專利名稱：治療經(jīng)前期緊張癥的藥物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種治療經(jīng)前期緊張癥的藥物。
經(jīng)前期緊張癥，約有50％的行經(jīng)婦女患有此癥，為多發(fā)病、常見病，對生產(chǎn)、工作和生活均有較大影響，且由于患者易怒、抑郁、強(qiáng)迫性行為、性欲改變，常給家庭造成悲劇?，F(xiàn)在市場上尚未有專門治療經(jīng)前期緊張癥的理想藥物，常用中成藥“逍遙丸”來代替。經(jīng)前期緊張癥，中醫(yī)辯證87％為實證(肝郁氣滯型)，“逍遙丸”雖能疏肝解郁，健脾和營，但用來替代治療經(jīng)前期緊張癥則無活血通絡(luò)的作用，且其舒肝理氣的藥力尚感不足。
本發(fā)明的目的在于提供一種舒肝理氣、活血通絡(luò)的治療經(jīng)前期緊張癥的藥物。
本發(fā)明的組成成分及各成分的組份為柴胡8～12 枳殼8～12 合歡皮6～10 郁金6～10香附6～10 青皮4～8 路路通4～8 橘核4～8當(dāng)歸6～10 白芍6～10 川芎4～8 茯苓4～8大腹皮4～8 甘草2～6下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作詳細(xì)描述。
取柴胡10kg、枳殼10kg、郁金8kg、香附8kg、當(dāng)歸8kg、川芎6kg、青皮6kg、七味中藥提取揮發(fā)油，揮發(fā)油用β-環(huán)糊精制成包合物，備用；上述藥渣與合歡皮8kg、路路通6kg、橘核6kg、白芍8kg、茯苓6kg、大腹皮6kg、甘草3kg、七味中藥加水共同煎煮1～3次，每次加8～13倍量水煎煮1～3小時，合并煎液，濾過，減壓濃縮至相對密度為1.10～1.30(75～80℃測)的稠膏，放冷，加入乙醇，使含醇量為50～75％，靜置24小時，取上清液回收乙醇，濃縮至相對密度為1.05～1.30(75～80℃測)的清膏，噴霧干燥，加入揮發(fā)油β-環(huán)糊精包合物，混勻，制粒，干燥，加輔量適量，混勻，壓制成片，包薄膜衣，即得。
本發(fā)明不限于上述所述的一個實施例。
下面為本發(fā)明(商品名稱為經(jīng)前安片)藥效學(xué)的實驗研究。


圖1為本發(fā)明對小鼠甩尾法鎮(zhèn)痛能力影響的藥效時間曲線圖。
圖2為本發(fā)明對小鼠熱板法鎮(zhèn)痛能力影響的藥效時間曲線圖。
橫坐標(biāo)軸(min)表示末次給藥后的測定時間，縱坐標(biāo)軸(S)表示甩尾反應(yīng)時間?！啊?-●”表示空白對照組，“○--○”表示小劑量組，“×--×”表示中劑量組，“Δ--Δ”表示大劑量組，“*--*”表示卡馬西平組，“Δ--Δ”表示逍遙丸組。
本發(fā)明(經(jīng)前安片)藥效學(xué)的實驗研究。
藥物及動物一、藥物經(jīng)前安片由柴胡、枳殼、合歡皮、郁金、香附、橘核、路路通、青皮、當(dāng)歸、白芍、川芎、茯苓等組成，東莞市中亞制藥廠提供，藥粉呈深棕褐色，含量為16.88g生藥/g藥粉，0.24g藥粉/片，批號970721。經(jīng)前安片具有舒肝理氣，活血通絡(luò)的作用，臨床上用于婦女經(jīng)前期緊張綜合癥。
逍遙丸，廣東華天寶藥廠。批號970603。逍遙丸具有疏肝健脾，養(yǎng)血調(diào)經(jīng)的作用，臨床上用于肝氣不舒，胸脅脹痛，頭暈?zāi)垦?，食欲減退，月經(jīng)不調(diào)。
卡馬西平片，北京市雙橋制藥廠。批號960301?？R西平系鎮(zhèn)痛抗痙攣藥，用于抗癲癇和三叉神經(jīng)痛。
呋塞米(速尿)片，江蘇省金壇市制藥廠。批號9606122。呋塞米系利尿藥，用于多種類型水腫及急性肺水腫。
戊巴比妥鈉，北京化工廠。批號930619。
生理鹽水，廣安門醫(yī)院藥劑室配制。批號970226。
二、動物雌性昆明種小白鼠，購自中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物研究所繁育場，級別為二級，經(jīng)檢疫，動物健康無病，動物合格證書為醫(yī)動字第01-3001號。
雌性Wistar種大白鼠，購自中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物研究所繁育場，級別為二極，經(jīng)檢疫，動物健康無病，動物合格證書為醫(yī)動字第01-3008號。
分別將實驗動物于我院二級動物室中飼養(yǎng)觀察，動物室合格證書為京動管準(zhǔn)字(1996)第009號。
方法和結(jié)果一、經(jīng)前安片對動物鎮(zhèn)痛能力的影響1．甩尾試驗取體重范圍為20±2g的雌性小鼠60只，按體重隨機(jī)分成6組，每組10只，分別為空白對照組、經(jīng)前安片小、中、大三個劑量組、逍遙丸組和卡馬西平組?？瞻讓φ战M的10只小鼠每天灌胃同體積自來水，經(jīng)前安片小、中、大三個劑量組的各10只小鼠分別灌胃經(jīng)前安片0.24、0.48、0.96g藥/kg(分別相當(dāng)于推薦臨床用量0.048g藥/kg的各5、10、20倍)，逍遙丸組的10只小鼠灌胃逍遙丸2.00g藥/kg(相當(dāng)于推薦臨床用量0.20g藥/kg的10倍)。除卡馬西平組外的各試驗組小鼠每日灌胃一次，每次0.5ml，連續(xù)給藥7天?？R西平組的10只小鼠在其它組給藥的第7天灌胃卡馬西平0.067g藥/kg(相當(dāng)于推薦臨床用量0.0067g藥/kg的10倍)。各試驗組用藥均以水稀釋成相應(yīng)濃度。各組在第7天最后一次給藥30、90、150分鐘后，分別將各組小鼠尾部浸入水溫為48±1℃的恒溫水槽中，浸入長度為5cm。將小鼠因受熱刺激而將尾部甩出水面的時間作為痛閾值，觀察各組小鼠在給藥30、90和150分鐘時的甩尾時間。結(jié)果見表1。
表1．經(jīng)前安片對小鼠甩尾法鎮(zhèn)痛能力的影響 甩尾時間秒組別 例數(shù) 劑量(g藥/kg) 給藥30分鐘 給藥90分鐘 給藥150分鐘空白對照組 10013.65±4.1112.82±4.53 12.62±4.46小劑量組10 0.24 23.55±9.7718.82±6.03 15.06±4.76中劑量組10 0.48 27.52±13.27*21.65±.9.16*19.31±8.74大劑量組10 0.96 31.12±19.21**24.18±12.64**22.27±8.11**逍遙丸組10 2.00 20.89±7.8417.12±5.05 15.04±4.50卡馬西平組 10 0.067 26.18±7.71*18.11 ±5.38 16.27±5.81與空白對照組比較方差分析結(jié)果*P＜0.05,**P＜0.01從表1可見，經(jīng)前安片具有明顯提高小鼠因尾部受熱引起銳痛的鎮(zhèn)痛能力，表現(xiàn)為明顯延緩疼痛反應(yīng)的出現(xiàn)，延長因疼痛引起的甩尾時間，即顯著提高小鼠的痛閾值。經(jīng)前安片隨著劑量的增加，其鎮(zhèn)痛作用顯著提高，且藥效較卡馬西平持久。結(jié)果見圖1。
2．熱板試驗取體重范圍為20±2g的雌性小鼠60只，按體重隨機(jī)分成6組，每組10只，分別為空白對照組、經(jīng)前安片小、中、大三個劑量組、逍遙丸組和卡馬西平組。各組的給藥劑量及時間均同前。各組在第7天最后一次給藥30、60、90、150分鐘后，分別將各組小鼠值于水溫為55±1℃恒溫水槽中預(yù)熱的不銹鋼桶中，將小鼠因受熱刺激而舔后足的時間作為痛閾值，觀察于末次給藥30、60、90和150分鐘時的舔足時間。結(jié)果見表2。
表2．經(jīng)前安片對小鼠熱板法鎮(zhèn)痛能力的影響甩尾時間秒組別 例數(shù) 劑量(g/藥kg) 給藥30分鐘給藥60分鐘給藥90分鐘 給藥150分鐘空白對照組 10 0 14.0±5.014.3±2.914.4±3.3 14.3±3.1小劑量組10 0.2414.9±2.016.8±6.018.8±4.8 16.8±5.2中劑量組10 0.4818.4±5.919.1±4.021.1±6.5*19.8±4.7#大劑量組10 0.9622.1±9.0**25.4±8.4**24.8±9.1**22.8±8.4**逍遙丸組10 2.0015.2±2.416 4±4.117.8±3.6 15.0±4.1卡馬西平組 10 0.067 20.3±5.7*22.4±7.2**23.6±7.4**22.5±4.6與空白對照組比較方差分析結(jié)果*P＜0.05**P＜0.01與逍遙丸組比較t-檢驗結(jié)果 #P＜0.05從表2可見，經(jīng)前安片具有明顯提高小鼠因足部受熱引起銳痛的鎮(zhèn)痛能力，表現(xiàn)為明顯延緩疼痛反應(yīng)的出現(xiàn)，延長因疼痛而引的舔后足時間，即顯著提高小鼠的痛閾值。經(jīng)前安片隨著劑量的增加，其鎮(zhèn)痛作用顯著提高。中劑量組經(jīng)前安片的鎮(zhèn)痛能力明顯優(yōu)于同為中劑量的逍遙丸組(P＜0.05)。結(jié)果見圖2。
3．扭體試驗取體重范圍為20±2g的雌性小鼠60只，按體重隨機(jī)分成6組，每組10只，分別為空白對照組、經(jīng)前安片小、中、大三個劑量組、逍遙丸組和卡馬西平組。各組的給藥劑量及時間均同前。各組在最后一次給藥30分鐘后，分別對各組小鼠腹腔注射5％乙酸溶液(0.3ml/30g)。記錄各組小鼠在腹腔注射乙酸后至出現(xiàn)第1次扭體時的疼痛反應(yīng)時間及15分鐘內(nèi)的扭體次數(shù)。15分鐘內(nèi)沒有出現(xiàn)扭體者，第1次出現(xiàn)扭體次數(shù)的疼痛反應(yīng)時間以15分鐘計算，扭體次數(shù)以0計算。結(jié)果見表3。
表3．經(jīng)前安片對小鼠扭體法鎮(zhèn)痛能力的影響組別 例數(shù) 劑量(g/藥kg) 疼痛反應(yīng)時間(分) 扭體數(shù)(次)空白對照組 10 0 9.57±3.90 7.7±4.3小劑量組 10 0.24 11.97±2.83 3.7±2.3*中劑量組 10 0.48 12.09±3.88 3.0±3.2**大劑量組 10 0.96 13.14±2.75*2.2±3.0**逍遙丸組 10 2.00 14.15±1.54**1.1±1.5**卡馬西平組 10 0.06714.63±1.19**0.6±1.9**與空白對照組比較方差分析結(jié)果*P＜0.05**P＜0.01
從表3可見，經(jīng)前安片具有顯著地提高小鼠因乙酸引起腹腔鈍痛的鎮(zhèn)痛能力，表現(xiàn)為明顯延緩疼痛反應(yīng)的出現(xiàn)，顯著降低因疼痛引起的扭體次數(shù)，即顯著提高小鼠的痛閾值。經(jīng)前安片隨著劑量的增加，其鎮(zhèn)痛作用顯著提高。
二、經(jīng)前安片對小鼠鎮(zhèn)靜能力的影響取體重范圍為20±2g的雌性小鼠60只，按體重隨機(jī)分成6組，每組10只，分別為空白對照組、經(jīng)前安片小、中、大三個劑量組、逍遙丸組和卡馬西平組。各組的給藥劑量及時間均同前。各組在最后一次給藥30分鐘后，分別對各組小鼠腹腔注射戊巴比妥鈉50mg/kg。以翻轉(zhuǎn)反射消失及恢復(fù)為睡眠指標(biāo)，記錄小鼠注射戊巴比妥鈉后的睡眠時間。結(jié)果見表4。
表4．經(jīng)前安片對小鼠鎮(zhèn)靜能力的影響組別例數(shù) 劑量(g/藥kg)睡眠時間(分)空白對照組 10 0 59.4±17.4小劑量組10 0.24 75.1±23.4中劑量組10 0.48 101.3±35.8**大劑量組10 0.96 119.1±42.1**逍遙丸組10 2.00 80.7±30.6卡馬西平組 10 0.067 70.4±26.9與空白對照組比較方差分析結(jié)果**P＜0.01從表4可見，同空白對照組相比，經(jīng)前安片具有顯著地增強(qiáng)小鼠的鎮(zhèn)靜能力。表現(xiàn)為明顯地延長小鼠的睡眠時間，即對小鼠戊巴比妥鈉催眠鎮(zhèn)靜有明顯的協(xié)同作用。經(jīng)前安片隨著劑量的增加，其鎮(zhèn)靜作用顯著提高。
三、經(jīng)前安片對大鼠利尿能力的影響將大鼠置于代謝籠中，按2.5ml/100g體重的劑量預(yù)先灌胃37℃溫水，2小時內(nèi)收集的尿量達(dá)到所灌入量40％以上的動物可用于利尿試驗，選取合格大鼠60只。取體重范圍為210±10g的雌性大鼠60只，按體重隨機(jī)分成6組，每組10只，分別為空白對照組、經(jīng)前安片小、中、大三個劑量組、逍遙丸組和呋塞米組?？瞻讓φ盏?0只小鼠每天灌胃同體積自來水，經(jīng)前安片小、中、大三個劑量組的各10只大鼠分別灌胃經(jīng)前安片0.24、0.48、0.96g藥/kg(分別相當(dāng)于推薦臨床用量0.048g藥/kg的各5、10、20倍)，逍遙丸組的10只大鼠灌胃逍遙丸2.00g藥/kg(相當(dāng)于推薦臨床用量0.20g藥/kg的10倍)。除呋塞米組外的各試驗組大鼠每日灌胃一次，每次2.0ml，連續(xù)給藥14天。在給藥第13天時，分別將各組大鼠預(yù)先放入代謝籠中生活1日，以使大鼠能適應(yīng)代籠中的生活環(huán)境。在給藥第14天的下午開始對所有大鼠禁食不禁水18小時。次日晨分別對各組大鼠按2.5ml/100g體重的劑量灌胃37℃生理鹽水。1小時后，各劑量組按2.5ml/100g體重的劑量灌胃37℃生理鹽水。配制的經(jīng)前安和逍遙丸，空白對照組灌胃同體積的生理鹽水，呋塞米組的10只大鼠此時按2.5ml/100g體重的劑量灌胃37℃生理鹽水配制的呋塞米0.02g藥/kg(相當(dāng)于推薦臨床用量0.002g藥/kg的10倍)。給藥后分別輕壓大鼠下腹部，排盡膀胱中余尿，然后分別置于代謝籠中(每籠1只)收集4小時尿液，每小時記錄一次排尿量，最后用同法壓迫下腹部，使尿液排入代謝籠漏斗中。比較各組的排尿量，測定尿液中的pH值，用美國CIBA·CORNING公司產(chǎn)644型Na+、K+、CI-分析儀測定尿液中的Na+、K+、CI-含量。結(jié)果見表5-7。
表5．經(jīng)前安片對大鼠排尿量的影響組別 例數(shù) 劑量(g/藥kg) 給藥1小時(ml) 給藥4小時總量(ml)空白對照組 10 01.284±0.6333.568±0.772小劑量組10 0.24 1.729±0.8433.993±1.532中劑量組10 0.48 1.825±0.9904.332±1.483大劑量組10 0.96 1.900±0.7794.115±0.867呋塞米組10 0.02 8.950.±0.737**11.199±1.226**逍遙丸組10 2.00 3.260±1.663**5.947±2.525與空白對照組比較方差分析結(jié)果**P＜0.01從表5可見，同空白對照組相比，經(jīng)前安片具有提高大鼠排尿量的作用趨勢。
表6-1．經(jīng)前安片對大鼠給藥1小時尿液中Na+、K+、CI-含量的影響組別 例數(shù) 劑量(g/藥kg) Na+(mol/L) K+(mol/L) CI-(mol/L)空白對照組 10 0 1.251±0.290 0.392±0.163 1.586±0.329小劑量組10 0.24 1.452±0.566 0.399±±±0.217 1.798±0.814中劑量組10 0.48 1.360±±0.363 0.675±0.270*# 2.066±0.501#大劑量組10 0.96 1.841 ±0.778*0.717±0.396**2.242±0.702*呋塞米組10 0.02 0.484±0.293**0.142±0.038*0.908±0.360*逍遙丸組10 2.00 1.097±0.436**5.947±2.525 1.390±0.759與空白對照組比較方差分析結(jié)果*P＜0.05,**P＜0.01
與逍遙丸組比較t-檢驗結(jié)果#P＜0.05表6-2．經(jīng)前安片對大鼠給藥2小時尿液中Na+、K+、CI-含量的影響組別 例數(shù) 劑量(g/藥kg) Na+(mol/L) K+(mol/L) CI-(mol/L)空白對照組 10 0 0.812±0.398 0.372±0.2371.627±0.672小劑量組10 0.24 0.943±0.550 0.366±0.1611.558±0.709中劑量組10 0.48 1.448±0392*0.551±0.245# 2.271±0.604*大劑量組10 0.96 2.091±0.380**0.741±0.192**2.856±0.277**呋塞米組10 0.02 1.223±0.323 0.295±0.0761.958±0.347逍遙丸組10 2.00 1.287±0.366 0.379±0.1721.728±0.784與空白對照組比較方差分析結(jié)果*P＜0.05**P＜0.01與呋塞米組比較t-檢驗結(jié)果 #P＜0.05表6-3．經(jīng)前安片對大鼠給藥3小時尿液中Na+、K+、CI-含量的影響組別 例數(shù) 劑量(g/藥kg) Na+(mol/L) K+(mol/L) CI-(mol/L)空白對照組 7 0 1.077±0.2020.439±0.068 1.929±0.273小劑量組8 0.241.031±0.3230.383±0.139 1.773±0.531中劑量組6 0.481.467±0.5680.430±0.195 2.215±0.760大劑量組6 0.962.023±0.665**0.573±0.142*2.673±0.363呋塞米組10 0.021.259±0.2420.476±0.151 2.208±0.363逍遙丸組8 2.001.706±0.528*0.496±0.350 2.258±0.773與空白對照組比較t-檢驗結(jié)果*P＜0.05,**P＜0.01從表6可見，同空白對照組相比，經(jīng)前安片具有顯著地提高大鼠尿液中的Na+、K+、CI-排放量。中劑量組經(jīng)前安片促進(jìn)尿液中Na+、K+、CI-排放量的能力明顯優(yōu)于同為中劑量的逍遙丸組或呋塞米組(p＜0.05)。經(jīng)前安片隨著劑量的增加，其足進(jìn)大鼠尿液中Na+、K+、CI-排放量的作用顯著提高。
表7．經(jīng)前安片對大鼠不同給藥時間尿液中pH值的影響組別1小時PH(例數(shù))2小時pH(例數(shù)) 3小時pH(例數(shù)) 4小時pH(例數(shù))空白對照組 6.3±0.3(10) 5.9±0.3(10)5.6±0.2(7)5.8±0.5(6)小劑量組5.9±0.4(10)*5.9±0.2(10)5.7±0.3(8)5.6±0.2(6)中劑量組6.0±0.3(10)*6.0±0.3(10)5.5±0.2(6)5.7±0.2(10)大劑量組6.1±0.4(10) 6.2±0.5(10)5.7±0.2(6)5.7±0.5(7)呋塞米組5.6±0.1(10)**5.9±0.5(10)5.6±0.3(10) 5.6±0.2(3)逍遙丸組5.9±0.3(10)*5.9±0.5(10)5.8±0.4(8)5.7±0.2(3)與空白對照組比較方差分析結(jié)果*P＜0.05**P＜0.01
從表7可見，同空白對照相比，經(jīng)前安片具有降落低大鼠尿液PH值的作用。
四、經(jīng)前安片對大鼠性征發(fā)育的影響1．經(jīng)前安片對大鼠性器官發(fā)育的影響取體重范圍為210±10g的雌性大鼠50只，按體重隨機(jī)分成5組，每組10只，分別為空白對照組、經(jīng)前安片小、中、大三個劑量組和逍遙丸組。各組大鼠的給藥劑量同前，連續(xù)給藥30天。各組在最后一次給藥30分鐘后，分別斷頭處死大鼠，解剖取子宮和卵巢稱重，計算子宮和卵巢的臟器系數(shù)。結(jié)果見表8。
表8．經(jīng)前安片對大鼠性器官發(fā)育的影響組別 例數(shù) 劑量(g/藥kg)子宮(×10-3) 卵巢(×10-3)空白對照組 10 0 1.862±0.518 0.513±0.073小劑量組 10 0.241.835±0.514 0.551±0.053中劑量組 10 0.481.764±0.380 0.545±0.097大劑量組 10 0.961.533±0.271*0.471±0.061逍遙丸組 10 2.001.875±0.493 0.473±0.064與空白對照組比較方差分析結(jié)果*P＜0.05從表8可見，同空白對照組相比，經(jīng)前安片具有明顯抑制大鼠子宮發(fā)育的作用，同時具有抑制大鼠卵巢發(fā)育的作用趨勢。經(jīng)前安片隨著劑量的增加，其抑制大鼠性器官司發(fā)育的作用顯著增強(qiáng)。
1．經(jīng)前安片對大鼠性激素水平的影響取體重范圍為210±10g的雌性大鼠50只，按體重隨機(jī)分成5組，每組10只，分別為空白對照組、經(jīng)前安片小、中、大三個劑量組和加味逍遙丸組。各組大鼠的給藥劑量同前，連續(xù)給藥30天。各組在最后一次給藥30分鐘后，分別斷頭處死大鼠，取大鼠血清，用國營262廠產(chǎn)FJ-2008G型γ自動免疫計數(shù)器測定血液中的睪酮(T)、雌二醇(E2)、促卵泡生成素(FSH)、促黃體生成素(LH)、催乳素(PRL)、孕酮(P)、絨毛膜促性腺激素(HCG)含量。結(jié)果見表9。
表9-1．經(jīng)前安片對大鼠性激素水平的影響組別例數(shù) T(Pg/ml) E2(ng/ml) E2/T FSH(mIU/ml)空白對照組 10 314.3±54.81.610±0.366 5.195±1.122 6.14±1.71小劑量組10 305.8±130.4 1.282±0.348 4.766±2.024 6.24±1.06中劑量組10 294.8 ±74.2 1.184±0.358 4.175±1.426 5.59±1.30大劑量組10 288.9±68.91.077±0.357 3.902±1.573 6.05±3.72加味逍遙丸組 10 256.9±82.1 1.661±0.362 6.650±2.890 5.73±1.59表9-2．經(jīng)前安片對大鼠性激素水平的影響組別 例數(shù) LH(mIU/ml) PRL(μIU/ml) P(ng/ml) HCG(mIU/ml)空白對照組 10 9.89±1.07 90.62±27.10 7.56±4.8423.88±2.65小劑量組10 9.45±1.02 94.31±19.23 9.51±7.0821.40±2.83中劑量組10 10.32±1.82 88.24±23.64 8.89±5.2622.95±4.25大劑量組10 11.35±0.85 83.10±17.15 12.25±.6.47 24.63±3.27加味逍遙丸組10 10.15±2.98 86.20±28.90 5.60±4.4520.71±5.03從表8可見，同空白對照組相比，經(jīng)前安片具有降低大鼠E2/T比值的作用趨勢。經(jīng)前安片隨著劑量的增加，其降低大鼠E2/T比值的作用趨勢有所增強(qiáng)。結(jié)合經(jīng)前安片明顯抑制大鼠性器官發(fā)育的作用，提示經(jīng)前安片具有類雄性激素樣的作用。
五、其他實驗期間通過具體觀察動物的一般形態(tài)、體重、進(jìn)食及飲水量、排便等情況，各組之間未見明顯差異。
討論經(jīng)前安片是在多年臨床經(jīng)驗基礎(chǔ)上總經(jīng)出的有效方劑，具有舒肝理氣，活血通絡(luò)的作用，臨床上用于婦女經(jīng)前期緊張綜合癥效果良好。為評價新藥經(jīng)前安片的有效性，我們進(jìn)行了有關(guān)試驗。通過本項工作，發(fā)現(xiàn)通過甩尾法、熱板法、扭體法鎮(zhèn)痛試驗，表明經(jīng)前安片具有顯著提高實驗動物鎮(zhèn)痛能力的作用；通過睡眠法鎮(zhèn)靜試驗，表明經(jīng)前安片具有顯著增強(qiáng)小鼠鎮(zhèn)靜能力的作用；通過利尿試驗，表明經(jīng)前安片具有提高大鼠排尿量的作用趨勢，明顯提高大鼠尿液中Na+、K+、CI-排放量，同時顯著降低大鼠尿液PH值；通過測定大鼠性器官臟器系數(shù)，表明經(jīng)前安片具有明顯抑制雌性大鼠性器官發(fā)育的作用；通過測定大鼠性激素水平，表明經(jīng)前安片具有降低大鼠E2/T比值的作用趨勢，提示經(jīng)前安片具有類雄性激素樣作用。經(jīng)前安片量效關(guān)系明顯，與陽性對照藥逍遙丸、卡馬西平、呋塞米(速尿)的藥理作用相似，部份指標(biāo)優(yōu)于逍遙丸、卡馬西平、呋塞米。
綜上所述，總結(jié)本項工作，經(jīng)前安片具有如下特點1．提高小鼠的鎮(zhèn)痛能力。
2．提高小鼠的鎮(zhèn)靜能力。
3．提高大鼠的排尿量和尿液中Na+、K+、CI-排放量，降低大鼠尿液pH值。
4．抑制雌性大鼠性器官發(fā)育，提示具有類雄性激素樣作用。
5．量效關(guān)系明顯。
6．與陽性對照藥逍遙丸、卡馬西平、呋塞米(速尿)的藥理作用相似，部分指標(biāo)優(yōu)于陽性對照藥。
本發(fā)明(經(jīng)前安片)活血化瘀作用的實驗研究藥物及動物一、藥物經(jīng)前安片由柴胡、枳殼、合歡皮、郁金、香附、橘核、路路通、青皮、當(dāng)歸、白芍、川芎、茯苓等組成，東莞市中亞制藥廠提供，藥粉呈深棕褐色，含量為16.88g生藥/g藥粉，0.24g藥粉/片，批號970721。經(jīng)前安片具有舒肝理氣，活血通絡(luò)的作用，臨床上用于婦女經(jīng)前期緊張綜合癥。
逍遙丸，廣東華天寶藥廠。批號970603。
二、動物雌性Wistar種大白鼠，購自中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物研究所繁育場，級別為二級，經(jīng)檢疫，動物健康無病，動物合格證書為醫(yī)動字第01-3008號。
將實驗動物于我院二級動物室中飼養(yǎng)觀察，動物室合格證書為京動管準(zhǔn)字(1996)第009號。
方法和結(jié)果取體重范圍為240±10g的雌性Wistar種大鼠50只，按體重隨機(jī)分成5組，每組10只，空白對照組和模型對照組的各10只大鼠分別灌胃同體積自來水，經(jīng)前安片小、大二個劑量組的各10只大鼠分別灌胃經(jīng)前安片0.48、0.96g藥/kg(分別相當(dāng)于推薦臨床用量0.048g藥/kg的各10、20倍)，陽性對照組的10只大鼠灌胃加味逍遙丸2.00g藥/kg(相當(dāng)于推薦臨床用量0.20g藥/kg的10倍)。各組用藥以水稀釋至相應(yīng)濃度，每天灌胃給藥1次，每次2.0ml/250g體重，連續(xù)給藥14天。在第14天給藥30分鐘后，除空白對照組外，對余下4組大鼠進(jìn)行急性血瘀模型的制備。過程為分別對這4組大鼠皮下注射鹽酸腎上腺素注射液，濟(jì)量為10、26μg/kg，二小時后分別將造型大鼠置于0～4℃冰水浴中冷浸5分鐘，再二小時后分別對造型大鼠皮下注射同樣劑量的鹽酸腎上腺素注射液，再過二小時后同樣分別將大鼠置于0-4℃冰水浴中冷浸5分鐘，完成急性血瘀模型大鼠的制備。隨后將所有大鼠禁食(不禁水)過夜，次日晨斷頭取動脈肝素抗凝血，測定血液流變學(xué)指標(biāo)的改變，觀察經(jīng)前安片對大鼠活血化瘀功能的影響。
用日本東京計器株式會社ELD型椎-板粘度計測定血液粘度。從表1可見，同模型對照組相比，經(jīng)前安片明顯降低急性血瘀模型大鼠的血液粘度。
表1．經(jīng)前安片對急性血瘀模型大鼠血液粘度的影響單位mpa.s1.92秒-19.6秒-138.4秒-1192秒-1組別 例數(shù)X±SD X±SDX±SD X±SD空白對照組 1021.93±3.32**15.78±3.99**10.03±0.92**5.80±0.28**模型對照組 1030.71±3.15 25.48±3.4111.42±0.766.33±0.41小劑量組 1026.71 ±2.45**21.22±4.52*10.19±1.05*5.91±0.25*大劑量組 1023.16±2.77**18.18±2.15**10.03±0.84**5.88±0.21**逍遙丸組 1025.37±2.57**20.31±2.05**10.28±1.32*5.95±0.39*方差分析與模型對照組比較，*P＜0.05,**P＜0.01用日本KUBOTA KH-120Ⅱ型紅細(xì)胞壓積儀，通過毛細(xì)管微量法測定紅細(xì)胞壓積，用溫氏常規(guī)血沉法測定紅細(xì)胞沉降率。從表2可見，同模型對照組相比，經(jīng)前安片明顯降低急性血瘀模型大鼠的血漿比粘度(生理鹽水與血漿分別通過毛細(xì)管時間的比值)、紅細(xì)胞壓積和紅細(xì)胞沉降率。
表2．經(jīng)前安片對急性血瘀模型大鼠血漿比粘度和血漿纖維蛋白原的影響劑量 血漿比粘度紅細(xì)胞壓積(％) 紅細(xì)胞沉降率(mm/h)組別 例數(shù) g藥/kgX±SD X±SDX±SD空白對照組 10 0 1.711±0.021**40.10±2.39**1.80±0.26*模型對照組 10 0 1.792±0.030 45.05±2.49 2.35±0.47小劑量組 10 0.48 1.732±0.028**42.50±2.851.95±0.55大劑量組 10 0.96 1.718±0.023**40.10±2.72*1.80±0.67*逍遙丸組 10 2.00 1.737±0.035**42.60±2.331.90±0.57方差分析與模型對照組比較，*P＜0.05,**P＜0.01用日本KUBOTA KH-120Ⅱ型高速離心機(jī)和測量板，通過毛細(xì)管微量熱沉法測定血漿纖維蛋白原。用北京普利生集團(tuán)LBY-BX2型紅細(xì)胞聚集儀測定紅細(xì)胞聚集指數(shù)。用江蘇省丹陽市電子研究所PAM-3型雙通道血小板聚集儀，用比濁法測定通過1.0μmol ADP誘導(dǎo)的血小板聚集率。從表3可見，同模型對照組相比，經(jīng)前安片明顯降低急性血瘀模型大鼠的血漿纖維蛋白原含量、紅細(xì)胞聚集指數(shù)和血小板聚集率。表3．經(jīng)前安片對血瘀模型大鼠血漿纖維蛋白原、紅細(xì)胞聚集指數(shù)和血小板聚集率的影響劑量 血漿纖維蛋白原(g/L) 紅細(xì)胞聚集指數(shù) 血小板聚集率(％)組別 例數(shù) (g藥/kg) X±SDX±SD X±SD空白對照組 10 0 3.28±0.42**14.61 ±3.36**48.82±5.05**模型對照組 10 0 3.84±0.20 20.60±2.38 67.16±6.37小劑量組 10 0.48 3.60±0.36 18.76±2.89 59.68±4.73**大劑量組 10 0.96 3.35±0.42*15.84±2.97**51.86±4.20**逍遙丸組 10 2.00 3.55±0.31 17.24±2.64*54.20±4.43**方差分析與模型對照組比較，*P＜0.05,**P＜0.01討論經(jīng)前安片是在多年臨床經(jīng)驗基礎(chǔ)上總結(jié)出的有效方劑，具有舒肝理氣，活血通絡(luò)的作用，臨床上用于婦女經(jīng)前期緊張綜合癥效果良好。為評價新藥經(jīng)前安片活血化瘀作用的有效性，我們進(jìn)行了有關(guān)試驗。
中醫(yī)辯證為血瘀證的患者，在血液變性上具有粘、濃、凝聚的特點。本實驗所用急性血瘀動物模型系依據(jù)中醫(yī)關(guān)于血瘀證的“暴怒”“寒邪”病因、病機(jī)所設(shè)計。給大鼠皮下注射大劑量腎上腺素模擬暴怒時機(jī)體狀態(tài)，以冰水浸泡模擬寒邪侵襲，二者綜合作用可迅速復(fù)制出血液流變性呈粘、濃、凝聚狀態(tài)的血瘀模型。
通過本項工作，表明經(jīng)前安片具有顯著提高實驗大鼠活血化瘀功能的作用。表現(xiàn)為明顯降低大鼠的血液粘度和血漿比粘度，使血瘀大鼠血液流變性上“粘”的特點得到明顯改善；明顯降低大鼠的紅細(xì)胞壓積和紅細(xì)胞沉降率，使血瘀大鼠血液流變性上“濃”的特點得到明顯改善；明顯降低大鼠的血漿纖維蛋白原含量、紅細(xì)胞聚集指數(shù)和血小板聚集率，使血瘀大鼠血液流變性上“凝聚”的特點得到明顯改善。
經(jīng)前安片的使用劑量與藥效之間具有明顯的量效關(guān)系。
經(jīng)前安片具有陽性對照藥逍遙丸相似的藥效作用。
本發(fā)明(經(jīng)前安片)急性毒性的實驗研究材料和方法一、藥物經(jīng)前安片由柴胡、枳殼、合歡皮、郁金、香附、橘核、路路通、青皮、當(dāng)歸、白芍、川芎、茯苓等組成，東莞市中亞制藥廠提供，藥粉呈深棕褐色，含量為16.88g生藥/g藥粉，0.24g藥粉/片，批號970721。
二、動物雌性及雌性種昆明種小白鼠，購自中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物研究所繁育場，級別為二級，經(jīng)檢疫，動物健康無病，動物合格證書為醫(yī)動字第01-3001號。于我院二級動物室中飼養(yǎng)觀察，動物室合格證書為京動管準(zhǔn)字(1996)第009號。
三、方法將經(jīng)前安片藥粉溶于水中，含量為為0.32g藥粉/ml(此為本藥可以灌胃給藥的最大濃度)。選取體重范圍在19±1g的昆明種小白鼠雄、雌性各10只，同性別的10只小鼠合放于一籠，給藥前分別對這20只小鼠禁食(不禁水)14小時。按照216.1g生藥/kg體重(0.8ml/20g體重)的劑量，分別對20只空腹小鼠經(jīng)口灌胃給藥(此為小鼠胃所能容納的最大體積)。約藥后每籠均加飼料200g。間隔12小時再次給藥，24小時內(nèi)給藥2次，每次給藥后立即觀察小鼠的即刻反應(yīng)，隨后每天觀察一次，連續(xù)觀察7天。實驗室溫度為22±2℃。
結(jié)果和討論第1次灌胃給藥后，所有小鼠均表現(xiàn)為活動減少，精神不振，臥伏嗜睡，給藥2小時前后逐漸恢復(fù)正?；顒雍瓦M(jìn)食飲水，6小時后有暗褐色藥物狀大便排出，身體狀態(tài)恢復(fù)正常。間隔12小時后再次給藥，劑量同前，小鼠產(chǎn)生癥狀同上。24小時內(nèi)給藥2小時，小鼠表現(xiàn)均一致，無一只小鼠死亡。對全部存活小鼠連繼觀察7天，均健康存活，無死亡現(xiàn)象發(fā)生，記錄7天后的體重和飼料消耗量，見表1。
表1．小鼠給藥前后的體重和飼料消耗量性別 例數(shù) 給藥前體重(g) 7天后體重(g) 飼料消耗量(g/7天/10只)♂1018.7±0.4 28.8±1.2 200-30=170♀1018.7±1.1 24.4±0.9 200-49=151經(jīng)前安片最大耐受量計算的參考系數(shù)如下性別 例數(shù) 給藥途徑 給藥劑劉(g/生藥kg) 死亡數(shù) 死亡率(％)
♂10經(jīng)口灌胃216.1×2次=432.200♀10經(jīng)口灌胃216.1×2次=432.200經(jīng)前安片的最大耐受量＞432.2g生藥/kg相當(dāng)于推薦臨床用量(0.81g生藥/kg)的533.6倍以上。
結(jié)論經(jīng)前安片在最大給藥濃度和最大給藥體積條件下未測出半數(shù)致死劑量。當(dāng)24小時內(nèi)給藥2次，無一只實驗小鼠死亡時，方測出最大耐受量大于432.2g生藥/kg，為推薦臨床用量的533.6倍以上。證明經(jīng)前安片作為口服中成藥，在正常使用的劑量范圍內(nèi)是安全可靠的。
本發(fā)明(經(jīng)前安片)長期毒性的實驗研究材料和方法一、藥物經(jīng)前安片由柴胡、枳殼、合歡皮、郁金、香附、橘核、路路通、青皮、當(dāng)歸、白芍、川芎、茯苓等組成，東莞市中亞制藥廠提供，藥粉呈深棕褐色，含量為16.88g生藥/g藥粉，0.24g藥粉/片，批號970721。
尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(GOT)、乳酸脫氫酶(LDH)試劑盒，北京中生生物工程高技術(shù)公司生產(chǎn)，批號971203。
二、動物雌性及雌性Wistar種大白鼠，體重范圍為150±10g，購自中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物研究所繁育場，級別為二級，經(jīng)檢疫，動物健康無病，動物合格證書為醫(yī)動字第01-3008號。于我院二級動物室中飼養(yǎng)觀察，動物室合格證書為京動管準(zhǔn)字(1996)第009號。
三、方法大白鼠按體重隨機(jī)分成四組，分別為對照組、大劑量組、中劑量組和小劑量組，每組20只，10雄10雌，雌雄分開，分別飼養(yǎng)于4個籠中，每籠5只大鼠。大、中、小三個劑量組給藥劑量分別為72.90、36.45、14.58g生藥/kg，相當(dāng)于推薦臨床用量(0.81g生藥/kg)的90、45和18倍，劑距為5.0∶2.5∶1.0。經(jīng)前安片大、中、小三個劑量組用藥以水配制，調(diào)成相應(yīng)濃度。對照組用等量水。大白鼠按1ml/100g體重的給藥劑量每日一次經(jīng)口灌胃，連續(xù)給藥11周。觀察動物服藥后的一般狀態(tài)、行為、皮毛及大小便等情況。每周稱量一次體重和進(jìn)食量，以調(diào)節(jié)給藥劑量。在第11周末次給藥24小時后，停止大鼠給藥，體檢，查血常規(guī)。隨后將每組大鼠各處死12只(6雄6雌)，每組余下的8只大鼠(4雄4雌)分別飼養(yǎng)于2個籠中，每籠4只。將每組分別處死的12只大鼠取血檢查肝腎功能，并取心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、胸腺、十二指腸、子宮、卵巢等臟器做病理形態(tài)學(xué)剖檢。觀察動物因連續(xù)用藥而產(chǎn)生的毒性反應(yīng)和嚴(yán)重程度。各組剩余大鼠的8只大鼠停藥觀察2周，處死后再次檢測有關(guān)指標(biāo)，以考察其停藥后的發(fā)展和恢復(fù)情況。數(shù)據(jù)處理采用方差分析。
實驗結(jié)果一、預(yù)實驗情況正式實驗開始前，取體重范圍為150±10g的雄雌性大鼠各10只，以72.90g生藥/kg劑量，相當(dāng)于推薦臨床用量(0.81g生藥/kg)的90倍，對大白鼠按1ml/100g體重的給藥劑量每日一次經(jīng)口灌胃給藥，連續(xù)給藥一周進(jìn)行灌胃給藥，大鼠未見任何異常，故確定大、中、小三個劑量組給藥劑量分別為72.90、36.45和14.58g生藥/kg，相當(dāng)于推薦臨床用量(0.81g生藥/kg)的90、45和18倍，對大鼠進(jìn)行長期毒性實驗。
二、對一般狀態(tài)及體重的影響在給藥11周及停藥2周后，各組大鼠的行為活潑，皮毛色澤光潤，進(jìn)食飲水正常，大小便未見異常，未見有胃腸反應(yīng)，各組間無明顯差異。從表1可見，各組間每籠內(nèi)每只大鼠每日的平均進(jìn)食量在給藥期間和停藥2周后進(jìn)食量基本相同，沒有明顯的統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)。
表1．經(jīng)前安片對大鼠進(jìn)食量的影響(單位克)周數(shù) 大鼠平均進(jìn)食量±標(biāo)準(zhǔn)差(籠數(shù))對照組 小劑量組 中劑量組 大劑量組0 19.8±4.4(4) 18.2±2.5(4) 18.3±3.4(4) 18.6±2.1(4)1 19.9±2.6(4) 19.7±2.8(4) 20.7±5.7(4) 20.0±5.8(4)2 21.8±5.6(4) 21.1±6.4(4) 21.5±6.1(4) 20.0±5.6(4)3 21.6±6.2(4) 21.6±5.9(4) 21.2±5.6(4) 20.0±5.1(4)4 21.7±5.6(4) 21.3±5.7(4) 21.1±5.2(4) 20.6±5.1(4)5 21.7±6.2(4) 21.2±5.4(4) 20.9±6.1(4) 20.9±5.1(4)6 22.2±4.3(4) 22.0±6.0(4) 21.0±5.1(4) 21.0±6.0(4)7 22.1±5.2(4) 22.1±5.4(4) 20.9±4.4(4) 21.2±4.7(4)8 22.4±5.9(4)21.8±6.2(4)21.5±5.0(4)22.1±5.0(4)9 23.7±8.2(4)23.1±7.2(4)22.8±8.0(4)22.5±4.8(4)10 24.2±6.9(4)23.8±5.1(4)23.7±7.6(4)23.7±7.0(4)11 25.5±5.6(4)25.8±6.6(4)25.0±6.3(4)24.5±6.6(4)12 25.6±9.4(2)26.1±8.3(2)25.6±4.4(2)25.1±12.6(2)13 25.4±8.0(2)26.6±8.3(2)25.4±2.7(2)23.5±4.6(2)三、對體重的影響在給藥11周及停藥2周后，隨著時間的延續(xù)，各組間的大鼠體重均逐漸增加，從表2可見，各組間的大鼠在給藥期間和停藥2周后體重增長情況基本一致，沒有明顯的統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)。
表2．經(jīng)前安片對大鼠體重的影響(單位克)周數(shù) 大鼠平均體重±標(biāo)準(zhǔn)差(例數(shù))對照組 小劑量組 中劑量組 大劑量組0170.9±13.5(20)169.6±13.1(20)167.3±12.4(20)168.4±13.5(20)1200.4±15.6(20)198.7±20.3(20)198.5±13.8(20)192.4±18.3(20)2231.6±29.8(20)232.2±35.8(20)231.4±24.7(20)224.2±32.4(20)3252.5±42.9(20)252.1±43.4(20)251.2±31.2(20)244.6±36.5(20)4273.7±49.2(20)273.0±49.7(20)266.1±36.0(20)264.7±41.8(20)5281.1±56.1(20)281.3±60.0(20)274.4±12.6(20)272.4±44.5(20)6286.8±70.5(20)285.3±58.3(20)280.2±47.3(20)278.7±50.4(20)7298.5±71.5(20)297.3±62.2(20)294.5±55.2(20)293.9±55.5(20)8309.4±67.3(20)312.8±71.7(20)309.6±69.8(20)310.4±61.4(20)9312.1±73.5(20)315.2±74.3(20)311.0±70.4(20)315.1±60.4(20)10 321.7±80.4(20)321.8±74.9(20)318.5±72.4(20)320.2±65.1(20)11 319.1±76.2(20)321.5±77.3(20)321.9±79.9(20)321.8±76.7(20)12 334.0±84.7(8) 330.4±84.6(8) 331.0±67.1(8) 330.8±61.9(8)13 336.3±91.9(8) 333.6±85.7(8.)335.0±65.8(8)331.8±65.8(8)四、對外周血常規(guī)的影響用日本NIHON KOHDEN公司產(chǎn)血液學(xué)分析儀測定大鼠的外周血象。服用經(jīng)前安片11周后，與對照相比，各組間的紅、白細(xì)胞數(shù)量和血色素含量都無明顯差異，均在正常范圍之內(nèi)(P＞0.05)，結(jié)果見表3。停藥2周后，各組指標(biāo)與對照組比較亦無明顯差異(P＞0.05)，同樣在正常范圍內(nèi)，結(jié)果見表4。
表3．灌胃經(jīng)前安片11周后對大鼠血象的影響組別 例數(shù) RBC(×1012/L)WBC(×109/L) HB(g/L)對照組 205.23±1.1010.99±2.10169.0±19.7小劑量組204.90±1.2711.06±1.86170.3±22.9中劑量組204.80±1.1111.07±1.80167.9±14.1大劑量組204.50±1.1611.90±1.70166.8±12.7表4．停止灌胃經(jīng)前安片2周后對大鼠血象的影響組別 例數(shù) RBC(×1012/L)WBC(×109/L) HB(g/L)對照組 86.27±0.819.90±1.28 176.6±10.3小劑量組86.15±0.8410.03±1.41172.6±9.9中劑量組86.13±0.9710.83±1.64171.0±7.2大劑量組86.12±0.7410.86±1.92174.1±11.8服用經(jīng)前安片11周后，與對照組相比，各組間的白細(xì)胞分類檢查亦未見異常(P＞0.05)，停藥2周后，各組指標(biāo)與對照組比較亦無明顯差異(P＞0.05)，結(jié)果見表5。
表5．長期灌胃經(jīng)前安片對大鼠各類白細(xì)胞的影響灌胃11周后停藥2周后組別 例數(shù) 淋巴(％) 中性(％) 單核 例數(shù) 淋巴(％) 中性(％) 單核對照組2069.1±6.130.3±5.5 ＜2.0 869.1±6.0 30.9±4.9＜2.0小劑量組 2068.1±5.730.0±6.3 ＜2.0 866.8±7.6 32.6±7.0＜2.0中劑量組 2069.0±6.530.5±6.8 ＜2.0 869.0±7.8 30.0±7.5＜2.0大劑量組 2069.1±6.130.2±6.1 ＜2.0 868.8±6.7 30.5±6.3＜2.0五、對肝功能的影響通過比色法，在olympus650型生化自動分析儀上測定大鼠血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(GOT)、乳酸脫氫酶(LDH)活性，以檢測經(jīng)前安片對肝功能的影響。從表6可見，與對照組比較，灌胃給藥11周后各組的GPT、GOT、LDH活性無明顯變化(P＞0.05)。結(jié)果見表7。
表6．灌胃經(jīng)前安片11周后對大鼠肝功能的影響組別例數(shù)GPT(U/L)GOT(U/L)LDH(U/L)對照組1252.5±10.6176.0±18.7524.8±70.3小劑量組 1252.3±12.1173.9±33.2531.2±93.0中劑量組 1253.8±12.7173.9±33.2551.6±78.6大劑量組 1252.0±12.2158.2±39.4531.0±92.1表7．停止灌胃經(jīng)前安片2周后對大鼠肝功能的影響組別 例數(shù)GPT(U/L)GOT(U/L) LDH(U/L)對照組8 63.6±12.4 174.9±28.8 542.3±91.3小劑量組 8 63.8±6.9177.3±24.4 541.1±66.7中劑量組 8 63.3±19.7 173.5±29.7 547.1±60.9大劑量組 8 62.7±12.2 174.1±22.5 536.0±84.5六、對腎功能的影響通過比色法，在olympus650型生化自動分析儀上測定大鼠血清尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)含量，觀察經(jīng)前安片對大鼠腎功能的影響。灌胃給藥經(jīng)前安片11周的大、中劑量組大鼠BUN含量與對照組比較明顯降低(P＜0.01)，停藥2周后即恢復(fù)到對照組水平，三個劑量組與對照組比較均無顯著差異(P＞0.05)。而灌胃給藥經(jīng)前安片11周的各劑量組Cr含量與對照組比較無明顯區(qū)別(P＞0.05)，停藥2周后亦無顯著差異(P＞0.05)，結(jié)果見表8．表8．長期灌胃經(jīng)前安片對大鼠腎功能的影響B(tài)UN(mg％)Cr(mg％)組別 例數(shù) 灌胃11周后 停藥2周后 例數(shù) 灌胃11周后 停藥2周后對照組12 24.0±3.123.9±2.7 80.61±0.12 0.65±0.08小劑量組 12 22.7±4.224.3±1.4 80.54±0.12 0.66±0.07中劑量組 12 19.4±3.2**24.3±2.4 80.54±0.09 0.68±0.05大劑量組 12 17.3±3.1**24.0±2.4 80.53±0.14 0.66±0.05方差分析與對照組比較，**P＜0.01七、對臟器組織的影響以對給藥11周及停藥2周后大鼠的解剖過程中，肉眼仔細(xì)觀察經(jīng)前安片對大鼠的心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、胸腺、睪丸、子宮、卵巢、胃、腸等臟器組織發(fā)育的影響，均未見異常，各組間無明顯差異。并對以上除胃和腸以外的其它臟器組織進(jìn)行稱重。從表9、表10可見，各劑量組的臟器重量和臟器系數(shù)與對照組比較，均無明顯差異(P＞0.05)。
表9．長期灌胃經(jīng)前安片對大鼠各臟器重量的影響(單位克)大鼠臟器重量(例數(shù))臟器 周數(shù)對照組 小劑量組中劑量組 大劑量組心 111.03±0.20(12) 1.06±0.23(12) 1.06±0.23(12)1.08±0.26(12)131.09±0.21(8)1.12±0.15(8)1.09±0.14(8) 1.06±0.16(8)肝 1110.6±2.9(12)11.6±3.1(12)11.7±3.8(12) 12.2±3.8(12)1312.2±3.5(8) 11.9±3.6(8) 11.2±2.2(8) 11.9±2.6(8)脾 110.53±0.12(12) 0.57±0.12(12) 0.56±0.11(12)0.56±0.15(12)130.61±0.09(8)0.58±0.17(8)0.60±0.12(8) 0.58±0.06(8)肺 111.82±0.19(12) 1.84±0.40(12) 1.94±0.35(12)2.07±0.39(12)132.05±0.44(8)1.92±0.29(8)1.98±0.32(8) 2.11±0.36(8)腎 112.16±0.34(12) 2.26±0.38(12) 2.22±0.41(12)2.34±0.45(12)132.14±0.29(8)2.16±0.38(8)2.18±0.31(8) 2.31±0.39(8)腎上腺 110.10±0.02(12) 0.09±0.02(12) 0.10±0.02(12)0.11±0.02(12)130.09±0.02(8)0.10±0.01(8)0.09±0.01(8) 0.10±0.02(8)胸腺 110.37±0.10(12) 0.35±0.10(12) 0.40±0.12(12)0.39±0.12(12)130.38±0.07(8)0.35±0.08(8)0.41±0.10(8) 0.40±0.09(8)睪丸 113.58±0.27(6)3.61±0.26(6)3.66±0.33(6) 3.65±0.38(6)133.88±0.45(4)3.66±0.42() 3.47±0.26(4) 3.50±0.47(4)子宮 110.81±0.38(6)0.80±0.42(6)0.67±0.34(6) 0.72±0.20(6)130.72±0.24(4)0.69±0.14(4)0.61±0.20(4) 0.77±0.11(4)卵巢 110.16±0.03(6)0.18±0.06(6)0.18±0.06(6) 0.16±0.06(6)130.16±0.02(4)0.18±0.02(4)0.14±0.02(4) 0.17±0.02(4)表10．長期灌胃經(jīng)前安片對大鼠各臟器系數(shù)和影響(單位克/體重，即×10-3)大鼠臟器重量(例數(shù))臟器 周數(shù) 對照組小劑量組 中劑量組 大劑量組心113.35±0.32(12)3.32±0.33(12) 3.30±0.35(12)3.30±0.27(12)133.26±0.51(8) 3.21±0.96(8)3.29±0.32(8) 3.23±0.35(8)肝1133.9±2.0.(12)35.5±3.6(12)35.9±2.1(12) 36.5±2.8(12)1335.8±2.1(8) 35.3±2.1(8) 33.6±1.3(8) 35.6±1.8(8)脾11 1.75±0.28(12) 1.78±0.17(12) 1.76±0.27(12) 1.73±0.35(12)13 1.79±0.25(8)1.80±0.30(8)1.80±0.25(8)1.78±0.27(8)肺11 6.09±1.33(12) 5.78±1.15(12) 6.17±1.26(12) 6.57±1.88(12)13 6.20±1.15(8)5.90±0.95(8)5.99±0.76(8)5.88±1.96(8)腎11 7.11±0.80(12) 7.06±0.74(12) 6.99±0.96(12) 7.23±0.69(12)13 6.51±1.15(8)6.61±0.77(8)6.55±0.55(8)7.05±0.76(8)腎上腺11 0.36±0.12(12) 0.30±0.10(12) 0.34±0.10(12) 0.34±0.13(12)13 0.29±0.11(8)0.30±0.07(8)0.28±0.07(8)0.31±0.10(8)胸腺 11 1.12±0.24(12) 1.14±0.47(12) 1.23±0.24(12) 1.23±0.32(12)13 1.20±0.39(8)1.10±0.32(8)1.25±0.36(8)1.24±0.33(8)睪丸 11 9.42±0.75(6)9.13±0.73(6)8.92±0.49(6)9.00±1.07(6)13 8.94±1.16(4)9.05±0.63(4)8.79±0.21(4)9.01±0.61(4)子宮 11 2.94±0.89(6)3.22±1.89(6)2.71±1.26(6)2.82±0.70(6)13 2.84±0.96(4)2.62±0.47(4)2.21±0.65(4)2.78±0.31(4)卵巢 11 0.65±0.17(6)0.71±0.26(6)0.71±0.20(6)0.65±0.23(6)13 0.62±0.12(4)0.68±0.18(4)0.52±0.08(4)0.60±0.06(4)八、病理形態(tài)學(xué)檢查將給藥11周及停藥2周后大劑量組和對照組大鼠斷頭處死后，肉眼觀察心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、胸腺、十二指腸、胃、睪丸、子宮和卵巢等臟器，二組之間均無明顯區(qū)別。取給藥11周及停藥2周后大劑量組和對照組大鼠的心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、胸腺、卵巢、子宮和十二指腸等臟器，常規(guī)取材固定，H-E染色，制片后進(jìn)行病理組織形態(tài)學(xué)檢查。顯微鏡下所見，所有大鼠不分組別及是否用藥和藥量大小，均無明顯區(qū)別。結(jié)果如下①對大劑量組給藥11周及對照組給水11周后處死動物的心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、胸腺、卵巢、子宮、十二指腸等臟器進(jìn)行組織形態(tài)學(xué)觀察，未發(fā)現(xiàn)明顯的病理性改變，僅個別動物的肺部可見少量炎性細(xì)胞浸潤，與對照組相比無差異性，表明該藥在劑量范圍內(nèi)無毒、副作用。
②對大劑量組停藥2周及對照組停水2周后處死動物的心、肝脾、肺、腎、腎上腺、胸腺、卵巢、子宮、十二指腸等臟器進(jìn)行組織形態(tài)學(xué)觀察，未發(fā)現(xiàn)明顯的病理性改變，說明未出現(xiàn)遲緩性毒性反應(yīng)。
③對照組及大劑量組個別大鼠肺組織出現(xiàn)少量炎細(xì)胞浸潤和輕度瘀血，考慮為動物長期喂藥嗆入肺部所致，與藥物毒性無關(guān)。
對照組和大劑量組各臟器病理顯微照片見圖1～20。
綜上所述病理形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果表明，經(jīng)前安片在給定的劑量范圍內(nèi)使用，對服藥大鼠的心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、胸腺、十二指腸、睪丸、子宮和卵巢等臟器組織均未見毒、副作用。
結(jié)論通過對經(jīng)前安片進(jìn)行長期毒性的實驗觀察，發(fā)現(xiàn)灌胃經(jīng)前安片11周對實驗動物的行為、皮毛、進(jìn)食飲水、大小便、胃腸、體重和有關(guān)臟器的重量、臟器系數(shù)及病理改變均無明顯影響；對血常規(guī)及白細(xì)胞分類無明顯影響；對肝功能無明顯影響；對腎功能的Cr含量無明顯影響，而中、大劑量組大鼠的BUN含量明顯降低。停藥2周后對上述指標(biāo)進(jìn)行可逆性變化觀察，同對照組比較，中、大劑量組大鼠的BUN含量恢復(fù)到正常水平，其它各組間的各項指標(biāo)亦無明顯差異。本實驗大、中、小三個劑量組給藥劑量分別為72.90、36.45和14.58g生藥/kg，相當(dāng)于推薦臨床用量(0.81g生藥/kg)的90、45和18倍，大鼠按大、中、小三個劑量組長期灌胃經(jīng)前安片未見明顯毒副作用，大、中劑量組大鼠灌胃經(jīng)前安片11周后BUN含量明顯降低，但停藥2周后即可恢復(fù)到正常水平。
經(jīng)前安片治療經(jīng)前期綜合癥臨床觀察總結(jié)經(jīng)前安片具有舒肝理氣、活血通絡(luò)之功，用于婦女經(jīng)前期緊張癥由肝郁氣滯所致者，自1997年10月至1998年4月我院使用本藥觀察了60例患者，近期總有效率86.67％，治愈率31.67％，遠(yuǎn)期有效率為78.33％，同時以逍遙丸做對照觀察了30例，近期有效率66.67％，治愈率16.67％，遠(yuǎn)期有效率46.67％，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理，p＜0.05，療效優(yōu)于對照組，且治療中未發(fā)生不良反應(yīng)。
現(xiàn)將臨床驗證結(jié)果報告如下一、一般情況(一)年齡表1．兩組年齡分布情況(歲)18～ 30～ 40～50合計治療組321513 60對照組157 830
經(jīng)Ridit分析，p＞0.05，兩組年齡無顯著性差別。
(二)病程表2．兩組病程比較(年、例)1～ 2～ 3～ 4～4.5合計治療組32216 2 60對照組16103 1 30經(jīng)Ridit分析，p＞0.05，兩組病程無顯著性差別。
(三)癥狀體征表3．兩組患者癥狀體征情況表(例)性情急躁 性情低落乳房脹痛 小腹痛 頭痛浮腫易怒抑郁悲傷治療組5010 54 49 43 7對照組24 6 29 20 19 5經(jīng)X2檢驗，各組癥狀及體征均無顯著性差異(p＞0.05)。
(四)舌脈表4兩組患者舌脈比較表(例)舌質(zhì) 舌苔脈暗 瘀斑 紅 黃白經(jīng)澀 細(xì)治療組509550106092對照組2882264 3022經(jīng)X2檢驗，各組癥狀及體征均無顯著性差異(p＞0.05)。
二、病例選擇(一)診斷標(biāo)準(zhǔn)參照《實用婦產(chǎn)科學(xué)》、《臨床婦科學(xué)》和上海第二醫(yī)科大學(xué)附屬廣慈醫(yī)院關(guān)于經(jīng)前期緊張癥的診斷標(biāo)準(zhǔn)。
1．西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)(1)癥狀經(jīng)前出現(xiàn)情緒激動、急躁易怒或情緒低落，抑郁悲傷，乳房脹痛，小腹痛或頭痛，或有不同程度水腫等。上述癥狀多出現(xiàn)在月經(jīng)前3～14天左右，尤以經(jīng)前2～7天明顯，往往數(shù)種癥狀聯(lián)合出現(xiàn)，具有周期性出現(xiàn)特點。
(2)經(jīng)后癥狀自動消失。
(3)妊娠時不發(fā)生。
2．中醫(yī)辯證標(biāo)準(zhǔn)肝郁氣滯癥經(jīng)前情緒激動、急躁易怒或情緒低落，抑郁悲傷，乳房脹痛，或小腹痛，頭痛，或有不同程度水腫，經(jīng)量或多或少，色暗，舌質(zhì)暗，脈經(jīng)等。
(二)病例入選標(biāo)準(zhǔn)1．符合上述西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)者；2．中醫(yī)辯證標(biāo)準(zhǔn)屬肝郁氣滯癥者；3．年齡在14歲至50歲者。
(三)病例排除標(biāo)準(zhǔn)1．不符合上述診斷標(biāo)準(zhǔn)與病例入選標(biāo)準(zhǔn)者；2．對本藥過敏者；3．合并有心血管、肝、腎和造血系統(tǒng)等原發(fā)疾病、重度糖病患者；4．未按規(guī)定用藥，無法判斷療效或資料不全等影響療效或安全性判斷者。
三、觀察方法(一)本研究采用隨機(jī)對照試驗的方法，臨床設(shè)治療組60例，對照組逍遙丸30例。
(二)給藥方法1．治療組經(jīng)前安片，口服，每次5片，每日2次，于經(jīng)前14天開始服藥，服至月經(jīng)來潮停藥，連用3個月經(jīng)周期，隨訪三個月，判斷療效。
2．對照組逍遙丸，口服，每次6克，每日2次。服用方法與治療組相同。
3．治療組與對照組在用藥治療期間，不得服用其他任何治療經(jīng)前期緊張癥之藥物。
四、觀察指標(biāo)1．安全性觀察(1)一般體檢項目；(2)血、尿、便常規(guī)化驗；(3)心、肝、腎功能檢查；(4)注意觀察不良反應(yīng)，認(rèn)真記錄，并說明處理方法。
2．療效性觀察(1)臨床表現(xiàn)包括癥狀，舌、脈變化；
(2)婦科常規(guī)檢查；(3)測定基礎(chǔ)體溫曲線；(4)經(jīng)前兩周內(nèi)放免法測血清泌乳素。
五、療效判斷標(biāo)準(zhǔn)近期痊愈(1)經(jīng)前癥狀消失；(2)恢復(fù)排卵或血清泌乳素顯著降低。
有效(1)經(jīng)前癥狀有不同程度改善；(2)血清泌乳素有不同程度降低；無效經(jīng)前癥狀及內(nèi)分泌指標(biāo)無變化。
隨訪療程結(jié)束，停藥后判斷療效為近期療效；停藥三個月隨訪判斷療效為遠(yuǎn)期療效。
六、驗證結(jié)果(一)療效總結(jié)1．總療效數(shù)比較(近期療效)表5．兩組總療效比較表(例)合 痊愈 有效 無效 總有效計 例 ％例 ％ 例％ 例 ％治療組 60 19 31.67 33 55.00 8 13.33 52 86.67對照組 30 5 16.67 15 53.33 9 30.00 20 66.67經(jīng)X2檢驗，兩組總療效有顯著性差異(p＜0.05)。
2．主要癥狀療效數(shù)比較(見表6)癥狀各組經(jīng)X2檢驗，治療后情緒激動、急躁易怒、乳房脹痛、小腹痛或頭痛均有顯著性差異，而情緒低落、抑郁悲傷及浮腫治療后兩組對照無顯著性差異。
表6．主要癥狀恢復(fù)情況消失 改善 無效合計 P值例數(shù)(％) 例數(shù)(％)例數(shù)(％)性情激動 治療組 5012(24.00) 33(66.00) 5(10.00)＜0.005急躁易怒 對照組 243(12.50) 9(37.50)12(50.00)情緒低落 治療組 101(10.00) 6(60.00)3(30.00)＞0.05抑郁悲泣 對照組 6 0(0.00)4(66.67)2(33.33)乳房脹痛治療組54 21(38.89) 28(51.85) 5(9.30)＜0.025對照組29 5(17.24) 15(51.72) 9(31.03)小腹痛治療組49 21(42.86) 22(44.90) 6(12.25)＜0.05對照組202(10.00) 15(75.00) 3(15.00)頭痛治療組43 18(41.86) 21(48.84) 4(9.30)＜0.05對照組19 2(10.53) 13(68.42) 4(21.05)浮腫治療組70(0.00) 4(57.14) 3(42.86)＞0.05對照組50(0.00) 3(60.00) 2(40.00)3．治療后舌脈變化。
表7．兩組治療后舌脈變化表(例)療前異常 療后異常 復(fù)常率(％)舌質(zhì) 55 11 80.00治療組舌苔 50 18 64.00脈象 60 30 50.00舌質(zhì) 28 14 50.00對照組舌苔 26 869.23脈象 30 18 40.00經(jīng)X2檢驗，兩組患者治療后舌質(zhì)變化有顯著性差異p＜0.005。治療后舌苔，脈象兩組比較無顯著差異(p＞0.05)。
4．兩組遠(yuǎn)期療效的比較表8 兩組治療后遠(yuǎn)期療效的比較合計 有效 無效例數(shù)(％) 例數(shù)(％)治療組60 47(78.33) 13(21.67)對照組30 14(46.67) 16(53.33)經(jīng)X2檢驗，兩組患者治療后隨訪，遠(yuǎn)期療效有顯著性差異(p＜0.005)。
5．兩組患者治療前后血清泌乳素檢測比較表9．兩組患者治療前后血清泌乳素測值(X±S)合計 治療前 治療后 隨訪前治療組5718.74±14.2314.16±11.7616.88±12.35對照組2919.67±14.2715.20±14.6417.96±14.57經(jīng)t檢驗，兩組治療后血清泌乳素均有下降，具有統(tǒng)計學(xué)意義(p＜0.05)。治療前兩組比較，血清泌乳素?zé)o顯著性差異(p＞0.05)。但治療后兩組比較結(jié)果有顯著性差異(p＜0.05)。但兩組治療后隨訪，在停藥三個月后復(fù)測血清泌乳素其變化無統(tǒng)計學(xué)意義(p＞0.05)。
(二)安全性檢測治療組和對照組所有病例均有治療前后查肝，腎功能，用藥前后測值均正常，治療過程中無明顯不良反應(yīng)發(fā)生，只有一例在服藥過程中出現(xiàn)腹痛，未經(jīng)治療，三天后痛自行緩解。
(三)典型病例陳祥梅，女，19歲，未婚，學(xué)生。
11月28日初診。主訴經(jīng)前小腹脹痛一年，近發(fā)二天?；颊咭荒陙?，每次經(jīng)期前二周出現(xiàn)小腹脹痛，乳痛作脹，情緒波動，急躁易怒，時有頭痛，經(jīng)期前后不定，經(jīng)色暗紅，有小雪塊，量中等，經(jīng)后腹脹頭痛，諸癥好轉(zhuǎn)，大便正常，小便微黃，舌質(zhì)暗，苔薄黃，脈弦。
婦科檢查外陰已婚式，宮頸I°糜爛，雙側(cè)附件壓痛(±)。
實驗室檢查血清泌乳素(放免法)32mg/ml，血，尿，糞常規(guī)及肝，腎功能均正常。
心電圖竇性心率。
基礎(chǔ)體溫曲線雙相曲線。
診斷西醫(yī)經(jīng)前期緊張癥。中醫(yī)月經(jīng)前后諸癥(肝郁氣滯癥)。
治療經(jīng)過經(jīng)前安片5片，每日二次。連服12天，月經(jīng)來潮停藥，第二個月經(jīng)期前二周，微感小腹部疼痛，乳脹頭痛及易于急躁之癥均消失，復(fù)查血清泌乳素19mg/ml。再服經(jīng)前安片5片，每日二次。連服14天，月經(jīng)來潮停藥，等第三個月經(jīng)周期前二周諸癥悉除，舌脈恢復(fù)正常，繼續(xù)服藥(同上)，復(fù)查血清泌乳素10.02mg/ml，停藥2個月經(jīng)周期后，小腹疼痛諸癥均未出現(xiàn)。復(fù)查血清泌乳素9.8mg/ml。血，尿，糞常規(guī)及肝，腎功能均在正常范圍。基礎(chǔ)體溫曲線為雙相曲線。
七、小結(jié)經(jīng)前安片由柴胡、枳殼、合歡皮、郁金、香附、橘核、路路通、青皮、當(dāng)歸、白芍、川芎、茯苓、大腹皮、甘草等14味藥組成，具有疏肝理氣，活血通絡(luò)之功，治療經(jīng)前期緊張癥有較好的療效。
1．臨床實驗資料表明經(jīng)前安片治療經(jīng)前期緊張癥近期總有效率86.67％，治愈率31.67％，對照組逍遙丸近期總有效率66.67％，治愈率16.67％，兩組療效有顯著性差異，經(jīng)前安片療效明顯優(yōu)于逍遙丸。
2．治療后主要癥狀如性情急躁易怒，乳房脹痛，小腹痛，頭痛的有效率經(jīng)前安片優(yōu)于逍遙丸。
3．隨訪遠(yuǎn)期療效，經(jīng)前安片治療組有效率78.33％，對照組46.67％，治療組明顯優(yōu)于對照組。
4．兩組治療后血清泌乳素均有明顯下降(p＜0.05)，但經(jīng)前安片治療組下降幅度明顯大于對照組，但隨訪后血清泌乳素值兩組比較無統(tǒng)計學(xué)意義。
5．兩組病人均未出現(xiàn)明顯的不良反應(yīng)，說明經(jīng)前安片服用安全。
本發(fā)明具有舒肝理氣、活血通絡(luò)之功效，為治療行經(jīng)婦女經(jīng)前期緊張癥的理想藥物，且價格適宜，易服用。
權(quán)利要求
1．一種治療經(jīng)前期緊張的藥物，其特征在于它的組成成分及各成分的組份為柴胡 8～12 枳殼 8～12 合歡皮 6～10 郁金 6～10香附 6～10 青皮 4～8 路路通 4～8 橘核 4～8當(dāng)歸 6～10 白芍 6～10 川芎 4～8 茯苓 4～8大腹皮 4～8 甘草 2～全文摘要
本發(fā)明涉及一種治療經(jīng)前期緊張癥的藥物。它由柴胡、枳殼、合歡皮、郁金、香附、青皮、路路通、橘核、當(dāng)歸、白芍、川芎、茯苓、大腹皮、甘草十四味中藥按一定比例組成。本發(fā)明具有舒肝理氣、活血通絡(luò)之功效,為治療行經(jīng)婦女經(jīng)前期緊張癥的理想藥物。
文檔編號A61P43/00GK1220163SQ9812221
公開日1999年6月23日 申請日期1998年11月12日 優(yōu)先權(quán)日1998年11月12日
發(fā)明者梁峰, 田福生 申請人:東莞市亞洲制藥有限公司