吉西他濱-磷脂復(fù)合物的制備方法及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種醫(yī)學(xué)的配制品，尤其是涉及一種吉西他濱-磷脂復(fù)合物的制備方 法及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 吉西他濱（Gemcitabine，國產(chǎn)商品名為澤菲），化學(xué)名稱為（+)_2' -脫 氧-2'，2' -二氟胞嘧啶，是一種新的胞嘧啶核苷衍生物，和阿糖胞苷一樣，需要進(jìn)入體內(nèi)后 由脫氧胞嘧啶激酶活化才能起作用，形成吉西他濱磷酸鹽、吉西他濱二磷酸鹽和吉西他濱 三磷酸鹽，其中吉西他濱二磷酸鹽和吉西他濱三磷酸鹽為活性物質(zhì)可以抑制DNA的合成， 所以吉西他濱為細(xì)胞周期特異性抗代謝類藥物，主要作用于DNA合成期的腫瘤細(xì)胞，即S期 細(xì)胞，在一定條件下，可以阻止G1期向S期的進(jìn)展，從而發(fā)揮細(xì)胞毒作用。吉西他濱可以增 加鉑類化療藥物與DNA嵌合的穩(wěn)定性，抑制DNA損傷后的修復(fù)，故與鉑類聯(lián)合可以起到 協(xié)同和增效作用，吉西他濱與鉑類聯(lián)合是當(dāng)今治療非小細(xì)胞肺癌（NSCLC)的一線標(biāo)準(zhǔn)方案。 在美國更有80%的胰腺癌患者接受吉西他濱治療，而成為胰腺癌治療的"金標(biāo)準(zhǔn)"。吉西他 濱在歐洲已被批準(zhǔn)用于進(jìn)展期乳腺癌的二線治療。此外，吉西他濱還被試用于膀胱癌、卵巢 癌、淋巴瘤及消化道癌等。
[0003] 吉西他濱為水溶性抗腫瘤藥物，在體內(nèi)很容易失活，其體內(nèi)半衰期短（僅有32-94 分鐘），并且水溶性的吉西他濱由于核苷轉(zhuǎn)運蛋白缺失而產(chǎn)生耐藥性。因此，尋找新型高效， 低毒副作用，對腫瘤組織或細(xì)胞有高滲透性的吉西他濱復(fù)合物成為提高其治療指數(shù)的有效 措施。專利（CN 103130854 A)公開了一種維生素E琥珀酸酯化吉西他濱前藥，維生素E琥 珀酸酯與吉西他濱的N4位氨基通過酰胺鍵相連，可以提高吉西他濱藥物穩(wěn)定性和降低毒 副作用。專利（CN 102617679 A)用共輒亞油酸修飾吉西他濱的氨基，可以改善吉西他濱因 核苷轉(zhuǎn)運蛋白缺失而引起的耐藥性。專利（CN 103221067 A)公開了一種磷脂藥物修飾方 法。因此對吉西他濱進(jìn)行磷脂化改造后可以提高藥物分子在體內(nèi)的半衰期，改善其藥效動 力學(xué)性質(zhì)，而且磷脂是細(xì)胞膜的重要組成部分，使其具有更好的膜滲透能力。此外，腫瘤生 長需要大量的磷脂作為能量來源及細(xì)胞膜組成部分，這就使得磷脂化后的藥物能在腫瘤組 織中選擇性聚集，從而產(chǎn)生更好地治療效果，并降低對正常組織的毒副作用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)不足之處而提供一種吉西他濱-磷脂復(fù)合物的制 備方法及其應(yīng)用。本發(fā)明的吉西他濱-磷脂復(fù)合物通過其磷脂的高滲透性能將藥物轉(zhuǎn)運至 腫瘤細(xì)胞內(nèi)，增加藥物半衰期和藥效活性，本復(fù)合物能用作制備治療胰腺癌、乳腺癌、非小 細(xì)胞肺癌、膀胱癌、卵巢癌、淋巴瘤及消化道癌癥等惡性腫瘤的藥物。
[0005] 本發(fā)明的目的是通過以下措施來實現(xiàn)：一種吉西他濱-磷脂復(fù)合物的制備方法， 其特征在于，包括以下具體步驟：在氮氣保護(hù)下，將吉西他濱、磷脂、鈣鹽、緩沖液和表面活 性劑配制成水溶液反應(yīng)體系；反應(yīng)溫度為30-50攝氏度，加入磷脂酶D后持續(xù)機(jī)械攪拌，攪 拌時間3-10小時；反應(yīng)結(jié)束后加入有機(jī)溶液萃取2次，將有機(jī)相合并、并加入無水硫酸鈉干 燥，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除溶劑，真空干燥，得到吉西他濱-磷脂復(fù)合物，其結(jié)構(gòu)式為
式中Rl、R2均為C6-C30烷基。
[0006] 所述吉西他濱的添加量是20-40 g/L，L為配制成的水溶液反應(yīng)體系體積，磷脂與 吉西他濱的投料摩爾比為1:2-5。
[0007] 所述磷脂來源于大豆、葵花籽、蛋黃、魚肝油、磷蝦油等一種或者幾種混合物，一種 或者幾種混合物中的磷脂酰膽堿在總磷脂中的含量為20-95%之間。
[0008] 所述鈣鹽包括氯化鈣，碳酸鈣，醋酸鈣，硫酸鈣，磷酸鈣等一種或者幾種以不同比 例混合而成的混合物，鈣鹽的添加量是吉西他濱重量的1-5%。
[0009] 所述緩沖液為乙酸-乙酸鈉緩沖液，濃度為0? 1mol/L，緩沖液pH值在4. 0-6.0 內(nèi)，乙酸鈉的添加量是1. 5-8. 1 g/L，乙酸的添加量是0. 9-5 g/L，各式中，L為配制成的水 溶液反應(yīng)體系體積。
[0010] 所述表面活性劑包括單月桂基磷酸酯（MAP)、1，4-二（2-乙基己基）丁二酸酯磺 酸鈉鹽（A0T)或者Tween 80 (R)中的一種或者以任何比例混合得到的混合表面活性劑體 系，添加量為吉西他濱重量的5-10%。
[0011] 所述磷脂酶D的來源包括植物來源的或酵母菌、或鏈霉菌、或大腸桿菌的基因工 程菌發(fā)酵得到的磷脂酶D，添加量為吉西他濱重量的1-5%。
[0012] 所述有機(jī)溶液為C5-C8烷烴與短鏈烴醇按1:0. 1-0. 3的比例混合而成，最終形成 的吉西他濱-磷脂復(fù)合物溶液的濃度為0. 05-0. 2 g/mL ; 所述C5-C8烷烴有機(jī)溶劑為從下列物品中任選：戊烷、己烷、環(huán)己烷、庚烷、辛烷、壬 烷、癸烷或它們的同分異構(gòu)體中的任何一種溶劑或這些溶劑以任何比例混合形成的混合溶 劑； 所述短鏈烴醇為從下列物品中任選：乙醇、丙醇、丁醇、戊醇、異丙醇、異丁醇、異戊醇它 們的同分異構(gòu)體中的任何一種溶劑或這些溶劑以任何比例混合形成的混合溶劑。
[0013] 所述吉西他濱-磷脂復(fù)合物在癌癥治療上的應(yīng)用，將所述吉西他濱-磷脂復(fù)合物 制備成注射用針劑，步驟如下：取吉西他濱-磷脂復(fù)合物40g，氫化磷脂酰膽堿HSPC 120g， 膽固醇40g，聚氧乙烯化磷脂酰乙醇胺MPEG2000-DSPE 40g，抗氧劑a -生育酚1. 2g，加注射 水800mL，加入葡萄糖432克作為賦形劑，加入磷酸氫二鈉5. 7g，磷酸二氫鈉11. 0g，調(diào)節(jié)藥 液pH值至7. 0,常溫以60rpm攪拌30min，然后將物料高壓均質(zhì)，均質(zhì)壓力為23-25MPa，透射 電鏡圖顯示得到比較完整的球形，粒徑在120 ± 60 nm，再加活性炭粗濾后用0.2um濾膜進(jìn) 行過濾，分裝制成1000瓶針劑備用。
[0014] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，采用了本發(fā)明提出的吉西他濱-磷脂復(fù)合物的制備方法及其應(yīng) 用方法，具有如下優(yōu)點：采用磷脂對吉西他濱進(jìn)行修飾，將磷脂和吉西他濱在磷脂酶D的作 用下，生成吉西他濱-磷脂復(fù)合物，磷脂相對于其它修飾方法具有許多優(yōu)點：1、磷脂本身無 毒和免疫原性，適合于生物體內(nèi)降解。2、磷脂是細(xì)胞膜的主要成分，也是一種表面活性劑， 與細(xì)胞的親和力強(qiáng)，能增加被修飾藥物透過細(xì)胞的能力，易于被組織吸收，提高了藥物的吸 收利用率，降低耐藥性的產(chǎn)生。3、磷脂可形成雙分子層，將所修飾的吉西他濱包裹在磷脂 中，可以降低其對機(jī)體特定部位的毒性，被包裹的吉西他濱也可以避免被人體內(nèi)酶分解，改 善了吉西他濱在體內(nèi)半衰期，從而減少藥物用量，使藥物具有緩釋和控釋作用。4、腫瘤生長 需要大量的磷脂作為能量來源及細(xì)胞膜組成部分，這就使得磷脂化后的藥物能在腫瘤組織 中選擇性聚集，從而產(chǎn)生更好地治療效果。
【具體實施方式】
[0015] 下面對【具體實施方式】作詳細(xì)說明： 一種吉西他濱-磷脂復(fù)合物的制備方法，包括以下具體步驟：在氮氣保護(hù)下，將吉西他 濱、磷脂、鈣鹽、緩沖液和表面活性劑配制成水溶液反應(yīng)體系；反應(yīng)溫度為30-50攝氏度，加 入磷脂酶D后持續(xù)機(jī)械攪拌，攪拌時間3-10小時；反應(yīng)結(jié)束后加入有機(jī)溶液萃取2次，將有 機(jī)相合并、并加入無水硫酸鈉干燥，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除溶劑，真空干燥，得到吉西他濱-磷脂復(fù) 合物。
[0016] 所述吉西他濱的結(jié)構(gòu)式為
所述磷脂酰膽堿PC的結(jié)構(gòu)式為
在磷脂酶D、鈣鹽的作用下發(fā)生反應(yīng)得到吉西他濱-磷脂復(fù)合物，吉西他濱-磷脂復(fù)合 物的結(jié)構(gòu)式為
式中Rl、R2均為C6-C30烷基。
[0017] 所述吉西他濱-磷脂復(fù)合物在癌癥治療上的應(yīng)用，將所述吉西他濱-磷脂復(fù)合物 制備成注射用針劑，步驟如下：取吉西他濱-磷脂復(fù)合物40g，氫化磷脂酰膽堿HSPC120g， 膽固醇40g，聚氧乙烯化磷脂酰乙醇胺MPEG2000-DSPE40g，抗氧劑a-生育酚1. 2g，加注射 水800mL，加入葡萄糖432克作為賦形劑，加入磷酸氫二