輪枝孢菌素a及與trail組合在制備藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬制藥領(lǐng)域，設(shè)及輪枝抱菌素 A與TRAIL組合在制備抗腫瘤轉(zhuǎn)移藥物中的應(yīng) 用。
【背景技術(shù)】
[0002] 癌癥是嚴(yán)重危害人類健康的疾病之一，腫瘤轉(zhuǎn)移則是癌癥患者死亡的最主要原 因，某種程度上講，控制腫瘤轉(zhuǎn)移即能控制癌癥死亡，目前盡管國內(nèi)外抗腫瘤轉(zhuǎn)移藥物研究 投入了大量的人力、財力、時間，但是還沒有一個真正的抗腫瘤轉(zhuǎn)移藥物上市。
[0003] TRAIL(TNF-related apoptosis-inducing ligand)是腫瘤壞死因子超家族的一 個成員，由于能夠特異性地誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞調(diào)亡，自被發(fā)現(xiàn)W來研究人員就將其作為一個選 擇性抗腫瘤藥物進(jìn)行著廣泛的研究。近期，WTRAIL為主體的腫瘤治療正在進(jìn)行I期和II期 臨床試驗(yàn)(WWW.clinicalhaiIs.gov)。雖然TRAIL在臨床前試驗(yàn)中表現(xiàn)了良好的選擇特異 性和較低的細(xì)胞毒性，TRAIL在腫瘤臨床治療中的療效非常有限。究其原因，就是腫瘤細(xì)胞 特別是轉(zhuǎn)移性腫瘤細(xì)胞對TRAIL產(chǎn)生了耐藥性。因此，尋找新型有效的TRAIL增敏劑與TRAIL 協(xié)同作用W治療腫瘤尤其是治療腫瘤轉(zhuǎn)移具有廣泛的應(yīng)用前景。已有報道vedicillin A 具有抗腫瘤效果，但是vedicillin A抗腫瘤轉(zhuǎn)移的效果未曾報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的是提供輪枝抱菌素 A(vedicillin A)在制備抗腫瘤轉(zhuǎn)移藥物中的 應(yīng)用。所述的vedicillin A是從高等真菌黃髓碟膏菌(含菌寄生菌歪抱菌)子實(shí)體中分離 所得，分子式為C3()也8N606S4，分子量化SI-MS):m/z 696.3，所述藥物由veパicillinA與制 劑允許的藥物賦形劑或載體組成。本發(fā)明所述腫瘤主要包括肝癌、結(jié)腸癌和乳腺癌。
[0005] 本發(fā)明的另一個目的是提供輪枝抱菌素 A(vedicillin A)與TRAIL組合(重量比 1:10)在制備抗腫瘤轉(zhuǎn)移藥物中的應(yīng)用。
[0006] 本發(fā)明提供的藥物，其制劑形式液體制劑、固體制劑或膠囊劑，主要包括顆粒劑、 片劑、沖劑、軟膠丸、軟膠囊、滴丸劑或注射劑。
[0007] 本發(fā)明提供的藥物，制劑的給藥形式主要包括口服給藥或注射給藥。
[0008] 本發(fā)明提供的vedicillinA對多種人的W及小鼠的肝癌細(xì)胞、結(jié)腸癌和乳腺癌 細(xì)胞都有較強(qiáng)的TRAIL增敏效果。表明vedicillin A是一廣譜的有效的TRAIL增敏劑。目前 臨床上缺乏真正的抗腫瘤轉(zhuǎn)移藥物，因此verticil 1 in A具有很好的應(yīng)用前景。本發(fā)明 verticillin A能夠在較低劑量下有效增加腫瘤細(xì)胞對TRAIL的敏感性，并W協(xié)同作用的方 式抑制腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移。因此vedicillin A及與TRAIL組合具有更好抗腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的應(yīng)用 前景。
【附圖說明】
[0009] 圖1是輪枝抱菌素 A的液相色譜分析。儀器:Agilent 1100系列高效液相色譜儀； 柱：Hypersil 抓S-C18,，5皿，4.6X250mm;柱溫：35°C;流動相：60% 乙臘-40%水；流速： 0.8mL/min;檢測波長：210nm。
[0010]圖2是4T-1細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)顯微照片圖。
[00川圖3是4T-1細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)柱狀圖。
[0012]圖4是CT26細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)柱狀圖。
[001引圖5是服始田胞劃痕實(shí)驗(yàn)柱狀圖。
[0014] 圖6是服0細(xì)胞Tranawe 11實(shí)驗(yàn)，上圖是顯微照片圖（左：對照，右：加藥），下圖是柱 狀圖。
[001引圖7是RT-PCR篩查基因的結(jié)果。
[0016] 圖8是Ve;rticillin A下調(diào)c-Met蛋白表達(dá)。
[0017] 圖9是Vedicillin A抑制HGF(肝細(xì)胞生長因子)激活的c-Met蛋白表達(dá)及其憐酸 化。
[001引圖10是Vedicillin A抑制服F誘導(dǎo)的服始田胞轉(zhuǎn)移Tranawell實(shí)驗(yàn)。
[0019] 圖11是Vedicillin A抑制服F誘導(dǎo)的DLD1細(xì)胞轉(zhuǎn)移Tranawell實(shí)驗(yàn)。
[0020] 圖12是Vedici 11 in A與TRAIL組合抑制小鼠體內(nèi)結(jié)腸癌細(xì)胞肺部轉(zhuǎn)移的照片。
[0021 ] 圖13是Vedici 11 in A與TRAIL組合抑制小鼠體內(nèi)結(jié)腸癌細(xì)胞肺部轉(zhuǎn)移腫瘤顆粒 數(shù)的柱狀圖。
【具體實(shí)施方式】
[0022] W下將結(jié)合具體實(shí)施例與附圖詳細(xì)說明本發(fā)明，運(yùn)些實(shí)例僅用于說明目的，而不 用于限制本發(fā)明范圍。
[0023] 實(shí)施例1:分離純化抗腫瘤細(xì)胞毒化合物Vedicillin A
[0024] 1.提取和純化:黃髓碟膏菌真菌(含菌寄生菌歪抱菌)濕重1500g，真空凍干粉碎后 先用石油酸然后用乙酸乙醋室溫浸提，取乙酸乙醋浸提物1.2g溶劑溶解后過反相色譜柱， 流動相取石油酸:氯仿：乙臘=6:1:3，部分收集器收集分離片段進(jìn)行體外MTT法檢測各片段 對肝癌細(xì)胞HepG2的毒性，檢測到毒性最大的組分收集后用C8反相半制備柱化ypersil 0DS20巧50mm)純化，流動相為10%-100%的乙臘或甲醇梯度洗脫，收集細(xì)胞篩選有活性的 洗脫峰，揮發(fā)溶劑后得白色晶體10.5mg，純度99.0 %，VertiCi 11 in A的高效液相色譜圖見 圖1。
[00巧]2.結(jié)構(gòu)鑒定:核磁共振儀（IN0VA-400)，質(zhì)譜儀(Bruker Esquire 3000plus)。
[0026] 3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果:VerticillinA，分子式為C3地28N606S4，ESI-MS:m/z 696.3，根據(jù)運(yùn)些 數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)（Minato Η, et al.J Chem Soc Perkin 197317:1819-25)比較所得 Verticillin A的化學(xué)結(jié)構(gòu)如下：
[0027]
[00巧]實(shí)施例2 Verticil 1 in A體外抑制腫瘤細(xì)胞遷移；
[00巧]實(shí)驗(yàn)材料和方法：
[0030] 腫瘤細(xì)胞購自美國American Type Culture Collection并培養(yǎng)在DMEM培養(yǎng)基 (1]1￥；[付0肖日]1日），添加 5%小牛血清（1]1￥；[付0肖日]1日），211^谷氨酷胺，37"€，10%〔〇2培養(yǎng)箱。
[0031] 實(shí)驗(yàn)選擇5種不同腫瘤細(xì)胞分別是4T-1(鼠乳腺癌）、Bcap37(人乳腺癌）、CT26(鼠 結(jié)腸癌）、服〇(人結(jié)腸癌-轉(zhuǎn)移性）、HCT116(人原發(fā)結(jié)腸癌），分別添加或不添加 Vedicillin A24或48小時利用細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)，顯微觀察分析腫瘤細(xì)胞的遷移情況（圖2)，結(jié)果表明：0.1μ Μ Verticillin Α48小時處理可W顯著抑制4T-UCT26及服0的細(xì)胞遷移達(dá)50%左右（圖3- 5)，而對Bcap37或肥T116影響不大（圖略）。
[0032] VertiCi 11 in A溶解在DMS0中配成Img/ml母液，置于-20°C冰箱，實(shí)驗(yàn)時用培養(yǎng)液 稀釋成所需