專利名稱：一種替尼泊苷磷脂復合物的脂質(zhì)體制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種替尼泊苷磷脂復合物脂質(zhì)體制劑及 其制備方法。
背景技術(shù)：
替尼泊苷(Teniposide，Vumon， VM-26)別名替尼泊甙，威猛，維埃坶 26，足葉毒硫花亞甲基葡萄糖苷，邦萊，鬼臼噻吩甙，鬼臼噻吩苷，鬼臼甲 叉苷。替尼泊苷，是從三尖杉屬植物提出有抗癌作用的生物酯堿，能抑制真 核細胞蛋白質(zhì)的合成，使多聚核糖體解聚，干擾蛋白核糖體功能。替尼泊苷 屬于周期特異性細胞毒藥物，作用于細胞周期S2后期和G2期，通過阻止細 胞的有絲分裂而起作用。它也可引起DNA鍵的單股性和雙股性斷裂，其作用 機理可能是抑制II型拓撲異構(gòu)酶所致。替尼泊苷療效顯著，臨床資料表明替 尼泊苷副作用少，毒性較小，對肝腎功能無明顯影響。由于替尼泊苷具有較 廣譜的抗腫瘤活性，臨床上通常與其它抗癌藥物聯(lián)合應用主要用于惡性淋 巴瘤、霍奇金氏病、急性淋巴細胞性白血病、膠質(zhì)母細胞瘤、空管膜瘤、星 形細胞瘤、膀胱癌、神經(jīng)母細胞瘤和兒童的其他實體瘤。也用于治療小細胞 肺癌、卵巢癌、乳腺癌、多發(fā)性骨髓瘤、非小細胞肺癌等；更因其中性親脂 特性，能通過血腦屏障，目前已成為臨床治療腦瘤的首選化療藥物之一。市售制劑在臨床使用過程中存在的問題主要是處方中含有大量的表面活 性劑聚氧乙烯蓖麻油(CremophorEL)而引起的嚴重過敏反應。為此，醫(yī)生在 醫(yī)囑前必須了解病人的過敏史，如是否對替尼泊苷或者蓖麻油等過敏；在臨 床使用時，醫(yī)務人員需密切觀察病人的情況，必要時使用抗組胺藥物以減輕 Crem叩horEL造成的嚴重過敏反應。同時，苯甲醇作為輔料的不良反應有靜脈 注射毒性，小白鼠靜脈注射LDs。為0.32g/kg。此夕卜，N， N-二甲基乙酰胺有一 定的毒性，具有溶血作用，小白鼠腹腔注射LD5。為3.236g/kg。結(jié)果是臨床上 應用起來非常不方便，給病人帶來很大的痛苦。近年來許多國外文獻報道，將天然活性成分與磷脂在一定條件下進行復 合，得到天然活性成分磷脂復合物(phytosomes)，其理化性質(zhì)和生物特性較原化合物均有不同程度的改變，具有較強的親脂性。關(guān)于天然活性成分磷 脂復合物的研究，有水溶性及脂溶性均不佳的水飛薊素、銀杏、奧沙普秦、 葛根素、淫羊霍黃酮、黃芩苷磷脂復合物等(凌沛學等，藥物與磷脂復合物研究近況，中國藥學雜志，2005 ， 40 ( 6 ) : 401 -402 )。這不僅改善了 替尼泊苷的親水和/或親脂性，也為進一步提高其脂質(zhì)體制劑的包封率，穩(wěn)定 性提供了思路。脂質(zhì)體(liposome)是一種新型遞藥系統(tǒng)，目前實驗表明，替尼泊苷脂 質(zhì)體注射劑與普通注射劑相比，療效相似，但毒性降低，耐受性提高。傳統(tǒng) 脂質(zhì)體的粒徑比較大(平均粒徑都在lym以上)，包封率以及穩(wěn)定性都比較 差。由于粒徑大，所以容易產(chǎn)生融合，滲漏，顯著降低了藥物穩(wěn)定性，而且 由于大粒徑脂質(zhì)體容易被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)(RES)的吞噬細胞所吞噬，從而被清 除出血液循環(huán)系統(tǒng)，因此減少了藥物在腫瘤組織中的藥物濃度，從而降低了 臨床療效。1998年起，美國FDA相繼批準了4個脂質(zhì)體制劑上市，這些脂質(zhì) 體的粒徑都小于100nm，而且包封率都達到了 90%以上，使藥物穩(wěn)定性大大提 高，不易發(fā)生融合與滲漏。由于粒徑在100nm以下可以避過網(wǎng)狀內(nèi)皮吞噬系 統(tǒng)的吞噬，以提高藥物在腫瘤組織中的藥物濃度，從而提高了臨床療效。經(jīng)文獻檢索，目前尚未見有關(guān)利用制備替尼泊苷磷脂復合物以提高替尼 泊苷脂質(zhì)體制劑包封率的報道。鑒于上述特性，為使替尼泊苷更好地發(fā)揮臨床療效，提高替尼泊苷的穩(wěn) 定性，我們研究和開發(fā)新劑型，以新劑型的高效、低毒的優(yōu)勢充分發(fā)揮替尼 泊苷抗腫瘤活性并降低毒副作用。這無疑對進一步促進和推廣替尼泊苷在臨 床中的應用具有重要意義。發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種新的替尼泊苷磷脂復 合物脂質(zhì)體制劑及其制備方法，不僅改善替尼泊苷現(xiàn)有制劑毒性、過敏性方 面的缺陷；同時改善替尼泊苷的親水和/或親脂性，提高其脂質(zhì)體制劑的包封 率和穩(wěn)定性。本發(fā)明提供一種替尼泊苷磷脂復合物脂質(zhì)體制劑，包括下述重量百分比 配比的組分替尼泊苷磷脂復合物O. 1 10%，磷脂0 80%，膽固醇0 50%;其中的替尼泊苷磷脂復合物由替尼泊苷和磷脂復合而成，磷脂和替尼泊苷的摩爾比為1~3:1。優(yōu)選的， 一種替尼泊苷磷脂復合物脂質(zhì)體制劑，包括下述重量百分比配比的組分替尼泊苷磷脂復合物0. 1 10%，磷脂0. 5 80%，膽固醇0. 1 50%。 所述磷脂來源于天然磷脂和合成磷脂。天然磷脂包括蛋黃卵磷脂、大豆卵磷脂；合成磷脂包括但不局限于二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰膽堿、二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿等。上述的替尼泊苷磷脂復合物脂質(zhì)體制劑是凍干制劑，復溶后其脂質(zhì)體平均粒徑《400nm，所述凍干保護劑為海藻糖、甘露醇、葡萄糖、絲胺酸或蔗糖的一種或多種組合。本發(fā)明還提供了上述替尼泊苷磷脂復合物脂質(zhì)體制劑的制備方法，該方法依次包括以下步驟-A、 替尼泊苷磷脂復合物的制備 按照處方量稱取替尼泊苷和磷脂，將其加到有機溶劑中，30 6(TC加熱回流反應30 180分鐘，至溶液澄清透明。其中，磷脂和替尼泊苷的摩爾比為1 3:1。所述磷脂來源于天然磷脂和合成磷脂。天然磷脂包括蛋黃卵磷脂、大豆 卵磷脂；合成磷脂包括但不局限于二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰膽 堿、二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿等。所述有機溶劑選自乙酸乙酯、四氫呋喃、二氯甲烷、三氯甲烷、正己烷、 環(huán)己烷、甲醇、乙醇、異丙醇、正丁醇、丙酮等。B、 將步驟A中所得溶液轉(zhuǎn)移到茄型瓶中，30 6(TC減壓蒸發(fā)，除去有機 溶劑，并置于真空干燥機中干燥1 5小時，即得替尼泊苷磷脂復合物粉末。C、 將步驟B所制得的替尼泊苷磷脂復合物粉末與磷脂、膽固醇，按照重 量百分比為替尼泊苷磷脂復合物O. 1 10%，磷脂0 80%，膽固醇0 50%的配 比，置于玻璃容器中，并加入有機溶劑，在氮氣保護下，20 60°C水浴加熱 攪拌，使溶液澄清透明，所得溶液轉(zhuǎn)移到茄型瓶中，減壓蒸發(fā)，除去有機溶 劑，在茄型瓶壁上形成一透明薄膜，加入pH為4 10的緩沖液，進行充分水 化，即得初步脂質(zhì)體。D、 按常規(guī)藥劑學方法制得制劑。所述磷脂來源于天然磷脂和合成磷脂。天然磷脂包括蛋黃卵磷脂、大豆 卵磷脂；合成磷脂包括但不局限于二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰膽堿、二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿等。所述膽固醇為制劑中的穩(wěn)定劑。所述有機溶劑選自乙酸乙酯、四氫呋喃、二氯甲烷、三氯甲烷、正己烷、 環(huán)己烷、甲醇、乙醇、異丙醇、正丁醇、丙酮等。所述緩沖液為磷酸鹽緩沖液、蒸餾水、生理鹽水或5%葡萄糖注射液。 上述替尼泊苷磷脂復合物脂質(zhì)體凍干制劑的制備方法，步驟D具體為 在步驟C中制得的初步脂質(zhì)體中加入重量百分比為1 20%的凍干保護劑，并 使其充分溶解，使用水浴超聲或探頭超聲或高壓均質(zhì)降低脂質(zhì)體的平均粒徑，使制得的脂質(zhì)體平均粒徑《400皿，隨后分裝，凍干，即得替尼泊苷脂質(zhì)體凍干制劑。其中所述凍干保護劑為海藻糖、甘露醇、葡萄糖、絲胺酸或蔗糖一種或 多種組合。所述水浴超聲是指脂質(zhì)體混懸液在水浴中不間斷超聲5 120mins。探頭 超聲是指在100w 500w范圍內(nèi)超聲10 180s。高壓均質(zhì)是指在壓力為5000 20000PSI條件下，用高壓均質(zhì)機對脂質(zhì)體進行均質(zhì)，循環(huán)1 10次。由于磷脂中磷原子上羥基中的氧原子有較強的得電子的傾向，而磷脂酰 膽堿基團中氮原子有較強的失電子的傾向，因此在一定條件下，可與一定結(jié) 構(gòu)的藥物生成復合物。本發(fā)明的替尼泊苷制劑利用這一原理首先將替尼泊苷 制備成磷脂復合物，然后制備成脂質(zhì)體制劑。具有以下有益效果1. 提高了替尼泊苷的溶解度，按照本發(fā)明制備方法所得替尼泊苷磷脂復合物 和替尼泊苷原料藥在常見的幾種油相、乳化劑、助乳化劑中溶解度進行比較， 發(fā)現(xiàn)溶解度得到明顯提高。2. 提高了藥物的親脂性，使得其脂質(zhì)體制劑的包封率和穩(wěn)定性都得到了明顯提咼°3. 與市售制劑相比較，以脂質(zhì)體制劑中無毒副作用的輔料磷脂、膽固醇等替 代了原有制劑中的聚氧乙烯蓖麻油，大大改善了替尼泊苷現(xiàn)有制劑毒性，過 敏性方面的缺陷。本發(fā)明的目的是為克服背景技術(shù)的不足，提供一種不含有聚氧乙烯蓖麻 油的替尼泊苷脂質(zhì)體制劑的制備方法。該方法制得的替尼泊苷脂質(zhì)體具有毒 性小，穩(wěn)定性高，包封率>85%，包封率的測定采用S印hadex G-50微柱離心 分離脂質(zhì)體與游離藥物，再用HPLC法測定替尼泊苷磷脂復合物脂質(zhì)體中藥物包封率(劉利萍等，微柱凝膠離心分離-HPLC法測定克霉唑脂質(zhì)體的包封率，藥物分析雜志，2007, 27 (11) :1812-1815)。證實本發(fā)明制得的替尼泊苷 脂質(zhì)體制劑將是一種新型的藥物緩釋靶向制劑。
具體實施方式
下面通過具體實施例進一步詳細說明本發(fā)明，該實施例僅用于說明本發(fā) 明而非對本發(fā)明的限制。 實施例l稱取替尼泊苷6.56g，大豆卵磷脂7.5g，加入四氫呋喃中，在3(TC下，加 熱回流反應30分鐘，至溶液澄清，以旋轉(zhuǎn)薄膜揮發(fā)溶劑法將四氫呋喃揮發(fā)除 去，得淺黃色結(jié)晶狀替尼泊苷磷脂復合物。取替尼泊苷磷脂復合物5.0 g、大 豆卵磷脂10g、膽固醇5g，加入氯仿中，在4(TC下，以旋轉(zhuǎn)薄膜揮發(fā)溶劑法 將氯仿?lián)]發(fā)除去，加入PBS (pH7.4)緩沖液充分水化，隨后加入蔗糖50g， 使之充分溶解，所得脂質(zhì)體混懸液進高壓均質(zhì)，隨后分裝，凍干，即得替尼 泊苷脂質(zhì)體凍干制劑。 實施例2稱取替尼泊苷65.6g，大豆卵磷脂75g，加入丙酮中，在4(TC下，加熱回 流反應60分鐘，至溶液澄清，以旋轉(zhuǎn)薄膜揮發(fā)溶劑法將丙酮揮發(fā)除去，得淺 黃色結(jié)晶狀替尼泊苷磷脂復合物。取替尼泊苷磷脂復合物50 g、大豆卵磷脂 100g、膽固醇50g，加入氯仿中，在4(TC下，以旋轉(zhuǎn)薄膜揮發(fā)溶劑法將氯仿 揮發(fā)除去，加入PBS (pH7.4)緩沖液充分水化，隨后加入海藻糖750g，使之 充分溶解，所得脂質(zhì)體混懸液進高壓均質(zhì)，隨后分裝，凍干，即得替尼泊苷脂質(zhì)體凍干制劑。 實施例3稱取替尼泊苷131.2g， 二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿150g，加入四氫呋喃中， 在5(TC下，加熱回流反應120分鐘，至溶液澄清，以旋轉(zhuǎn)薄膜揮發(fā)溶劑法將 四氫呋喃揮發(fā)除去，得淺黃色結(jié)晶狀替尼泊苷磷脂復合物。取替尼泊苷磷脂 復合物100g、大豆卵磷脂200g、膽固醇100g，加入氯仿中，在40。C下，以 旋轉(zhuǎn)薄膜揮發(fā)溶劑法將氯仿?lián)]發(fā)除去，加入PBS (pH6.8)緩沖液充分水化， 隨后加入海藻糖1500g，使之充分溶解，所得脂質(zhì)體混懸液進高壓均質(zhì)，隨后 分裝，凍干，即得替尼泊苷脂質(zhì)體凍干制劑。稱取替尼泊苷196.8g，蛋黃卵磷脂225g，加入三氯甲烷中，在60。C下， 加熱回流反應150分鐘，至溶液澄清，以旋轉(zhuǎn)薄膜揮發(fā)溶劑法將三氯甲烷揮 發(fā)除去，得淺黃色結(jié)晶狀替尼泊苷磷脂復合物。取替尼泊苷磷脂復合物200 g、 大豆卵磷脂400g、膽固醇200g，加入氯仿中，在40'C下，以旋轉(zhuǎn)薄膜揮發(fā)溶 劑法將氯仿?lián)]發(fā)除去，加入PBS (pH5)緩沖液充分水化，隨后加入海藻糖 3000g，使之充分溶解，所得脂質(zhì)體混懸液進高壓均質(zhì)，隨后分裝，凍干，即 得替尼泊苷脂質(zhì)體凍干制劑。稱取替尼泊苷328g，大豆卵磷脂375g，加入三氯甲烷中，在6(TC下，加 熱回流反應1'80分鐘，至溶液澄清，以旋轉(zhuǎn)薄膜揮發(fā)溶劑法將三氯甲垸揮發(fā) 除去，得淺黃色結(jié)晶狀替尼泊苷磷脂復合物。取替尼泊苷磷脂復合物300g、 大豆卵磷脂600g、膽固醇300g，加入氯仿中，在40。C下，以旋轉(zhuǎn)薄膜揮發(fā)溶 劑法將氯仿?lián)]發(fā)除去，加入PBS(pH8)緩沖液充分水化，隨后加入蔗糖4500g， 使之充分溶解，所得脂質(zhì)體混懸液進高壓均質(zhì)，隨后分裝，凍干，即得替尼 泊苷脂質(zhì)體凍干制劑。稱取替尼泊苷393.6g，蛋黃卵磷脂450g，加入三氯甲垸中，在30。C下， 加熱回流反應150分鐘，至溶液澄清，以旋轉(zhuǎn)薄膜揮發(fā)溶劑法將三氯甲烷揮 發(fā)除去，得淺黃色結(jié)晶狀替尼泊苷磷脂復合物。取替尼泊苷il脂復合物400 g、 大豆卵磷脂800g、膽固醇400g，加入氯仿中，在4(TC下，以旋轉(zhuǎn)薄膜揮發(fā)溶 劑法將氯仿?lián)]發(fā)除去，加入氯化鈉注射液充分水化，隨后加入蔗糖6000g，使 之充分溶解，所得脂質(zhì)體混懸液進高壓均質(zhì)，隨后分裝，凍干，即得替尼泊 苷脂質(zhì)體凍干制劑。 實施例7稱取替尼泊苷524.8g，大豆卵磷脂600g，加入四氫呋喃中，在4(TC下， 加熱回流反應120分鐘，至溶液澄清，以旋轉(zhuǎn)薄膜揮發(fā)溶劑法將四氫呋喃揮 發(fā)除去，得淺黃色結(jié)晶狀替尼泊苷磷脂復合物。取替尼泊苷磷脂復合物500g、 大豆卵磷脂1000g、膽固醇500g，加入氯仿中，在40。C下，以旋轉(zhuǎn)薄膜揮發(fā) 溶劑法將氯仿?lián)]發(fā)除去，加入5%葡萄糖注射液充分水化，隨后加入甘露醇 7500g，使之充分溶解，所得脂質(zhì)體混懸液進高壓均質(zhì)，隨后分裝，凍干，即得替尼泊苷脂質(zhì)體凍干制劑。稱取替尼泊苷656g，大豆卵磷脂750g，加入三氯甲烷中，在30。C下，加 熱回流反應180分鐘，至溶液澄清，以旋轉(zhuǎn)薄膜揮發(fā)溶劑法將三氯甲烷揮發(fā) 除去，得淺黃色結(jié)晶狀替尼泊苷磷脂復合物。取替尼泊苷磷脂復合物600g、 大豆卵磷脂1200g、膽固醇600g，加入氯仿中，在4(TC下，以旋轉(zhuǎn)薄膜揮發(fā) 溶劑法將氯仿?lián)]發(fā)除去，加入PBS (pH7.4)緩沖液充分水化，隨后加入蔗糖 9000g，使之充分溶解，所得脂質(zhì)體混懸液進高壓均質(zhì)，隨后分裝，凍干，即 得替尼泊苷脂質(zhì)體凍干制劑。稱取替尼泊苷lg，大豆卵磷脂1.37g，加入三氯甲烷中，在4(TC下，加 熱回流反應150分鐘，至溶液澄清，以旋轉(zhuǎn)薄膜揮發(fā)溶劑法將三氯甲烷揮發(fā) 除去，得淺黃色結(jié)晶狀替尼泊苷磷脂復合物。取替尼泊苷磷脂復合物1 g、大 豆卵磷脂4g、膽固醇lg，加入氯仿中，在4(TC下，以旋轉(zhuǎn)薄膜揮發(fā)溶劑法將 氯仿?lián)]發(fā)除去，加入PBS (pH7.4)緩沖液充分水化，隨后加入甘露醇10g， 使之充分溶解，所得脂質(zhì)體混懸液進高壓均質(zhì)，隨后分裝，凍干，即得替尼 泊苷脂質(zhì)體凍干制劑。 實施例10稱取替尼泊苷10g，大豆卵磷脂13.7g，加入四氫呋喃中，在30。C下，加 熱回流反應120分鐘，至溶液澄清，以旋轉(zhuǎn)薄膜揮發(fā)溶劑法將四氫呋喃揮發(fā) 除去，得淺黃色結(jié)晶狀替尼泊苷磷脂復合物。取替尼泊苷磷脂復合物10g、大 豆卵磷脂40g、膽固醇10g，加入氯仿中，在40。C下，以旋轉(zhuǎn)薄膜揮發(fā)溶劑法 將氯仿?lián)]發(fā)除去，加入PBS (pH7.4)緩沖液充分水化，隨后加入蔗糖100g， 使之充分溶解，所得脂質(zhì)體混懸液進高壓均質(zhì)，隨后分裝，凍干，即得替尼 泊苷脂質(zhì)體凍干制劑。 實施例11稱取替尼泊苷50g，大豆卵磷脂68.5g，加入四氫呋喃中，在5(TC下，加 熱回流反應90分鐘，至溶液澄清，以旋轉(zhuǎn)薄膜揮發(fā)溶劑法將四氫呋喃揮發(fā)除 去，得淺黃色結(jié)晶狀替尼泊苷磷脂復合物。取替尼泊苷磷脂復合物50g、大豆 卵磷脂200g、膽固醇60g，加入氯仿中，在4(TC下，以旋轉(zhuǎn)薄膜揮發(fā)溶劑法 將氯仿?lián)]發(fā)除去，加入PBS (pH6.8)緩沖液充分水化，隨后加入蔗糖600g，使之充分溶解，所得脂質(zhì)體混懸液進高壓均質(zhì)，隨后分裝，凍千，即得替尼 泊苷脂質(zhì)體凍千制劑。實施例12稱取替尼泊苷100g，大豆卵磷脂137g，加入四氫呋喃中，在60。C下，加 熱回流反應45分鐘，至溶液澄清，以旋轉(zhuǎn)薄膜揮發(fā)溶劑法將四氫呋喃揮發(fā)除 去，得淺黃色結(jié)晶狀替尼泊苷磷脂復合物。取替尼泊苷磷脂復合物100g、大 豆卵磷脂300g、膽固醇150g，加入氯仿中，在4(TC下，以旋轉(zhuǎn)薄膜揮發(fā)溶劑 法將氯仿?lián)]發(fā)除去，加入PBS(pH7.4)緩沖液充分水化，隨后加入蔗糖1000g， 使之充分溶解，所得脂質(zhì)體混懸液進高壓均質(zhì)，隨后分裝，凍干，即得替尼 泊苷脂質(zhì)體凍干制劑。 實施例13稱取替尼泊苷300g，大豆卵磷脂411g，加入四氫呋喃中，在5(TC下，加 熱回流反應180分鐘，至溶液澄清，以旋轉(zhuǎn)薄膜揮發(fā)溶劑法將四氫呋喃揮發(fā) 除去，得淺黃色結(jié)晶狀替尼泊苷磷脂復合物。取替尼泊苷磷脂復合物300g、 大豆卵磷脂900g、膽固醇300g，加入氯仿中，在40。C下，以旋轉(zhuǎn)薄膜揮發(fā)溶 劑法將氯仿?lián)]發(fā)除去，加入PBS (pH6.8)緩沖液充分水化，隨后加入蔗糖 3000g，使之充分溶解，所得脂質(zhì)體混懸液進高壓均質(zhì)，隨后分裝，凍干，即 得替尼泊苷脂質(zhì)體凍干制劑。 實施例14稱取替尼泊苷400g， 二硬脂酰磷脂酰膽堿548g，加入四氫呋喃中，在40°C 下，加熱回流反應1200分鐘，至溶液澄清，以旋轉(zhuǎn)薄膜揮發(fā)溶劑法將四氫呋 喃揮發(fā)除去，得淺黃色結(jié)晶狀替尼泊苷磷脂復合物。取替尼泊苷磷脂復合物 400g、大豆卵磷脂1000g、膽固醇200g，加入氯仿中，在4(TC下，以旋轉(zhuǎn)薄 膜揮發(fā)溶劑法將氯仿?lián)]發(fā)除去，加入PBS (pH6.8)緩沖液充分水化，隨后加 入蔗糖4000g，使之充分溶解，所得脂質(zhì)體混懸液進高壓均質(zhì)，隨后分裝，凍 干，即得替尼泊苷脂質(zhì)體凍干制劑。 實施例15稱取替尼泊苷500g，大豆卵磷脂685g，加入四氫呋喃中，在40。C下，加 熱回流反應90分鐘，至溶液澄清，以旋轉(zhuǎn)薄膜揮發(fā)溶劑法將四氫呋喃揮發(fā)除 去，得淺黃色結(jié)晶狀替尼泊苷磷脂復合物。取替尼泊苷磷脂復合物500g、大 豆卵磷脂750g、膽固醇300g，加入氯仿中，在4(TC下，以旋轉(zhuǎn)薄膜揮發(fā)溶劑法將氯仿?lián)]發(fā)除去，加入PBS(pH6.8)緩沖液充分水化，隨后加入蔗糖5000g， 使之充分溶解，所得脂質(zhì)體混懸液進高壓均質(zhì)，隨后分裝，凍干，即得替尼 泊苷脂質(zhì)體凍干制劑。 實施例16稱取替尼泊苷656g， 二硬脂酰磷脂酰膽堿899g，加入四氫呋喃中，在50°C 下，加熱回流反應90分鐘，至溶液澄清，以旋轉(zhuǎn)薄膜揮發(fā)溶劑法將四氫呋喃 揮發(fā)除去，得淺黃色結(jié)晶狀替尼泊苷磷脂復合物。取替尼泊苷磷脂復合物 600g、大豆卵磷脂600g、膽固醇300g，加入氯仿中，在40。C下，以旋轉(zhuǎn)薄膜 揮發(fā)溶劑法將氯仿?lián)]發(fā)除去，加入PBS (pH7.4)緩沖液充分水化，隨后加入 蔗糖6000g，使之充分溶解，所得脂質(zhì)體混懸液進高壓均質(zhì)，隨后分裝，凍干， 即得替尼泊苷脂質(zhì)體凍干制劑。 實施例17稱取替尼泊苷lg，大豆卵磷脂2.29g，加入四氫呋喃中，在30(TC下，加 熱回流反應90分鐘，至溶液澄清，以旋轉(zhuǎn)薄膜揮發(fā)溶劑法將四氫呋喃揮發(fā)除 去，得淺黃色結(jié)晶狀替尼泊苷磷脂復合物。取替尼泊苷磷脂復合物lg、大豆 卵磷脂4g、膽固醇2g，加入氯仿中，在4(TC下，以旋轉(zhuǎn)薄膜揮發(fā)溶劑法將氯 仿?lián)]發(fā)除去，加入PBS (pH6.8)緩沖液充分水化，隨后加入蔗糖6g，使之充 分溶解，所得脂質(zhì)體混懸液進高壓均質(zhì)，隨后分裝，凍干，即得替尼泊苷脂質(zhì)體凍干制劑。 實施例18稱取替尼泊苷10g， 二棕櫚酰磷脂酰膽堿22.9g，加入四氫呋喃中，在40°C 下，加熱回流反應150分鐘，至溶液澄清，以旋轉(zhuǎn)薄膜揮發(fā)溶劑法將四氫呋 喃揮發(fā)除去，得淺黃色結(jié)晶狀替尼泊苷磷脂復合物。取替尼泊苷磷脂復合物 10g、大豆卵磷脂40g、膽固醇20g，加入氯仿中，在4(TC下，以旋轉(zhuǎn)薄膜揮 發(fā)溶劑法將氯仿?lián)]發(fā)除去，加入PBS (pH6.8)緩沖液充分水化，隨后加入蔗 糖60g，使之充分溶解，所得脂質(zhì)體混懸液進高壓均質(zhì)，隨后分裝，凍干，即 得替尼泊苷脂質(zhì)體凍干制劑。 實施例19稱取替尼泊苷100g，大豆卵磷脂229g，加入四氫呋喃中，在4(TC下，加 熱回流反應150分鐘，至溶液澄清，以旋轉(zhuǎn)薄膜揮發(fā)溶劑法將四氫呋喃揮發(fā) 除去，得淺黃色結(jié)晶狀替尼泊苷磷脂復合物。取替尼泊苷磷脂復合物100g、大豆卵磷脂200g、膽固醇50g，加入氯仿中，在40。C下，以旋轉(zhuǎn)薄膜揮發(fā)溶 劑法將氯仿?lián)]發(fā)除去，加入PBS (pH7.4)緩沖液充分水化，隨后加入葡萄糖 600g，使之充分溶解，所得脂質(zhì)體混懸液進高壓均質(zhì)，隨后分裝，凍干，即 得替尼泊苷脂質(zhì)體凍干制劑。 實施例20稱取替尼泊苷300g，大豆卵磷脂687g，加入四氫呋喃中，在40。C下，加 熱回流反危150分鐘，至溶液澄清，以旋轉(zhuǎn)薄膜揮發(fā)溶劑法將四氫呋喃揮發(fā) 除去，得淺黃色結(jié)晶狀替尼泊苷磷脂復合物。取替尼泊苷磷脂復合物300g、 大豆卵磷脂600g、膽固醇200g，加入氯仿中，在4(TC下，以旋轉(zhuǎn)薄膜揮發(fā)溶 劑法將氯仿?lián)]發(fā)除去，加入PBS (pH7.4)緩沖液充分水化，隨后加入蔗糖 1800g，使之充分溶解，所得脂質(zhì)體混懸液進高壓均質(zhì)，隨后分裝，凍干，即 得替尼泊苷脂質(zhì)體凍干制劑。 實施例21稱取替尼泊苷lg，大豆卵磷脂1.37g，加入四氫呋喃中，在40。C下，加 熱回流反應150分鐘，至溶液澄清，以旋轉(zhuǎn)薄膜揮發(fā)溶劑法將四氫呋喃揮發(fā) 除去，得淺黃色結(jié)晶狀替尼泊苷磷脂復合物。取替尼泊苷磷脂復合物0.1185g、 大豆卵磷脂0.2g、膽固醇0.025g，加入氯仿中，在40。C下，以旋轉(zhuǎn)薄膜揮發(fā) 溶劑法將氯仿?lián)]發(fā)除去，加入PBS (pH7.4)緩沖液充分水化，隨后加入葡萄 糖lg，使之充分溶解，所得脂質(zhì)體混懸液進高壓均質(zhì)，隨后分裝，凍干，即 得替尼泊苷脂質(zhì)體凍干制劑。 實施例22稱取替尼泊苷lg， 二棕櫚酰磷脂酰膽堿3.43g，加入四氫呋喃中，在4(TC 下，加熱回流反應150分鐘，至溶液澄清，以旋轉(zhuǎn)薄膜揮發(fā)溶劑法將四氫呋 喃揮發(fā)除去，得淺黃色結(jié)晶狀替尼泊苷磷脂復合物。取替尼泊苷磷脂復合物 lg、大豆卵磷脂2g、膽固醇lg，加入氯仿中，在4(TC下，以旋轉(zhuǎn)薄膜揮發(fā)溶 劑法將氯仿?lián)]發(fā)除去，加入PBS(pH7.4)緩沖液充分水化，隨后加入蔗糖5g， 使之充分溶解，所得脂質(zhì)體混懸液進高壓均質(zhì)，隨后分裝，凍干，即得替尼 泊苷脂質(zhì)體凍干制劑。 實施例23稱取替尼泊苷10g，大豆卵磷脂34.3g，加入四氫呋喃中，在4(TC下，加 熱回流反應150分鐘，至溶液澄清，以旋轉(zhuǎn)薄膜揮發(fā)溶劑法將四氫呋喃揮發(fā)13除去，得淺黃色結(jié)晶狀替尼泊苷磷脂復合物。取替尼泊苷磷脂復合物10g、大
豆卵磷脂30g、膽固醇10g，加入氯仿中，在40。C下，以旋轉(zhuǎn)薄膜揮發(fā)溶劑法 將氯仿?lián)]發(fā)除去，加入PBS (pH7.4)緩沖液充分水化，隨后加入蔗糖50g， 使之充分溶解，所得脂質(zhì)體混懸液進高壓均質(zhì)，隨后分裝，凍干，即得替尼 泊苷脂質(zhì)體凍干制劑。 實施例24
稱取替尼泊苷100g，大豆卵磷脂343g，加入四氫呋喃中，在40。C下， 加熱回流反應150分鐘，至溶液澄清，以旋轉(zhuǎn)薄膜揮發(fā)溶劑法將四氫呋喃揮 發(fā)除去，得淺黃色結(jié)晶狀替尼泊苷磷脂復合物。取替尼泊苷磷脂復合物100g、 大豆卵磷脂1500g、膽固醇50g，加入氯仿中，在4(TC下，以旋轉(zhuǎn)薄膜揮發(fā)溶 劑法將氯仿?lián)]發(fā)除去，加入PBS(pH6.8)緩沖液充分水化，隨后加入蔗糖500g， 使之充分溶解，所得脂質(zhì)體混懸液進高壓均質(zhì)，隨后分裝，凍干，即得替尼 泊苷脂質(zhì)體凍干制劑。 實施例25
稱取替尼泊苷300g，大豆卵磷脂1029g，加入四氫呋喃中，在4(TC下， 加熱回流反應150分鐘，至溶液澄清，以旋轉(zhuǎn)薄膜揮發(fā)溶劑法將四氫呋喃揮 發(fā)除去，得淺黃色結(jié)晶狀替尼泊苷磷脂復合物。取替尼泊苷磷脂復合物330g、 大豆卵磷脂500g、膽固醇125g，加入氯仿中，在40'C下，以旋轉(zhuǎn)薄膜揮發(fā)溶 劑法將氯仿?lián)]發(fā)除去，加入PBS (pH7.4)緩沖液充分水化，隨后加入蔗糖 1500g，使之充分溶解，所得脂質(zhì)體混懸液進高壓均質(zhì)，隨后分裝，凍干，即 得替尼泊苷脂質(zhì)體凍干制劑。
實施例26
稱取替尼泊苷lg， 二棕櫚酰磷脂酰膽堿3.43g，加入二氯甲烷中，在4(TC 下，加熱回流反應180分鐘，至溶液澄清，以旋轉(zhuǎn)薄膜揮發(fā)溶劑法將二氯甲 烷揮發(fā)除去，得淺黃色結(jié)晶狀替尼泊苷磷脂復合物。取替尼泊苷磷脂復合物 lg、膽固醇lg，加入氯仿中，在4(TC下，以旋轉(zhuǎn)薄膜揮發(fā)溶劑法將氯仿?lián)]發(fā) 除去，加入5%葡萄糖注射液充分水化，隨后加入蔗糖5g，使之充分溶解， 所得脂質(zhì)體混懸液進高壓均質(zhì)，隨后分裝，凍干，即得替尼泊苷脂質(zhì)體凍干 制劑。
實施例27
稱取替尼泊苷lg， 二棕櫚酰磷脂酰膽堿3.43g，加入四氫呋喃中，在50'C下，加熱回流反應60分鐘，至溶液澄清，以旋轉(zhuǎn)薄膜揮發(fā)溶劑法將四氫呋喃 揮發(fā)除去，得淺黃色結(jié)晶狀替尼泊苷磷脂復合物。取替尼泊苷磷脂復合物lg、
大豆卵磷脂2g，加入氯仿中，在4(TC下，以旋轉(zhuǎn)薄膜揮發(fā)溶劑法將氯仿?lián)]發(fā) 除去，加入5%葡萄糖注射液充分水化，隨后加入蔗糖5g，使之充分溶解， 所得脂質(zhì)體混懸液進高壓均質(zhì)，隨后分裝，凍干，即得替尼泊苷脂質(zhì)體凍干 制劑。 實施例28
稱取替尼泊苷lg，大豆卵磷脂3.43g，加入二氯甲垸中，在5(TC下，加 熱回流反應120分鐘，至溶液澄清，以旋轉(zhuǎn)薄膜揮發(fā)溶劑法將二氯甲烷揮發(fā) 除去，得淺黃色結(jié)晶狀替尼泊苷磷脂復合物。取替尼泊苷磷脂復合物lg、膽 固醇lg，加入氯仿中，在4(TC下，以旋轉(zhuǎn)薄膜揮發(fā)溶劑法將氯仿?lián)]發(fā)除去， 加入PBS (pH7.4)緩沖液充分水化，隨后加入蔗糖5g，使之充分溶解，所得 脂質(zhì)體混懸液進高壓均質(zhì)，隨后分裝，凍干，即得替尼泊苷脂質(zhì)體凍千制劑。
本發(fā)明所述的依托泊苷和磷脂的摩爾質(zhì)量比為概數(shù)，為便于計算，上述 實施例中的替尼泊苷分子量以656計，磷脂(蛋黃卵磷脂、大豆卵磷脂、二 棕櫚酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰膽堿、二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿)分子量 以大豆磷脂分子量750計，這種做法僅僅是為了利于實踐，不以任何方式構(gòu) 成對本發(fā)明的限制。
權(quán)利要求
1、一種替尼泊苷磷脂復合物脂質(zhì)體制劑，包括下述重量百分比配比的組分替尼泊苷磷脂復合物0.1～10％，磷脂0～80％，膽固醇0～50％；其中的替尼泊苷磷脂復合物由替尼泊苷和磷脂復合而成，磷脂和替尼泊苷的摩爾比為1～3∶1。
2、 根據(jù)權(quán)利要求l所述的替尼泊苷磷脂復合物脂質(zhì)體制劑，其特征在于該制 劑包括下述重量百分比配比的組分替尼泊苷磷脂復合物0. 1 10%，磷脂 0.5 80%，膽固醇O. 1 50%。
3、 根據(jù)權(quán)利要求l所述的替尼泊苷磷脂復合物脂質(zhì)體制劑，其特征在于該制 劑是凍干制劑，脂質(zhì)體平均粒徑^400mn，凍干保護劑為海藻糖、甘露醇、葡 萄糖、絲胺酸或蔗糖的一種或多種組合。
4、 一種如權(quán)利要求1所述的替尼泊苷磷脂復合物脂質(zhì)體制劑的制備方法，其 特征在于該方法依次包括以下步驟A、 替界泊苷磷脂復合物的制備 按照處方量稱取替尼泊苷和磷脂，將其加到有機溶劑中，30 6(TC加熱回流反應30 180分鐘，至溶液澄清透明；其中，磷脂和替尼泊苷的摩爾比為 卜3:1;B、 將步驟A中所得溶液轉(zhuǎn)移到茄型瓶中，30 6(TC減壓蒸發(fā)，除去有機 溶劑，并置于真空干燥機中干燥1 5小時，即得替尼泊苷磷脂復合物粉末；C、 將步驟B所制得的替尼泊苷磷脂復合物粉末與磷脂、膽固醇，按照重 量百分比為替尼泊苷磷脂復合物O. 1 10%，磷脂0 80%，膽固醇0 50%的配 比，置于玻璃容器中，并加入有機溶劑，在氮氣保護下，20 60°C水浴加熱 攪拌，使溶液澄清透明，所得溶液轉(zhuǎn)移到茄型瓶中，減壓蒸發(fā)，除去有機溶 劑，在茄型瓶壁上形成一透明薄膜，加入pH為4 10的緩沖液，進行充分水 化，即得初步脂質(zhì)體；所述有機溶劑為乙酸乙酯、四氫呋喃、二氯甲垸、三氯甲垸、正己烷、 環(huán)己烷、甲醇、乙醇、異丙醇、正丁醇或丙酮；所述緩沖液為磷酸鹽緩沖液、蒸餾水、生理鹽水或5%葡萄糖注射液；D、 按常規(guī)藥劑學方法制得制劑。
5、 根據(jù)權(quán)利要求4所述的替尼泊苷磷脂復合物脂質(zhì)體制劑的制備方法，其特征在于其中步驟C，將步驟B所制得的替尼泊苷磷脂復合物粉末與磷脂、膽固醇，按照重量百分比為替尼泊苷磷脂復合物O. 1 10%，磷脂O. 5 80%，膽固 醇O. 1 50%的配比，置于玻璃容器中。
6、 根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的替尼泊苷磷脂復合物脂質(zhì)體制劑的制備方法， 其特征在于步驟D具體為在步驟C中制得的初步脂質(zhì)體中加入重量百分比 為1 20%的凍干保護劑，并使其充分溶解，使用水浴超聲或探頭超聲或高壓 均質(zhì)降低脂質(zhì)體的平均粒徑，使制得的脂質(zhì)體平均粒徑《400nm，隨后分裝， 凍干，即得替尼泊苷脂質(zhì)體凍干制劑；其中所述的凍干保護劑為海藻糖、甘 露醇、葡萄糖、絲胺酸或蔗糖一種或多種組合。
7、 根據(jù)權(quán)利要求l、 2 、 3、 4或5所述的替尼泊苷磷脂復合物脂質(zhì)體制劑， 其特征在于其中所述的磷脂是天然磷脂和合成磷脂。
8、 根據(jù)權(quán)利要求7所述的替尼泊苷磷脂復合物脂質(zhì)體制劑，其特征在于其中 所述的天然磷脂是蛋黃卵磷脂或大豆卵磷脂。
9、 根據(jù)權(quán)利要求7所述的替尼泊苷磷脂復合物脂質(zhì)體制劑，其特征在于其中 所述的合成磷脂是二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰膽堿或二肉豆蔻酰 磷脂酰膽堿。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種替尼泊苷磷脂復合物脂質(zhì)體制劑及其制備方法。臨床證明替尼泊苷具有較廣譜的抗腫瘤活性，但現(xiàn)有制劑在使用過程中由于處方中含有大量的表面活性劑CremophorEL而引起嚴重過敏反應。本發(fā)明提供一種替尼泊苷磷脂復合物脂質(zhì)體制劑，包括下述重量百分比配比的組分替尼泊苷磷脂復合物0.1～10％，磷脂0～80％，膽固醇0～50％；其中的替尼泊苷磷脂復合物由替尼泊苷和磷脂復合而成。本發(fā)明還提供了上述替尼泊苷磷脂復合物脂質(zhì)體的制備方法，以及凍干制劑，不僅改善替尼泊苷現(xiàn)有制劑毒性、過敏性方面的缺陷；同時改善替尼泊苷的親水和/或親脂性，提高其脂質(zhì)體制劑的包封率和穩(wěn)定性，是一種新型的藥物緩釋靶向制劑。
文檔編號A61P35/00GK101292957SQ20081003903
公開日2008年10月29日 申請日期2008年6月17日 優(yōu)先權(quán)日2008年6月17日
發(fā)明者薇 劉, 吳忠斌, 靖 孫, 悅 張, 揚 張, 瑩 李, 楊秋霞, 莉 鄧, 鄭肖利, 丹 郭, 陳建明, 芃 顧 申請人:中國人民解放軍第二軍醫(yī)大學