的模型管，模型管填砂參數(shù) 如表1所示；
[0060] 表1、模型管填砂參數(shù)
[0062] 3、抽真空飽和地層水，計算孔隙度；
[0063] 4、油驅水建立束縛水，測量原始含油飽和度;并在油藏溫度(37 °C)下老化3天；
[0064] 5、用注入水進行驅油，至出口產(chǎn)出液達到極限含水率(98%)停止水驅，計算水驅 米收率；
[0065] 6、將W-Y3菌株接種于液體LB培養(yǎng)基（10g/L氯化鈉、10g/L蛋白胨、5g/L酵母粉，pH 7-8)中，30°C、150rpm振蕩培養(yǎng)24h，得到W-Y3菌液(W-Y3菌液的濃度為108-109CFU/ml)。在注 入水中加入NH4H2P〇4、(NH4) 2S〇4、K2HP〇4、KN〇3、蛋白胨、酵母粉和W-Y3菌液，混勻，得到含W-Y3 的混合液，使各組分在含W-Y3的混合液中的濃度分別為lg/L NH4H2P〇4、lg/L (NH4)2S〇4、lg/ L K2HP〇4、3g/ L KN03、2g/L蛋白胨、lg/L酵母粉、5% (體積分數(shù))W-Y3菌液。W-Y3的混合液中 W-Y3 的濃度為 106_107CFU/ml。
[0066] 7、按0.5PV注入量將上述含W-Y3的混合液注入模型管中；在油藏溫度（37°C )下培 養(yǎng)15天；
[0067] 8、二次水驅，水驅至含水98 %以上，計算注微生物(含W-Y3的混合液)過程中、微生 物(含W-Y3的混合液)作用后續(xù)水驅的采收率和W-Y3菌株提高采收率。
[0068] 水驅、注微生物過程中、微生物作用后續(xù)水驅等不同階段的采收率的結果如表2所 示。對水驅、注微生物過程中、微生物作用后續(xù)水驅等不同階段的采收率進行了對比發(fā)現(xiàn)： 使用W-Y3菌株進行采油，采收率提高了 6.67%。物模驅油結果曲線如圖3所示。
[0069] 表2、水驅、注微生物過程中、微生物作用后續(xù)水驅等不同階段的采收率
【主權項】
1. 一株紅簍菌Rhodocista SP.W-Y3,其保藏編號為CGMCC No.12493。2. 權利要求1所述的紅簍菌Rhodocista Sp.W-Y3或其菌懸液或其培養(yǎng)液或其發(fā)酵產(chǎn)物 或含有其的菌劑在石油降解中的應用。3. 權利要求1所述的紅簍菌Rhodocista Sp.W-Y3或其菌懸液或其培養(yǎng)液或其發(fā)酵產(chǎn)物 或含有其的菌劑在制備石油降解的產(chǎn)品中的應用。4. 權利要求1所述的紅簍菌Rhodocista Sp.W-Y3或其菌懸液或其培養(yǎng)液或其發(fā)酵產(chǎn)物 或含有其的菌劑在石油污染治理和/或修復中的應用。5. 權利要求1所述的紅簍菌Rhodocista Sp.W-Y3或其菌懸液或其培養(yǎng)液或其發(fā)酵產(chǎn)物 或含有其的菌劑在制備石油污染治理和/或修復的產(chǎn)品中的應用。6. 權利要求1所述的紅簍菌Rhodocista Sp.W-Y3或其菌懸液或其培養(yǎng)液或其發(fā)酵產(chǎn)物 或含有其的菌劑在微生物采油中的應用。7. 權利要求1所述的紅簍菌Rhodocista Sp.W-Y3或其菌懸液或其培養(yǎng)液或其發(fā)酵產(chǎn)物 或含有其的菌劑在制備微生物采油的產(chǎn)品中的應用。8. -種產(chǎn)品，其活性成分為權利要求1所述的紅簍菌Rhodocista Sp.W-Y3或其菌懸液 或其培養(yǎng)液或其發(fā)酵產(chǎn)物或含有其的菌劑； 所述產(chǎn)品具有如下1)_3)中任一種功能： 1) 石油降解； 2) 石油污染治理和/或修復； 3) 微生物采油。9. 一種石油污染治理和/或修復的方法，包括如下步驟：用權利要求1所述的紅簍菌 Rhodocista sp.W-Y3或其菌懸液處理石油污染物。10. -種微生物驅油的方法，包括如下步驟:在采油的過程中，加入權利要求1所述的紅 萎菌Rhodocista sp.W_Y3或其菌懸液。
【文檔編號】C12R1/01GK105950514SQ201610403188
【公開日】2016年9月21日
【申請日】2016年6月8日
【發(fā)明人】池昌橋, 吳曉篤, 劉澤漢
【申請人】北京潤世科技有限公司